CRISPR/CAS9

De manera general el sistema CRISPR/CAS es una herramienta molecular que tiene la

intención de editar o corregir el genoma de cualquier cedula.

Una forma sencilla de comprender este sistema es pensar en que esta tecnología es una
tijera de ADN, que si bien no es la unica tecnica conocida es la que ofrece mayor precisión.

Es importante destacar que la capacidad de cortar es solo uno de sus componentes ya que
también se incluye la capacidad de sustituir (o en dado caso pegar).

CRISPR significa: Clustered regularly interspaced short palindromic repeats.

Repeticiones cortas agrupadas y regularmente interespaciadas.

Cas-9: es una serie de proteínas (generalmente nucleasas), que son llamadas asi por
estar asociadas al CRISPR.

HISTORIA

En el año 1987 se publicó un artículo en el que se describia como una serie de bacterias,
específicamente el STREPTOCOCCUS PYOGENES se defendia de las infecciones víricas.
Debido a que estas bacterias contienen enzimas que son capaces de distinguir el material
genetico de la bacteria y el virus, y a su vez eliminar el material genético del virus una vez
identificado.

Luego se descubrió que zonas de genoma y otros microorganismos, se encontraban llena

de repeticiones palindrómicas, las que aparentemente no tenían ninguna función

Lo sorprendentemente es que estas repeticiones se encontraban separados por unas

secuencias a las que se les llamó ​espaciadores ​y que estas secuencias eran parecidas a
otras de virus y plásmidos.

Justo delante de esas repeticiones y espaciadores se halló una secuencia a la que se llamó
líder. Las que recibieron el nombre de CRISPR.

Cerca de este agrupamiento se encontraron las nucleasas: CAS

¿CÓMO ACTÚA EL CRISPR COMO MECANISMO DE DEFENSA?

Ya es bien conocidos que los virus son microorganismos parasitarios, es decir,l estos toman
el control de su huésped. Al momento de que un virus se enfrenta a algún microorganismo
con este tipo de sistema, el material genético del virus puede reaccionar con este sistema,
en dado caso de que esto ocurra, el material genético es inactivado y posteriormente.
En las que las proteínas CAS toman una parte del ADN viral, modificarlo e integrarlo dentro
del conjunto de secuencias CRISPR.

Debido a esto si esa bacteria (o sus descendientes) se encuentran con este mismo virus, lo
inactivara de forma más eficiente, pudiendo llegar a crear un sistema totalmente inmune.

En el año 2012, es que se da el paso clave para lograr que esta observación pase a ser una
verdadera herramienta, esto debido a la publicación de las doctoras Jennifer Douda y
Emmanuelle Charpentier, en el que se demostró de como herramienta de edición
programable que servía para cortar cualquier cadena de ADN in vitro.

Es decir ya no solo se dirige hacia ADN vírico, sino que se puede direccionar a cualquier
secuencia predeterminada.

¿COMO SE EDITA EL ADN CON ESTA TECNOLOGÍA?

● Diseño de ARN (CRISPR guia)

● Asociación con enzima CAS-9
● Inserción a célula objeto.
● Sistema busca secuencia de ADN.
● CAS-9 causa la ruptura de los enlaces en la cadena de ácidos nucleicos.

En la segunda etapa se activan al menos dos mecanismos naturales de reparación del ADN
cortado. El primero llamado indel (inserción-deleción) hace que, después del sitio de corte
(la secuencia específica del ADN donde se unió el ARN guía), bien aparezca un hueco en la
cadena, bien se inserte un trocito más de cadena. Esto conlleva a la pérdida de la función
original del segmento de ADN cortado.

Un segundo mecanismo permite la incorporación de una secuencia concreta exactamente

en el sitio original de corte. Para esto, lógicamente, hemos de darle a la célula la secuencia
que queremos que se integre en el ADN.

BLOQUEO DE CRISPR

A finales de diciembre de 2016 se publicó en la revista Cell el descubrimiento de una

manera de inactivar el sistema CRISPR/Cas9, empleando para ello unas proteínas de
bacteriófagos. En principio podemos pensar ¿y esto para qué vale? ¿Para qué quiero
bloquear el sistema que me permite editar un genoma? Estas nuevas proteínas
“antiCRISPR” ayudarán a tener un control más preciso de las aplicaciones de la técnica y
también pueden servir para bloquear de manera rápida usos potencialmente dañinos de la
tecnología. Recordemos que el principal problema de CRISP/Cas9 es que no es todo lo
preciso que debiera. Estos inhibidores podrían, en un futuro, mejorar la precisión de la
edición genómica.
ABREVIANDO EL NOMBRE… Y MEJORANDO LAS PRESTACIONES

La tecnología ha ido evolucionando ella misma. De hecho lo está haciendo de manera

continua. Ya todo el mundo la conoce como tecnología CRISPR, abreviando y eliminando
Cas9. Lo que en principio era solo economía del lenguaje se ha convertido en algo muy
acertado. Si recordáis, comentábamos que la molécula CRISPR se une a una secuencia
específica del ADN. Guía entonces a una enzima, Cas9 que corta en ese punto, a modo de
tijeras moleculares. A partir de ahí se reparaba la cadena de ADN sin más o se añadía más
material genético antes de la reparación. Uno de los grandes peros a la tecnología es que
Cas9 no es siempre preciso. Los investigadores han encontrado ya 6 tipos diferentes de
sistemas CRISPR con hasta 19 subtipos (y se cree que solo se conoce una fracción). Bien,
se trabaja ya en los laboratorios con otra proteína, Cpf1, La principal diferencia es que Cas9
genera lo que se llaman “extremos romos” en el corte que hace en el ADN, mientras que
Cpf1 lo hace dando lugar a “extremos cohesivos” (aquí tenéis una explicación de lo que son
extremos romos y cohesivos). Hace muy poco, en diciembre de 2016, científicos de
Berkeley han publicado un artículo en el que utilizan nuevas enizmas, CasX y CasY que se
supone mejoran aún más la tecnología.

¿PARA QUÉ SE HA UTILIZADO YA?

Lo primero que hay que dejar bien claro es que aún no hay ninguna terapia disponible que
emplee la tecnología CRISPR. Sí se ha utilizado ya con bastante éxito en modelos tanto
celulares como animales. A continuación citamos solo algunos ejemplos llamativos:

Evitar que los champiñones se vuelvan marrones al contacto con el aire.

Investigadores de la Penn State University desactivaron el gen de la polifenol oxidasa de los
champiñones, logrando así que el pardeamiento se retrase en el tiempo. Bien, no va a
cambiar de manera relevante nuestra vida, pero sí puede contribuir, por ejemplo, a que se
deseche menos comida porque su aspecto se haya deteriorado.

Cáncer de pulmón. A finales de octubre de 2016 un equipo de científicos chinos delecionó

(eliminó) un gen de unos linfocitos de un paciente de cáncer de pulmón y reinyectó estas
células editadas en el paciente, en el primer ensayo clínico del mundo con CRISPR.

Primer ensayo clínico de CRIPSR en Estados Unidos. El 21 de junio de 2016 el Instituto

de Salud de Estados Unidos (NIH) dio luz verde a un ensayo que proponía el empleo de
CRISPR en células T del sistema inmune de 18 pacientes, con el fin de modificarlas y
hacerlas más eficaces en la destrucción de las células tumorales. La modificación consiste
en tres abordajes diferentes:
1. Inserción de un gen que codifica para una proteína que detecta a las células tumorales.
2. Eliminación de un gen que codifica para otra proteína que interfiere con la detección de
las células tumorales.
3. Eliminación de un gen que codifica para una proteína que identifica a las células T como
células del sistema inmune y evita que las células tumorales las inactiven.
Anemia falciforme. En noviembre de 2016 se publicó un artículo en el que se editaban
células madre de la médula ósea de personas con anemia falciforme. Estas células
posteriormente se trasplantaban en ratones para ver si sobrevivían y daban lugar a células
sanguíneas sanas. Pasados cuatro meses las células madre seguían perfectamente vivas
en la médula ósea de los ratones.

Enfermedad granulomatosa crónica. Es una enfermedad rara que afecta a 25.000

personas en todo el mundo. Se trata de un desorden genético con pocas alternativas
terapéuticas y que hace que los pacientes tengan una mayor susceptibilidad a las
infecciones. Está provocada por defectos en la proteína NOX2, esencial para el sistema
inmune. Investigadores de Estados Unidos lograron reparar por medio de CRISPR/Cas9 la
mutación de NOX2 en células madre de pacientes de esta enfermedad y confirmaron que
eran capaces de diferenciarse en células del sistema inmune con sus habilidades
antibacterianas restablecidas.

Producción de precursores de polímeros, adhesivos, fragancias y biofuel. Un equipo

de la Universidad de California ha empleado la tecnología de CRIPSR/Cas9 para modificar
determinadas levaduras y así lograr que produzcan una serie de lípidos y polímeros a partir
de azúcares. De esa manera se evita partir de derivados del petróleo, que es lo que se usa
actualmente para fabricar las sustancias anteriormente nombradas.

Creación de líneas celulares “a medida” con fines de investigación. La empresa

Horizon Discovery, del Reino Unido utiliza la tecnología CRISPR para crear estas líneas
celulares “especiales”. Además, están desarrollando, junto con la empresa también británica
Solentim, una plataforma automatizada de fabricación para la edición genética de líneas
celulares de mamíferos. Dicho de otra manera: una manera rápida y barata de fabricar
líneas celulares con su genoma editado.