Microorganismo productor.

•Características de los microorganismos

utilizados en los procesos de producción.
•Selección y conservación de cepas.
•Mutagénesis y aislamiento de mutantes.
 ¿por qué seleccionar microorganismos?

o La cepa a utilizar debe ser genéticamente estable.

o Velocidad de crecimiento alta.
o Requerimientos nutrimentales accesibles.
o Proceso fermentativo corto.
o Alto rendimiento y fácil recuperación del producto.
Colecciones de cultivos microbianos
Preservación ex-situ
Son organizaciones que se ocupan de guardar convenientemente
cepas de microorganismos, células superiores o diversos
materiales biológicos y los suministran, previa petición, a
laboratorios microbiológicos de docencia y/o investigación.

 ATCC American Type Culture Collection; USA.

 CNCM Collection Nationale de Cultures de Microorganismes;
Instituto Pasteur, Francia.
 NRRL Northern Regional Research Laboratory; Peoria, USA.
 NCTC National Collection of Type Cultures; Londres,
Inglaterra.

De 200 a 500 dólares por muestra…

Normas generales para la conservación de
cepas microbianas
Los tres objetivos para una correcta conservación:

1.-Mantenimiento en Cultivo puro (PUREZA)

2.-Que este viva (VIABILIDAD)

3.-La cepa debe mantenerse genéticamente estable (ESTABILIDAD)

a) Un cultivo inicial de una especie es una población.

b) Un sub-cultivo es una población diferente derivada de este

cultivo inicial.

c) Una cepa es una sucesión de sub-cultivos del cultivo inicial

La conservación de cepas microbianas

 Método de elección o de conservación a largo

plazo (mas de 1 año)
◦ Conservación por congelación
◦ Conservación por liofilización

 Métodos a corto plazo

◦ Conservación por transferencia periódica
◦ Conservación por suspensión en agua destilada o en agua
de mar estéril.
Conservación de microorganismos por congelación
La criopreservación consiste en la conservación de los microorganismos a
temperaturas inferiores a cero Celsius. Se basa en la paralización del
metabolismo celular por la disminución del agua disponible.

Objetivos de la crio-preservación
- Mantenimiento de la viabilidad.
-Uso de crio-protectores.
-La temperatura de almacenamiento.
-El estado fisiológico de la célula.
- Mantenimiento de la estabilidad. CRIOPROTECTORES
- Mantenimiento de la pureza.  Glicerol
 Dimetilsulfóxido (DMSO)
 Ácido glutámico
 Glucosa
 Sacarosa
 Mio-inositol
 Lactosa
 Leche Descremada
 PROCESO

Congelar el
agua libre de Eliminación del agua
las células

Agua congelada Vapor de agua

Sublimación

Congelación rápida

Fase de Desecación
 Conservación por transferencia periódica
Es un método en el que los microorganismos permanecen activos
durante el proceso.
Consiste en la inoculación de microorganismos en un medio de cultivo
adecuado, la incubación a una temperatura favorable para obtener
crecimiento y finalmente el almacenamiento bajo unas condiciones
adecuadas.
El proceso es repetido a intervalos que garanticen la obtención de un
cultivo fresco antes de la pérdida del viejo.

 Medio de cultivo.
 Temperatura, tiempo y condiciones de incubación.
 Intervalo entre dos resiembras
◦ Reducción de la temperatura de almacenamiento.
◦ Medios no enriquecidos, con limitación de nutrientes.
◦ Restricción de la accesibilidad de aire del cultivo.
Conservación por suspensión en agua destilada o en agua de
mar estéril

Es un método muy usado y que da altos porcentajes de viabilidad en

diversos tipos de microorganismos, tanto hongos filamentosos como
en levaduras y bacterias.

Consiste en suspender en agua estéril unas cuantas células del cultivo

que se quiere conservar.

Para los hongos filamentosos que no esporulan, se pueden poner en

Suspensión, trocitos de agar con el crecimiento del hongo.

En el caso de microorganismos marinos, la suspensión se hace

en agua de mar diluida.
Métodos de desecación Papel de filtro

Paquete
cerrado

Paquetes
Papel semicerrado
15 minutos
Watman nº4 121ºC

Desecador
P
R
O
T
E
Papel con
C
T
cultivo 2-3 semanas
O
R 4ºC
Cultivo Suspensión Gotas de
celular cultivo
Cerrado de
Los paquetes
 Métodos de desecación Suelo

G
E
R
M
20 minutos Tierra esteril I
121ºC 4ºC N Microorganismos
A en fase
C durmiente
P
R
I
O 4-5días Ó Agotamiento
T
E 25ºC N de
C nutrientes
T
O
R
Almacenamiento
a 18ºC
Cultivo Suspensión de
esporulado esporas
Métodos de desecación Bolas de Alginato

Gotas Placa petri con

Papel secante

Alginato 3%
13 minutos
121ºC

CaCl2 0,03M Medio de Cultivo Gotas de alginato

esteril 0,75M Sacarosa con cultivo
48horas DESECACIÓN
Gotas de alginato
con cultivo Corriente de aire estéril
30 minutos ó bomba de vacío a
Temperatura controlada
Cultivo Suspensión Polimerización del
en agua esteril Alginato
Pérdida del 30% del pes
Mutagénesis y aislamiento de mutantes

1. Selección natural de variantes.

2. Mutación inducida.
3. Recombinación genética.
Selección natural de variantes
 Frecuencia de 10-6 a 10-9 por generación
Mutación inducida
 Exposición UV.
 Exposición a agentes químicos (Ácido nitroso,
NTG, análogos de base).
 Exposición a mutágenos estructurales (proflavina,
naranja acridina).
Recombinación genética - Conjugación
Recombinación genética - Transducción
Recombinación genética -
Transformación
 Mejoramiento histórico de la producción de antibióticos
Antibiótico Rendimiento al Rendimientos Rendimientos
tiempo del mejorados en mejorados en
descubrimiento URSS Francia en 1972
(Unidades ml-1) (Unidades ml-1) (Unidades ml-1)
Penicilina 20 (1943) 8,000 (1955) 12,000-15,000
Estreptomicina 50 (1945) 5,000 (1955) 12,000-15,000
Clorotetraciclina 200 (1948) 4,000 (1959) 12,000-15,000
Oxytetraciclina 400 (1950) 6,000 (1959) ---
Eritromicina 100 (1955) 2,000 (1961) 3,000
Tomado de: Principles of Fermentation Technology, P.F. Stanbury & A. Whitaker. Pergamon Press, 1987 .
Medios de cultivo

•Diseño de medios de cultivo.

•Selección de materias primas.
•Optimización de los procesos de fermentación.
•Métodos estadísticos-matemáticos de
optimización.
Etapa fundamental para el éxito del
proceso…
 Cumplir con los requerimientos del crecimiento y
de formación de productos, así como de los
metabolitos para el mantenimiento celular.
◦ Macronutrientes (C, N, S, P, K, Mg).
◦ Micronutrientes (Fe, Mn, Mo, Ca, Zn, Co).
◦ Factores de crecimiento (vitaminas, ácidos grasos,
aminoácidos).
 Consumo de oxígeno.
 pH inicial de fermentacíón.
Disponibilidad de los componentes
 Los nutrientes deben traspasar las membranas
celulares.
 En el medio hay quelantes que secuestran los
iones que necesitan las células.
Medios básicos
Medios enriquecidos

Agar sangre
Agar Proteosa
Agar de suero
Agar Chocolate
Agar infusión de
cerebro corazón
 Medios selectivos
Se preparan con reactivos

que inhiben el crecimiento de

microorganismos, para dejar

a ciertas especies

únicamente
Medios de enriquecimiento
 Materias primas más utilizadas
 Fuentes de carbono y fuentes de nitrógeno.
◦ Componentes puros
◦ Desechos agroindustriales.

$1.2 USD/kg  Metabolismo del

microorganismo.
 Producto deseado.
 COSTOS.

¡SIN COSTO!
Optimización
 Generar una superficie de respuesta; mediante un
software.
◦ MINITAB
◦ SIGMA PLOT
◦ MATLAB
Esterilización

Vapor bajo presión

Métodos químicos
•Químicos
•Alcoholes: etanol,
isopropílico.
•Adehído: Formol,
glutaraldehido.
•Fenoles.
•Óxido de etileno.
•Peróxido de hidrógeno.