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neuroinmunológicos
Abstracto
Los linfocitos B aumentan la respuesta inmune produciendo anticuerpos y activando las células T
mediante la presentación del antígeno. Estudios recientes han destacado un subconjunto de células
B específico y funcionalmente significativo que podría regular a la baja respuestas inmunes e
inflamatorias excesivas a través de una amplia gama de citocinas inhibidoras, como la interleucina
(IL) -10 y el factor de crecimiento transformante-β (TGF-β). Este subconjunto de células B
generalmente se denomina células B reguladoras (Bregs). Además, estudios recientes han
demostrado que los Bregs productores de IL-35 también desempeñan un papel en la regulación a la
baja de la inmunidad. Se han propuesto diversos fenotipos de Bregs para sustentar trastornos
humanos y sus modelos animales. La mayoría de los estudios se han centrado en el papel de
diferentes subconjuntos de moléculas asociadas a Bregs y Bregs, como IL-10, TGF-β e IL-35 en la
patogénesis de trastornos neuroinmunológicos. Además, los Bregs ejercen una función reguladora
principalmente mediante la supresión de la diferenciación de las células Th1 / Th17 y la promoción
de la expansión reguladora de las células T. Se informa que la presencia reducida de Bregs está
asociada con la progresión de varios trastornos neuroinmunológicos. Esta revisión resume el
conocimiento actual sobre el papel de Bregs en los trastornos neuroinmunológicos, que incluyen la
esclerosis múltiple, la neuromielitis óptica y la miastenia grave. © 2016 Los autores.
Palabras clave: células B reguladoras, IL-10, TGF-β, IL-35, trastornos neuroinmunológicos
Se cree que las células B, como precursores de los plasmablastos y las células plasmáticas, regulan
positivamente la respuesta inmune humoral produciendo anticuerpos y activando las células T
mediante la presentación del antígeno. Trabajos recientes han revelado un papel protector específico
de las células B en la modulación de la respuesta inmune en condiciones patogénicas
(Tedder, 2015 ). Estos subconjuntos específicos de células B pueden modular negativamente la
respuesta inmune mediante la producción de citocinas antiinflamatorias como la interleucina (IL) -
10 y el factor de crecimiento transformante β (TGF-β; Mizoguchi y Bhan, 2006 ; DiLillo et al., 2010 ; Kalampokis
et al., 2013 ; Yang et al., 2013 ; Candando et al., 2014 ; Goode et al., 2014) Estos subconjuntos de células B
generalmente se denominan células B reguladoras (Bregs). Estudios recientes también sugieren que
los Bregs están relacionados con la patogenia en varios trastornos relacionados con el sistema
inmune (Blair et al., 2010 ; Noh et al., 2010 ; Olkhanud et al., 2011 ; Furuzawa-Carballeda et al., 2013 , 2014 ; Wilde et
al., 2013 ; Daien et al., 2014 ; He et al., 2014; Hua et al., 2014 ; L. Wang et al., 2014 ; Aybar et al., 2015 ; de Masson et
al., 2015 ; Zhu y otros, 2015) Los Bregs son conocidos principalmente por suprimir las células Th1 / Th17
patógenas y promover la expansión reguladora de las células T (Treg), lo que permite a los Bregs
ejercer su función reguladora. Se ha demostrado que la falta o pérdida de Bregs está asociada con la
progresión de varias enfermedades neuroinmunológicas, como la esclerosis múltiple (MS; Knippenberg
et al., 2011 ; de Andres et al., 2014 ), neuromielitis óptica (NMO; Quan et al. ., 2013 ) y miastenia gravis (MG;
Sun et al., 2014 ). Más importante aún, artículos recientes han descrito un nuevo subconjunto de células
B productoras de IL-35 (i35-Breg) que parece regular negativamente la respuesta inmune mediante
la producción de IL-35 (Shen et al., 2014 ; RX Wang et al., 2014; Egwuagu y Yu, 2015 ). Bregs comprende varios
linajes de células B inmunofenotípicamente distintos identificables por la producción de las
citoquinas inmunomoduladoras IL-10, TGF-β e IL-35. Sin embargo, la caracterización fenotípica
precisa y las moléculas de señalización de Bregs siguen sin estar claras. Los conocimientos
adicionales sobre el papel y las características de Bregs bien pueden proporcionar nuevas dianas
terapéuticas en pacientes con trastornos neuroinmunológicos. Esta revisión proporciona un resumen
del estado actual del conocimiento sobre el papel de Bregs en trastornos neuroinmunológicos.
CARACTERIZACIÓN FENOTIPICA DE Bregs
Caracterización fenotípica de los ratones
Debido a que no existen características fenotípicas precisas o moléculas de señalización de Bregs,
la mejor estrategia para identificar Bregs sería mediante tinción intracelular para IL-10. Sin
embargo, este proceso implica fijar y permeabilizar las células, lo que puede afectar la
caracterización funcional de Bregs. Entonces, los fenotipos y marcadores de superficie celular son
clave para la identificación de Bregs. Algunos de los fenotipos de superficie celular que, según los
informes, son específicos de Bregs en ratones, en relación con su capacidad para producir IL-10, se
resumen en la Tabla 1 .
Las células B del bazo productoras de IL-10 estaban restringidas a un único subconjunto
CD1 + hi CD5 +Breg que estaba ausente en ratones Cd19 - / - . Este subconjunto relativamente raro de
CD19 + CD5 +CD1d hi Breg se ha denominado células B10 porque es atribuible a la producción de
IL-10 (Yanaba et al., 2008 ). En estudios anteriores, se demostró que las células B de la zona marginal
esplénica (CD1d hi CD21 hi CD23 - CD24 hi IgM hi IgD lo ) producen IL - 10 e inhiben el desarrollo
de la enfermedad inflamatoria intestinal en modelos animales (Wei et al. 2005; Mauri y
Bosma, 2012 ). Además, las células de transición 2-MZ precursor (T2-MZP) B
(CD1d CD21 CD23 CD24 hi lgM hi IgD +) son conocidos para inhibir la progresión de la
hi hi +
artritis. La regulación negativa de las células T2-MZP aparentemente depende de la secreción de IL-
10, dado que las células T2-MZP de ratones IL-10 - / - no protegen contra el desarrollo de artritis
(Evans et al., 2007 ; Mauri y Bosma, 2012) Se ha demostrado que el dominio de inmunoglobulina de células
T y el dominio de mucina-1 (TIM-1) identifican más del 70% de las células B productoras de IL-10
del bazo. TIM-1 se expresó por un gran número de células B reguladoras productoras de IL-10 en
todos los subconjuntos principales de células B (Ding et al., 2011 ). Se ha demostrado que las células B
TIM-1-deficientes mejoran las respuestas Th1 / Th17 y agravan la encefalomielitis autoinmune
experimental (EAE, Xiao et al., 2015 ). Se cree que los Bregs ejercen su efecto supresor mediante la
producción de citocinas inhibidoras. Se ha avanzado mucho en la identificación de Bregs a través
de estudios en ratones.
Caracterización fenotípica de los Bregs humanos
El estado actual del conocimiento sobre los fenotipos y marcadores de Bregs humanos (Blair et
al., 2010 ; Iwata et al., 2011 ; Furuzawa-Carballeda et al., 2013 ; Daien et al., 2014 ; L. Wang et al. , 2014 ) se presenta
en la Tabla 1 . Se ha demostrado que los Bregs humanos comparten algunas de las características
fenotípicas con marcadores previamente definidos en ratones (Correale et al., 2008 ; Yanaba et
al., 2008 ). Se demostró que los Bregs que expresan IL-10 humana normalmente están presentes en
números bajos pero fácilmente identificables en la sangre periférica y el bazo, un hallazgo similar
al observado en ratones (Iwata et al., 2011 ; Kalampokis et al.,2013 ). Después de la estimulación ex
vivo con forbol miristato acetato y ionomicina más brefeldin-A, se demostró que los Bregs humanos
bloquean la producción de proteínas (Candando et al., 2014 ). Este método proporciona una evaluación
indirecta de los Bregs activos asociados con trastornos autoinmunes humanos porque Bregs no se
pudo observar directamente ex vivo(Candando et al., 2014 ).
Se demostró que los pejes de sangre periférica producen más IL-10 después de la estimulación con
CD40 en comparación con el que se obtiene después de la estimulación tanto por el receptor de
células B (BCR) como por CD40. Además, se demostró que los Bregs secretan marcadamente
menos IL-10 en pacientes con EM en comparación con controles sanos en ambas condiciones (Duddy
et al., 2007 ).
Iwata et al. ( 2011 ) describieron un subconjunto de Bregs humano con CD19 + CD24 hi CD27 + que
desempeñaba un papel regulador inmunitario y parecía afectar funcionalmente a pacientes con lupus
eritematoso sistémico (LES). Además, este subconjunto de Bregs mostró una capacidad reducida
para secretar IL-10 después del compromiso de CD40 en pacientes con LES en comparación con
controles sanos (Iwata et al., 2011 ). Las células B que expresan granzima B revelaron
CD19 + CD38 + CD1d + IgM + CD147 +fenotipo en el microambiente de varios tumores sólidos. Se
demostró que el establecimiento de este fenotipo regulador en los infiltrados tumorales sólidos
suprime las respuestas inmunes antitumorales (Lindner et al., 2013 ). Se sabe que los Bregs humanos
tienen un alto nivel de expresión de marcadores CD48 y CD148. CD48 es un marcador para la
activación de las células B, y CD148 se considera un marcador para las células B de la memoria
humana (Kalampokis et al., 2013 ). Los fenotipos que son únicos de Bregs aún no se han identificado; no
obstante, se cree que los Bregs modulan la inmunidad de forma negativa a través de mecanismos
complejos en los trastornos autoinmunitarios en humanos.
FUNCIONES DE Bregs
Función de ejercicio de Bregs a través de IL-10
Hay varios mecanismos por los que Bregs ejercer su función reguladora durante la respuesta inmune
(Fig. (Fig.1).1 ). IL-10 es una citocina inmunorreguladora que desempeña un papel fundamental en
el control de la inflamación excesiva y la regulación negativa de la respuesta inmune (Lemoine et
al., 2009 ; Yao et al., 2013 ). Se sabe que los Bregs productores de IL-10 regulan negativamente la
activación de macrófagos y células dendríticas (Kalampokis et al., 2013 ). De acuerdo con Flores-
Borja et al. ( 2013 ), CD19 + CD24 hiCD38 hi Bregs mostraron una regulación negativa de la
respuesta Th1 / Th17. Carter et al. ( 2011) mostró que los ratones que carecían específicamente de
células B productoras de IL-10 desarrollaban una artritis progresiva y exhibían una frecuencia
incrementada en las células Th1 / Th17 inflamatorias en comparación con los ratones de tipo salvaje
(WT). Además, se demostró que la transferencia adoptiva de Bregs a ratones IL-10 - / - reduce las
frecuencias de las células patogénicas Th1 / Th17 y suprime la inflamación autorreactiva. En
general, los Bregs parecen suprimir la diferenciación de las células Th1 / Th17 y potenciar la
polarización de Th2, lo que resulta en una disminución de la activación de las células T (Lampropoulou
et al., 2008 ; Kalampokis et al., 2013 ).
Figura 1
Los pang juegan su papel en la respuesta
inmune a través de IL-10, TGF-β y / o
IL-35. a: los Bregs productores de IL-10
parecen suprimir la diferenciación de las
células Th1 / Th17 y potenciar la
polarización Th2. Los Bregs
productores de IL-10 también suprimen
la activación de macrófagos y células
dendríticas. b: los Bregs productores de
TGF-β parecen suprimir la activación de
Th1 y promover la expansión de
Tregs. c: i35-Bregs parece suprimir la
activación Th1 / Th17 y promover la
expansión de Tregs. [La cifra en color se
puede ver en la edición en línea, que está
disponible en wileyonlinelibrary.com .]
Varios estudios mostraron aumentos marcados en la secreción de IL-10 por células B vírgenes
después de la estimulación con agonistas de señalización de receptor Toll-like (TLR), que también
se sabe que desencadena la respuesta inhibidora (Lampropoulou et al., 2008 , 2010 ). Los ratones
portadores de deficiencia restringida de células B en la vía de señalización MyD88, una proteína
adaptadora de señalización esencial para la mayoría de las recaídas crónicas de EAE desarrolladas
en TLR, eran clínicamente indistinguibles de los ratones que carecían de producción de IL-10 por
las células B. La señalización de TLR en células B parece ser un requisito para la función supresora
mediada por células B en la patogénesis de enfermedades (Lampropoulou et al., 2008).) Se cree que la
función supresora de las células B se inicia mediante un proceso de dos pasos, la señalización de
TLR y la posterior amplificación a través de señalización BCR y CD40 (Yao et al., 2013 ). En otro
descubrimiento crucial reciente, Yoshizaki et al. ( 2012 ) mostraron que las señales de CD40 podrían
inducir la expansión de Breg en la generación de células efectoras productoras de IL-10 funcional a
través de interacciones análogas dependientes de IL-21.
Función de ejercicio Bregs a través de IL-35
IL-35, una citocina recientemente identificada que pertenece a la familia IL-12, es una potente
citocina antiinflamatoria producida por Tregs y Bregs (Collison et al., 2010 ; Mauri y Nistala, 2014 ; Xiang
y Xie, 2015 ). Se demostró que una nueva subpoblación i35-Breg regula negativamente la respuesta
inmune al inhibir las células Th1 / Th17 (Choi et al., 2015 ). Este nuevo jugador clave parece
prometedor y podría abrir nuevos horizontes para el tratamiento de trastornos autoinmunes en el
futuro (Shen et al., 2014 ; RX Wang et al., 2014 ; Egwuagu y Yu, 2015 ).
Se cree que la IL-35 derivada de células B es un importante regulador de la autoinmunidad mediada
por células T. En un estudio, los ratones que carecían de expresión de IL-35 en las células B
perdieron su capacidad de recuperarse completamente de EAE en contraste con los ratones WT (Shen
et al., 2014 ). Este estudio también demostró la secreción de IL-35 por las células B después de la
estimulación de TLR4 y CD40. Aunque TLR4 desencadenó la formación de Bregs productores de
IL-10, tal efecto no fue observable después de la coestimulación por TLR4 y CD40 (Shen et al., 2014 ).
Se ha demostrado que el tratamiento de ratones con IL-35 limita las respuestas inmunes dañinas en
un modelo animal de uveítis. Además, los ratones que carecían de IL-35 o tenían señalización de
IL-35 disfuncional (que comprende las subunidades IL-12Rβ2 / IL-27Rα) mostraron una pobre
expansión de Bregs y manifestaron progresión de uveítis. Sin embargo, después de la transferencia
adoptiva de IL-35 recombinante, los Bregs inducidos por IL-35 suprimieron la uveítis, inhibieron
las células Th1 / Th17 patógenas y promovieron la expansión de Tregs. Además, IL-35 indujo la
conversión de células B humanas en Bregs, lo que sugiere que IL-35 podría ser una molécula posible
para tratar trastornos autoinmunes en virtud de su efecto en la mejora de la función de Bregs (RX
Wang et al., 2014 ).
Sin embargo, los investigadores han informado hallazgos contradictorios que describen otros
estudios en los que se observó frecuencia y fenotipo normales de Bregs en la sangre periférica de
pacientes con EM (Michel et al., 2014 ). No se observaron diferencias entre pacientes con EM y
controles sanos en la frecuencia y función de CD19 + CD24 hi CD38 hi Bregs, lo que sugiere que la
falta de Bregs periféricos puede no contribuir a la fisiopatología de la EM (Michel et al., 2014 ). Sin
embargo, estas discrepancias podrían deberse a diferencias en los protocolos en términos de tiempo
de cultivo celular y naturaleza de la estimulación, y ambos han demostrado tener un impacto en la
secreción de citoquinas por las células B.
Los investigadores identificaron un nuevo tipo de Bregs (CD19 + CD25 +), en números bajos, pero
fácilmente apreciables, en la circulación periférica humana de pacientes con EM y controles
sanos. En un estudio, los pacientes con EM tuvieron una mayor frecuencia de células B circulantes
CD19 + CD25 +durante la recaída en comparación con aquellos en remisión. La frecuencia de
circulación de CD19 + CD25 + Bregs también fue mayor en pacientes con EM en remisión en
comparación con controles sanos (de Andres et al., 2014 ). Comprender el complejo papel de Bregs
ayudará a iluminar la inmunopatogenia de la EM, que puede ofrecer nuevas oportunidades para
atacar a la EM.
NMOSD
La NMO es un trastorno desmielinizante inflamatorio grave del SNC que se caracteriza por ataques
típicos de neuritis óptica y mielitis transversa extendida longitudinalmente (Wingerchuk et
al., 2007 , 2015 ). Varios estudios han indicado un papel crucial de las células B en la patogénesis del
trastorno del espectro de la NMO (NMOSD, Krumbholz y Meinl, 2014 ; Bennett et al., 2015 ). El papel central
de los autoanticuerpos contra la proteína acuosa del canal aquaporin 4 (AQP4, Lennon et al., 2004 ) y
MOG (Probstel et al., 2015 ) en la patogénesis de NMOSD ha proporcionado una nueva esperanza para
el tratamiento de este trastorno rápidamente incapacitante.
Algunos investigadores han informado sobre el papel de Bregs en la patogénesis de
NMOSD. Recientemente, dos artículos de investigadores chinos indicaron frecuencias
significativamente más bajas de diferentes subconjuntos de Bregs en pacientes con NMOSD en
comparación con pacientes con EM y controles sanos (Quan et al., 2013 ; Yang et al., 2015 ). Uno de estos
estudios demostró frecuencias significativamente más bajas de CD19 + CD24 hi CD38 hi Bregs e IL-
10 en NMOSD. Además, la frecuencia de CD19 + CD24 hi CD38 hi Bregs fue incluso menor en los
pacientes con NMOSD que arrojaron un resultado positivo para el anticuerpo AQP4 en comparación
con los que dieron negativo para el anticuerpo AQP4 (Quan et al.,2013 ).
Otro estudio pareció reflejar estos hallazgos en el sentido de que la proporción de
CD19 + CD5 + CD1d hiBregs fue significativamente menor en pacientes NMOSD en comparación
con aquellos en pacientes con EM y controles sanos. Además, la proporción de
CD19 + CD5 + CD1d hi Bregs en células CD19 + B fue menor en pacientes NMOSD con anticuerpos
AQP4 positivos que en pacientes con anticuerpos negativos (Yang et al., 2015 ). Estos hallazgos
parecen implicar la expresión reducida de Bregs en la patogénesis de los trastornos
neuroautoinmunes.
MG
La MG es un trastorno neuroautoinmune mediado por células B en el que los autoantígenos
principales son la tirosina cinasa específica de músculo (MuSK) o el receptor de acetilcolina (AchR)
en la membrana postsináptica de la unión neuromuscular, lo que produce debilidad muscular y fatiga
( Vincent et al., 2001 ; Guptill et al., 2015 ). Se ha demostrado que CD72 actúa como un receptor inhibidor
de células B en varios trastornos autoinmunes (Smith et al., 2004 , Nakano et al., 2007 ). Los estudios
preliminares han demostrado que CD72 parece estar significativamente disminuida en pacientes con
MG y negativamente se correlaciona con niveles anti-AchR-IgG. Esto sugiere un efecto inhibidor
de CD72 en la activación de células B en MG e implica CD72 en la causación de MG (Lu et al.,2013 ).
Recientemente se ha demostrado que la frecuencia y la función de Bregs
(CD19 + CD24 hi fenotipo CD38 hi así como CD19 + CD5 + CD1d hi fenotipo) se redujeron en
pacientes con MG en comparación con controles sanos. Además, la frecuencia y la función de Bregs
se asociaron con la actividad de la enfermedad (Sun et al., 2014 ). Otro estudio pareció reflejar estos
hallazgos en el sentido de que se detectó un menor porcentaje de células B10 en pacientes con MuSK
MG (Guptill et al., 2015 ). Por lo tanto, Bregs puede servir como un marcador de la actividad de la
enfermedad en pacientes MG y es un posible objetivo terapéutico futuro.
CONCLUSIONES
La evidencia disponible indica que los Bregs pueden regular a la baja las respuestas inflamatorias
excesivas en los trastornos neuroinmunológicos. Debido a las obvias limitaciones de la obtención
de muestras de sangre periférica humana, solo se han publicado algunos estudios sobre células B
reguladoras, a excepción de las enfermedades neuroinmunológicas más comunes, como la EM,
NMOSD y MG. Sin lugar a duda, habrá avances significativos en otras enfermedades
neuroinmunológicas importantes en los próximos años. Igualmente anticipamos la identificación
precisa de subpoblaciones de Bregs adicionales que producen diferentes citoquinas o median
funciones distintas. Sin embargo, aún no se sabe si las células B productoras de i35-Bregs e IL-10
se superponen a las subpoblaciones o simplemente representan diferentes etapas de las células B, y
esto debe abordarse en el futuro.in vitro y cómo lograr la función reguladora máxima de las células
B. Este conocimiento crucial abrirá las puertas para un enfoque prometedor y novedoso para el
tratamiento de los trastornos relacionados con el sistema inmune humano.
Notas
SIGNIFICADO Se cree que las células B regulan positivamente la respuesta inmune humoral
produciendo anticuerpos y activando las células T mediante la presentación del antígeno. Esta
revisión proporciona una sinopsis sucinta de la literatura actual y destaca un subconjunto específico
y funcionalmente significativo de las células B que puede regular a la baja la respuesta inmune a
través de citocinas inhibidoras como la interleucina (IL) -10, IL-35 y el factor de crecimiento
transformante-β. Este subconjunto de células B generalmente se denomina células B
reguladoras (Bregs). Se requiere investigación adicional para comprender cómo expandir Bregs
eficientemente in vitro para lograr la función reguladora máxima de las células B. Este conocimiento
crucial abrirá las puertas para un enfoque prometedor y novedoso para el tratamiento de los
trastornos neuroinmunológicos humanos.