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Resumen .............................................................................................................................................. 3
I. Introduccion ..................................................................................................................................... 1
Ii. Objetivos De La Investigacion ....................................................................................................... 3
2.1. Objetivo General .......................................................................................................................... 3
2.2. Objetivos Especificos ................................................................................................................... 3
Iii. Justificacion ................................................................................................................................... 3
Iv. Hipotesis ........................................................................................................................................ 3
V. Marco Teorico ................................................................................................................................ 4
5.1. Definición..................................................................................................................................... 4
5.2. Preparación De Anticuerpos Monoclonales ................................................................................. 4
5.3. Producción De Anticuerpos Monoclonales Humanos ................................................................. 5
5.4. Aplicaciones Clínicas ................................................................................................................... 6
5.5. Producción De Anticuerpos Monoclonales Por Medio De La Técnica De Hibridación. ............. 9
5.5.1. Producción De Anticuerpos Específicos. ................................................................................ 12
5.6. Ventajas De Los Anticuerpos Monoclonales ............................................................................. 13
5.7. Tipos De Anticuerpos Monoclonales ......................................................................................... 14
Vi. Conclusiones ............................................................................................................................... 16
Vii. Referencias Bibliográficas ......................................................................................................... 17
Anexos .............................................................................................................................................. 18
RESUMEN
Los anticuerpos monoclonales son glucoproteínas especializadas que hacen parte del
sistema inmune, producidas por las células B, con la capacidad de re- conocer moléculas
específicas (antígenos). Los anti- cuerpos monoclonales son herramientas esenciales en el
ámbito clínico y biotecnológico, y han probado ser útiles en el diagnóstico y tratamiento de
enfermedades infecciosas, inmunológicas y neoplásicas, así como también en el estudio de
las interacciones patógeno-hospedero y la marcación, detección y cuantificación de
diversas moléculas.
Una técnica que ha revolucionado la inmunología es la que permite producir una cantidad
sin límite de anticuerpos específicos por un antígeno determinado, estos son los anticuerpos
monoclonales. Estos han surgido de la necesidad que tenían los investigadores de estudiar
la estructura de los anticuerpos.
Los inmunólogos han podido desde entonces estudiar los rasgos estructurales de las
moléculas de los anticuerpos. Sin embargo no pudieron analizar en detalle los anticuerpos
(p. ej. conocer las secuencias de aminoácidos) la producción en masa de los anticuerpos
monoclonales. Georges Kohler y Cesar Milstein, en 1975, elaboraron las técnicas para la
producción de estos anticuerpos. El paso clave sucedió cuando las investigaciones
mostraron que pacientes o animales con mieloma múltiple, un tumor monoclonal de células
plasmáticas secretoras de anticuerpos, tenían altas concentraciones de anticuerpos
bioquímicamente idénticos o porciones de estos anticuerpos en su orina o sangre. Era
entonces una fuente de anticuerpos de una especificidad.
El organismo debe producir cientos de miles, o aun millones de moléculas adaptables con
sitios de reconocimiento diferentes. Esta molécula adaptadora se conoce como anticuerpo.
En un principio se creía que los anticuerpos derivaban de una molécula plástica maestra que
podía moldearse hasta adquirir la forma adecuada, con el antígeno como patrón, en la
actualidad se sabe que los anticuerpos son formados antes de siquiera ver al antígeno, y que
son seleccionados por él. El sistema funciona de la siguiente manera: cada linfocito de un
subtipo denominado linfocitos B, es programado para formar uno y sólo un anticuerpo, y
coloca ese anticuerpo sobre su superficie externa para actuar como receptor.
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Cuando un antígeno penetra en el organismo, es confrontado con un número deslumbrante
de linfocitos, cada uno con un anticuerpo diferente, con un sitio individual de
reconocimiento. El antígeno sólo se une a los receptores con los que se acopla en forma
adecuada. Los linfocitos cuyos receptores están ligados a antígeno reciben una señal
desencadenante y se desarrollan a células plasmáticas formadoras de anticuerpos, y dado que
los linfocitos están programados para formar un único anticuerpo, el secretado por las
células plasmáticas será idéntico al que actuó originalmente como receptor del linfocitos, es
decir, se unirá bien al antígeno. De esta manera, el antígeno selecciona los anticuerpos que
lo reconocen en forma eficaz.
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II. OBJETIVOS DE LA INVESTIGACION
III. JUSTIFICACION
Para comprender qué son los anticuerpos monoclonales y cómo actúan es importante
conocer algunas nociones básicas sobre el funcionamiento del sistema inmunitario y en
concreto de los anticuerpos, unas células especializadas que el organismo utiliza para atacar
a microorganismo y en general a cualquier agente extraño (antígeno). Son muchos los
anticuerpos que configuran el sistema de defensa del organismo, y todos tienen la
característica de ser muy específicos, ya que cada uno de ellos ataca a un único antígeno.
Además, ese ataque refuerza la resistencia del organismo ante futuras infecciones.
IV. HIPOTESIS
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V. MARCO TEORICO
5.1. Definición
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también la formación de anticuerpos monoclonales contra mezclas complejas de antígenos
multiópticos.
Los monoclonales de ratón inyectados en sujetos humanos con fines terapéuticos resultan
muy inmunogénicos y los anticuerpos anti-ratón humanos así formados representan un
problema que acelera la depuración del monoclonal de la sangre. En determinadas
circunstancias se supone que un monoclonal de ratón captado por una célula tumoral podría
ser procesado y transformarse en el blanco ligado al CMH de linfocitos T citotóxicos o
favorecer la respuesta contra un antígeno débilmente inmunogénico. Sin embargo, se tiende
a eliminar las porciones extrañas del anticuerpo monoclonal y reemplazarlos por Ig
humanas por DNA recombinante. Las construcciones quiméricas, en las que los dominios
murinos Vh y Vl son acoplados a genes humanos Ch y Cl son mucho menos
inmunogénicos en humanos aunque presenten cierta tendencia a provocar respuestas anti-
idiotipo; esto puede ser evitado por medio de anticuerpos quiméricos que cargan diferentes
idiotipos en inyecciones subsecuentes. Esto no representa un ejercicio trivial, y aún atrae el
objetivo de fusionar linfocitos B humanos para crear hibridomas, teniendo en cuenta no
sólo la importante reducción de la inmunogenicidad, sino además el hecho de que en una
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misma especie pueden formarse anticuerpos contra sutiles diferencias. A pesar de las
dificultades que existen para encontrar componentes adecuados para la fusión, se han
establecido numerosos monoclonales humanos. Los linfocitos B de la sangre periférica, por
lo general no se consideran una buena fuente de células formadoras de anticuerpo lo cual
representa una restricción adicional.
Muchos monoclonales humanos están listos para ser utilizados en clínica, pueden citarse el
IgG anti-RhD para la prevención de la enfermedad hemolítica del recién nacido por
incompatibilidad Rh, y monoclonales muy poderosos para la protección contra varicela
zoster, citomegalovirus, estreptococos grupo B y endotoxinas lipopolisacáridas de bacterias
gramnegativas.
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con lesiones a nivel de la médula espinal. Esta neutralización llevó a una regeneración de
las neuronas y una recuperación parcial de las funciones límbicas. La ventaja de las
aplicaciones de los anticuerpos monoclonales en la regeneración del sistema nervioso
central es que permite llegar a unos beneficios clínicos en vez de solo reducir los daños
causado por lesiones.
La globulina antilinfocito, que contiene anticuerpos que reaccionan con los antígenos
leucocitarios CD45, es un agente efectivo en la prevención de rechazo después de un
transplante de órgano. El Dr. Andrew Y. Lazarovitsy y colegas, reportaron que ratones
sometidos a un transplante de riñón y tratados después con dos inyecciones de la proteína
CD45RB, sobrevivieron y mantuvieron un funcionamiento normal de sus riñones.Otro
grupo de ratones en el cual el tratamiento había sido retardo a 4 días, las inyecciones de
CD45RB permitieron prevenir el rechazo agudo del órgano implantado.. El Dr. Lazarovits
añadió que los anticuerpos monoclonales bajo investigación tienen la ventaja de atacar solo
las células inmunes encargadas del rechazo de órganos.
b) En el SIDA
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especímenes del HIV-1 tiene implicaciones importantes en la elaboración de una vacuna
contra el SIDA.
d) En el Cáncer
En otro estudio, los investigadores usan los factores de crecimiento tumorales como terapia
contra el cáncer de mama. En la fase II de un estudio del Dr. José Baselga en el Memorial
Sloane Kettering Cáncer Center, los resultados mostraron que al atacar un receptor
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específico de un factor de crecimiento tumoral de mujeres con cáncer de mama
metastático, puede conllevar a la regresión del tumor. En estas investigaciones se usó
anticuerpos monoclonales humanos recombinados (HER2), que tienen una alta afinidad
para un receptor glicoproteico transmembranal llamado p185HER. Las 43 mujeres en el
estudio tenían cáncer de mama metastático con un HER2 sobreexpresado. Después de 10
semanas de terapia con los anticuerpos monoclonales específicos para HER2, se logró la
curación completa de una paciente, y la parcial de 4 más. La respuesta general al
tratamiento era de 11.6%. Según el Dr. Baselga la terapia fue bien tolerada por los
pacientes, y es un tratamiento viable porque contrario a la mayoría de los tratamientos
contra el cáncer, la terapia con anticuerpos monoclonales no es tóxica.
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La primera célula involucrada es un linfocito B de un animal previamente inmunizado con
el antígeno de interés, que aporta la memoria inmune y la capacidad de producir
anticuerpos contra el antígeno específico. La segunda es una célula tumoral de mieloma no
secretora de anticuerpos, deficiente en la enzima hipoxantina-guanina-fosforribosil
transferasa (HGPRT), útil en el proceso de selección posterior de los hibridomas, que
aporta su capacidad de división ilimitada (inmortalidad). De esta unión surge un tipo de
célula inmortal con la capacidad virtual- mente ilimitada de producción de anticuerpos
monoclonales, llamada hibridoma.
En 1985 se crearon los primeros anticuerpos quiméricos humanos a partir de ratones, con la
tecnología del ADN recombinante, en la cual los genes que codifican la región variable de
las Ig de ratón se unen con genes que codifican la región constante humana para, luego, ser
insertados en células de mieloma, donde producirán nuevas moléculas de anticuerpo que
tendrán una parte humana pero que tienen la unión específica del antígeno (Fab) generada
en ratones (1, 5) (figura 2).
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Figura 2: Anticuerpo quimérico en el que se conserva la región variable de ratón
Aunque los anticuerpos monoclonales quiméricos son menos inmunogénicos que los
anticuerpos monoclonales de ratón, se han observado respuestas importantes de tipo
anticuerpo-antiquiméricos en el 40% de los productos que se han usado en humano A.
Sin embargo, algunos estudios han reportado que esta transferencia puede generar una
afinidad variable hacia el antígeno; estos tipos de anticuerpos los han hecho diferentes
grupos de investigación y se han obtenido anticuerpos que mantienen la afinidad antigénica
y anticuerpos que la han disminuido. Este proceso debe llevar consigo la conservación de la
afinidad nativa para lo cual se ha implementa- do el modelo molecular de las regiones
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receptoras y donantes. Aunque la humanización de anticuerpos monoclonales ha
minimizado la respuesta anti-anticuerpo humanizado, se han reportado respuestas
exageradas con el 9% de los productos que se han usado.
2) Fusión: se realiza 3 días después de la dosis de recuerdo del Ag, momento de máxima
presencia de blastos en el bazo. Como agente fusionante se usa el polietilenglicol (PEG).
6) Clonado: los cultivos que dan reacción positiva específica deben ser clonados lo más
rápidamente posible para lograr el establecimiento de clones productores de Ac. El método
más utilizado es la dilución en medio líquido o método de la dilución límite. Consiste en
realizar diluciones de la población original para obtener cultivos que contengan una sola
célula capaz de originar el clon correspondiente.
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7) Producción de Ac monoclonales en grandes cantidades. Se puede realizar:
“In vitro”: realizar cultivos celulares de los híbridos a gran escala, obteniéndose
concentraciones de mgr/ml en los sobrenadantes.
5.6.1.- Homogeneidad
Al provenir de un único clon de células B, los anticuerpos monoclonales son idénticos entre
sí, lo que los convierte en unos reactivos homogéneos que confieren consistencia a los
ensayos.
5.6.2.- Especificidad
Una vez obtenidos los hibridomas, estos son una fuente inagotable de anticuerpos
monoclonales que permite obtenerlos a gran escala, de manera ilimitada y a un coste
razonable, mediante su cultivo in vitro.
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5.6. 4.- Reproducibilidad
Debido a que la producción se realiza a partir de una línea celular inmortal y estabilizada, el
proceso de producción de los anticuerpos monoclonales es altamente escalable hasta
niveles industriales.
Según su origen, podemos distinguir entre 4 tipos de Anticuerpos Monoclonales, los cuales
se diferenciar principalmente en su composición y diferente antigenicidad que presentan en
el organismo.
Murinos:
Eficacia terapéutica disminuida (sistema inmune los identifica como extraños y reacciona
para destruirlo.
Quiméricos:
Obtenidos mediante la humanización de los AcMo obtenidos del ratón por Ingeniería
Genética (regiones variables proceden de ratón que reconocen el antígeno específico y las
regiones contantes de los anticuerpos son humanas).
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Evitan el rechazo del Sistema Inmune al ser introducidos en el organismo.
Humanizados:
El 90% del anticuerpo es de origen humano, por lo que reduce aún más la inmunogenicidad
de los anticuerpos.
El 10% restante corresponde a las regiones CDR o hipervariables que son las únicas en este
caso que proceden del ratón.
Humanos:
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VI. CONCLUSIONES
Los anticuerpos monoclonales han sustituido a los sueros policlonales para las
investigaciones llevadas a cabo en las que se requiere ensayos de alta afinidad, sensibilidad,
y precisión, o bien donde se necesita trabajar en condiciones que permitan aumentar la
detectabilidad de una técnica.
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VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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ANEXOS
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Anexo 1
Técnica De Hibridación.
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Anexo 2
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