Clase instrumental 1 – cromatografía gaseosa

Cuando se desea realizar un análisis químico, normalmente los analitos o los

compuestos químicos no están puros, por ende, es necesario poder separarlos
para su identificación y cuantificación.
Ejemplo de esto: Identificar un fármaco en un tejido de salmón.
 ¿Qué es lo que es la cromatografía?
Es un método o técnica de separación que se usa en todas las ramas de la
ciencia. Esta palabra viene del griego chroma significa ‘’color’’ y Graphein
‘’escribir’’
Michael Tswett fue el primer botánico ruso en producir una cromatografía en 1906,
lo que hizo fue tratar de identificar los pigmentos que estaban en ciertas plantas y
poder de alguna manera describir si todos los pigmentos que estaban presentes
eran los mismos.
 ¿Hoy en día todo tipo de cromatografía tiene color?
No, pero en sus inicios se basó en los colores de los pigmentos.
Cromatografía
En las separaciones cromatográficas la muestra se desplaza en una fase móvil
(que puede ser un líquido, gas o un fluido supercrítico)
La fase móvil pasa a través de una fase estacionaria con la que es inmiscible (no
se mezcla) y que se fija a una columna o soporte sólido.

 La función de la fase móvil es transportar el o los analitos a través de la

columna cromatográfica y todos estos se mueven por esta fase
estacionaria.
En la cromatografía gaseosa como bien se mencionó, la fase móvil puede ser un
gas o un fluido supercrítico.
 - Fluido supercrítico: es un fluido que bajo ciertas condiciones de presión y
temperatura se comporta como un líquido, pero en realidad es un gas.
La fase estacionaria es un soporte en donde ocurre la cromatografía y la
separación de cada uno de estos dos puntos denota en un proceso de separación.

Cromatografía preparativa
La cromatografía preparativa se utiliza principalmente con fines cualitativos,
preparativos o de limpieza, entre otros.

Cromatografía en papel

 Sirve para realizar análisis cuantitativos

(identificar presencia o ausencia).
 La fase estacionaria está constituida
simplemente por una tira de papel de filtro.
 Los analitos se mueven en función de su
afinidad por la fase estacionaria.
 Es una técnica muy útil y no requiere de ningún
tipo de equipamiento.
 La muestra se deposita en un extremo
colocando pequeñas gotas de la solución y
evaporando el solvente. Luego el disolvente
empleado como fase móvil se hace ascender por
capilaridad.
 Después de unos minutos cuando el solvente
deja de ascender o ha llegado al extremo se
retira el papel y se seca.
 Si el solvente elegido fue adecuado y las
sustancias tienen color propio se verán las
manchas de distinto color separadas.
 Cuando los componentes no tienen color propio
el papel se somete a procesos de revelado.
 Hay varios factores de los cuales depende una
cromatografía eficaz: la elección del solvente y la
del papel filtro.
Muestra estándar: es una mezcla conocida, conocer su composición nos sirve
para saber qué es lo que hay en las muestras a separar.
Cromatografía en capa fina

 Es un poco más compleja que la cromatografía en papel.

 La cromatografía de capa fina es un procedimiento que se utiliza para
separar moléculas relativamente pequeñas.
 Consiste en una fase estacionaria y una fase móvil y el principio es el
mismo: la sustancia de interés se adhiere a la fase estacionaria y se mueve
con la fase móvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional
a la afinidad por la fase estacionaria.
 La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o
de un gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie sólida
(una placa de vidrio, aluminio, plástico o papel).
 Esta superficie sólida puede ser rígida o flexible.
 El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento dependerá del
tipo de moléculas que se quieran separar.
 La fase estacionaria consiste de un solvente que puede ser agua, un
solvente orgánico o una mezcla de ambos.

Cromatografía en columna
 - A diferencia de los dos procesos anteriores que eran ascendentes, en
cambio esta cromatografía es descendente.
- Se rellena una columna que puede ser de distintos tamaños, lo importante
es poner algodón o lana de vidrio, para que cuando se rellene con silica gel
no pase a través de la llave.
- Cuando se rellena toda la columna, es importante que no quede con
fracturas, puesto que no es un relleno sólido ya que se le va agregando con
solvente.
- Es una técnica utilizada principalmente para limpieza o depuración de la
muestra por separación de los componentes de la mezcla.
- La muestra se aplica en la parte superior y se eluye con los solventes
agregados por gravedad o forzados por presión externa

Fase estacionaria: Las fases estacionarias más comunes en cromatografía en

columna son Sílica gel (SiO2) y alúmina (Al2O3).
Dato: Los tipos de fases vendidas son, por ejemplo: “Sílica gel 60” o “Sílica gel
230-400” El número se refiere al número de agujeros por unidad de área (Mesh)
que tiene el filtro. Entonces mientras más grande es el número Mesh las partículas
que pasan a través de él tendrán un tamaño menor y esto significa que los
analitos van a recorrer lentamente esa trayectoria, por lo tanto, la elusión va a ser
super lenta.
Mesh 1/α Tamaño de partícula
 Partículas con valores de Mesh altos se usan con presión forzada Ej. 230–
400 mesh
 Partículas con valores de Mesh bajos se usan con gravedad Ej. 70–230
mesh
 Alúmina se vende en tres formas: acidia, neutra y básica.
¿Qué significa presión forzada? Significa situar algo en la superficie que empuje o
que logre acelerar el efecto de la fuerza de gravedad.

Cromatografía gaseosa

Es una de las técnicas más usadas en instrumentación. Puede ser usada como
método de identificación y cuantificación
Esta técnica tiene sus similitudes y diferencias con la cromatografía liquida:
 Esta técnica pude ser utilizada para compuestos con apreciable grado de
volatilidad (bajo 350 a 400C).
 El compuesto a analizar deber ser rápidamente volatilizado y no
transformado durante su análisis (esto no es función de los puntos de
ebullición, sino que también del tamaño de la molécula y la polaridad).
Dato: Algunos compuestos de origen farmacéutico son térmicamente sensibles y
se degradan con la temperatura, esta técnica no es la más idónea para estos
compuestos. La polaridad de la mayoría de los compuestos farmacéuticos es que
son iónicos y solubles en agua.
Existen dos tipos de cromatografías:
1. Gas – sólido
2. Gas – liquido
Esto significa que una es la fase móvil y la otra es la estacionaria respectivamente.
La cromatografía gas-líquido se basa en la distribución del analito entre una fase
móvil gaseosa y una fase líquida inmovilizada sobre la superficie de un sólido
inerte, esto quiere decir, que lo que transporta a los analitos a través del proceso
cromatográfico es un gas, a diferencia de la cromatografía liquida y se mueve a
través de una fase estacionaria que es un sólido o líquido.

Ejemplo: Cuando un gas está pasando a través de un líquido, lo que debiese

pasar es que el gas empuja al líquido, por lo tanto, la fase estacionaria nunca fue
estacionaria.
La mayoría de las cromatografías gaseosas es gas – líquido, pero ese líquido es
altamente viscoso (fase estacionaria).
IMPORTANTE RECORDAR QUE TODO ESTE PROCESO TIENE QUE VER CON
LA AFINIDAD… los más son los que más se demorarán en pasar por el proceso
cromatográfico.
Elusión: salir de (concepto)
Cuando uno hace un proceso cromatográfico hay millones de moleculas de
el o los analitos.

Equipo

Una vez que los analitos se

separan, se detectan. El
detector, no siempre, está
asociado a un gas del detector
a un control de flujo y luego
hay un registro de datos.

 Sublimar: pasar de
solido a gas, sin pasar
por líquido.
 Auto- sampler: es el sistema por el cual ingresa la muestra hacia el
inyector
 Para ingresar la muestra hacia el sistema es mediante una microjeringa.
  Microjeringa: Es una jeringa ‘’común y corriente’’ de dimensiones
manipulables, pero que el embolo en su interior tiene una capacidad muy
pequeña, normalmente no supera los 10 microlitros.

Gas portador (fase móvil)

Cumple básicamente dos propósitos:

1. Transportar los componentes de la muestra
2. Crear una matriz adecuada para el detector
Un gas portador debe reunir ciertas condiciones:
 Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la
fase estacionaria) por ejemplo, un gas que nunca se utilizaría para
cromatografía gaseosa sería el oxígeno, pues se oxida.
 Debe ser capaz de minimizar la difusión gaseosa, o sea que difunda de
forma homogénea a través del sistema.
 Fácilmente disponible y puro, el problema de esto es él precio.
 Adecuado al detector a utilizar.
A diferencia de los equipos de HPLC, los equipos de cromatografía gaseosa no
pueden prenderse y apagarse, deben estar encendidos aun cuando no esté
corriendo muestra, por lo tanto, debe estar pasando un flujo de gas portador,
aunque no se esté ocupando, pero se puede minimizar (desventaja).
Los tipos de gases empleados son:
Helio, argón, nitrógeno, hidrógeno, metano, dióxido de carbono, entre otros.
La elección de este gas depende del tipo de detector empleado.

 Manómetro: Mide la presión interna de un sistema.

 Barómetro: Mide la presión atmosférica.
Hay gases que son mezclas.
 No siempre el color del
cilindro se asocia con su
contenido.

Reguladores
Tiene dos presiones, uno
que tiene una mayor
graduación y otro que tiene
una menor graduación. El
que posee la mayor
graduación es de primer
estado y está conectado
directamente al cilindro, denota lo que queda en el cilindro, en cambio, el segundo
estado es con la presión que está saliendo del cilindro.

Generalmente la regulación de la presión se hace a dos niveles:

 Un primer manómetro se sitúa a la salida del cilindro de gas y el otro a la
entrada del cromatógrafo, donde se regula el flujo.
 Las presiones de entrada varían entre 10 y 25 psi (25 a 150 mL/min en
columnas de relleno y de 1 a 25 mL/min en columnas capilares).

Inyector
Es donde ingresa la muestra. En este compartimento la muestra es volatilizada
debido a la alta temperatura a la cual se encuentra el inyector.
La temperatura depende de los analitos, pero normalmente esta por sobre los
200°, no es constante.
 Normalmente lo que se inyecta a un
sistema cromatográfico, no es más de un
microlitro de muestra.
La jeringa pasa a través de una septa o
septum es como una ‘’goma’’ la cual tiene
por función evitar que la muestre una vez
que ingrese, salga.
En el interior del inyector es donde está la
cámara de vaporización, son unos tubos
de vidrios en los cuales se indica el flujo y
que tiene distintas geometrias internas, no
externas.

Split injection
Existen dos tipos de inyeccion:
 Split (con división): parte de ese volumen inyectado pasa al volumen
cromatografico y parte se purga o se va del sistema.
 Splitless (sin división): Significa que todo lo que este inyectando en el
sistema pasa al proceso cromatografico.
¿Cómo funciona esto?
Estan las moleculas del gas carrier que pasan a través del sistema, las
moleculas de la muestra y las moleculas del solvente que son las mayoritarias.
Cuando ocurre un proceso normal, todo lo que ingresa al sistema, las
moleculas, pasa al proceso cromatografico.
Si yo abro la valvula de split lo que se puede hacer es que parte de lo que se
inyecte pasa al sistema y la otra parte de alguna forma salga del sistema,
mediante una vía de escape (inyección split).
Normalmente los cromatografos vienen con un sistema de limpieza o purga de
septa ¿Por qué? Porque la septa, a pesar de que posea un bajo sangrado (low
bleeding) como está posicionada en el inyector, está a alta temperatura, por lo
tanto, lo que le puede pasar a la septa es que puede sufrir ciertas
modificaciones termicas y puede que ser que ciertos componentes por los
cuales esta fabricada la septa tambien pasen al proceso cromatografico y
cuando esto ocurre se conoce como sangrado, que es cuando la señal
analitica es mucho mayor a la del analito.
Para evitar esto, se agrega bajo la septa una especie de flujo o de gas
portador, que va de alguna forma limpiando los posibles componentes que se
han producido por la septa para que no entre al sistema.
Lo que normalmente se coloca en los cromatografos de gases es la razón del
split y en este caso es 80:1, esto significa que de cada 80 moleculas que
ingresan al sistema solamente una pasa al proceso cromatografico.
Cosas importantes de entender:
 Que significa y que herramientas nos proporciona ocupar split o splitless