UNIVERSIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA

DE MÉXICO

MATERIA:

TÉCNICAS DE LABORATORIO DE BIOLOGÍA.

NOMBRE DEL DOCENTE:

M en C. JAVIER CARRILLO CAMPOS

NOMBRE DEL ALUMNO:

JUAN LUIS IBARRA FLORES

UNIDAD:
4
ACTIVIDAD:

“Evidencia de aprendizaje”
FECHA:
06 DE SEPTIEMBRE 2018
 TINCIÓN DE PROTEÍNAS EN ELECTROFORESIS

La electroforesis es un método en el que las especies químicas cargadas

eléctricamente son separadas por migración diferencial en un campo eléctrico.
Generalmente se usa en la separación de moléculas como proteínas, enzimas,
ácidos nucleicos, polisacáridos, etc. La velocidad de migración de las partículas
en el campo eléctrico depende de las características de la especie química, como
son densidad, carga, peso y forma molecular; además de las características
propias del sistema como son pH, intensidad de corrientes, tipo de material de
soporte, etc.

Actualmente para la tinción de Proteínas por Electroforesis (SDS-PAGE), se utiliza

como agente colorante o revelador de las proteínas, el reactivo azul de Coomasie
con el que se pueden visualizar desde 0.1-0.5 µg de proteína por banda. Otro de
los métodos de tinción, se realiza con sales de plata, que permite gracias a su
elevada sensibilidad detectar hasta 0.1ng de proteína por banda, aunque presenta
una serie de desventajas entre las cuales se encuentran; elevada laboriosidad,
costo alto, baja reproducibilidad, y el hecho de que, algunas proteínas no se tiñen
y sobre todo, no presenta especificidad de proteínas, ya que algunos
lipopolisacáridos, ácidos nucleicos y polisacáridos también se tiñen. Un método de
sensibilidad para revelar proteínas en este tipo de técnicas es la del empleo de
compuestos fluorescentes que se unen específicamente a las proteínas, la unión
puede realizarse antes o después de la electroforesis, dentro de estos reactivos se
encuentran: el cloruro de dansilo que detecta hasta 10ng de proteína por banda, la
fluorescamina la cual detecta hasta 3-5ng de proteína por band y por último el
MDPF (2-metoxi-2,4-difenil-3(2H) furanona; que detecta hasta 1ng de proteína por
banda.

Una vez teñido el gel de poliacrilamida, la imagen que se obtiene es un conjunto

de bandas coloreadas sobre un soporte transparente. Su análisis permite
identificar el número mínimo de componentes (bandas) de cada muestra. Cada
banda se caracteriza por su movilidad electroforética relativa.

Ahora bien en la investigación de: “Evaluación de Procedimientos de Tinción

para el Análisis de Proteínas por Electroforesis (SDS-PAGE)”, se plantea la
evaluación de distintos colorantes para el revelado de los geles de electroforesis
utilizando; Violeta de Genciana (cloruro de hexametildisilazano-p-rosanilina), Azure
A (N’,N’-dimethylphenothiazin-5-ium-3,7-diamine), Azul Índigo 23 (2,2’-Bis(2,3-
dihydro-3- oxoindolyliden)), con el fin de determinar la capacidad de resolución en
el revelado de geles SDS-PAGE. Dicho estudio concluye que si es posible el uso
de colorantes comunes disponibles en cualquier laboratorio de análisis. Dentro de
los cuales el colorante violeta de genciana presentó mayor reproducibilidad,
linealidad y sensibilidad, reflejada en un menor límite de detección, a
concentraciones de muestra del orden de las proteínas. Es así como los
resultados de este trabajo pueden ser utilizados para posteriores investigaciones
donde se requiere el uso de electroforesis.

Propuesta (hipotética) de colorante revelador para proteínas en tiempo real.

Dentro de los colorantes o reveladores de proteínas o aminoácidos más usuales

en unan cromatografía en papel, se encuentra el uso de la ninhidrina( 2,2-
Dihydroxyindane-1,3-dione), esta reacciona específicamente con el grupo de amino
de los aminoácidos, ya sean libres o bien unidos mediante enlaces peptídicos.
Todo esto a pH entre 4 y 8, debido a que es un oxidante muy fuerte y siempre
reacciona con los grupos de amino liberando amonio, el cual se condensa con la
ninhidrina reducida y con otra molécula de ninhidrina formando un compuesto
coloreado que varía de azul a violeta púrpura(revelado). Este tipo de colorantes o
reveladores permitiría la tinción de proteínas en los geles de poliacrilamida en
tiempo real, y sin necesidad de la utilización de luz ultravioleta en el proceso de
revelación, ahora, al garantizar la interacción con los aminoácidos o en su defecto
con los enlaces peptídicos en las proteínas, garantizaría un alto grado de
sensibilidad, pues este tipo de enlaces solo existen entre proteínas o sus
derivados.

Referencias.

Alberts, B., Johnson, A., Walter, P., Lewis, J., Raff, M., & Roberts, K. (2008).
Molecular cell biology. New YorN and London: Garland Science.

Carrillo, J., Candia, M., Lugo, R., Espinoza, E., & Noriega, J. (2013). Evaluación de
Procedimientos de Tinción para el Análisis de Proteínas por Electroforesis (SDS-
PAGE). Invurnus, 8(1), 19-2.

Lehninger, A. L. (1978). Bioquímica, las bases moleculares de la estructura y

función celular, Albert L. Lehninger, F. Calbert Prats, J. Bozal Fes.

Scriban, R. (1985). Biotecnología. Ed. Manual moderno.

Stryer, L. (1988). Biochemistry by Lubert Stryer.