Cursul Disciplinei de Biofizica

si Fizica Medicala

Prof. dr. C. Stefanescu, Sef. lucr. dr. I. Grierosu, Prof. dr. V. Rusu
2016 - 2017

CURSUL 3
 Curs de
Biofizică

3
Metode de studiu
în Biofizică
Prof. dr. Cipriana ŞTEFĂNESCU
Şef lucr. dr. Irena GRIEROSU
3/18/2019 2
Clasificare:

 I. METODE GENERALE

 II. METODE SPECIFICE

3/18/2019 3
I. METODE GENERALE:

 A) Observaţia ştiinţifică

 B) Experimentul ştiinţific

Ştiinţa este o uşă şi

cercetarea este cheia acesteia.
- Anton Pann
3/18/2019 4
Observaţia ştiinţifică

Natura răspunde doar celui

pregătit să o audă.
3/18/2019 5
 Serendipitate

 Cuvânt la modă, îndeosebi în SUA.

 Origine interesantă. Ilustrează afirmaţia lui

Pasteur: „Şansa, întâmplarea ajută numai
spiritele pregătite”.
Serendipitatea este un „hazard fericit”.
3/18/2019 6
From gunpowder to Viagra, many of the greatest
eureka moments in human history were chance
discoveries that led to world-changing
inventions and ideas. Let this book take you on
a tour of the scientific and technological
advancements where leaps of faith, unexpected
inspiration, and sudden shifts of understanding
brought about overnight changes in our
perception of the world. Sudden flashes of
genius have shaped our lives for seven
thousand years, from the discovery of penicillin
to the invention of the microwave oven.
Celebrating the accidental Einsteins whose
moments of inspiration changed the world, this
book covers the work of familiar figures such as
Isaac Newton and Louis Pasteur, but also
reveals unsung heroes like the inventors of
3/18/2019 7
safety glass and the radio.
Hippocrate: observaţia ştiinţifică
 Hippocrate a fost fondatorul şcolii
medicale Kos şi numele lui este
strâns legat de prima perioadă a
medicinii ştiinţifice.

 Diagnosticul lui se bazează pe

sistemul de raţionament logic, pe
observaţie clinică atentă, pe o
abordare umană a pacientului, pe
logică.
3/18/2019 8
Hippocrate:
Părintele medicinii
Jurământul lui Hippocrate
Bazele cercetării ştiinţifice:
observaţia
Fişa medicală - Foaia de
observatie, continuă să fie cel
mai important document al
pacientului (primele observaţii
clinice - Hippocrate)
 Tratamentul pe
baze ştiinţifice
3/18/2019 9
 Observaţia ştiinţifică
 intenţională: scop
 metodică: metodă
 organizată, cercetare sistematică
 valoare cognitivă
 depinde de calităţile
cercetătorului
 fără intervenţia cercetătorului
- poate fi:
1. directă (bazată pe percepţia
senzorială)
2. indirectă (intermediată de un
instrument
3/18/2019 - stetoscopul)
Experimentul ştiinţific
aceleaşi caracteristici,
dar cu intervenţia
cercetătorului
 poate fi:
1. in vivo (pe modele animale)
2. in vitro (pe celule, culturi de
celule)
- nu poate fi aplicat pe om.10
 “L’expérience est une observation
provoquée dans le but de faire naître
une idée. ”
Claude Bernard

3/18/2019 11
 II. Metodele specifice biofizicii
Clasificare bazată pe 3 criterii:
I. Principiul fizic/biofizic al metodei (prezentat extensiv)
II. În relaţie cu modul de utilizare:
metode de separare
metode analitice (de analiză)
III. În relaţie cu complexitatea
biosistemului:
atomi,
molecule
celule
ţesuturi
organe, sisteme fiziologice
3/18/2019 12
 De ce ‘metode de separare’
pentru medic?
Analiza unei anumite proteine dintr-un ţesut
complex necesită separarea acesteia.
Schema unei celule animale tipice, care arată componentele
subcelulare. Organite: (1) nucleoli (2) nucleu (3) ribozom (4) veziculă
(5) reticulul endoplasmatic (ER) (6) aparatul Golgi (7) citoscheletul
(8) reticulum endoplasmatic (9) mitocondrii (10) vacuole (11)
citoplasma (12) lizozom (13) centriol.

Proteom - ansamblul de
proteine produse de
genom (aproximativ
60.000 de proteine la om).
3/18/2019 13
 Separarea-purificarea proteinelor
Scop
Studiul proprietăţilor unei proteine.
Determinarea secventei de aminoacizi.
Determinarea structurii tridimensionale.

Dificultate
Celulele conţin, de obicei mai mult de 1000
tipuri diferite de proteine. Fiecare proteină are
abundenţa medie mai puţin de 1 / 1000.

Soluţie
Diferenţele biochimice şi ale proprietăţilor fizico-
chimice ale proteinelor:
solubilitate, dimensiuni, punct izoelectric,
hidrofobicitate, afinitate pentru anumiţi liganzi.
3/18/2019 14
I. Grupele principale de
metode în raport cu
principiul fizic/biofizic
1. Metode electrokinetice: L.P.!
Electroforeza, electrofocalizarea şi imunoelectroforeza

3/18/2019 15
 Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

2. Metode cromatografice: (adsorbţie,

partiţie, schimb de ioni, afinitate)

3. Centrifugare şi ultracentrifugare L.P.!

4. Metoda de liofilizare

3/18/2019 16
 Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

5. Metode kinetice:
L.P.!
 Viscozimetrie
 Osmometrie L.P.!

 Măsurarea tensiunii superficiale L.P.!

3/18/2019 17
 Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

6. Metode optice:
 Fotocolorimetrie L.P.!

 Turbidimetrie
 Nefelometrie
 Fluorimetrie
 Polarimetrie L.P.!

 Refractometrie L.P.!

3/18/2019
 Flamfotometrie L.P.!
18
 Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

7. Metode electrice:
 Polarografie
 pH-metrie
 Conductometrie L.P.!

8. Difracţie cu raze X

3/18/2019 19
 Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

9. Microscopia optică:
Microscopul optic L.P.!
 Microscopul cu contrast de fază
 Microscopul cu fluorescenţă
 Ultramicroscopul
 Microscopul polarizant L.P.!

 Microscopul cu imersie L.P.!

3/18/2019 20
 Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

10. Microscopul electronic,

microanaliza nucleară şi alte
tehnici în relaţie.

3/18/2019 21
 Grupele principale de metode în raport cu
principiul fizic/biofizic

11. Metode de spectrometrie optică:

 spectrometrie ultraviolet-vizibil
 spectrometrie Raman
 spectrometrie RMN L.P.!
 spectrometrie de masă
14. Metode radio-izotopice L.P.!
15. Metode pentru studiul semnalului L.P.!
bioelectric (metoda patch-clamp - canale ionice şi l.p.)
3/18/2019 22
3/18/2019 23
 Bibliografie selectivă

 Aurengo A., Grémy F., Petitclerc T. - Biophysique, Médecine-Sciences Flammarion,

Paris, 1998.
 Dimoftache C., Herman S. – Principii de Biofizică umană, Ed. Universitară “Carol
Davila”, Bucureşti, 2003.
 Duncan G, Physics in the Life Sciences, Blackwell Scientific Publications, The
Alden Press, Oxford, 1990.
 Durand A., Escanyé J-M., Naoun A. La biophysique en 1001 QCM, Ed. Ellipses,
2004.
 Goldfarb D. Biophysics DeMYSTiFieD. McGraw-Hill Companies, 2011.
 Herman S. Aparatura medicală. Principiile fizice ale aparaturii medicale
moderne,Ed.Teora,Bucureşti, 2000.
 Nölting, Bengt. Methods in Modern Biophysics. Springer. 2003.
 Pascu M., Rusu V., Vasile C., Spectrometria in IR in medicina si farmacie, Editura
BIT, 2003.
 Popescu A., Bazele Opticii, Ed. Universităţii „Al. I. Cuza”, Iaşi, 1988.
 Rusu V., Baran T., Brănişteanu DD. - Biomembrane şi patologie, vol. I, Ed.
Medicală, Bucureşti, 1988, 63-92, 286-292.
 Rusu V. Note de curs. 2010.
 Rusu V. – Nobel – Retrospectivă 1905 – 1995 – Laureaţii premiului pentru
fiziologie şi medicină, Ed. Omnia, Iaşi, 1996.
 Rusu V si colab. Lucrări practice şi demonstraţii de Biofizică şi Fizică Medicală,
Ed. „Gr. T. Popa” Iaşi, 2003.
 Rusu V. – Dicţionar medical, Ed. Medicală, Bucureşti, ed. IV, 2011.
 Skoog D. A., Holler F. J., Nieman T. A., Principes d’analyse instrumentale, De
Boeck Université, Paris, 2003.
 Ştefănescu C, Rusu V. Biophysics and Medical Physics: An Introduction, Ed.
Tehnopress, 2008.
3/18/2019 24