INFORME PRÁCTICA 3 – PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y MICROORGANISMOS DEL
AMBIENTE
DANNA CUELLAR ERIKA TORRES, XIOMY ARIAS PRESENTADO A ALEJANDRO PATARROYO
CONVENIO SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE- CORPORACIÓN TENOLÓGICA DE BOGOTÁ
NOVIEMBRE 2014
Resumen:
Las prácticas en el desarrollo de la
experiencia en los análisis químicos, son
irreemplazables e ilustran, los procesos
biológicos que se pretende alcanzar
mediante guías o instrucciones a seguir. El
laboratorio de microbiología, permite seguir
con esta idea del conocimiento práctico.
Hace parte esencial, tener claro los procesos
que se necesitan en este tipo de práctica,
que en claridad no son las mismas
precauciones que se toman en un
laboratorio de química orgánica e inorgánica.
En este tipo de prácticas es necesario que el
ambiente y los objetos estén esterilizados,
esto, para permitir un ambiente libre de
bacterias o microorganismos, puesto que en
sí, el desarrollo de las actividades se basan
en inocular organismos específicos, en
medios de cultivos ricos en sustancias
nutricionales.
Se desarrolló la interiorización conceptual
sobre términos del entorno del laboratorio
microbiológico, como parte de los objetivos a
alcanzar en la práctica, como lo fue, los
principios generales de la preparación y
técnicas de esterilización de los materiales y
los medios de cultivo. La orientación fue a
partir del conocimiento del instructor, que
ilustró acerca del uso de la autoclave, este es
un equipo de uso común en la esterilización;
puesto que con su proceso de calor
húmedo, en el que se ve afectada la
estabilidad de estructuras celulares y de sus
proteínas, es pertinente para la
esterilización de medios de cultivo,
materiales de vidrio y cultivos bacterianos
que se desechen.
También se comprendió el concepto de
medio de cultivo. Este, constituye al aporte
de nutrientes indispensables para el
crecimiento de los microorganismos. Este,
permite que la especie que se quiera cultivar,
crezca dependiendo de su grupo
microbiano, su estado físico, su complejidad
química y su aplicación.
En la práctica se manejó tres tipos de medios
de cultivo distintos, dado que los
microorganismos tenían diferentes
procedencias.
En la preparación del vidrio, se procedió a
aprender a preparar los materiales para la
esterilización de estos, con una solución
salina y papel craft, para ponerlo en la
autoclave. En la preparación de los medios
de cultivo, se procedió en el pesaje y
preparación del agar nutritivo, su medición,
luego se ajustó, para ser distribuido en las
cajas Petri.
En el procedimiento, se llevó a cabo la
inoculación de los diferentes tipos de
bacterias que se iban a ver; con la instrucción
de dejar abierto por el espacio de una hora
una caja Petri, estriar e incubar por un
tiempo determinado, y luego de que este
transcurriera, se observó el tipo de colonias
formadas. Se hizo igual con las otras dos
cajas de Petri, con las bacterias asignadas, y
ya luego, con la ayuda del indicador del azul
de metileno, se hizo unas observaciones en
el microscopio.
Palabras clave: esterilización, microbiología,
medios de cultivo.
Abstract:
The practices in the development of the
experience in the analysis chemistries, is
unreplaceable and illustrate, the process
biologics that pretend to reach by means of
guidebook or instructions to follow. The
laboratory of microbiology, to permit follow
with this idea of knowledge practical.
Do it part essential, have clear the process
that need us in this type of practical, that
really no aren’t the same precautions that
take us in the laboratory of organic or
inorganic chemistry. In this type of
practical’s is necessary that the atmosphere
and the objects are to sterilize , this, for to
permit a atmosphere free of bacterium s or
microbes, because this activity is in base in
inoculate organism specifics, into mediums
of cultivation rich in nutritionals substances.
We to develop the to acquaint oneself
with conceptual about words of the site
of microbiology’s laboratory, like part of the
objectives to attain in the practice, like was,
the principle generals of the preparation and
techniques of sterilization of materials and
the by all means of cultive. The orientation
was from the knowledge of instructor, that
learned us about of use of the autoclave,
this is a equipment of use common in the
sterilization; because in the process of
warmth dump ,in this,see it to affect the
estability of celulars estructure and the
proteins, is pertinent for the sterilization of
medium of cultive, amterials of glass and
cultives bacteriums that to have to reject.
Also to usderstand the concepts of médium
of cultive. This,component the contribution
of nutritive necessary for growth of
bacteriums.this to permit that class that we
wanna cultive , grow up microbial group
depending on their physical condition, their
chemical complexity and application.
In practice three types of different culture
media are managed, since the
microorganisms have different origins.
In preparing the glass, proceeded to learn
how to prepare materials for sterilization of
these, with a saline solution and craft paper
to put in the autoclave. In the preparation of
the culture media, we proceeded in the
weighing and nutrient agar preparation,
measurement, then adjusted to be
distributed in Petri dishes.
The procedure was carried out inoculation of
different types of bacteria that would see;
with instructions to leave the space open for
an hour a Petri dish, fluting and incubate for
a certain time, and after this proceed, type of
colonies was observed
formed. It was the same with the other two
Petri dishes with bacteria assigned, and since
then, with the aid of methylene blue
indicator was made some observations on
the microscope.
Keywords: sterilization, microbiology culture
media.
Introducción:
El primer medio de cultivo probablemente
llega cuando el micólogo Brefeld, consigue
aislar y cultivar esporas de hongos en
medios sólidos realizados a base de
gelatina. Sin embargo este sistema no era
adecuado para las bacterias (por su menor
tamaño) pero en el año1878 Lister
popularizó un método enfocado al cultivo
puro basado en diluciones seriadas en un
medio líquido. Después Koch realizo sus
investigaciones con rodaja de papa como un
soporte nutritivo sólido, pero no tardó en
recurrir al caldo de carne líquida, diseñada al
que en 1881 añadió gelatina, logrando un
medio sólido transparente ideal para la
observación de la morfología macroscópica
de las colonias microbianas. En el año 1882
el médico alemán Walter Hesse introduce el
agar-agar (polisacárido extraído de algas
rojas) como solidifican te. Un gran avance en
la microbiología. Pero en 1887 un ayudante
de Koch llamado Petri, comienza a utilizar
placas de cristal planas, para sustituir a las
clásicas bandejas de vidrio cubiertas con
campanas que se usaban hasta entonces.
En 1892 Würtz impulsó el uso de los medios
diferenciales, incorporando indicadores de
pH a la composición de ciertos medios con lo
cual se podía observar la producción de
ácidos en la fermentación en ciertos
microorganismos.
Metodología:
1. Se Preparó el material de vidrio
(Figura1)
Se procedió a agregar 9ml de
solución salina al 0.85% y luego se
llevó a la autoclave (all american
model° 25x) envueltos en papel kraft
para ser esterilizado por 15 mínts a
121°C, la (Figura 1) muestra como
quedo luego de retirarlo de la mufla.
2. Preparación de medios de cultivo
El instructor asigno a cada grupo
preparar el agar nitritivo o con
sacarosa. El grupo de trabajo se
encargó de preparar el agar nutritivo
sacarosa 100 ml, por lo cual se tuvo
que hacer los cálculos para saber
cuánto agar se debía pesar para ese
volumen.
1000ml20g
100mlx= 2g agar
Luego se nos indicó que para ese
volumen se debía agregar 0.5g de
sacarosa para que quedara al 5% y
ponerlo en el agitador magnético
con plancha de calentamiento(Boeco
Germany), hasta total disolución,
como se ilustra en la (Figura 2).
 inoculo cada uno en la mitad de la
caja Petri con agar sacarosa, se
incubo (Memmert Incubadora Rust
Frei (Edelstan)) por 72h a 37°C
6. Se observó las bacterias del yogurt
de marca alquería.
I. Primero se procedió a
(Figura2)
colocar 1 gota de agua estéril
Después de terminada la disolución
en la lámina portaobjetos
se llevó a la autoclave (all american
II. Se tomó con una asa
model° 25x)a las mismas condiciones
previamente esterilizada un
que la solución salina.
poco de la parte más líquida
Cuando ya se sacó de la autoclave se
del yogurt y se esparció en la
agregó de a 20ml aproximadamente
lámina como se ve en la
en cada caja de Petri, como se ve en
(Figura 4), para hacer el
la (figura 3) y se dejó solidificar.
frotis.

(Figura3)
3. El siguiente paso fue dejar una caja
de Petri de agar nutritivo sacarosa y
agar nutritivo por una hora abierta y
la otra completamente cerrada, para
que en la de tapa abierta se cultivará
los microorganismos del ambiente
(Figura 4)
en este caso los del laboratorio de
III. Se fijó la muestra con ayuda
microbiología y en la tapa cerrada se
del mechero, ilustrado en la
esperara que habría
(figura 5)
microorganismos anaerobios. Luego
de pasado el tiempo se incubo por 3
días.
4. En las otras cajas de Petri se froto
con un copito previamente
humedecido con agua estéril y cerca
de la cámara de flujo laminar (ACN
Ingenieria GAEV 24" x 12"), una (Figura 5)
parte de la piel dos compañeros, y IV. La muestra se cubrió con
luego se inoculo cada uno en la azul de metileno y se dejó
mitad de la caja con agar nutritivo. actuar aproximadamente por
5. También se hizo lo mismo con la un minuto. (Figura 6). Luego
boca, uno se froto en la parte de la
lengua y el otro en la mejilla y se
 se lavó cuidadosamente para
eliminar el exceso.

(Figura 6) Ambiente (Cerrada)

V. Después se cubrió con la
lámina cubre objetos por  Clostridium botulinum
medio de el “splash”, que es  Bacillus anthracis
agregar 2 gotas de agua
estéril y poner la lámina sin
dejar burbujas.
VI. Por último se procedió a
observar en el microscopio
en todos los objetivos menos
el de inmersión.

Resultados:

Ambiente (Abierta)

 Pseudomonas aeruginosa
 Samonella

Piel

 Propionibacterium acnés
 Corinebacterias
 Candida
 Yogourt

4x
Boca

 Albicans

10x

16x

40x

Análisis Y Discusión

 La Pseudomonas aeruginosa es un
microorganismo aérobico que en el
agar nutritivo sacarosa se mostró
 como un pequeño punto verde y fue
la caja de Petri que se dejó abierta.
 La Samonella es anaerobia
facultativa, y usan la glucosa ya que
tienen una enzima especializada para
digerirla
 La Bacillus anthracis es una bacteria
anaerobia en el agar se ve de forma
circular y borde redondeado, puede
producir lesiones en la piel que se
manifiestan como una mancha
negra.
 La Clostridium botulinum es una
bacteria que se generalmente se
presenta en ambientes anaerobios,
su superficie es umbilicada, de forma
irregular y borde lobulado.
 La Propionibacterium acnés es una
bacteria anaerobia o eso se cree,
está presente en la piel
alimentándose de los ácidos grasos
producidos en los poros por las
glándulas sebáceas. Es de superficie
convexa , forma redonda y borde
redondeado.
 Las Corinebacterias son anaerobias
facultativas, se situan en la piel
humana, la mayoría de éstas no
causan ninguna afección. Son de
superficie convexa , forma redonda y
borde redondeado.
 La candida es un hongo unicelular
que generalmente está situado en
las mucosas humanas, pero también
en la piel, está relacionado con
algunas afecciones dependiendo del
tipo que sea, en el cultivo se ve de
forma redonda, de un color un poco
más amarillento.
 En el microscopio se pudo observar
con mayor detenimiento algunas
bacterias del yogurt como son la
lactobacylus bulgaricus y
streptococus salvarius, eso
demuestra que aunque este
producto es puesto a una
pasteurización, igualmente queda
cierto porcentaje de bacterias que
son las que permiten que el yogurt
tenga su fase de fermentación.
1. Mencione con que esporas bacterianas se
realiza el control biológico para el método de
esterilización de:
a) Calor húmedo: El calor húmedo es un
método térmico de esterilización y mata
microorganismos por la coagulación de
proteínas (desnaturalización), lo que es
causado por la rotura de los puentes de
hidrógeno que son los que mantienen a
las proteínas en su forma
tridimensional, las proteínas por lo tanto
regresan a su estructura secundaria, se
coagulan y se convierten en proteínas no
funcionales. El calor húmedo puede
penetrar más rápidamente que el calor
seco porque las moléculas de agua
conducen mejor el calor que las
moléculas de aire. Por ello el calor
húmedo puede ser usado a temperaturas
más bajas y menor tiempo de exposición
que el calor seco.
b) Calor seco: El calor seco es un método
térmico de esterilización y su efecto en
los microorganismos es equivalente al
horneado. El calor cambia las proteínas
microbianas por las reacciones de
oxidación y crea un medio interno árido,
así quema a los microorganismos
lentamente. Una simple analogía es la
lenta carbonización de papel dentro de
un horno caliente, aunque
la temperatura permanezca por debajo
del punto de ignición del papel.
c) óxido de etileno: Es un muy inflamable
que al ser mezclado con un gas inerte
produce una esterilización eficaz para la
destrucción del ADN y la estructura proteica
de los microorganismos. Se usa para
instrumentos que no pueden soportar altas
temperaturas la presión alta ni la humedad.
En la actualidad el óxido de etileno se usa
puro mezclado con anhídrido carbónico por
el momento ningún método de esterilización
iguala la penetrabilidad que tiene este su
ventaja reside en la capacidad que tiene para
penetrar las envolturas y otros materiales
también es muy importante porque es el
único método que se puede utilizar para
aquellos materiales que no soportan la
humedad ni la presión sin embargo este es
muy toxico y se sabe que a la exposición
prolongada puede causar leukemia.
2.- ¿Las bacterias del yogurt son autótrofas o
heterótrofas? Explique por qué.
BACTERIAS DEL YOGURTH**
Las bacterias son microorganismos
pluricelulares procariotícos , los cuales,
normalmente , poseen una rígida pared
celular que les permite protegerse del
exterior. Algunas segregan, exteriormente
una envuelta denominada capsula
bacteriana.
Son de vida autótrofa o heterótrofa.
Las bacterias que se alimentan de manera
heterótrofa tienen distintos modos de vida,
que fundamentalmente son:
Parasitaria: que es la relación que establece
entre dos especies, ya sean vegetales o
animales. En ella se distinguen dos factores
biológicos; el paraíso y el huésped. El
primero vive a expensas de la otra especie.
Las denominadas patógenas son las que
parasitan al hombre produciéndole algún
tipo de daño en forma de enfermedad.
Saprofilica: cualquier organismo que no
puede obtener su alimento mediante la
fotosíntesis ye n su lugar se nutre de estos
de materia vegetal o animal en putrefacción.
Simbiótica: que es la asociación
interdependiente de dos organismos de
especies diferentes
3.- Describa el tipo de contaminantes
microbianos que se encuentran con mayor
frecuencia en las cajas de Petri. ¿Cómo
explican estos resultados?
4. ¿Cuáles son las tres principales
recomendaciones de uso correcto de la
autoclave?
El autoclave es el equipo que se utiliza para
esterilizar. La destrucción o eliminación de
toda forma de vida microbiana, incluyendo
esporas presente en objetos inanimados
mediante procedimientos físicos químicos o
gaseosos.
CUIDADOS:
I. El lugar en donde el autoclave
permanece debe ser limpio por el
trabajo que hace.
 II. El autoclave tiene que ser limpiado  El yogurt necesita algunos
por lo menos cada tres días del microorganismos para poder
tanque y cámara, así como las partes fabricarse.
externas. Luego de terminar de
ocuparlo cada día, se desagüe el Bibliografía
generador luego fe haberlo
 Métodos de investigación
desocupado, y antes de limpiarlo
fitopatológica
asegúrese que la cámara este fría.
Escrito por Eduardo R.
III. Por ningún motivo deje solo al
French,Teddy Theodore
autoclave cuando esté funcionando,
Hebert.
siempre vigílelo por cualquier
 The Normal Flora. The
problema.
Bacterial Normal Flora. 2007.
IV. Fíjese que el material no salga muy
Kenneth Todar. Universidad
húmedo porque si no este se
de Wisconsin. Departamento
contamina muy fácil, vea que este
de Bacteriologia de Madison.
salga completamente seco así no se
 Manual Práctica
contaminara.
Microbiología General, José
Conclusiones María Botero Ospina.
 Microbiología T.T.J Inglis Dm
 Se logró reconocer los tipos de MRC Dim.
microorganismos que habitan en las  Ryan KJ; Ray CG
cavidades (especialmente en la boca) (2004). Sherris Medical
desarrollando para esto métodos Microbiology (4th ed.
aprendidos con anterioridad (tinción edición).
Gram) para así lograr los objetivos  Introducción a la
planteados. microbiología
 En el ambiente se encuentran Escrito por Gerard J.
diversos microorganismos, desde Tortora,Berdell R.
hongos hasta bacterias, incluso por Funke,Christine L. Case
él se propagan gran parte de los  Instrumentación quirúrgica:
virus. por esto Es necesario teoría, técnicas y
esterilizar los objetos y sustancias procedimientos
para prevenir margen de error en los Escrito por Joanna Kotcher
laboratorios debido a la Fuller,Joanna Ruth
contaminación microbiana que se Fuller,Elizabeth Ness
encuentra en el ambiente.  McCarthy, R. J., and P.
Courtney. 2004. Ohio State
 Nuestro cuerpo también es un
University.
excelente portador de
microorganismos.