PRÁCTICA No.

I. TITULO:

Validación de un método analítico por espectrofotometría UV/VIS para la determinación de

paracetamol (sistema).

II. OBJETIVO:

A partir del proceso analítico del laboratorio, aplicar los conocimientos adquiridos a la determinación de
paracetamol mediante la espectrofotometría UV-VIS y el análisis de sus resultados para identificar los
parámetros de desempeño correspondientes a la validación del método aplicado al analito en solución.

III. INTRODUCCIÓN:

Validación de métodos

La validación y verificación de métodos tiene por objeto asegurarse de que los resultados obtenidos
responden a los fines previstos mientras que la calibración y verificación del funcionamiento de los
instrumentos y equipo pretende garantizar que funcionen correctamente. La validación de un sistema
analítico, denominada también frecuentemente prueba de la conveniencia del sistema, se centra en
controlar el funcionamiento combinado del método y el equipo en los procedimientos de análisis
ordinarios.

Los métodos utilizados en un laboratorio de análisis químicos han de ser evaluados y sometidos a prueba
para asegurarse de que producen unos resultados válidos y coherentes con el objetivo previsto, es decir,
han de ser validados.

Todos los métodos nuevos que se introduzcan en un laboratorio deben estar además documentados, y
todos los analistas que los vayan a utilizar han de recibir una formación adecuada y demostrar su
competencia en su utilización antes de empezar a actuar en casos concretos.

También necesitan una reválida, o al menos una verificación, los métodos comercializados. Los
procedimientos recomendados por los fabricantes han de respetarse lo máximo posible.

En caso contrario, si se introducen cambios importantes, se necesitará una validación completa.

Si un método se modifica o se aplica en una situación nueva (por ejemplo, una muestra de matriz nueva)
se necesitará una revalidación o una verificación, según el alcance de la modificación y el carácter de la
nueva situación. Por ejemplo, se necesitará una revalidación si un método diseñado para actuar con orina
se utiliza con sangre; se necesitará una verificación si se utiliza una columna cromatográfica de un
carácter o una dimensión diferentes.

Para los fines de una validación, se utilizan generalmente procedimientos señalados normativamente o guías de
reconocimiento nacional e internacional que sirven de apoyo para establecer Sistemas de Calidad Analítica que
ofrecen confiabilidad en las mediciones llevadas a cabo para la ´determinación de uno o varios analitos en una gran
variedad de muestras, las diversas metodologías empleadas para llevar esta actividad utilizan conceptos señalados
en los documentos señalados en estas guías y normatividades enfocadas al proceso de validación analítica, entre los
principales se comentan a continuación:

SE RECOMIENDA A LOS ALUMNOS QUE UTILICEN LAS DEFINICIONES Y PROCEDIMIENTOS QUE SEÑALAN
LAS GUIAS DE LA CCAYAC-P058 Y LA GUIA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS DEL COLEGIO DE
QFB PARA DESCRIBIR LO MAS ACERTADO QUE PERMITA SU COMPETENCIA LOS SIGUIENTES
CONCEPTOS:
Validación del Sistema: (Incluya como lo recomienda cada normatividad y/o Guía)

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Parámetros de validación para el sistema: (Incluya ecuaciones para cada parámetro)

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Formula estructural y desarrollada del Paracetamol

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Propiedades fisicoquímicas del Paracetamol

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Farmacodinamia y Farmacocinética del Paracetamol

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IV. METODOLOGÍA:

a. Material y reactivos:

Marca y pureza:
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Vaso de precipitado
Matraces volumétricos (100, 50, 25 y 10 ml)
Pipetas volumétricas (5, 4, 3, 2, 1 y 0.5 mL)
Gradilla
Tubos con tapón de rosca
Sustancia de referencia de paracetamol
Alcohol etílico absoluto
Agua desionizada
b. Equipo y/o Instrumento:
Marca y modelo:
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Balanza analítica
Espectrofotómetro UV/Vis

c. Preparación de soluciones:

Solución Stock del estándar (150 ppm)

Pesar de acuerdo a la pureza del estándar la cantidad equivalente a 15 mg de paracetamol, transferir a

un matraz volumétrico de 100 mL, adicionar 10 mL de etanol y disolver completamente, llevar al afore con
agua desionizada.

d. Instrucciones:

A partir de la solución de 150 ug/mL, preparar las curvas de calibración necesarias para determinar
cada parámetro de desempeño (señalar normatividad o guía utilizada como base para su ejecución y
de acuerdo a su protocolo) para la validación del sistema en las concentraciones indicadas en la
siguiente tabla:

Conc. final Volumen Volumen final

Nivel Paracetamol Solución Stock Solución de
(μg/mL) (mL) Trabajo (mL)
1 3
2 6
3 9
4 12
5 15

Determinar las absorbancias correspondientes a 244 nm, utilizando agua como blanco de ajuste.

Evaluar los parámetros de validación correspondientes a sistema de acuerdo a lo establecido en la “Guía

de validación de métodos analíticos”, editada por el Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos
Biólogos A.C:

 Intervalo lineal
 Intervalo de Trabajo
 Precisión del sistema
 Linealidad del sistema
 Repetibilidad
 Precisión intermedia (utilizar los datos de los otros equipos del grupo)
 Sensibilidad
 Límite de detección (con base a la S0 y Sb )
 Límite de cuantificación (con base a la S0 y Sb)
 Exactitud (Recuperación y Sesgo)
  Precisión del sistema

Preparar por lo menos un sextuplicado de soluciones a la concentración del analito que represente la
concentración de la solución de referencia utilizada, o en ciertos casos, la concentración que represente
el 100% de la muestra procesada para su medición; preparadas por dilución o por pesadas
independientes. Medir la respuesta analítica bajo las mismas condiciones.

 Linealidad del sistema

Preparar por lo menos por triplicado 5 niveles de concentración (intervalo) de la solución de referencia ya
sea por dilución (a partir de una misma solución concentrada) o por pesadas independientes (cuando no
sea posible prepararlas por dilución). La concentración central debe ser igual a la que se prepara la
solución de referencia en el método o en ciertos casos, la concentración que represente el 100% en la
muestra procesada para su medición.

 Repetibilidad

Preparar por lo menos 6 muestras del analito, hasta completar lo que represente el 100% de éste en la
muestra. Las muestras deben ser analizadas por un mismo analista bajo las mismas condiciones
utilizando como referencia la sustancia empleada en la adición de la muestra.

 Precisión intermedia

Analizar por triplicado una muestra homogénea del producto que tenga un nivel cercano o igual al 100 %
(en el caso de contenido/ potencia/ valoración) o una muestra homogénea cuyo contenido esté incluido
en el intervalo lineal de concentración de linealidad de método, en dos días diferentes y por dos analistas
diferentes. Utilizar de preferencia la misma sustancia de referencia y los mismos instrumentos y/o
equipos.

 Sensibilidad

Estimar este parámetro a partir de los datos de la linealidad del sistema, de acuerdo a las guías o
normatividades revisadas en el salón de clases

 Límite de detección y cuantificación (con base a la Sb0)

Preparar por lo menos 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos adicionados, etc.;
según proceda). La concentración central debe ser igual a la que se prepara la solución de referencia en
el método o en ciertos casos, la concentración que represente el 100% en la muestra procesada para su
medición.

 Exactitud (Recuperación y Sesgo)

Estimar este parámetro a partir de los datos de la linealidad del sistema, de acuerdo a las guías o
normatividades revisadas en el salón de clases
V. CALCULOS:
Proceder a calcular cada parámetro de validación del sistema que define el desempeño del método analítico

Intervalo lineal ______________________________________________________________________

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Intervalo de Trabajo ______________________________________________________________________

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Precisión del sistema ______________________________________________________________________

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Linealidad del sistema ______________________________________________________________________

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Repetibilidad ______________________________________________________________________
________________________________________________________________________________________

Precisión intermedia (utilizar los datos de los otros equipos del grupo) ____________________________
________________________________________________________________________________________

Sensibilidad ______________________________________________________________________
________________________________________________________________________________________

Límite de detección (con base a la S0 y Sb ) __________________________________________________

________________________________________________________________________________________

Límite de cuantificación (con base a la S0 y Sb) _______________________________________________

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Exactitud (Recuperación y Sesgo) __________________________________________________________

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VI. RESULTADOS
Criterios de aceptación

CRITERIOS DE ACEPTACION
PARÁMETROS CCAYAC- GUÍA DEL
RESULTADO OBTENIDO
P058 COLEGIO DE QFB
Intervalo lineal
Intervalo de Trabajo
Precisión del sistema
Linealidad del sistema
Repetibilidad
Precisión intermedia
(reproducibilidad)
Sensibilidad
Límite de detección
Límite de cuantificación
Exactitud (Recuperación
y Sesgo)
VII. EQUIPO DE SALUD OCUPACIONAL:

Bata de algodón, lentes de seguridad, zapato cerrado con suela antiderrapante y guantes de nitrilo.

VIII. MANEJO DE RESIDUOS GENERADOS:

Las soluciones preparadas deberán ser tratadas de acuerdo con lo indicado en su hoja de seguridad de los
reactivos empleados

IX. CONCLUSIONES:
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X. BIBLIOGRAFÍA:

1. Paracetamol KERN PHARMA 500mg comprimidos EFG, Ficha de seguridad

https://www.aemps.gob.es/cima/pdfs/es/ft/75410/FichaTecnica_75410.html.pdf [Octubre 2017]

2. Lorenzo and F. Pedro, Farmacología básica y clínica. 18a ed. 2010: Panamericana.

3. Duran, D. Análisis físico- químicos de productos farmacéuticos en las diferentes etapas del proceso de
la industria farmacéutica. Universidad de Carabobo. Facultad experimental de ciencias y tecnología.
Coordinación de pasantıas 1-33, 2011.

4. Díaz de Armas M, Hernández Oramas I, Martínez Cuervo M. Validación de técnicas analíticas

utilizadas en el control de calidad. Rev Cubana Farm. 1998;32(2):1.

5. United States Pharmacopoeia Convention. Farmacopea de los Estados Unidos USP. Validation of
Compendial Methods. 27 ed. Rockville: Maryland; 2004.

6. Guía de validación de métodos analíticos; editada por el Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos
Biólogos de México, A-C. Mayo 2002

XI. BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA POR EL ALUMNO:

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