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Doenças e o Genoma: Doenças
Genéticas, Neoplásicas e do
Desenvolvimento
Ashley G. Riverbark e William B. Coleman
INTRODUÇÃO
Ao longo dos séculos, médicos e cientistas têm estudado as
doenças humanas por meio da descrição de lesões anormais
(patologia) e seus efeitos adversos nos pacientes (fisiopatologia),
procurando identificar os fatores de risco (suscetibilidade)
e as causas (agentes etiológicos) e buscando uma maior
compreensão de como surgem as doenças (patogênese).
Com o progresso nessas direções, algumas doenças humanas
atualmente são bem compreendidas na perspectiva dos
fatores de risco e causais, tendo sido desenvolvidas estratégias
de prevenção e/ou tratamento. Para muitas outras doenças
humanas, a investigação dos elementos fundamentais da
patogênese molecular e celular representa um esforço contínuo.
No entanto, nas últimas décadas, o campo da patologia evoluiu
no reconhecimento de que as doenças podem se manifestar,
em muitos casos, como um reflexo direto de mudanças nos
padrões da expressão gênica e, muitas vezes, envolvendo
alterações no próprio genoma. Há também o reconhecimento
de que os padrões de expressão gênica em determinado
O GENOMA HUMANO
o Dna é a Fonte de informação
Genética
Entre os blocos construtores essenciais das células vivas que fo-
ram identificados e caracterizados por químicos e pelos primei-
ros bioquímicos estão os ácidos nucleicos – polímeros de cadeia
longa compostos de nucleotídeos. Os ácidos nucleicos foram
denominados com base parcialmente em suas propriedades
químicas e parcialmente na observação de que eles represen-
tam um constituinte importante do núcleo celular. A percep-
ção fundamental de que os ácidos nucleicos formam as bases
químicas para a transmissão das características genéticas não
ocorreu até cerca de 65 anos atrás. Antes desse período, havia
considerável discordância entre os cientistas se a informação
genética estava contida e era transmitida por proteínas ou áci-
dos nucleicos. Constatou-se que os cromossomos continham o
ácido desoxirribonucleico (DNA) como constituinte principal,
C A P Í T U L O
tipo de lesão (p. ex., determinada forma de câncer) irão
influenciar o comportamento clínico dessa lesão e sua resposta
à terapia. Portanto, um grande esforço tem sido feito para
caracterizar as bases genéticas de várias doenças humanas
(patologia molecular), levando a uma melhor compreensão das
contribuições das alterações genômicas para o desenvolvimento
e a progressão de doenças. A patologia molecular representa
a aplicação dos princípios da biologia molecular básica à
investigação dos processos de doenças humanas. Nossas
percepções, sempre crescentes, sobre as bases moleculares
da doença fornecem oportunidades para o desenvolvimento
de abordagens novas e inovadoras para o diagnóstico, a
classificação e a avaliação prognóstica das doenças humanas
e para a expansão de tratamentos direcionados a alvos ou vias
moleculares específicas. Neste capítulo, fornecemos uma visão
geral do papel das alterações genômicas nas doenças genéticas,
neoplásicas e do desenvolvimento, com ênfase especial no papel
das mutações e epimutações na patogênese dessas doenças.
mas não se sabia se esse DNA carregava a informação genética
ou se servia meramente como um arcabouço para alguma classe
de proteínas desconhecidas que carregavam a informação gené-
tica. Entretanto, a demonstração de que as características ge-
néticas podiam ser transmitidas pelo DNA formou a base para
numerosas investigações centradas na elucidação da natureza
do código genético. Nos últimos 65 anos, numerosos investiga-
dores participaram da revolução científica que conduziu à bio-
logia molecular moderna. Apresentaram significado especial a
elucidação da estrutura do DNA, a determinação das relações
estrutura-função entre o DNA e o RNA e a aquisição de percep-
ções básicas dos processos de replicação do DNA, transcrição
do RNA e síntese proteica.
o Dogma Central da Biologia molecular
A biologia molecular desenvolveu-se em um amplo campo de
busca científica e, ao mesmo tempo, representou um compo-
nente básico da maioria das outras ciências de pesquisas básicas.
2   Capítulo 1
Esse fato aconteceu pela rápida expansão de nossos conheci-
mentos sobre numerosos aspectos básicos da biologia mole-
cular e pelo desenvolvimento de uma compreensão das intera-
ções fundamentais entre os diversos processos principais que
abrangem o campo maior de investigação. Uma teoria, referi-
da como dogma central, descreve as inter-relações entre esses
processos principais. O dogma central define o paradigma da
biologia molecular de que a informação genética se perpetua
como sequências de ácidos nucleicos e que os genes funcionam
por sua expressão na forma de moléculas de proteínas. Molé-
culas individuais de DNA funcionam como moldes para fitas
complementares de DNA durante o processo de replicação
ou moléculas complementares de RNA durante o processo de
transcrição. Por sua vez, as moléculas de RNA funcionam como
moldes para a ordenação de aminoácidos por ribossomos du-
rante a síntese proteica ou tradução. Essa simples representa-
ção de interações e inter-relações complexas entre DNA, RNA
e proteínas (Figura 1-1A) foi proposta e normalmente aceita
logo após a descoberta da estrutura do DNA. No entanto, esse
paradigma ainda se sustenta mais de 50 anos depois e continua
a representar um princípio norteador para os biólogos mole-
culares envolvidos em todas as áreas de pesquisa de biologia
básica, biomedicina e genética.
Com os avanços de nossa compreensão dos fundamentos
moleculares da célula eucariótica, o conceito de dogma central
permanece em grande parte o mesmo. Porém, agora reconhe-
cemos a importância da manutenção da integridade genômica
por meio de mecanismos de reparo do DNA, múltiplos meca-
nismos e níveis de regulação da expressão gênica (nos níveis de
transcrição e pós-transcrição) e modificação da funcionalida-
de das proteínas pela modificação pós-tradução (Figura 1-1B).
Replicação
Transcrição Tradução
DNA RNA Proteína
A
Reparo de DNA
Modificação
Replicação Metilação de DNA microRNA
pós-tradução
Transcrição Tradução
DNA RNA Proteína
Modificação de histonas
B Dano ao DNA
Figura 1-1 O dogma central. (A) O dogma central da biologia
molecular como originalmente descrito por Crick. Este esquema ilustra
o fluxo de informação genética do DNA para o RNA e, a seguir, para a
proteína, ilustrando também como o DNA funciona como seu próprio
molde na replicação. (B) O novo dogma central reflete avanços em nos-
sa compreensão dos processos moleculares que ocorrem em células
normais. Esses processos incluem a regulação epigenética da expressão
gênica por metilação do DNA e modificação de histonas, a regulação
pós-transcrição da expressão gênica por microRNAs e a modificação da
funcionalidade proteica por modificação pós-tradução (que pode in-
cluir glicosilação, ubiquitinação, fosforilação ou outros processos). Esse
novo dogma central também enfatiza a importância dos processos de
reparo do DNA na manutenção da integridade do genoma.
Numerosos mecanismos de reparo do DNA são expressos em
células eucarióticas para garantir a integridade da estrutura
primária do DNA (a sequência do DNA). Esses mecanismos
funcionam em conjunto com os processos de replicação (para
proteção contra erros de replicação) e transcrição (para pro-
teção de regiões expressas no genoma). As principais vias de
reparo do DNA para danos na sequência primária do DNA in-
cluem o reparo de pareamentos errados, o reparo de excisão de
nucleotídeos e os mecanismos diretos de reversão química. As
células eucarióticas também apresentam vias de reparo do DNA
que podem corrigir quebras na fita e outros danos no nível cro-
mossômico. A regulação da transcrição da expressão gênica é
realizada por interações equilibradas de fatores de transcrição
de ativação específica e inibidores de repressão da expressão gê-
nica. Além disso, o controle de transcrição da expressão gênica
é muito influenciado pelos fatores epigenéticos, incluindo a me-
tilação da sequência do DNA e o remodelamento da cromatina
secundário à modificação de proteínas histonas. A regulação
pós-transcrição da expressão gênica é influenciada por micro­
RNAs (miRNAs) que direcionam a degradação de RNAs men-
sageiros (mRNAs) específicos. As proteínas codificadas por ge-
nes estruturais muitas vezes são modificadas na pós-tradução
por glicosilação, fosforilação, acetilação, metilação ou clivagem
enzimática, resultando em um polipeptídeo com funções novas
ou modificadas. Esse novo conceito de dogma central descreve
com maior precisão o número e a complexidade das funções
celulares que incidem no genoma e sua expressão (Figura 1-1B).
Estrutura e Organização do Genoma
Humano
Natureza Química do DNA
O DNA é uma molécula polimérica composta de subunidades
repetidas de nucleotídeos. A ordem das subunidades de nucle-
otídeos contidas na sequência linear ou na estrutura primária
desses polímeros representa toda a informação genética de uma
célula. Cada nucleotídeo é composto de (1) um grupo fosfato,
(2) um açúcar pentose (5 carbonos) e (3) um nitrogênio cíclico
que contém um composto chamado de base. No DNA, o radical
açúcar é o 2-desoxirribose. O DNA eucariótico é composto de
quatro bases diferentes: adenina, guanina, timina e citosina (Fi-
gura 1-2A). Essas bases são classificadas de acordo com suas es-
truturas químicas em dois grupos: adenina e guanina são estru-
turas em anel duplo denominadas purinas, e timina e citosina
são estruturas em anel simples denominadas pirimidinas (Fi-
gura 1-2A). Na composição geral do DNA, a concentração de
timina é sempre igual à de adenina, e a concentração de citosina
é sempre igual à de guanina. Assim, a concentração total de
pirimidinas é sempre igual à concentração total de purinas. A
relação constante entre purinas e pirimidinas no DNA, e, mais
especificamente, a mesma concentração de adenina/timina e
guanosina/citosina, é conhecida como regra de Chargaff. As
observações de Chargaff relacionadas à composição de purina/
pirimidina do DNA foram validadas quando foi reconhecido
que adenina/timina (A:T) e guanosina/citosina (G:C) são espe-
cificamente ligações de hidrogênio na estrutura do DNA. Os
pares de adenina-timina são ligados na estrutura do DNA por
 Doenças e o Genoma: Doenças Genéticas, Neoplásicas e do Desenvolvimento    3

NH2 O NH2 O

N CH3
N
N N N N

N N N N N N
NH2 O O
HOCH2 O HOCH2 O HOCH2 O HOCH2 O

OH OH OH OH
A 2′-desoxiadenosina 2′-desoxiguanosina 2′-desoxicitosina 2′-desoxitimosina

Adenosina Citosina Guanosina Timosina

FIGURA 1-2  Blocos de construção do DNA. (A) Estrutura química dos desoxirribonucleosídeos da purina (2‘-desoxiadenosina e 2‘-desoxigua-
nosina) e da pirimidina (2‘-desoxicitosina e 2‘-desoxitimosina). (B) Estrutura química de subunidades de repetição de nucleotídeos no DNA. As áreas
sombreadas destacam uma ligação 3‘,5‘-fosfodiéster.

ligações duplas de hidrogênio, e os pares de guanosina-citosina
são ligados por ligações triplas de hidrogênio. A extensa liga-
ção de hidrogênio entre as fitas de DNA na estrutura de dupla-
-hélice da molécula confere grande estabilidade em condições
fisiológicas. As unidades de nucleotídeos monoméricos são
ligadas entre si na estrutura polimérica do DNA por ligações
3ʹ,5ʹ-fosfodiéster (Figura 1-2B). Os DNAs naturais apresentam
ampla variação de tamanho, dependendo de sua fonte. Os pesos
moleculares relativos variam de 1,6 × 106 dáltons para DNA de
bacteriófago a 1 × 1011 dáltons para um cromossomo humano.
Estrutura do DNA
A estrutura do DNA é uma dupla-hélice, composta de duas fitas
de polinucleotídeos que são enroladas entre si em uma espiral.
Cada fita de polinucleotídeo é fixada à outra por ligações fosfo-
diéster ligando metades das desoxirriboses adjacentes (Figura
1-2B). As duas fitas são fixas entre si por várias interações não
covalentes, incluindo interações lipofílicas entre bases adjacen-
tes e ligações de hidrogênio entre as bases de fitas opostas. Os
esqueletos de açúcar-fosfato de duas fitas complementares são
antiparalelos – isto é, eles possuem polaridade química opos-
ta. Movendo-se ao longo da dupla-hélice de DNA em uma di-
reção, as pontes de fosfodiéster em uma fita são orientadas de
5ʹ-3ʹ, enquanto são orientadas de 3ʹ-5ʹ na fita complementar.
Essa configuração resulta em pares de bases sendo empilhados
entre as duas cadeias perpendiculares ao eixo da molécula. Os
pares de bases são sempre específicos: adenina é sempre parea­
da com timina, e guanina é sempre pareada com citosina. Essa
especificidade resulta das capacidades das ligações de hidro-
gênio das próprias bases. Adenina e timina formam duas liga-
ções de hidrogênio, e guanina e citosina formam três ligações
de hidrogênio. A especificidade das interações moleculares, no
interior da molécula de DNA, permite a previsão da sequência
de nucleotídeos em uma fita de polinucleotídeo, se a sequência
de nucleotídeos da fita complementar for conhecida. Embora
as próprias ligações de hidrogênio sejam relativamente fracas,
o número dessas ligações no interior de uma molécula de DNA
resulta em uma molécula muito estável que não se separa de
modo espontâneo em condições fisiológicas. Há muitas possi-
bilidades de ligações de hidrogênio entre pares de bases hetero-
cíclicas. As mais importantes são os pares de bases com ligações
de hidrogênio A:T e G:C que foram propostos por Watson e
Crick em seu DNA com estrutura de dupla-hélice. Entretanto,
outras formas de pareamento de bases foram descritas. Além
disso, interações hidrofóbicas entre as bases empilhadas na
dupla-hélice conferem uma estabilidade adicional à molécula
de DNA. Existem três formas reconhecidas de hélices de DNA:
A, B e Z. A conformação B é a forma dominante em condições
fisiológicas. No DNA B, os pares de bases têm uma distância de
0,34 nm entre eles, com 10 pares de bases por volta da dupla-
-hélice voltada para a direita, e um diâmetro de cerca de 2 nm.
Como o DNA B, a conformação A também é uma hélice volta-
da para a direita. Entretanto, o DNA A apresenta um diâmetro
maior (2,6 nm), com 11 bases por volta da hélice, e as bases
são empilhadas com menor distância entre elas (0,25 nm). Um
exame criterioso dos modelos de preenchimento do espaço das
conformações A e B do DNA revela a presença de um sulco
maior e um sulco menor. Esses sulcos (em particular, o sulco
menor) contêm moléculas de água que interagem favoravel-
mente com os grupos amino e os cetogrupos das bases. Nesses
sulcos, as proteínas de ligação do DNA podem interagir com
sequências específicas do DNA, sem destruir o pareamento de
4   Capítulo 1
base da molécula. Em contrapartida às conformações A e B do
DNA, o DNA Z é uma hélice voltada para a esquerda. Ele pos-
sui um sulco menor, mas não possui um sulco maior, e o sulco
menor é profundo o suficiente para atingir o eixo da hélice do
DNA. A ocorrência natural e o potencial significado fisiológi-
co do DNA Z nas células vivas têm sido objeto de muita es-
peculação, mas têm obtido reconhecimento atualmente. Foram
descritas estruturas adicionais de DNA não B, e algumas delas
podem contribuir para a base genética de doenças humanas.
Sequências do Genoma Humano
O genoma diploide de uma típica célula humana contém cerca
de 3 × 109 pares de bases de DNA, que são subdivididos em 23
pares de cromossomos (22 autossômicos e os cromossomos se-
xuais X e Y). Por muitos anos foi sugerido que o conhecimento
do sequenciamento completo do genoma humano permitiria a
investigação das causas genéticas e de suas contribuições para
as doenças humanas. Entretanto, as técnicas iniciais de biologia
molecular e as abordagens para clonagem e sequenciamento
do DNA eram lentas e muito trabalhosas. Não obstante, em
meados da década de 1970, surgiram métodos práticos para
sequenciamento do DNA e começaram a surgir numerosos
relatos de sequências do DNA correspondendo a segmentos
do genoma humano. Em meados da década de 1980, foi pro-
posto um projeto para o sequenciamento completo do genoma
humano, que se iniciou nos últimos anos daquela década. O
desenvolvimento de métodos automatizados para o sequencia-
mento do DNA tornou possível as ambiciosas metas do Pro-
jeto Genoma Humano. Subsequentemente, surgiram mapas
genéticos e físicos detalhados do genoma humano, sequências
expressas foram identificadas e caracterizadas, e foram cons-
truídos os mapas de genes do genoma humano. Os esforços de
vários consórcios utilizando diferentes abordagens para o se-
quenciamento em larga escala do DNA humano e a montagem
de sequências contig culminaram em 2001 com a publicação de
um projeto para o sequenciamento do genoma humano. Mui-
tos anos mais tarde, foi lançada uma sequência mais completa
do genoma humano. Atualmente, acredita-se que o genoma
humano contenha cerca de 21.000 genes diferentes codificado-
res de proteínas. A análise das sequências do genoma humano
revelou considerável variabilidade entre indivíduos, incluindo
em excesso de 1,1 a 1,4 milhão de polimorfismos de nucleo-
tídeo único (SNPs, de single-nucleotide polymorphisms) dis-
tribuídos através do genoma. O refinamento da sequência do
genoma humano, a identificação e a caracterização dos genes
contidos e a descrição das características do genoma (SNPs e
outras variações) continuam em ritmo acelerado (www.geno-
me.gov). São imensas as implicações para o conhecimento do
genoma humano, no contexto da compreensão do impacto dos
fatores genéticos nas doenças humanas.
Organização do Genoma Humano
O DNA genômico humano é acondicionado em unidades estru-
turais distintas, que variam em tamanho e composição genética.
A unidade estrutural do DNA é o cromossomo, que é um grande
segmento contínuo de DNA. Um cromossomo representa uma
única molécula de DNA, geneticamente específica, à qual se liga
um grande número de moléculas de proteínas, que estão envol-
vidas na manutenção da estrutura do cromossomo e na regula-
ção da expressão gênica. O DNA genômico contém sequências
tanto codificadoras quanto não codificadoras. Sequências não
codificadoras contêm informação que não leva à síntese de uma
molécula de RNA ativo ou proteínas. Isso não significa que o
DNA não codificador não apresente qualquer função no geno-
ma. Ao contrário, foi sugerido que sequências de DNA não co-
dificadoras atuam no empacotamento do DNA, na estrutura do
cromossomo, na organização da cromatina no interior do nú-
cleo e/ou na regulação da expressão gênica. Uma fração das se-
quências não codificadoras representa sequências intervenien-
tes que separam as regiões codificadoras dos genes estruturais.
Entretanto, a maior parte do DNA não codificador é classificada
em várias famílias de DNA repetitivas cujas funções exatas não
foram inteiramente elucidadas. As sequências de DNA codifi-
cadoras originam todos os RNAs transcritos da célula, incluin-
do os mRNAs que codificam as proteínas. A organização dos
genes estruturais transcritos consiste em regiões codificadoras
que são interrompidas por regiões de DNA não codificadoras
intervenientes. Assim, os transcritos primários de RNA contêm
sequências tanto codificadoras quanto não codificadoras, e as
sequências não codificadoras devem ser removidas do transcrito
de RNA primário durante o processamento para produzir uma
molécula de mRNA funcional adequada para tradução.
Função do DNA
O DNA apresenta duas funções essências em relação à home-
ostase celular: (1) armazenamento de informação genética e (2)
transmissão da informação genética. A molécula de DNA fun-
ciona como um modelo para realizar cada uma dessas funções
gerais. Durante a divisão celular, o DNA funciona como um
modelo para a replicação fiel da informação genética, que é, em
última análise, passada para as células-filhas; do mesmo modo,
a molécula de DNA serve como modelo para a restauração da
sequência normal de DNA durante os processos de reparo do
DNA. Durante operações celulares normais, o DNA serve como
modelo para a transcrição do RNA. As moléculas transcritas de
RNA podem funcionar diretamente (como no caso dos RNAs
ribossomais [rRNAs] e RNAs transportadores [tRNAs]), po-
dem funcionar após processamento (como no caso dos miR-
NAs), ou podem funcionar como modelo para a síntese de pro-
teínas celulares (como no caso dos mRNAs).
Replicação de DNA
A descoberta da estrutura em fita dupla do DNA levou rapida-
mente à sugestão de que a replicação do DNA seria realizada
de uma maneira semiconservativa. Na replicação semiconser-
vativa do DNA, cada fita da hélice de DNA serve de modelo
para a síntese da fita complementar. O resultado é a formação
de duas cópias completas da molécula de DNA, cada uma con-
sistindo em uma fita da molécula de DNA parental e outra fita
recentemente sintetizada. A utilização de fitas de DNA como
modelos para a síntese de fitas complementares de DNA garan-
te a reprodução fiel do material genético para transmissão às
células-filhas.
 Doenças e o Genoma: Doenças Genéticas, Neoplásicas e do Desenvolvimento    5
Transcrição de RNA
A informação necessária para a síntese de todos os componen-
tes proteicos de uma célula, bem como de várias espécies de
moléculas de RNA funcional, está contida na sequência linear
de nucleotídeos do DNA. A transcrição é o processo pelo qual
moléculas de RNA são sintetizadas com uma sequência com-
plementar à unidade de transcrição do DNA. Desse modo, o
mRNA que codifica uma proteína específica é complementar à
sequência de DNA daquele gene específico. Do mesmo modo,
rRNAs, tRNAs e vários outros tipos de RNA são transcritos. Os
pontos corretos e de final da transcrição de um gene específico
são determinados pela sequência promotora acima da sequên-
cia codificadora do gene e por sinais de término abaixo dela.
Vários outros elementos reguladores estão presentes no geno-
ma humano associados às sequências transcritas. Alguns desses
elementos são potencializadores (enhancers) da transcrição, en-
quanto outros são responsáveis pela regulação negativa (repres-
são) da expressão gênica em resposta a sinais fisiológicos espe-
cíficos. Em contrapartida à replicação do DNA, em que ambas
as fitas da molécula servem como molde para a síntese de fitas
complementares de DNA, na transcrição do RNA, apenas uma
fita do DNA serve como molde. Essa fita é denominada fita sen-
se. A transcrição da fita sense produz, em última análise, uma
molécula de mRNA que codifica a sequência de aminoácidos
adequada para uma proteína específica.
Recombinação Genética
A recombinação genética representa um mecanismo para a ge-
ração de diversidade genética pela troca de material genético
entre duas sequências homólogas de nucleotídeos. Tal troca de
material genético com frequência resulta em alterações da es-
trutura primária (sequência de nucleotídeos) de um gene e em
alteração da estrutura primária (sequência de aminoácidos) da
proteína codificada. Em organismos com reprodução sexuada,
a recombinação é iniciada pela formação de uma junção en-
tre sequências de nucleotídeos semelhantes transportadas no
mesmo cromossomo a partir de dois pais diferentes. A junção
é capaz de se mover ao longo da hélice de DNA pela migração
dos ramos, resultando em uma troca das fitas de DNA (troca de
cromátides-irmãs).
Dano do DNA e Mutagênese
Visão Geral dos Agentes Danificadores do DNA
O DNA contido em cada uma das células do corpo humano é
agredido diariamente por vários agentes endógenos e exógenos
danificadores do DNA, e parte desse dano leva à mutação. O
dano no DNA pode resultar de alteração espontânea da molé-
cula de DNA ou da interação de numerosos agentes químicos
e físicos com a molécula de DNA estrutural. Lesões espontâ-
neas podem ocorrer durante processos celulares normais, tais
como replicação do DNA, reparo do DNA ou rearranjo gênico,
ou por meio de alteração química da própria molécula de DNA
como resultado de hidrólise, oxidação ou metilação. Na maio-
ria dos casos, as lesões no DNA criam combinações errôneas
de nucleotídeos, que levam a mutações pontuais. Combinações
errôneas de nucleotídeos podem resultar da formação de sítios
apurínicos ou apirimidínicos, após reações de despurinação ou
despirimidinação, conversões de nucleotídeos envolvendo re-
ações de desaminação, ou, em casos raros, podem resultar da
presença de uma forma tautomérica de um nucleotídeo indivi-
dual no DNA em duplicação. Reações de desaminação resultam
na conversão da citosina em uracil, adenina em hipoxantina,
e guanina em xantina. Entretanto, a reação mais comum de
desaminação de nucleotídeos envolve citosinas metiladas, que
podem substituir a citosina na sequência linear de uma molé­
cula de DNA, na forma de 5-metilcitosina. Os resíduos de
5-metilcitosina estão sempre localizados ao lado de resíduos
de guanina na mesma cadeia, um motivo denominado dinu-
cleotídeo CpG. A desaminação da 5-metilcitosina resulta na
formação de timina. Essa reação de desaminação específica é
responsável por uma porcentagem de mutações espontâneas
em doenças humanas. A interação do DNA com agentes físi-
cos, como radiação ionizante, pode levar a quebras de uma
ou ambas as fitas como resultado do rompimento das ligações
fosfodiéster em uma ou ambas as fitas de polinucleotídeos da
molécula de DNA. Luz ultravioleta (UV) pode produzir dife-
rentes formas de fotoprodutos, incluindo dímeros de pirimidina
entre bases de pirimidina adjacentes, na mesma fita de DNA.
Outras formas menores de dano no DNA, provocadas por luz
UV, incluem quebras da fita e ligações cruzadas. Modificações
das bases dos nucleotídeos podem resultar da exposição do DNA
a vários agentes químicos, incluindo compostos N-nitrosos e hi-
drocarbonetos aromáticos policíclicos. Dano no DNA também
pode ser causado por substâncias químicas que se intercalam na
molécula de DNA e/ou fazem ligações cruzadas entre as fitas de
DNA. Agentes alquilantes bifuncionais podem provocar ligações
cruzadas tanto intrafita quanto interfita na molécula de DNA.
Tipos de Mutação de DNA
Mutação é simplesmente definida como qualquer alteração
permanente na molécula de DNA. As várias formas de dano,
espontâneo e induzido, no DNA originam uma pletora de ti-
pos diferentes de alterações moleculares na molécula de DNA,
levando a mutações estáveis. Esses vários tipos de mutações
incluem tanto alterações grosseiras do cromossomo quanto al-
terações mais sutis a sequências gênicas específicas em cromos-
somos de outro modo normais.
Alterações Cromossômicas
Alterações cromossômicas grosseiras incluem grandes deleções,
adições (refletindo amplificação de sequência de DNA), translo-
cações (recíprocas e não recíprocas) e outras formas de rearranjo
cromossômico. Todas essas formas de anormalidade cromossô-
mica podem ser diferenciadas por análises-padrão do cariótipo
de cromossomos com bandas G e bandas R. Entretanto, as me-
todologias de análise de cromossomos empregadas atualmente
em geral dependem da hibridização fluorescente in situ (FISH,
de fluorescence in situ hybridization) e de técnicas derivadas. A
técnica de FISH pode ser utilizada para questões relacionadas
a um único locus ou região gênica (para marcar para amplifi-
cação ou deleção) ou pode ser aplicada mais amplamente como
um meio de análise do cariótipo. A cariotipagem espectral (SKY,
de spectral karyotyping) é um método em que sondas de FISH
6   Capítulo 1
marcam cromossomos individuais com uma coloração distinta,
permitindo uma numeração rápida e direta dos cromossomos e
a identificação dos rearranjos estruturais.
A principal consequência da deleção cromossômica é a perda
de genes específicos que estão localizados na região cromossô-
mica deletada, resultando em alterações no número de cópias
dos genes afetados. Por exemplo, a deleção de certas classes de
genes, incluindo genes supressores de tumores ou genes codifi-
cadores de proteínas envolvidas no reparo do DNA, leva à pre-
disposição das células afetadas à transformação neoplásica. Do
mesmo modo, a amplificação de regiões cromossômicas resulta
em um aumento no número de genes copiados, o que pode levar
à mesma circunstância se a região afetada contiver genes para
proto-oncogenes dominantes ou outros mediadores positivos de
progressão e proliferação do ciclo celular. O resultado direto da
translocação cromossômica é o movimento de algum segmento
de DNA de sua localização natural para uma nova localização
no genoma, o que pode resultar na expressão alterada dos genes
que estão contidos na região translocada. Se os pontos de que-
bra cromossômicos utilizados em uma translocação estiverem
localizados no interior de genes estruturais, então novos genes
híbridos podem ser gerados. Do mesmo modo, algum rearran-
jo cromossômico provoca a perda de genes estruturais devido
à presença de um ponto de quebra no interior do próprio gene.
Alterações das Sequências de Nucleotídeos
As formas mais comuns de mutação envolvem alterações de um
único nucleotídeo, pequenas deleções ou pequenas inserções
em sequências gênicas específicas. Ao contrário das alterações
cromossômicas, essas alterações moleculares no genoma po-
dem ser detectadas apenas pelo sequenciamento do DNA ou
por outras análises moleculares sensíveis que empregam pri-
mers de reação em cadeia da polimerase (PCR, de polymerase
chain reaction) específicos de sequência.
Alterações de um único nucleotídeo que envolvam uma
mudança na sequência codificadora normal do gene são deno-
minadas mutações pontuais. A consequência da maioria das
mutações pontuais é uma alteração na sequência de aminoá-
cidos da proteína modificada. Entretanto, algumas mutações
pontuais são silenciosas e não afetam a estrutura do produto do
gene. Mutações silenciosas (também conhecidas como mutações
sinônimas) são possíveis porque a maioria dos aminoácidos é
codificada por mais de um códon triplo. Elas representam um
mecanismo para a introdução de variabilidade genética, mas não
apresentam consequências funcionais. As mutações pontuais
restantes caem em duas classes: (1) mutações missense e (2) mu-
tações nonsense. As mutações missense envolvem substituições
de bases de nucleotídeos que alteram a tradução do códon triplo
afetado, mas frequentemente com uma alteração não conser-
vadora de aminoácidos. Elas costumam ser classificadas como
transições com base na natureza do nucleotídeo trocado na se-
quência do DNA. Uma transição é a substituição de um nucleo-
tídeo por outro nucleotídeo do mesmo tipo químico (i.e., purina
por purina ou pirimidina por pirimidina). Mutações pontuais
de transição incluem a troca de A por G, G por A, C por T e T
por C. Em contrapartida, uma transversão é a substituição de
um nucleotídeo de um tipo químico por um nucleotídeo de ou-
tro tipo químico (i.e., purina por pirimidina ou pirimidina por
purina). Mutações pontuais de transversão incluem a troca de A
por T, A por C, G por C, G por T, T por A, T por G, C por A e
C por G. as mutações nonsense diferem das mutações missense
pelo fato de envolverem substituições de bases dos nucleotídeos
que modificam um códon triplo, que normalmente codifica um
aminoácido em um códon de parada da tradução. Isso resulta
na interrupção prematura da tradução e na produção de uma
proteína truncada. Em alguns casos, a proteína truncada que re-
sulta de uma mutação missense não apresenta funcionalidade e
é rapidamente degradada. Em outros casos, a proteína truncada
pode reter alguma função ou pode ganhar nova funcionalidade
(como liberação dos mecanismos reguladores normais).
Pequenas deleções e inserções em geral originam mutações
de mudança de fase, pois a deleção ou a inserção de um único
nucleotídeo (por exemplo) altera o quadro de leitura do gene no
lado 3ʹ do sítio afetado. Isso resulta na síntese de um polipep-
tídeo que não se assemelha ao produto normal do gene. Além
disso, pequenas inserções ou deleções podem resultar no térmi-
no prematuro da tradução em função da presença de um códon
de parada na nova fase de leitura do gene que sofreu mutação.
Deleções ou inserções que ocorrem envolvendo múltiplos de
três nucleotídeos não resultarão em mutação de mudança de
fase, mas irão alterar o polipeptídeo resultante produzido pelo
gene, o qual irá apresentar a perda de aminoácidos específicos
ou a presença de aminoácidos adicionais em sua estrutura pri-
mária. Esses tipos de alteração também podem levar a uma per-
da de função da proteína.
Mutações Somáticas versus Mutações na
Linhagem Germinativa
Todo o DNA celular está sujeito à mutação por mecanismos
espontâneos ou em resposta a agentes mutagênicos. Quando
eventos mutacionais ou de dano ao DNA afetam o DNA de uma
célula somática, as mutações resultantes são denominadas muta-
ções somáticas. As células somáticas representam as células que
compõem todos os tecidos no organismo, além da linhagem ger-
minativa. As mutações somáticas foram associadas a diversos ti-
pos de doenças, em particular aquelas que são caracterizadas por
proliferação clonal de células alteradas (como no caso do câncer).
Algumas mutações somáticas ocorrem durante o desenvolvimen-
to, resultando em tipos específicos de anomalias do desenvolvi-
mento localizadas. As mutações somáticas não são herdáveis. Em
contrapartida, eventos mutacionais e dano ao DNA que afetem o
DNA das células da linhagem germinativa produzem mutações
que são denominadas mutações na linhagem germinativa. Essa
distinção é biológica e clinicamente significativa. As células da
linhagem germinativa são responsáveis pela origem dos oócitos
(na mulher) e espermatócitos (no homem). Portanto, a transmis-
são de uma mutação na linhagem germinativa introduz uma al-
teração na sequência de nucleotídeos no ovo fertilizado. Se esse
ovo produzir um organismo viável, a mutação será encontrada
em cada célula do organismo. Mutações nas células germinativas
são responsáveis por várias doenças genéticas, que podem se ma-
nifestar como doenças sistêmicas ou específicas de um órgão (ór-
gão único ou multiórgãos). Além disso, a mutação na linhagem
germinativa é encontrada na linhagem germinativa do indivíduo
afetado, ou seja, sua prole também herdará a mutação.
 Doenças e o Genoma: Doenças Genéticas, Neoplásicas e do Desenvolvimento    7
O EPIGENOMA HUMANO
Conrad Waddington cunhou o termo epigenética em 1942 e o
definiu como “... as interações causais entre genes e seus produ-
tos, que fazem o fenótipo se expressar...”. Atualmente a epigené-
tica refere-se a alterações herdáveis nos padrões de expressão
gênica que se devem a mecanismos diferentes de alterações na
sequência de nucleotídeos do DNA genômico. As alterações
epigenéticas diferem das alterações genéticas pelo fato de se-
rem mais frequentes, reversíveis e ocorrerem em regiões defini-
das de genes específicos. A epigenética explica como o mesmo
genótipo pode produzir diferentes fenótipos, como no caso de
gêmeos monozigóticos. A informação epigenética é armazena-
da como modificações químicas nas (1) proteínas histonas que
acondicionam o genoma e nas (2) citosinas na sequência do
DNA. Essas alterações regulam a acessibilidade do DNA e in-
fluenciam diretamente como o genoma é expresso ao longo das
diferentes etapas do desenvolvimento, nos diferentes tecidos e
tipos celulares e nas diversas etapas de doenças. Muitas modi-
ficações epigenômicas afetam o DNA, o RNA e as proteínas,
mas a metilação do DNA, as modificações de histonas, os fato-
res remodeladores da cromatina e os RNAs não codificadores
estão entre os mecanismos epigenéticos mais bem estudados.
Vários processos epigenômicos funcionam juntos para estabe-
lecer e preservar os estados da cromatina aberto ou fechado, em
um nível global ou sítio-específico, que determinam, em última
análise, se um gene é ativo ou inativo.
Metilação do DNA
A metilação do DNA é encarada como a marca registrada das
modificações epigenéticas. Essa modificação química nas ba-
ses de citosinas fornece informação genética hereditária, que
é transmitida durante a replicação do DNA. A metilação do
DNA é encontrada em vários bacteriófagos, bactérias (sem
cromatina), fungos, plantas e mamíferos. Entretanto, ela não
é encontrada em organismos-modelo como Caenorhabditis
elegans (vermes) e Saccharomyces cerevisiae (levedura da cer-
veja). A maioria desses organismos parece sobreviver quando
a metilação de seu DNA genômico é drasticamente reduzida;
contudo, quando a metilação do DNA é completamente per-
dida em camundongos, ocorre a mortalidade embrionária du-
rante o desenvolvimento dos órgãos. A metilação do DNA é
ESR1
MYB
CST6
Figura 1-3  Genes contendo ilhas CpG. As distribuições dos dinucleotídeos CpG proximais ao sítio de início da transcrição no promotor e
éxon 1 (seta preta) do receptor de estrogênio 1 (ESR1, de estrogen receptor 1), do oncogene viral da mieloblastose (MYB, de myeloblastosis) e da cistati-
na (CST6) são representadas esquematicamente (linhas verticais indicam a posição relativa de dinucleotídeos CpG individuais). Ilhas são encontradas
em todos os genes representativos. A ilha CpG é encontrada no éxon 1 do ESR1. Em MYB e CST6, a ilha CpG está localizada no promotor proximal e
éxon 1, abrangendo o sítio de início da transcrição.
um mecanismo epigenético que contribui para a instabilidade
genética e para o silenciamento de genes específicos.
Ilhas CpG
A metilação ocorre quase que exclusivamente em citosinas, no
interior de dinucleotídeos CpG, que são encontrados no geno-
ma em cerca de 20% da sequência prevista. A maioria (> 70%)
dos dinucleotídeos CpG é metilada. Entretanto, regiões de alta
densidade de CpG, chamadas de ilhas CpG, ocorrem nas regi-
ões promotoras de vários genes, próximas a seu ponto de início
de transcrição e/ou em sequências adjacentes à região promo-
tora (como o éxon 1). Foi sugerido que até 50% de todos os ge-
nes humanos podem conter uma ilha CpG promotora (Figura
1-3). Essas ilhas CpG são convencionalmente definidas como
≥ 200 pares de bases com ≥ 50% G + C e ≥ 0,6 CpG observa-
do/CpG esperado, embora uma definição mais rigorosa (≥ 200
pares de bases com ≥ 60% G + C e ≥ 0,7 CpG observado/CpG
esperado) tenha sido proposta. Alguns estudos sugeriram que
grandes ilhas CpG não são necessárias para a sensibilidade de
genes promotores ao silenciamento dependente de metilação.
Ao contrário, outras regiões de alta densidade de CpG podem
se comportar como ilhas CpG classicamente definidas. A maio-
ria das ilhas CpG do promotor não é metilada em tecidos nor-
mais, mas se torna metilada em várias condições patológicas.
Padrões distintos de metilação do DNA são encontrados nos
genomas de células em diferentes condições fisiológicas e no
desenvolvimento. Durante a maioria dos estágios de desenvol-
vimento, o DNA é fortemente metilado. Entretanto, promotores
e outras regiões reguladoras de genes de manutenção (house-
-keeping genes) são em grande parte não metilados na maioria
dos tipos celulares, e genes com expressão específica por tecido
são não metilados apenas nos tipos celulares em que esses genes
são transcricionalmente ativos.
Enzimas DNA-Metiltransferase
Existem três enzimas DNA-metiltransferase (DNMT) ativas, as
quais catalisam a adição de grupos metil à citosina no interior
de um dinucleotídeo CpG, incluindo a metiltransferase de ma-
nutenção DNMT1 e as metiltransferases de novo DNMT3a e
DNMT3b (Figura 1-4A). O DNA complementar (cDNA) da
DNMT1 humana foi clonado em 1992 e mapeado para o cro-
mossomo 19p13.2. O funcionamento da DNMT1 é coordenado
8   Capítulo 1

NH2 NH2 CpG e os níveis de expressão gênica, e foram propostos múl-

CH3 tiplos mecanismos moleculares para a regulação da expressão
N DNA-metiltransferase N gênica mediada por metilação do DNA (Figura 1-5). Entre-
DNMT1 tanto, a relação entre metilação de CpG e estado de expressão
O
N DNMT3b
O
N gênica vale apenas para a metilação de CpG afetando os genes
DNMT3a
HOCH2 O HOCH2 O promotores e suas sequências proximais (tais como íntron 1), e
não a metilação que ocorre em porções transcritas da sequência
gênica. A metilação do DNA pode ocorrer em alguns fatores de
transcrição conhecidos ligados a sítios, que incluem um CpG
em sua sequência de reconhecimento, impedindo desse modo o
OH OH
maquinário de transcrição de se ligar ao sítio e inibindo a trans-
A 2′-desoxicitosina 5-metil-2′-desoxicitosina
crição gênica (Figura 1-5B). Adicionalmente, proteínas de liga-
ção de metil-CpG são recrutadas para alguns sítios de metilação
DNMT3b
DNMT3a
do DNA e podem formar um bloqueio impedindo que o com-
plexo de transcrição transcreva ao longo do promotor de um
Molde de DNA gene (Figura 1-5C). Proteínas de ligação de metil-CpG (MBD,
não metilado
de methyl-CpG-binding) foram identificadas ligadas a um úni-
DNMT1 co sítio de CpG ou a múltiplos sítios de CpG para reprimir a
Molde de DNA transcrição. Proteínas MBD incluem MBD1, MBD2, MBD3,
B hemimetilado MBD4, MeCP1 e MeCP2. Em alguns casos, essas proteínas se
ligam a sequências do promotor impedindo a capacidade do
FIGURA 1-4 Metilação do DNA. (A) Representação química da
estrutura da adição de um grupo metil por DNMTs, produzindo uma
5-metilcitosina. (B) Esquema da metilação do DNA (círculos amarelos)
em um gene promotor típico por metiltransferases de novo (DNMT3b e
DNMT3a) e uma metiltransferase (DNMT1) envolvida na replicação do
DNA. A Ilha CpG

com os processos de replicação do DNA em vários tipos de cé-

lulas. A DNMT1 não possui a capacidade de metilar de maneira
eficiente o DNA não metilado (metilação de novo) e preferen-
cialmente metila o DNA hemimetilado (Figura 1-4B). Durante
a replicação, os sítios de CpG hemimetilados são produzidos
refletindo uma ausência de metilação na fita-filha recentemen-
te sintetizada quando o DNA parental foi metilado. A DNMT1
metila os sítios de CpG na fita-filha opostos dos CpGs metilados
na fita parental (Figura 1-4B). Em 1999, os genes para DNMT3a
e DNMT3b foram descobertos e mapeados para os cromosso-
mos 2p23 e 20q22.3, respectivamente. A DNMT3a liga-se, de
modo relativamente não específico e preferencialmente a subs-
tratos de DNA não metilados, em comparação a substratos de
DNA hemimetilados (Figura 1-4B). A DNMT3a pode metilar
apenas os sítios de CpG em uma fita de DNA, deixando a fita
complementar não metilada. A DNMT3b apresenta capacidade
de metilação de novo e é a fonte aceita de nova metilação nas
células de mamíferos (Figura 1-4B). A metilação de novo, pela
ação da DNMT3b, estabelece uma metilação do DNA nas se-
quências-alvo que carece de metilação CpG. A DNMT3b, junto
com a DNMT1, trabalha para estabelecer e manter os padrões
de metilação do DNA em todo o genoma, em especial em se-
quências densamente metiladas ou repetitivas. Os mecanismos
que governam a maioria desses processos ainda não são bem
compreendidos.
Regulação da Transcrição Mediada por Metilação
do DNA
Há uma forte correlação inversa entre o estado de metilação das
ilhas CpG do promotor e/ou das regiões de alta densidade de
B
C
X
D
FIGURA 1-5 Regulação epigenética dependente de metilação
da expressão gênica. A distribuição de dinucleotídeos CpG proximal
ao sítio de início da transcrição (indicada pela seta curva) é representa-
da esquematicamente (linhas verticais indicam a posição relativa dos
dinucleotídeos CpG individuais) por genes teóricos com densidade de
CpG no promotor variável. Os círculos amarelos correspondem a dinu-
cleotídeos CpG metilados. Genes com ilhas CpG estão sujeitos a even-
tos de metilação regionais e isolados. (A) A ausência de metilação de
ilhas CpG leva à ativação da transcrição pelo maquinário de transcrição
(representado como círculos verde, azul e roxo associados) e expressão
gênica subsequente. (B) Os eventos de metilação regionais e isolados
nos sítios de ligação dos fatores de transcrição levam à inativação da
transcrição e subsequente ausência de expressão gênica. (C) A meti-
lação regional pode afetar a transcrição pelo recrutamento de proteí-
nas de ligação de DNA metilado (círculos cor-de-rosa). (D) Do mesmo
modo, a metilação focal no interior de uma ilha CpG maior pode atrair
proteínas de ligação de DNA metilado (círculo cor-de-laranja), que po-
dem inibir a transcrição ao bloquear a progressão do maquinário de
transcrição para o sítio de início da transcrição.
 Doenças e o Genoma: Doenças Genéticas, Neoplásicas e do Desenvolvimento    9

maquinário de transcrição de reconhecer e se ligar à sequên- Proteínas Histonas e Modificações

cia promotora (Figura 1-5C). Em outros casos, os complexos de
transcrição se formam, mas são impedidos de se movimentar
ao longo da sequência gênica para uma região distinta do pro-
motor pelas proteínas MBD (Figura 1-5D).
Imprinting Genômico
Características determinadas pelos pais em geral são o resulta-
do de imprinting genético, que é definido como a modificação
epigenética restrita de domínios cromossômicos específicos
associados à origem parental do alelo (i.e., alelos maternos ou
paternos estão presentes, mas não são igualmente expressos).
Pequenos subconjuntos de genes são modificados epigene-
ticamente desse modo. Esses genes são denominados genes
imprinted e são caracterizados por marcas de metilação do
DNA diferenciais em elementos de sequências especializados
chamados de regiões de controle de imprinting (ICRs, de im-
printing control regions). Esses padrões de metilação ocorrem
em uma ou outra das linhagens germinativas parentais, em que
indivíduos masculinos e femininos apresentam estados de me-
tilação opostos (metilados ou não metilados) nas ICRs de suas
respectivas linhagens germinativas. Esse processo depende de
reprogramação epigenética, apagando o padrão de metilação
preexistente e estabelecendo um novo padrão de metilação de
acordo com o sexo do indivíduo. Uma vez estabelecidos, esses
padrões de linhagens germinativas são então passados para a
próxima geração para regular o estado de expressão de genes
imprinted, que são essenciais para o desenvolvimento embrio-
nário adequado. O primeiro gene imprinted (IGF2) foi identi-
ficado em 1991 e, atualmente, mais de 100 genes imprinted já
foram identificados. Genes associados a doenças importantes
que são sujeitos a imprinting genético incluem IGF2 (alelo
paterno expresso), WT1 (alelo materno expresso), INS (alelo
paterno expresso), SNRPN (alelo paterno expresso) e IGF2R
(alelo materno expresso).
de Histonas
O DNA genômico de eucariotos é acondicionado em cromati-
na, no interior do núcleo da célula, por sua interação com pro-
teínas histonas. A partícula central do nucleossomo é a unidade
básica de cromatina e consiste em 147 pares de bases de DNA
enrolados em torno de um octâmero de 4 histonas centrais, que
incluem H3, H4, H2A e H2B. As propriedades das histonas
podem ser alteradas por mais de 100 modificações diferentes
pós-tradução de suas caudas N-terminais, que são ricas nos
aminoácidos básicos arginina e lisina. Embora muitas dessas
modificações sejam pouco conhecidas, em anos recentes hou-
ve considerável progresso no entendimento da acetilação e da
metilação da lisina. Muitos registros na literatura apoiam um
importante papel para essas caudas de histona na regulação da
organização da cromatina e na transcrição gênica.
O Código de Histonas
As caudas N-terminais dos aminoácidos de várias proteínas
histonas estão sujeitas a várias modificações diferentes que re-
fletem a adição de marcas de metilação, acetilação, fosforilação
e ubiquitinação a resíduos de aminoácidos individuais (Figura
1-6), todas tendo sido associadas à variação na atividade gênica.
A totalidade dessas modificações levou à hipótese de que um
código de histonas regula a estrutura de cromatina e o acon-
dicionamento do DNA, contribuindo diretamente para a regu-
lação da expressão gênica. Esse código exerce seu controle na
regulação gênica por combinações de modificações de histonas
que determinam o recrutamento de proteínas específicas que
produzem respostas biológicas. Compreender como as modi-
ficações de histonas regulam a expressão gênica e a transcrição
será fundamental na elucidação do controle da transcrição do
desenvolvimento e da função celular e de como a interrupção
desses processos pode levar à doença.

P A A A A A P
M Ub
M

S1 K5 K9 K13 K15 K36 K99 H2A K119 T120

M Ub
Ub
A A P A A A P P
M M

K5 K12 K14 K15 K20 K27 K28 K32 K36 H2B K120

A A M M A
A
P P P A A A P
M M M M M M M
K56
R2 T3 K4 R8 K9 S10 S11 K14 R17 K18 K23 K27 K28 K36 H3
M

K79
M
A
A A A A A P
M M

S1 R3 K5 K8 K12 K16 K18 K20 H4

FIGURA 1-6 O código de histonas. Esse esquema representa as principais modificações de histonas incluindo fosforilação (P), acetilação (A),
metilação (M) e ubiquitinação (Ub) das 4 histonas centrais (H2A, H2B, H3, H4) em células normais. A maioria das modificações conhecidas de histonas
ocorre nas caudas N-terminais de histonas (mostradas à esquerda dos grandes círculos coloridos) com poucas exceções.
10   Capítulo 1
Metilação de Histonas
A metilação de histonas ocorre nos resíduos dos aminoácidos
tanto lisina (Lys) quanto arginina (Arg) (Figura 1-6). Enquanto
os resíduos de arginina podem receber dois grupos metil, na
configuração cis ou trans, os resíduos de lisina podem ser mono,
di ou trimetilados. Sítios de metilação altamente conservados
são encontrados na histona H3, na lisina 4 (Lys4), na Lys9, na
Lys27, na Lys36 e na Lys79, bem como na histona H4, na Lys20.
A metilação de histonas apresenta diferentes efeitos na transcri-
ção gênica, dependendo de que resíduo de aminoácido é mo-
dificado. A metilação da H3 na Lys4 (H3K4) e da H3 na Lys36
(H3K36) está associada à transcrição gênica ativa. Entretanto,
a metilação da H3 na Lys9 (H3K9), da H3 na Lys27 (H3K27)
ou da H4 na Lys20 (H4K20) em geral é associada à transcrição
inativa. As lisinas metiltransferases apresentam enorme espe-
cificidade e geralmente modificam uma única lisina em uma
histona individual. A marca de ativação gênica mais bem es-
tudada é a H3K4, que pode ser metilada pelo complexo MLL
de metiltransferases consistindo em MLL1 a MLL5. Quando
presente, essa marca está localizada na terminação 5ʹ de genes
ativos e é encontrada associada ao maquinário de transcrição
(RNA-polimerase II). A metilação de H3K9 pode ser produzida
por várias metiltransferases, incluindo SUV39H, G9a, SETDB1,
GLP e RIZ1. A metilação de H3K9 produz a heterocromatina
silenciosa, o que envolve o recrutamento de HP1 para o pro-
motor de genes reprimidos para estabilizar adicionalmente a
repressão gênica.
Acetilação de Histonas
A acetilação de histonas ocorre em resíduos do aminoácido lisi-
na (Figura 1-6). Os sítios de acetilação são encontrados na his-
tona H3, na Lys9, na Lys14, na Lys18, na Lys23 e na Lys27, bem
como na histona H4, na Lys5, na Lys8 e na Lys16. Essas marcas
de acetilação estão associadas à ativação da transcrição. As ace-
tiltransferases são divididas em três famílias principais, GNAT,
MYST e CBP/p300. As enzimas que compõem essas famílias
podem modificar mais de uma lisina; por exemplo, CBP/p300
modifica H3K14, H3K18, H4K5 e H4K8. A repressão da ativi-
dade de transcrição ocorre com a remoção das marcas de ace-
tilação das histonas H3 e H4 pelas enzimas desacetilase de his-
tona (HDAC, de histone deacetylase), e os inibidores de HDAC
(HDACis, de HDAC inhibitors) podem inibir esse processo. O
efeito da acetilação em termos de abertura ou fechamento da
cromatina levando à ativação/inativação de genes reflete a neu-
tralização da interação de cargas entre o esqueleto de DNA e as
caudas de histonas.
Fosforilação de Histonas
A fosforilação de histonas ocorre nos resíduos dos aminoácidos
serina, treonina, histidina e tirosina (Figura 1-6). Ela está asso-
ciada a vários processos celulares, incluindo regulação da trans-
crição, apoptose, progressão do ciclo celular, reparo do DNA,
regulação dos genes de desenvolvimento e condensação da cro-
matina. Os sítios de fosforilação são encontrados na histona H3,
na treonina 3 (Thr3), na Thr10, na Thr11 e na Thr45, na serina
10 (Ser10), na Ser28 e na tirosina 41 (Tyr41); na histona H4 na
Ser1, na histidina 18 (His18) e na His75; na histona H2B na
Ser32 e na Ser36, e na histona H2A na Ser1 e na Ser119. Um dos
sítios de fosforilação mais extensamente estudados é a H3Ser10,
que é o alvo das quinases MSK1/2 e RSK2. A fosforilação das
histonas não é tão bem estudada quanto a metilação ou a ace-
tilação, pois vias de sinalização distintas precisam ser ativadas
para se observar esses eventos.
Regulação Pós-Transcricional da
Expressão Gênica
RNAs não codificadores fornecem outro nível de controle epi-
genético, uma vez que eles podem estabelecer outras marcas
epigenéticas e controlam a expressão gênica. Os miRNAs são
pequenos RNAs não codificadores (19 a 25 nucleotídeos de com-
primento) que regulam a expressão gênica pós-transcrição por
meio de sequências específicas que têm como alvo os mRNAs,
produzindo repressão da tradução ou degradação do mRNA-
-alvo. Os miRNAs são expressos de modo tecido-específico e
foram associados à regulação de vários processos biológicos,
incluindo proliferação celular, apoptose e desenvolvimento.
Muitas espécies de miRNA são codificadas por genes que estão
contidos no interior de sequências intrônicas de genes estru-
turais que codificam proteínas. O miRNA funcional (maduro)
é liberado das sequências intrônicas do gene estrutural pelo
processo de processamento do RNA, secundário aos eventos
de splicing específicos. Desse modo, a regulação da expressão
dessa classe de gene miRNA é coordenada com a regulação
(positiva e negativa) do gene estrutural, que contém a sequên-
cia pré-miRNA. Processamento adicional dos pré-miRNAs é
necessário para a geração de um miRNA funcional, que pode
ter como alvo uma sequência específica de mRNA. Esses even-
tos de processamento em geral refletem a clivagem da nuclease
por várias enzimas, incluindo Dicer e Drosha. Estudos recentes
identificaram os miRNAs como reguladores da expressão de
DNMT e alvos de metilação aberrante de DNA em vários tipos
de tecidos. Essas observações sugerem que interações diretas e
ligações cruzadas entre o maquinário da metilação de DNA e os
miRNAs ocorrem na regulação da expressão gênica.
DOENÇAS GENÉTICAS
Principais Formas de Doenças
Genéticas
As doenças genéticas podem ser classificadas em três grupos
principais: (1) distúrbios cromossômicos, (2) distúrbios mono-
gênicos e (3) distúrbios poligênicos. Os distúrbios cromossômi-
cos são o resultado da perda, do ganho ou do rearranjo anormal
de um ou mais cromossomos, resultando em deficiências do
material genético ou em material genético excessivo. Os distúr-
bios monogênicos são o resultado de um único gene mutante e
apresentam padrões típicos de herança mendeliana (autossômi-
co dominante, autossômico recessivo e ligado ao X). Os distúr-
bios poligênicos ou multifatoriais resultam de múltiplos fatores
genéticos e/ou epigenéticos que não se encaixam nos padrões
típicos de herança mendeliana.
 Doenças e o Genoma: Doenças Genéticas, Neoplásicas e do Desenvolvimento    11
Distúrbios de um Único Gene
Distúrbios de único gene envolvem a mutação de um gene que
é responsável pelo fenótipo observado no indivíduo afetado.
Esses distúrbios em geral acompanham um dos três padrões
de herança: (1) autossômico dominante, (2) autossômico re-
cessivo ou (3) ligado ao X. A frequência de distúrbios mono-
gênicos entre a população geral é de cerca de 10 em 1.000 nas-
cidos vivos.
Distúrbios Autossômicos Dominantes
Distúrbios autossômicos dominantes são aqueles em que a pre-
sença de uma única cópia de um gene mutante (alelo) resulta em
doença. Desse modo, tanto indivíduos homozigotos quanto he-
terozigotos expressam o fenótipo da doença, homens e mulhe-
res são igualmente afetados, e qualquer indivíduo afetado pode
transmitir a condição para seus descendentes. Na maioria dos
casos, os indivíduos afetados por um desses distúrbios apresen-
tam pelo menos um dos pais que também é afetado. O padrão
autossômico dominante de herança é caracterizado pela trans-
missão vertical da doença de uma geração para outra, expres-
são igual entre homens e mulheres, ausência de filhos afetados
a partir de pais não afetados, chance de 50% de filhos afetados a
partir de pais afetados, e a maioria dos indivíduos afetados
apresenta um dos pais afetado (Figura 1-7A). Indivíduos com
distúrbio autossômico dominante, mas sem um dos pais afeta-
do, em geral apresentam uma mutação fundadora no gene da
doença. Mutações fundadoras não são encontradas nas linha-
gens germinativas dos pais, mas ocorrem no espermatozoide
A sistema urinário (doença do rim policístico), o sistema gastrin-
B Distúrbios Autossômicos Recessivos
FIGURA 1-7 Padrões de herança associados a distúrbios mono-
gênicos autossômicos dominantes e autossômicos recessivos. (A)
Heredograma representando o padrão de herança autossômico domi-
nante de uma doença genética. Este é o padrão associado a doenças
como doença de Huntington, neurofibromatose, distrofia miotônica,
hipercolesterolemia familiar e várias outras. Círculo, mulher; quadrado,
homem; aberto, não afetado; sólido, afetado. (B) Heredograma apre-
sentando o padrão de herança autossômico recessivo de uma doença
genética. Este é o padrão associado a doenças como fibrose cística, do-
ença de Tay-Sachs, anemia falciforme e vários distúrbios metabólicos.
Círculo, mulher; quadrado, homem; aberto, não afetado; sólido, afeta-
do; parcialmente preenchido, portador.
ou no óvulo antes da fertilização. Desse modo, o filho afetado
carrega o gene mutante em sua linhagem germinativa e pode
passar a mutação para sua prole. Os irmãos de indivíduos com
mutações fundadoras não são afetados e não apresentam um
risco maior de desenvolvimento da doença.
A expressão da doença refletida nas características clínicas
entre indivíduos afetados por distúrbios autossômicos domi-
nantes pode variar em função da penetrância reduzida e da
expressividade variável. Do mesmo modo, a idade do início
da doença pode variar, indo da primeira infância à fase adulta
tardia. Alguns indivíduos que herdam um gene mutante serão
fenotipicamente normais (sem evidência da doença). Isso refle-
te uma penetrância incompleta da doença associada à mutação.
A penetrância é uma medida de quão frequentemente os pa-
cientes com um alelo mutante expressam a doença associada
à mutação. Dessa forma, uma mutação que apresente 100% de
penetrância irá produzir doença em todo indivíduo portador
da mutação. Em contrapartida, uma mutação que apresente
50% de penetrância irá produzir doença em apenas 50% dos
portadores da mutação. A expressividade variável refere-se à
observação de que, em um grupo de indivíduos com uma do-
ença associada à mutação, a manifestação da doença pode ser
diferente (diferenças na gravidade, no fenótipo da doença).
Os mecanismos responsáveis pela penetrância reduzida e pela
expressividade variável não são bem conhecidos. Entretanto,
acredita-se que os efeitos de outros genes ou fatores ambien-
tais possam influenciar a expressão das mutações causadoras
de doenças. Diferenças na idade de início da doença refletem
a observação de que algumas doenças associadas a mutações
se desenvolvem no início da vida e outras se desenvolvem em
adultos ou mais tarde na vida. Esse fenômeno provavelmente
está relacionado ao contexto fisiológico e de desenvolvimento
em que os genes causadores de doença se expressam.
Distúrbios autossômicos dominantes afetam vários sis-
temas, incluindo o sistema nervoso (doença de Huntington,
neurofibromatose, distrofia miotônica, esclerose tuberosa), o
testinal (polipose colônica familiar), o sistema hematopoiético
(doença de von Willebrand) e o sistema esquelético (síndrome
de Marfan, osteogênese imperfeita, acondroplasia e outras).
Além disso, alguns distúrbios autossômicos dominantes repre-
sentam doenças metabólicas (tais como hipercolesterolemia fa-
miliar). Essa lista de exemplos procura ser representativa, mas
não completa.
Distúrbios autossômicos recessivos são aqueles em que duas
cópias do gene mutante são necessárias para a expressão do fe-
nótipo da doença. Desse modo, indivíduos heterozigotos são
indistinguíveis de indivíduos portadores de duas cópias nor-
mais do gene associado à doença. Entretanto, deve ser obser-
vado que, em alguns indivíduos heterozigotos, há alterações
sutis em vários parâmetros bioquímicos, que não são facilmen-
te detectáveis, pois não provocam sintomas discerníveis. Esses
indivíduos heterozigotos (que carregam um gene normal e um
gene mutante) são denominados portadores. A prole de dois
portadores do mesmo gene mutante terá uma chance de 25%
12   Capítulo 1
de desenvolver a doença (devido à herança homozigótica do
gene mutante) e uma chance de 50% de se tornar portadora
(devido à herança heterozigótica do gene mutante). Em con-
traste com os distúrbios autossômicos dominantes, os distúr-
bios autossômicos recessivos apresentam uma expressão mais
uniforme do defeito, a penetrância completa é comum, e o iní-
cio da doença em geral ocorre precocemente na vida. Dessa
maneira, o padrão de herança autossômico recessivo é carac-
terizado por penetrância horizontal, indivíduos homozigóticos
afetados apresentando pais heterozigóticos não afetados, e pais
heterozigóticos (mãe e pai) com uma chance de 25% de ter um
filho afetado (Figura 1-7B).
Os distúrbios autossômicos recessivos incluem a maioria
dos erros inatos do metabolismo. Distúrbios metabólicos autos-
sômicos recessivos incluem fibrose cística, fenilcetonúria, ga-
lactosemia, homocistinúria, várias doenças de armazenamento
em lisossomos, deficiência de α1-antitripsina (várias formas),
doença de Wilson, hemocromatose e doenças de armazena-
mento de glicogênio. Outros distúrbios autossômicos recessivos
afetam sistemas específicos, incluindo o sistema hematopoiéti-
co (anemia falciforme, talassemias), o sistema endócrino (hi-
perplasia suprarrenal congênita), o sistema esquelético (alcap-
tonúria) e o sistema nervoso (atrofias musculares neurogênicas,
atrofia muscular espinal, ataxia de Friedreich). Essa lista de
exemplos procura ser representativa, mas não completa.
Distúrbios Ligados ao X
Genes responsáveis por distúrbios ligados ao X são transpor-
tados pelo cromossomo X. O risco de desenvolvimento desses
distúrbios e sua gravidade variam entre homens e mulheres em
função do fato de os homens apresentarem um cromossomo X
e as mulheres dois. Desse modo, as mulheres podem ser hete-
rozigóticas ou homozigóticas para um gene mutante ligado ao
X, e a característica associada pode se expressar de modo do-
minante ou recessivo. Em contrapartida, os homens expressam
o gene mutante ligado ao X sempre que ele for herdado. Não há
transmissão de homem para homem de distúrbios ligados ao X,
e todas as filhas de homens afetados herdam o gene mutante da
doença. Distúrbios recessivos ligados ao X afetam principalmen-
te homens. No caso de distúrbios dominantes ligados ao X, todas
as filhas de homens afetados também são afetadas. A inativação
do X resulta na expressão de genes ligados ao X de apenas um
cromossomo X. Assim, a expressão de um distúrbio ligado ao X
em uma mulher dependerá da presença do gene mutante, bem
como de sua localização em um cromossomo X ativo.
A herança recessiva ligada ao X é responsável por um pe-
queno número de condições clínicas bem definidas. Alguns
desses distúrbios ligados ao X afetam sistemas de órgãos especí-
ficos, incluindo o sistema musculoesquelético (distrofia muscu-
lar de Duchenne), o sangue (hemofilia A, hemofilia B, doença
granulomatosa crônica, deficiência de glicose-6-fosfato-desi-
drogenase), o sistema imune (agamaglobulinemia) ou o sistema
nervoso (síndrome do X frágil). Além disso, alguns distúrbios
metabólicos são doenças ligadas ao X, incluindo a síndrome de
Lesch-Nyhan e o diabetes insípido. Essa lista de exemplos pro-
cura ser representativa, mas não completa.
Distúrbios Mitocondriais
A mitocôndria humana (e de outros mamíferos) contém sua
própria molécula de DNA de cerca de 17 kb, que apresenta
vários genes que codificam proteínas associadas à função mi-
tocondrial e especificamente ao metabolismo energético (co-
dificando algumas das proteínas dos complexos enzimáticos
da cadeia transportadora de elétrons e a enzima ATP-sintase
mitocondrial). Cada mitocôndria pode conter várias cópias
do cromossomo mitocondrial, e cada célula contém um gran-
de número (talvez centenas) de mitocôndrias. Mutações em
genes codificados pelo DNA mitocondrial estão associadas a
várias doenças. Entretanto, a expressão de um estado doen-
te necessita do acúmulo de números suficientes de cópias do
DNA mitocondrial mutante (por deriva aleatória e segregação
citoplasmática) para resultar em disfunção mitocondrial no
nível celular. A herança de distúrbios associados à mitocôn-
dria é estritamente materna. Portanto, mulheres transmitem
características determinadas pelas mitocôndrias a todos os
seus filhos. Em casos raros, mães afetadas terão uma criança
não afetada. Esse fenômeno provavelmente reflete segregação
citoplasmática de mitocôndrias mutantes no tecido formador
de gametas.
Distúrbios mitocondriais incluem epilepsia mioclônica e
doença de fibras vermelhas rotas, neuropatia óptica hereditária
de Leber, fraqueza muscular neurogênica/ataxia/retinite pig-
mentosa, síndrome de Kearns-Sayre, síndrome hereditária ma-
terna de Leigh, oftalmoplegia progressiva e várias outras doen-
ças. Essa lista de exemplos procura ser representativa, mas não
completa. É notável que muitas dessas doenças mitocondriais
se manifestem como defeitos musculares, refletindo o grande
consumo energético dos tecidos musculares e o fato de que a
maioria dessas doenças mitocondriais se caracteriza por com-
prometimento do metabolismo energético.
Doenças Poligênicas
Doenças poligênicas ou multifatoriais resultam de múlti-
plos fatores genéticos e/ou epigenéticos (mutações ou even-
tos de silenciamento gênico) e não se encaixam nos padrões
mendelianos tradicionais de herança. Desse modo, elas re-
presentam patologias em que um único gene ou evento mu-
tacional não irá diagnosticar definitivamente ou ser capaz de
prever o risco. Distúrbios poligênicos incluem doenças crô-
nicas da fase adulta, malformações congênitas e síndromes
dismórficas. Em alguns casos, amplas classes de doenças re-
fletem patogênese molecular poligênica; por exemplo, câncer
(em quase todos os casos) é um distúrbio de genes múltiplos.
Outros exemplos de doenças poligênicas incluem hipertensão,
doença cardíaca isquêmica, doença de Alzheimer e diabetes
melito. Em todos esses casos, a manifestação da doença está
associada a interações de vários genes alterados e fatores am-
bientais. Dada a complexidade dessas doenças (e famílias de
doenças), não há uma compreensão das complexidades ge-
néticas da maioria das doenças poligênicas, e a elucidação da
patogênese molecular de distúrbios multifatoriais permanece
pouco conhecida.
 Doenças e o Genoma: Doenças Genéticas, Neoplásicas e do Desenvolvimento    13
Distúrbios Citogenéticos
Distúrbios citogenéticos são doenças que estão associadas a
alterações cromossômicas. Em alguns casos, essas doenças são
caracterizadas por anomalias do cariótipo envolvendo núme-
ros anormais de cromossomos (perdas ou ganhos), enquanto,
em outros, elas estão associadas ao rearranjo anormal de um ou
mais cromossomos. Independente da manifestação molecular
da anomalia cromossômica, todos esses distúrbios resultam em
deficiências de material genético ou em material genético ex-
cessivo. O complemento cromossômico normal de uma mulher
é 46XX (referindo-se a 22 pares de autossomos e os cromosso-
mos sexuais XX), e o complemento cromossômico normal de
um homem é 46XY (referindo-se a 22 pares de autossomos e
os cromossomos sexuais XY). A monossomia envolvendo um
autossomo normalmente é fatal na fase embrionária, refletindo
a perda de muitas informações genéticas para a viabilidade do
feto em desenvolvimento. Entretanto, algumas anomalias nu-
méricas, envolvendo a trissomia de autossomos, permitem um
nascimento vivo. No entanto, com raras exceções (síndrome de
Down), essas trissomias autossômicas levam a recém-nascidos
gravemente incapacitados, que morrem em uma idade precoce.
Em contraste, vários distúrbios cromossômicos afetando o nú-
mero de cromossomos sexuais foram caracterizados.
Distúrbios Citogenéticos Envolvendo Autossomos
A síndrome de Down é o distúrbio cromossômico autossômico
mais comum e é caracterizada pela trissomia do cromossomo 21.
Esse distúrbio ocorre com uma incidência de 1 em 700 nascidos
vivos nos Estados Unidos e é uma causa importante de deficiên­
cia intelectual. Esses indivíduos apresentam uma contagem cro-
mossômica de 47 (refletindo 44 autossomos e 2 cromossomos
sexuais, mais a cópia extra do cromossomo 21). Essa cópia extra
em indivíduos com síndrome de Down se origina de uma não
disjunção na meiose. Os pais de crianças com síndrome de Down
possuem cariótipo e fenótipo normais. Embora a causa efetiva
da não disjunção meiótica que resulta na trissomia do 21 não
seja conhecida, há muito tempo tem sido sugerido que a idade
materna desempenha um papel importante nessa doença – a
maioria dos bebês com síndrome de Down nasce de mães mais
velhas. A frequência dessa síndrome entre mães com menos de 20
anos é de 1 em 1.550 nascidos vivos, comparada à frequência de 1
em 25 nascidos vivos para mulheres acima de 45 anos. Indivíduos
com síndrome de Down são afetados por deficiên­cia intelectual
de gravidade variável. Além disso, esses indivíduos podem apre-
sentar doença cardíaca congênita, possuem risco de desenvolver
leucemias agudas, e a maioria apresenta comprometimento do
sistema imune, o que os coloca em risco de infecções graves. Pro-
blemas cardíacos congênitos são responsáveis pela maioria das
mortes em portadores da síndrome de Down na primeira infân-
cia e no início da infância. Portadores mais velhos dessa síndrome
desenvolvem sintomas neurodegenerativos e alterações neuropa-
tológicas características da doença de Alzheimer.
Distúrbios Citogenéticos Envolvendo
Cromossomos Sexuais
As doenças genéticas associadas a cromossomos sexuais altera-
dos são mais comuns do que aquelas que envolvem autossomos,
refletindo talvez o fato de que o desequilíbrio de cromossomos
sexuais (excesso ou perda) é mais bem tolerado do que desequi-
líbrios envolvendo os autossomos. A síndrome de Klinefelter e
a síndrome de Turner representam dois distúrbios citogenéticos
comuns envolvendo cromossomos sexuais.
A síndrome de Klinefelter é caracterizada pela presença
de dois ou mais cromossomos X e um ou mais cromossomos
Y. Todos os indivíduos afetados são homens, e a condição
manifesta-se como hipogonadismo. A maioria (> 80%) dos
indivíduos com essa síndrome está associada a um cariótipo
47XXY. Anomalias associadas a esse distúrbio estão relaciona-
das à presença de um cromossomo X extra, e a origem desse
cromossomo (materna versus paterna) não afeta a natureza do
distúrbio. Essa condição ocorre em 1 em 500 homens nascidos
vivos. A síndrome de Klinefelter raramente é diagnosticada an-
tes da puberdade. Indivíduos afetados podem apresentar um
QI abaixo do normal, mas deficiên­cia intelectual é rara. Esper-
matogênese reduzida e infertilidade masculina são comuns en-
tre homens com essa síndrome.
A síndrome de Turner é caracterizada pela monossomia do
cromossomo X. Todos os indivíduos afetados são mulheres, e a
condição manifesta-se como hipogonadismo. A maioria (> 55%)
dos indivíduos com essa síndrome está associada a um carióti-
po 45X. Outros com síndrome de Turner apresentam anomalias
estruturais do cromossomo X. Essa condição ocorre em 1 em
2.000 mulheres nascidas vivas. A apresentação das anomalias na
síndrome de Turner pode estar associada ao grau de mosaicismo
no indivíduo, mas os pacientes mais gravemente afetados apre-
sentam os sintomas na primeira infância. Indivíduos com essa
síndrome comumente apresentam doença cardíaca congênita e
não desenvolvem características sexuais secundárias.
Mecanismos Epigenéticos em Doenças
Familiares
As modificações epigenéticas do DNA e das histonas desem-
penham papéis críticos na patogênese molecular de doenças
familiares complexas. Os fatores epigenéticos apresentam plas-
ticidade e reagem a sinais dos meios interno e externo. Por
definição, a epigenética refere-se à regulação hereditária das
funções genômicas, que podem ser potencialmente reversíveis,
o que inclui a metilação do DNA (metilação das citosinas) e a
modificação de histonas (tais como a acetilação, a metilação ou
a fosforilação das histonas). A regulação epigenética normal ou
errônea representa mecanismos moleculares unificadores cen-
trais de características e doenças complexas, não mendelianas.
Portanto, genes com regulação epigenética normal (ou errônea)
que não carregam mutações ou polimorfismos predisponentes
podem apresentar consequências prejudiciais se não expressos
na quantidade correta, no momento certo do ciclo celular ou na
localização correta no interior da célula. Evidências crescentes
indicam que as células podem operar normalmente apenas se a
sequência de DNA e os componentes epigenéticos do genoma
celular funcionarem adequadamente. O papel da epigenética foi
investigado em várias síndromes pediátricas raras, como sín-
drome de Prader-Willi, síndrome de Angelman, síndrome de
Beckwith-Wiedemann e síndrome de Rett, bem como doença
de Alzheimer, doença de Parkinson e síndrome do X frágil.
14   Capítulo 1
A doença de Alzheimer é o distúrbio neurodegenerativo de-
pendente de idade mais comum e está ligada à história familiar.
As vias patológicas dessa doença incluem o processamento aber-
rante da proteína precursora amiloide (APP, de amyloid precursor
protein), o precursor Aβ e a hiperfosforilação de Tau. O gene APP
é constitutivamente metilado em condições normais e se torna
hipometilado com a idade. A doença de Alzheimer foi mais re-
centemente associada a perfis modificados de acetilação de histo-
nas, bem como a níveis elevados da histona H3 fosforilada. Por-
tanto, parece provável que mecanismos epigenéticos sejam um
marcador da doença e disparem cascatas de sinalização ligadas a
vários mecanismos patológicos na doença de Alzheimer.
A doença de Parkinson afeta 1 a 2% da população com idade
acima de 65 anos e 4% com idade superior a 85 anos. Uma his-
tória familiar dessa doença ocorre em cerca de 20% dos casos,
e estudos de famílias com doença de Parkinson identificaram
15 loci (PARK1-15) ligados à doença. Há alguma evidência de
que 5 desses genes (α-sinucleína, parkin, PTEN, DJ-1 e quinase
2 rica em repetições de leucina) provocam doença de Parkinson
típica, e mutações no ATP13A2 provocam uma forma autos-
sômica recessiva dessa doença (doença de Kufor-Rakeb). Dois
desses genes (α-sinucleína e quinase 2 rica em repetições de leu-
cina) provocam formas autossômicas da doença de Parkinson,
em que parkin, PTEN, DJ-1 e ATP13A2 são herdados de modo
autossômico recessivo. Vários estudos demonstraram que a
α-sinucleína apresenta regulação errônea na doença de Parkin-
son em função de padrões aberrantes de metilação do DNA.
Entretanto, nenhuma diferença na porcentagem de metilação
do DNA entre pacientes com doença de Parkinson e indivíduos
normais foi observada para qualquer outro dos genes associa-
dos à doença. A α-sinucleína interage com histonas e inibe a
acetilação de histonas, e foi demonstrado que os HDACis apre-
sentam um papel neuroprotetor contra a toxicidade associada à
regulação aberrante da α-sinucleína.
A síndrome do X frágil é um distúrbio ligado ao X e a forma
hereditária mais comum de retardo mental. Essa síndrome afeta
cerca de 1 em 4.000 homens e 1 em 6.000 mulheres, e cerca de
1 em 100 a 250 mulheres na população geral é portadora de X
frágil. O X frágil é causado por uma expansão da repetição do
trinucleotídeo CGG na região 5ʹ não traduzida do gene do sí-
tio frágil sensível ao folato (FMR1). O FMR1 está envolvido na
regulação da tradução nas sinapses e no transporte do mRNA.
Normalmente, estão presentes 6 a 52 cópias da repetição do tri-
nucleotídeo CGG. Entretanto, pacientes com a síndrome do X
frágil em geral apresentam > 200 repetições. Indivíduos afeta-
dos apresentam hipermetilação do DNA da região de repetição
levando ao silenciamento do FMR1. Inibidores de DNMT fo-
ram bem-sucedidos na reativação da transcrição de FMR1.
DOENÇAS DO DESENVOLVIMENTO
As doenças do desenvolvimento representam uma ampla cate-
goria de doenças que são provocadas por alterações genéticas
e epigenéticas no genoma. Muitas delas também são conside-
radas como doenças da infância ou doenças pediátricas. Isso
ocorre principalmente porque as anomalias do desenvolvi-
mento se manifestam no feto em desenvolvimento, no neonato
ou no início da infância. Essas anomalias congênitas em geral
representam defeitos estruturais que estão presentes no nasci-
mento, embora algumas só se apresentem mais tarde no desen-
volvimento. Por exemplo, anomalias cardíacas e renais podem
não se apresentar por vários anos após o nascimento.
Formas Principais de Doenças do
Desenvolvimento
As doenças do desenvolvimento refletem principalmente erros
na morfogênese. Essas doenças incluem (1) malformações, (2)
disrupções e (3) deformações. Além disso, anomalias secundá-
rias podem resultar de manifestações primárias de doenças do
desenvolvimento. Algumas delas são anomalias de sequência e
outras são consideradas síndromes de malformação.
Malformações são a manifestação de anomalias intrínsecas
de processos de desenvolvimento. Portanto, elas representam
erros primários de morfogênese. As malformações normal-
mente são o resultado de múltiplos fatores em vez de um defeito
em um único gene ou anomalia cromossômica isolada. Em al-
guns casos, elas estão restritas a um único órgão de um sistema
(como o coração), e, em outros, vários sistemas de órgãos po-
dem estar envolvidos. Além disso, as malformações variam em
gravidade. Algumas são cosméticas e outras provocam conse-
quências funcionais que podem ser toleradas, enquanto outras
são fatais. Exemplos de malformações menos graves incluem a
polidactilia (a presença de dedos extras) e a sindactilia (fusão
de vários dedos). Malformações de consequência funcional in-
cluem a fenda labial, que requer correção cirúrgica, mas que
pode ser tolerada. Malformações mais graves incluem aquelas
que afetam a formação adequada do cérebro e do sistema ner-
voso, que em geral resultam em natimorto.
As disrupções resultam de processos destrutivos secundá-
rios, agindo sobre um tecido ou uma região corporal que apre-
sentava previamente desenvolvimento normal. Portanto, elas
surgem de distúrbios extrínsecos da morfogênese. Foi sugerido
que muitos agentes ambientais seriam responsáveis por essas
disrupções. Dada a natureza dessa forma de anomalia congê-
nita, as disrupções não são hereditárias. As bandas amnióticas
representam um exemplo de uma disrupção. Essas bandas se
referem à ruptura do âmnio que resulta na formação de uma
banda que envolve, comprime ou se prende a partes do feto em
desenvolvimento.
As deformações são semelhantes às disrupções pelo fato de
representarem o resultado de um distúrbio extrínseco do de-
senvolvimento, e não um erro intrínseco da morfogênese. Elas
são muito comuns, afetando cerca de 2% dos nascidos vivos. A
patogênese das deformações envolve a compressão localizada
ou generalizada do feto em desenvolvimento por forças biome-
cânicas anormais. A compressão do feto leva a várias anomalias
estruturais. A causa mais comum de deformação é a restrição
uterina, que pode resultar de um desequilíbrio entre o cres-
cimento do feto e o útero no final da gestação. Vários fatores
maternos podem contribuir para esse fenômeno, incluindo pri-
miparidade, útero de tamanho pequeno, malformação uterina
ou presença de leiomiomas. Do mesmo modo, vários fatores
fetais podem contribuir para a deformação, incluindo presença
de fetos múltiplos, apresentação anormal do feto ou ausência de
líquido amniótico suficiente.
 Doenças e o Genoma: Doenças Genéticas, Neoplásicas e do Desenvolvimento    15
Alterações Gênicas e Doenças do
Desenvolvimento
Acredita-se que os genes que regulam diretamente a morfogê-
nese sejam alvo de teratogênicos. Portanto, a exposição da mãe
(e do feto em desenvolvimento) a tais agentes pode afetar pro-
cessos de desenvolvimento específicos. Do mesmo modo, os
genes que regulam os padrões de expressão gênica no desen-
volvimento fetal também podem ser alvo da ação de teratogê-
nicos. Por exemplo, a família Hox de reguladores da transcrição
controla a expressão de vários genes que governam o desenvol-
vimento. Agentes que alterem o funcionamento dos genes Hox
produzem malformações em modelos experimentais. Um des-
ses agentes que têm como alvo os genes Hox é o ácido retinoico.
Lactentes que nasceram de mães que foram expostas ao ácido
retinoico (como um tratamento para a acne grave) tendem a
apresentar embriopatias (caracterizadas por defeitos cardíacos
e do sistema nervoso central, bem como anomalias craniofa-
ciais). Em modelos animais, os disruptores de Hox provocam
anomalias fetais que são semelhantes àquelas encontradas nas
embriopatias por ácido retinoico.
Anomalias Cromossômicas e Doenças
do Desenvolvimento
A síndrome de Angelman é um exemplo de uma doença do
desenvolvimento cuja patogênese molecular costuma envolver
uma anomalia cromossômica. O gene da síndrome de Angel-
man (UBE3A) está localizado no cromossomo 15 (em 15q12).
Na maioria dos casos, uma grande deleção englobando 15q12
(e o locus UBE3A) resulta em uma deficiência para o produto
do gene UBE3A e na consequente síndrome de Angelman. Em
alguns casos, a perda da expressão/função de UBE3A é atribuída
à dissomia uniparental ou mutação inativadora do gene. Crian-
ças com essa síndrome apresentam retardos de desenvolvimen-
to que em geral são evidentes com 6 a 12 meses de idade. Em
crianças afetadas, a compreensão da linguagem e as habilidades
não verbais desenvolvem-se, mas a linguagem falada é rudimen-
tar. Crianças com síndrome de Angelman também apresentam
dificuldades de movimento/equilíbrio, movimentos de agitação
das mãos, comportamento hiperativo e curto período de aten-
ção, bem como outras características físicas e déficits funcionais
(incluindo questões ligadas ao sono e à alimentação).
Mecanismos Epigenéticos e Doenças
do Desenvolvimento
Estímulos ambientais que ocorram no início do desenvolvi-
mento podem produzir modificações epigenéticas que são her-
dadas, com consequências potenciais de longo prazo. Modifi-
cações epigenéticas apresentam uma memória das exposições
ambientais, tais como exposição a substâncias químicas ou não
químicas (nutrição), que podem influenciar o desenvolvimento
inicial. Estudos como gêmeos monozigóticos revelaram altera-
ções epigenéticas em várias doenças do desenvolvimento tais
como distúrbio bipolar, síndrome de Silver-Russell, síndrome
de Beckwith-Wiedemann e diabetes melito neonatal transitó-
rio. Por exemplo, a síndrome de Beckwith-Wiedemann é um
distúrbio transmitido pela mãe que leva à predisposição a tu-
mores embrionários, como o tumor de Wilms. O locus dessa
síndrome é encontrado na localização cromossômica 11p15.5 e
abrange cerca de 1 Mb, incluindo vários genes imprinted (IGF2,
H19, KCNQ1 e ICR2). Hipometilação aberrante afeta ICR2 e
KCNQ1. Entretanto, o mecanismo molecular da regulação epi-
genética não é completamente compreendido.
DOENÇAS NEOPLÁSICAS
Classificação de Doenças Neoplásicas
A palavra neoplasia é derivada do grego, significando “condição
de novo crescimento”. O termo tumor com frequência é utilizado
para se referir a uma neoplasia. Tumor significa literalmente “um
inchaço”. No início dos anos de 1950, R.A. Willis forneceu uma
descrição de neoplasia que ainda utilizamos nos dias de hoje: “...
Uma neoplasia é uma massa de tecido anormal cujo crescimento
é excessivo e descontrolado em relação àquele dos tecidos nor-
mais e persiste da mesma maneira após a interrupção dos estí-
mulos que provocaram a alteração...”. Mais recentemente, outros
pesquisadores descreveram os tumores como resultado de um
processo patológico em que uma única célula adquire a capaci-
dade de proliferar de modo anormal (crescimento clonal), resul-
tando em acúmulo de células da progênie, e definem o câncer
como tumores que adquiriram a capacidade de invadir os tecidos
normais circundantes. Essa definição ressalta um dos fatores de
distinção mais importantes na classificação geral de neoplasias
– a distinção entre tumores benignos e malignos. A divisão de
doenças neoplásicas em benignas e malignas é extremamente
importante, tanto para a compreensão da biologia dessas neo-
plasias quanto para o reconhecimento das alterações clínicas po-
tenciais para tratamento. No nível mais básico, as neoplasias são
classificadas como benignas ou malignas. As neoplasias benig-
nas não apresentam características invasivas e são consideradas
como tumores que apresentam baixa probabilidade de invasão e
dispersão. Em contraste, as neoplasias malignas apresentam com-
portamentos invasivos e/ou alto risco de dispersão metastática.
Uma subclassificação adicional das neoplasias malignas traça
uma distinção entre (1) cânceres da infância versus cânceres que
afetam principalmente adultos, (2) tumores sólidos versus neo-
plasias hematopoiéticas e (3) cânceres hereditários versus neopla-
sias esporádicas. Tanto neoplasias benignas quanto malignas são
compostas por células neoplásicas que formam o parênquima e
por estroma não neoplásico que é composto de tecido conectivo,
vasos sanguíneos e outras células que dão suporte ao parênquima
do tumor. O estroma do tumor apresenta uma função crítica no
apoio do crescimento das neoplasias fornecendo irrigação san-
guínea para nutrientes e oxigênio. Em quase todos os casos, as
células do parênquima determinam o comportamento biológico
(e o curso clínico) da neoplasia. Além disso, o tipo de célula do
parênquima da neoplasia determina como a lesão é nomeada.
Predisposição Genética de Doença
Neoplásica
O câncer não é uma doença, mas uma miríade de doenças com
tantas manifestações diferentes quanto tecidos ou tipos celulares
16   Capítulo 1
no corpo humano. Todos esses estados de enfermidade têm em
comum certas propriedades biológicas das células que com-
põem os tumores, incluindo crescimento celular descontrola-
do (clonal), dificuldade de diferenciação celular, invasividade e
potencial metastático. Atualmente, sabe-se que o câncer, na sua
forma mais simples, é uma doença genética. Mais precisamente,
ele é uma doença de expressão gênica anormal. Os mecanismos
moleculares que governam a proliferação celular descontrolada
na doença neoplásica envolvem perda, mutação ou desregulação
de genes que positivamente ou negativamente controlam a
proliferação, a migração e a diferenciação celulares. A carcino-
gênese é um processo em múltiplas etapas pelas quais o cân-
cer se desenvolve em resposta a alterações na expressão gênica
conduzidas por alterações cromossômicas, mutações gênicas e
alterações epigenéticas do DNA. A ideia de que a carcinogênese
é um processo em etapas múltiplas é apoiada por observações
morfológicas das transições entre crescimento celular pré-ma-
ligno (benigno) e tumores malignos. No câncer colorretal (e em
alguns outros tipos de câncer), a transição de uma lesão benigna
para uma neoplasia maligna pode ser facilmente documentada e
ocorre em etapas discerníveis, incluindo adenoma benigno, car-
cinoma in situ, carcinoma invasivo e finalmente metástase local
e distante. Além disso, demonstrou-se que alterações genéticas
específicas se correlacionam com cada uma dessas etapas histo-
patológicas bem definidas do desenvolvimento e da progressão
do tumor. Entretanto, é importante reconhecer que é o acúmulo
de alterações genéticas múltiplas em células afetadas (e padrões
de expressão gênica anormais associados), e não necessariamen-
te a ordem em que essas alterações se acumulam, que determina
a formação e a progressão do câncer.
Síndromes de Câncer Familiar
Várias síndromes de câncer familiar e hereditário foram reco-
nhecidas e caracterizadas. Cânceres familiares foram descritos
para a maioria dos principais sistemas, incluindo cólon, mama,
ovário e pele. Esses cânceres estão associados à predisposição
genética para desenvolver a doença. Os cânceres hereditários
normalmente são caracterizados por (1) idade precoce de iní-
cio ou diagnóstico, (2) neoplasias aparecendo em parentes de
primeiro grau do caso-índice e, (3) em muitos casos, tumores
múltiplos ou bilaterais. Por exemplo, evidências epidemiológi-
cas apontaram com consistência a história familiar como um
indicador forte e independente de risco de câncer de mama.
Portanto, mulheres com um familiar de primeiro grau (mãe ou
irmã) que tenha sido diagnosticado com câncer de mama apre-
sentam um risco elevado de desenvolvimento da doença. Essa
mesma relação é observada em outros cânceres hereditários.
Mutações Hereditárias em Genes de
Suscetibilidade ao Câncer
A síndrome de Li-Fraumeni foi caracterizada inicialmente en-
tre vários familiares com incidência excessiva de câncer. Pacien-
tes com essa síndrome desenvolvem vários tipos de neoplasias,
incluindo câncer de mama, sarcoma de partes moles e osteos-
sarcomas, tumores cerebrais e várias formas de leucemia, en-
tre outras. A suscetibilidade ao câncer entre indivíduos com a
síndrome de Li-Fraumeni acompanha um padrão de herança
autossômico dominante e é altamente penetrante (90% com
70 anos), mas muitas neoplasias se desenvolvem mais cedo na
vida. Sabe-se atualmente que a síndrome de Li-Fraumeni está
associada a mutações na linhagem germinativa no gene supres-
sor de tumores p53.
Sabe-se que cerca de 5 a 10% dos cânceres de mama estão
ligados à predisposição genética. Esses cânceres normalmente
estão associados a uma forte história familiar de desenvolvimen-
to de câncer de mama. Muitas pesquisas levaram à descoberta
de vários genes de suscetibilidade ao câncer de mama, incluindo
BRCA1, BRCA2 e p53, que podem ser responsáveis pela maioria
dos cânceres de mama hereditários. Em alguns casos, famílias
com maior suscetibilidade de câncer de mama também apre-
sentam taxas elevadas de câncer ovariano. As pacientes que são
afetadas por síndrome de câncer familiar mamário e ovariano
podem apresentar mutação de BRCA1 na linhagem germinativa.
O melanoma familiar está associado (1) à história familiar de
melanoma, (2) à presença de grande número de nevos comuns
ou atípicos, (3) a uma história de melanoma primário ou outros
cânceres de pele (não melanoma), (4) à imunossupressão, (5) à
suscetibilidade à queimadura solar e/ou (6) a uma história de
bolhas por queimadura solar. Dada a ligação entre o excesso de
exposição à luz do sol e o desenvolvimento de cânceres de pele
(incluindo o melanoma), não é surpreendente que a suscetibili-
dade à queimadura solar (sensibilidade à luz do sol) represente
um aumento do risco de melanoma. Essa suscetibilidade é parti-
cularmente pronunciada em indivíduos com pele clara, caracte-
rizados por sardas, olhos azuis, ruivos e uma pele que se queima
rapidamente em resposta à luz do sol e/ou apresenta dificuldade
em se bronzear. Foram identificados dois genes de suscetibili-
dade ao melanoma altamente penetrantes: CDKN2A (que co-
difica o inibidor 2A da quinase dependente de ciclina) e CDK4
(que codifica a quinase 4 dependente de ciclina). O CDKN2A
é encontrado no cromossomo 9p21, e o CDK4 é encontrado
no 12q13. Mutações de inativação da linhagem germinativa
do gene CDKN2A são a causa mais comum de suscetibilidade
hereditária ao melanoma, enquanto mutações do CDK4 ocor-
rem muito mais raramente. No entanto, mutações nas linhagens
germinativas de CDKN2A são raras e muitas são responsáveis
por uma pequena proporção de suscetibilidade ao melanoma
na população geral. O gene CDKN2A codifica duas importantes
proteínas reguladoras do ciclo celular: p161NK4A e p14ARF. Em-
bora outros loci de suscetibilidade ao melanoma tenham sido
mapeados por análise linkage de todo o genoma, os genes que
contribuem para a predisposição ao melanoma familiar perma-
necem desconhecidos para uma grande proporção dos casos
reconhecidos associados a parentesco. Pesquisa em andamen-
to está focada na identificação de genes de suscetibilidade ao
melanoma de baixa penetrância que conferem um risco mais
baixo de melanoma com variações mais frequentes. Por exem-
plo, demonstrou-se que variantes específicas dos genes MC1R e
OCA2 conferem um aumento do risco de melanoma.
Como o protótipo do gene supressor de tumor, o mecanis-
mo de inativação e a perda de função associados ao gene Rb1
são ilustrativos de toda a classe de genes supressores de tumor.
A inativação de ambos os alelos do gene Rb1 é necessária para o
desenvolvimento do retinoblastoma, uma neoplasia ocular que
em geral ocorre em uma idade muito jovem. Duas mutações
 Doenças e o Genoma: Doenças Genéticas, Neoplásicas e do Desenvolvimento    17
são necessárias para o desenvolvimento do retinoblastoma e es-
sas mutações são inativadoras. Assim, a perda de ambas as có-
pias funcionais do gene Rb1 é necessária para a transformação
neoplásica e a formação do câncer. O gene Rb1 foi encontrado
associado a várias neoplasias humanas, em geral por um meca-
nismo genético que envolve mutações ou deleções.
Foram descritos ou sugeridos cânceres familiares afetando vá-
rios outros tecidos e órgãos. Foi registrado e sugerido que o câncer
familiar do pâncreas segue um padrão de herança autossômico
dominante. Foi sugerido que uma forma familiar de câncer gás-
trico represente cerca de 10% de todos os cânceres gástricos e está
associada ao gene CDH1 no cromossomo 16q22.1. Uma varredu-
ra em todo o genoma de 66 famílias com alto risco de câncer de
próstata produziu evidências de associação da doença ao cromos-
somo 1q24-25. Subsequentemente, o locus de suscetibilidade no
cromossomo 1q24-25 foi associado ao gene HPC1.
Câncer Associado a Falhas nos Mecanismos
de Reparo do DNA
O câncer colorretal é uma doença mundialmente muito comum,
em particular em populações dos países ocidentais. Uma fração
substancial desses cânceres apresenta um componente genético,
e várias síndromes de câncer colorretal familiar são reconheci-
das, incluindo a polipose adenomatosa familiar (FAP, de familial
adenomatous polyposis) e o câncer de cólon não polipoide he-
reditário (HNPCC, de hereditary nonpolyposis colon cancer). Os
genes associados a cada uma dessas condições foram identifica-
dos e caracterizados. Entre essas síndromes de câncer colorretal
familiar, o HNPCC foi associado a reparo defeituoso do DNA. O
HNPCC é caracterizado pela ocorrência de carcinoma colorre-
tal predominantemente do lado direito, com um início precoce
e um aumento do risco de desenvolvimento de alguns tipos de
cânceres extracolônicos, incluindo o câncer de endométrio, es-
tômago, trato urinário e mama. Tumores associados ao HNPCC
apresentam uma forma característica de instabilidade genômi-
ca, que representa um mecanismo único para uma tendência de
todo o genoma à instabilidade em sequências de repetição curtas
(microssatélites), que foi originalmente denominada fenótipo de
erro de replicação. O defeito molecular responsável pela instabi-
lidade de microssatélite no HNPCC envolve os genes que codifi-
cam proteínas necessárias ao reparo normal de erros.
Foram descritas duas síndromes de cânceres familiares
adicionais que apresentam características clínicas semelhantes
àquelas do HNPCC ou da FAP. A síndrome de Muir-Torre é
definida pelo desenvolvimento de pelo menos uma neoplasia de
glândula sebácea e no mínimo um câncer interno, que frequen-
temente é um carcinoma colorretal. Essa síndrome compartilha
várias características com as síndromes de Lynch I e Lynch II do
HNPCC, incluindo a ocorrência de instabilidade de microssaté-
lite em um subconjunto de cânceres. Essa observação sugere o
possível envolvimento de mecanismos de reparo de erro anor-
mais na gênese de um subconjunto de tumores da síndrome de
Muir-Torre. A síndrome de Turcot é definida pela ocorrência de
um tumor cerebral primário e múltiplos adenomas colorretais.
Foi sugerido que a base molecular para essa síndrome envolva
mutação do gene APC ou mutação de um gene de reparo de
erro em tumores apresentando instabilidade de microssatélite.
Instabilidade Cromossômica e Suscetibilidade ao
Câncer
A observação de que a maioria das células cancerígenas contém
anomalias genéticas perceptíveis (aberrações cromossômicas e/
ou anomalias na sequência de DNA) sugere que todas as células
de transformação neoplásica sofreram dano genético e podem
ter apresentado alguma forma de instabilidade genômica duran-
te seu desenvolvimento. Células cancerígenas de pacientes com
HNPCC apresentam instabilidade genômica progressiva, que se
manifesta como alterações em sequências de microssatélites.
Mutações Gênicas e Outras Alterações
Moleculares em Doenças Neoplásicas
Não Familiares
Cânceres Não Familiares
Pesquisas revelaram que diferentes formas de câncer compar-
tilham mecanismos moleculares comuns governando a proli-
feração descontrolada de células, envolvendo perda, mutação
ou desregulação de genes que positivamente e negativamente
regulam a proliferação, a migração e a diferenciação celulares
(em geral classificados como proto-oncogenes e genes supres-
sores de tumor). A maioria dos cânceres humanos é classificada
como tumores sólidos (agrupados como carcinomas ou sarco-
mas). Os principais tipos de tumores sólidos incluem pulmonar,
colorretal, hepático, cutâneo, prostático, mamário, ovariano,
cerebral e cervical uterino. As exceções a essa classificação in-
cluem neoplasias malignas de origem hematopoiética, incluin-
do linfoma, mieloma e leucemias.
Mutações Gênicas em Doenças Neoplásicas
Não Familiares
Foi demonstrado que vários proto-oncogenes celulares são
ativados por mutação pontual. Entretanto, a família c-ras de
proto-oncogenes representa o subconjunto mais importante de
proto-oncogenes que são ativados por esse mecanismo. Essa fa-
mília inclui os homólogos celulares dos oncogenes retrovirais
de Harvey-ras (H-ras) e Kirsten-ras (K-ras). A forma ativada
de c-ras (oncogênica) apresenta propriedades marcadamente
diferentes daquela do proto-oncogene c-ras normal. A forma
ativada induz com consistência e eficiência a transformação
neoplásica em células de cultura, enquanto o proto-oncogene
normal não o faz. A diferença molecular crítica entre as duas
formas de c-ras foi encontrada na sequência de ácidos nucleicos
– a forma ativada de c-ras apresenta uma mutação pontual no
códon 12 do éxon 1, que resulta na substituição de um aminoá-
cido glicina por valina. Sabe-se atualmente que até 30% de todas
as neoplasias humanas apresentam mutações c-ras, e mutações
em c-H-ras, c-K-ras e N-ras refletem alterações específicas afe-
tando apenas o códon 12 (a maioria das mutações), o códon
13 ou o códon 61. Demonstrou-se que uma mutação adicional
em um íntron do c-H-ras regula a produção de produto gênico
estruturalmente normal, resultando em aumento da atividade
transformadora. Um tema comum de mutações c-ras é que uma
única mutação pontual é capaz de alterar drasticamente a ativi-
dade biológica de um produto proteico normal em outra com
18   Capítulo 1
propriedades transformadoras eficazes. As mutações c-ras são
encontradas em um grande número de tipos de tumores hu-
manos, incluindo tumores da tireoide, do trato gastrintestinal,
do útero, do pulmão, síndromes mielodisplásicas e leucemias.
Mecanismos Anormais de Reparo do DNA em
Doenças Neoplásicas Não Familiares
Vários distúrbios genéticos raros envolvendo vias de reparo
do DNA disfuncionais estão associados a risco elevado de de-
senvolvimento de câncer. Esses distúrbios incluem xeroderma
pigmentoso, ataxia telangectásica e anemia de Fanconi. Os indi-
víduos afetados por essas condições podem desenvolver várias
neoplasias quando expostos a agentes específicos de dano ao
DNA. Pacientes com xeroderma pigmentoso apresentam hiper-
sensibilidade à luz UV e incidência aumentada de vários tipos
de câncer de pele, incluindo carcinoma basocelular, carcinoma
espinocelular e melanoma maligno. Pacientes com ataxia telan-
gectásica apresentam hipersensibilidade à radiação ionizante e
a agentes químicos e podem desenvolver linfoma de células B e
leucemias linfocíticas crônicas, e as mulheres afetadas apresen-
tam um risco maior de desenvolvimento de câncer de mama.
Pacientes com anemia de Fanconi apresentam sensibilidade a
agentes que promovam ligações cruzadas no DNA e são pre-
dispostos a doenças malignas do sistema hematopoiético, em
particular a leucemia mieloide aguda.
A síndrome de Bloom é um raro distúrbio genético que
envolve vias de reparo do DNA disfuncionais. Pacientes com
essa síndrome apresentam maior incidência de vários tipos de
câncer, incluindo leucemia, câncer de pele e câncer de mama.
Esses pacientes apresentam instabilidade cromossômica que se
manifesta com níveis extremamente elevados de trocas entre
cromátides-irmãs. O defeito molecular na síndrome de Bloom
parece envolver falhas na regulação de enzimas de reparo do
DNA. O produto gênico suspeito nessa síndrome é uma enzima
com atividade helicase.
Alterações Cromossômicas em Doenças
Neoplásicas Não Familiares
A maioria dos cânceres humanos (incluindo tumores sólidos,
leucemias e linfomas) contém anormalidades cromossômicas
consistindo em alterações numéricas (aneuploidias) e/ou aber-
rações estruturais. Esses dois tipos gerais de dano cromossômi-
co podem refletir dois mecanismos distintos de instabilidade
cromossômica: (1) instabilidade do número de cromossomos e
(2) instabilidade na estrutura cromossômica. Em algumas for-
mas de câncer, as instabilidades cromossômicas predominam
sobre instabilidades na sequência de nucleotídeos, sugerindo
que esses mecanismos de instabilidade genética possam não se
sobrepor significativamente. Em geral é aceito que muitas (se
não a maioria) das alterações da estrutura cromossômica que
ocorrem em células cancerígenas conferem alguma vantagem
seletiva ao tumor em desenvolvimento. Assim, o acúmulo
de um número crítico de aberrações cromossômicas ou o
desenvolvimento de anomalias cromossômicas específicas pode
representar etapas essenciais no processo de transformação ne-
oplásica. Três formas gerais de alterações cromossômicas estru-
turais são observadas nas células cancerígenas: amplificações
do gene, rearranjos e translocações e deleções em larga escala.
A proteína supressora de tumor p53 parece desempenhar pa-
péis significativos na progressão do ciclo celular e na função
de verificação do ciclo celular em resposta ao dano no DNA. O
gene p53 costuma sofrer mutação em cânceres humanos, e es-
ses mesmos cânceres com frequência apresentam anomalias do
número de cromossomos. Portanto, foi sugerido que a perda da
função normal de p53 pode contribuir significativamente para a
instabilidade cromossômica em algumas formas de câncer.
Epigenética do Câncer
Nas células cancerígenas, as alterações epigenéticas ocorrem em
um contexto maior de alterações extensas na estrutura da cro-
matina relacionadas a padrões alterados de modificação de his-
tonas e ganhos e perdas de metilação nos dinucleotídeos CpG
nas sequências de DNA. O mecanismo de regulação epigenética
mais bem estudado e compreendido é a metilação do DNA, que
pode silenciar genes supressores de tumores (e outros media-
dores negativos de crescimento neoplásico) por transcrição,
resultando em vantagens seletivas de crescimento para células
neoplásicas emergentes. A transformação neoplásica associada
a alterações na metilação do DNA incluem tanto a perda global
de metilação (hipometilação) quanto o ganho gene-específico
de metilação (hipermetilação). A hipometilação ocorre princi-
palmente nas regiões de repetição de DNA, e a hipermetilação
ocorre nas regiões promotoras dos genes supressores de tumor.
Hipometilação de DNA no Câncer
No início da década de 1980, foram descobertos os eventos glo-
bais de hipometilação de DNA no câncer humano. A hipometi-
lação de genomas de células cancerígenas está associada à perda
de metilação nas regiões desprovidas de CpG onde se esperaria
que a maioria dos dinucleotídeos CpG fosse metilada. Essa per-
da de metilação nessas regiões do genoma possivelmente está
associada a expressões aberrantes ou inadequadas de alguns ge-
nes que poderiam contribuir para a transformação neoplásica,
a tumorigênese ou a progressão do câncer. Além disso, a ampla
desmetilação do genoma pode contribuir para a instabilidade
cromossômica, desestabilizando regiões pericentrômicas de
alguns cromossomos.
Hipermetilação de DNA no Câncer
Ganhos na metilação do DNA em células cancerígenas em
geral refletem hipermetilação de ilhas CpG em regiões pro-
motoras do gene, que pode levar ao silenciamento gênico. A
identificação de hipermetilação do promotor de ilhas CpG dos
genes supressores de tumor nas células cancerígenas ocorreu
em meados da década de 1990. O silenciamento do gene de-
pendente de metilação é um mecanismo normal de regulação
da expressão gênica. Entretanto, o silenciamento epigenético do
gene dependente de metilação nas células cancerígenas repre-
senta um mecanismo independente de mutação para a inativa-
ção dos genes supressores de tumor. Foi identificado um núme-
ro significativo de genes associados ao câncer que estão sujeitos
ao silenciamento dependente de metilação, e vários desses ge-
nes contribuem como marcas características do câncer.
 Doenças e o Genoma: Doenças Genéticas, Neoplásicas e do Desenvolvimento    19
Modificações de Histonas no Câncer
A atividade aberrante da lisina-metiltransferase em histonas
está associada a vários estados patológicos, incluindo diversas
doenças genéticas e câncer. Curiosamente, os resíduos de lisina
podem ser monometilados, dimetilados ou trimetilados, e cada
uma dessas modificações é realizada por uma histona-metil-
transferase (HMT) que é responsável por uma marca específica
de metilação, a qual é dispersa por todo o genoma. A regulação
aberrante das HMTs resulta na perda ou na superexpressão da
marca de metilação pela qual a enzima é responsável, levando
à expressão anormal do gene e, em última análise, à tumori-
gênese. Além disso, o metabolismo de conversão de S-adeno-
silmetionina (SAM) em S-adenosil-homocisteína (SAH) pelas
HMTs pode ser influenciado pela dieta, e a regulação aberrante
desse processo pode contribuir para carcinogênese. A via Rb
consiste em uma interação cooperativa de HDACs e HMTs, e
sofre mutação na maioria (90%) dos tumores sólidos huma-
nos, uma observação que pode explicar por que Rb1 é o alvo
preferido de mutações no câncer. A metilação da histona H3
na lisina 9 (H3K9) por HMT, G9a ou SETDB1 é crítica para a
repressão gênica e a formação de heterocromatina na divisão
celular de leveduras e mamíferos. Em contraste, a metilação da
histona H3 na lisina 4 (H3K4) pela metiltransferase SET7/9 está
ligada à ativação transcricional. A HMT responsável pela meti-
lação da histona H3 na lisina 27 (H3K27) é a EZH2, que parece
estar envolvida na progressão do câncer de próstata. Existem
duas HMTs que fazem metilação de H3K36 em seres humanos,
NSD1 e HYPB, e ambas foram associadas a distúrbios genéti-
cos. A NSD1 é essencial para o desenvolvimento embrionário
em camundongos, e mutações genéticas foram associadas ao
gigantismo cerebral, denominado síndrome de Sotos [171,173].
A HYPB foi identificada como uma proteína de interação com
a huntingtina e associada ao desenvolvimento da doença de
Huntington.
Um estudo recente mostrou que a metilação de H4K20 é
perdida em células cancerígenas. Além disso, quando a enzima
SUV4-20H, responsável pela metilação de H4K20, é desliga-
da em camundongos, estes podem desenvolver câncer. Esse
resultado indica que as HMTs para metilação de H4K20 po-
dem funcionar como genes supressores de tumor. Além disso, a
H3K4 metiltransferase MLL é translocada em neoplasias hema-
tológicas. Em um estudo recente, a HMT associada a H3K79,
hDOT1L, interage com uma parceira de fusão MLL envolvida
na leucemia mieloide aguda, e a fusão direta dessas duas prote-
ínas resulta na transformação leucêmica, indicando que o erro
do alvo de hDOT1L pode levar à leucemia. Além das HMTs
aberrantes, há várias linhas de evidências de que acetiltransfe-
rases (HATs) estão envolvidas na carcinogênese. As moléculas
H4K16 HATs, MOZ, MOF e MORF são recrutadas para se­quên­
cias de repetição nas células cancerígenas, e leucemias e mio­mas
uterinos são portadores de translocações que geram proteínas
de fusão tais como proteína ligadora de CREB (CBP)-MOZ e
MORF-CBP que são associadas à perda global de acetilação de
H4K16.
Interação entre Genética e Epigenética
no Câncer
O sequenciamento completo do genoma revelou uma alta fre-
quência de mutações específicas do câncer em genes conheci-
dos por direcionar e participar de processos epigenéticos que
ocorrem em múltiplos tipos de câncer. Esses genes incluem en-
zimas que são necessárias para a metilação do DNA (DNMTs),
a metilação de lisina de histona (EZH2, MLL) e a remodela-
gem da cromatina (SMARCB1). Portanto, eventos epigenéti-
cos aberrantes podem ser a base das anomalias genéticas. As
consequências fenotípicas das mutações não são bem conheci-
das. Além disso, a herança de algumas alterações ou mutações
genéticas pode aumentar a probabilidade de a metilação do
DNA ter como alvo genes-chave tais como MLH1 e possivel-
mente contribuir aos cânceres familiares e ao início precoce da
doença.