INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

FISIOLOGÍA CELULAR

“​PRÁCTICA 1. ASPECTOS GENERALES DEL MANEJ DE

ANIMALES DE LABORATORIO Y VIÁS DE
ADMINISTRACIÓN”

DR. Fidel de la Cruz López

Dra. Linda Garcés Ramírez
M. en C. Oriana Hidalgo Alegria

EQUIPO 3:
Buendía Buendía Adriana
Martínez Guzmán Mariel Izbeth
Meza Castrejón Gibran de Jesús
Castro García Eduardo

Fecha de entrega: 18/04/19

 INTRODUCCIÓN

El progreso científico ha promovido la introducción e incremento del uso de

animales de laboratorio como una herramienta fundamental para la
experimentación y enseñanza, de tal forma que ha aportado avances en
investigación biomédica y producción de reactivos biológicos (vacunas, sueros
heterólogos y fármacos).

Los experimentos con animales se fundamentan en el hecho de considerar a

otras especies animales como modelos en miniatura de los problemas
humanos, sin los cuestionamientos éticos que conlleva experimentar con
humanos. Se entiende que un experimento empieza cuando se inicia la
preparación del animal para su uso y termina cuando se acaban las
observaciones a realizar sobre el mismo.

Se realizan experimentos con animales en tres campos principales: la docencia,

la industria y la investigación; su uso como reactivos biológicos en el contexto
de la investigación científica ha aportado numerosos beneficios y tiene por
objetivo generar conocimiento científico que permita mejorar el futuro del
hombre y/o de otros seres vivos. Pero para que esta experimentación sea
científica debe cumplir una serie de condiciones y garantías en cuanto a la
manera de llevarla a cabo y sobre la nueva información que va a generar. En
este sentido, hay que tener en cuenta que sólo se deben usar animales cuando
las respuestas a las cuestiones científicas no pueden obtenerse de otra
manera. En otras palabras, utilizaremos animales en la investigación
biosanitaria cuando necesitemos conocer qué pasa en el conjunto de un
organismo vivo, y está claro que no podemos realizar ensayos en humanos por
cuestiones éticas.

Entre otros muchos ejemplos, han contribuido de manera directa a incrementar

la esperanza de vida del hombre, en la producción y validación de vacunas, en
el estudio de las enfermedades, etc. En este sentido los animales actúan como
modelos de diferentes enfermedades.

CARACTERÍSTICAS DE ANIMAL DE LABORATORIO

● Es engendrado y producido en condiciones controladas

● Mantenido en un entorno controlado
● Posee claros antecedentes genéticos y microbiológicos
● Existe una comprobación sistemática de estos antecedentes

Sin embargo, la utilización de animales en la investigación conlleva una serie de

responsabilidades. Con el fin de lograr una buena práctica con los animales es
necesario establecer una serie de normas o reglamentaciones. En México la
norma que se encarga de regular el uso de animales de laboratorio es la Norma
Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999.
De acuerdo con esta norma en el apartado 4.6 comprende la identificación y
registro se debe de considerar principalmente el tipo de especie con la que se
va a trabajar o circunstancia, de aplicación rápida y de ser posible indoloros. De
resultar invasivos, capaces de inducir molestias considerables al sujeto,
deberán emplearse sustancias o fármacos sedantes o anestésicos a juicio
veterinario. Los tipos de marcaje se divide en dos permanentes y temporales,
en el primer tipo se encuentran: tatuaje, muesqueo, aretaje y pulseras, mientras
que en el segundo tipo están las tintas y pinturas en diferentes partes del
cuerpo.

La administración idónea de un medicamento pretende que el fármaco pueda

llegar a la zona del organismo donde se requiere para ser activo, la biofase. En
la mayoría de los casos, este acceso no se produce de manera directa e
instantánea, sino que el fármaco presenta un tránsito específico por el
organismo que tendrá implicaciones en cuanto a la intensidad y duración de la
acción.

La eficiencia terapéutica estará influida entonces por la vía de administración y

por la formulación del fármaco.

Las vías de administración se pueden clasificar en:

1. Vías enterales. Permite el acceso del fármaco de forma fácil. Su

absorción se lleva a cabo a través del estómago e intestino. Algunas de
esta son: Vía oral, vía rectal, vía intragástrica.
2. Vías Parenterales. Consiste en la administración de fármacos mediante
inyección, utilizando jeringas y agujas. De esta forma el medicamento,
se pone en contacto directo con el medio interno. Es una vía de
absorción rápido. Algunas son: vía subcutánea, vía intravenosa, vía
intraperitoneal.

Un barbitúrico es una sustancia nociva que actúa como depresor del sistema
nervioso central con un efecto sedante y que en dosis elevadas presenta
síntomas como una intoxicación por alcohol, el pentobarbital sódico es un
barbitúrico de fácil absorción Se concentra en el hígado y riñón y
posteriormente alcanza un equilibrio en el cerebro a los 4-5 minutos. Es
utilizado para problemas del sueño, inducir el sueño antes de una operación y
para tratar convulsiones en casos de emergencia.

Los reflejos que pueden ayudarnos a determinar el efecto del Pentobarbital

sódico son: reflejo de enderezamiento y reflejo flexor. Donde el reflejo de
enderezamiento ​actúa siempre que, estando de pie, se tiende a perder esta
posición: los músculos erectores de la columna vertebral y los extensores de las
piernas, cuando comienzan a flexionarse, despiertan un reflejo miotático que
mantiene la posición erecta. Mientras que el reflejo flexor es respuesta de
retirada ante un estímulo nocivo.
 OBJETIVOS

● Aprender el marcado adecuado de los animales para su identificación

y la realización del experimento
● Manejo de animales de laboratorio (especialmente la rata)
● Aprender a administración de pentobarbital sódico por vías enterales
y parenterales
● Importancia del marcaje en los animales
● Calcular el volumen de pentobarbital sódico a administrar
● Determinar la vía de administración más efectiva como anestésico

FUNDAMENTO

En laboratorios de investigación los animales que más son utilizados como

modelos experimentales son los ratones y las ratas, esto es debido a múltiples
factores; fácil cuidado y mantenimiento, bajos costos de manutención, eficiencia
reproductiva y por su vida relativamente corta es excelente para uso en
ensayos de toxicología, farm​acología, así como diversas investigaciones. El
genoma de la rata consta de 2750 millones de pares de bases mientras que el
del humano tiene 2900 millones de pares de bases, por lo que se ha observado
que la rata tiene aproximadamente el número de genes que el humano, de tal
forma que los genes conocidos a enfermedades humanas tienen su
correspondiente gen en el genoma de la rata, por esta razón es utilizado en
investigaciones. Un factor importante que considerar para la realización de la
práctica es la temperatura central de la rata es de 38-39°C, que es similar a la
del humano 36-37°C.

La vía de administración de fármacos se realiza en función del tiempo de acción

en el que se requiere que actúe el fármaco, así como las características del
fármaco, si se requiere que el fármaco sea de acción rápida se selecciona una
vía de administración que permita su llegada a la circulación sanguínea y que
no tenga que ser metabolizada por medio de otros órganos antes de llegar a la
circulación sanguínea.

Para iniciar la práctica se distribuirá aleatoriamente 18 ratas en 6 equipos,

mediante la generación de números aleatorios con una calculadora científica,
por medio de la función Ran#. La finalidad de esta distribución es para obtener
datos homogéneos.

La realización de la práctica se considera como un experimento agudo por tal

motivo se marcará a las ratas mediante el método de manchado, que consiste
en aplicar un colorante en diferentes regiones del cuerpo lo que permite la
identificación de cada una. Una vez identificadas se procese a pesar las ratas.

Se utilizará pentobarbital sódico, el cual es un anestésico de tipo barbitúrico de

duración corta (1hr), pertenece a los medicamentos de tipo depresor del
sistema nervioso central. Induce somnolencia, alivian la tensión, sedación, es
hipnótico y en sobredosis puede producir la muerte. El pentobarbital sódico
tiene una composición química de carácter lipofílico, lo que permite ser
administrado por tres vías diferentes. La concentración de la solución de
pentobarbital sódico es de 63 mg/Kg y la dosis anestésica en la rata es de 35
mg/kg. De modo que solo se calculara el volumen de pentobarbital sódico a
administrar, dependiendo de cuanto pese la rata. Se tomará la temperatura
colonal de la rata en su momento basal y después de la aplicación del
anestésico, cada 5 minutos durante 25 minutos. El efecto anestésico se
evaluará mediante tres vías de administración: Intraperitoneal, subcutánea e
intragástrica. La acción de este fármaco debe alterar el sistema interno, por lo
que debemos notar cambios en la temperatura central, el reflejo de
enderezamiento y el reflejo flexor. La temperatura central es una variable
regulada y se mantiene constante dentro de un límite estrecho, es la
temperatura interna de un cuerpo, un cambio significativo podría ser indicio de
una falla en su centro integrados, el hipotálamo. El reflejo flexor entra en acción
al recibir un estímulo externo involucrando todos los músculos flexores de los
miembros y requieren de la activación de las neuronas motoras en varios
segmentos de la médula espinal. El reflejo de enderezamiento busca
restablecer la postura correcta de un individuo que ha sido modificada de dicha
posición, orientándose de la posición de su cabeza y su percepción visual, se
integra en el mesencéfalo.
METODOLOGÍA
 RESULTADOS

Figura 1. Porcentaje de pérdida del reflejo de enderezamiento sobre tiempo, por

efecto del pentobarbital sódico administrado en tres vías​: vía intragástrica, vía
intraperitoneal y vía subcutánea. Los puntos, cuadros y triángulos representan
la media. Los asteriscos indican diferencia significativa en los valores, mediante
prueba Xi cuadrada.

*P<0.05, en vía intraperitoneal en el intervalo 5-25 min vs basal

*P<0.05, en vía subcutánea en el intervalo 20-25 min vs basal

Figura 2. Porcentaje de pérdida del reflejo flexor sobre el tiempo, ​por efecto del
pentobarbital sódico administrado en tres vías​: vía intragástrica, vía
intraperitoneal y vía subcutánea. Los asteriscos indican diferencia significativa
en los valores, mediante prueba Xi cuadrada.

*P<0.05, en vía intraperitoneal en el intervalo 5-25 min vs basal

Figura 3. Efecto del pentobarbital sódico sobre la temperatura colonal en ratas,
administrado por tres vías diferentes (intraperitoneal, subcutánea e
intragástrica) en un lapso de 25 min. Los datos representan la media ± el error
estándar. Prueba estadística: ANOVA bifactorial de medias repetidas, n=6.
Prueba post hoc: Student-Newman-Keuls. Los asteriscos (*) representan la
diferencia significativa con respecto a la temperatura basal.

P<0.05, min 15-25 vs basal. Vía subcutánea.

★ P<0.05, min 10-25 vs basal. Vía intragástrica.
* P<0.05, min 5-25 vs basal. Vía intraperitoneal.

DISCUSIÓN

Efecto de pentobarbital sódico en el reflejo enderezamiento

En la gráfica (figura 1) de porcentaje de pérdida de reflejo enderezamiento

indica que en la vía intragástrica presentó el porcentaje mínimo en la pérdida de
este reflejo enderezamiento solo el 20% se perdió en el intervalo de tiempo
10-25 min. Mientras que en la vía subcutánea se perdió el reflejo
enderezamiento en un 80% entre el intervalo de tiempo 20-25min, sin embargo,
teniendo un cambio significativo. Mientras que en la vía intraperitoneal hay una
diferencia significativa del intervalo de tiempo 5-10 min con un 80% de pérdida y
de 20-25 min con la pérdida de reflejo enderezamiento de un 100%, se nota que
en el minuto 5 comienza el periodo de latencia del efecto anestésico de
pentobarbital sódico solo en esta vía intraperitoneal se presentó el mayor
porcentaje de efecto anestésico, notando que conforme avanzaba el tiempo la
pérdida de dicho reflejo iba en aumento. Esto se debe a que en cada vía llegó
una cantidad distinta del anestésico, así como la velocidad en que llegó al
órgano integrador del reflejo enderezamiento, que es el mesencéfalo. El reflejo
enderezamiento es aquel en el que las ratas buscan posarse en sus cuatro
patas (posición prona) después de haber sido desequilibradas puestas en
posición supina. Esta primera evaluación con el porcentaje de pérdida de reflejo
flexor nos dice qué tan rápido actuó el anestésico, sin embargo, la pauta para
determinar la efectividad nos lo indica la evaluación sobre el reflejo flexor.

Efecto de pentobarbital sódico en el reflejo flexor

El reflejo flexor al ser un reflejo defensivo que es producido por la contracción

de los músculos flexores donde se hizo un estímulo nocivo (doloroso) y
analizando la gráfica (Figura 2) se muestra el porcentaje de pérdida de reflejo
flexor obtenido en el experimento, se observa que en el minuto 5 comienza el
periodo de latencia del anestésico. Al transcurrir un tiempo en las tres vías de
administración aumenta la pérdida de reflejo flexor. Es evidente que en la vía
intraperitoneal nuevamente se obtiene los porcentajes más altos de pérdida de
reflejo flexor, sin embargo, en la vía subcutánea es la segunda en presentar
efecto del anestésico, pero no de la forma que se requiere. En cuanto la vía
intragástrica fue la de menor efectividad. La cantidad de fármaco llegó en
diferente cantidad y distinta velocidad a la médula espinal dado que es el
órgano controlador del reflejo flexor. La última evaluación nos confirma que la
vía adecuada es la intraperitoneal.

Efecto del pentobarbital sódico en la temperatura colonal

Los anestésico e hipnóticos son fármacos depresores del sistema nervioso

central. Un fármaco anestésico disminuye la actividad, modera la excitación e
inhibe el dolor, mientras que el fármaco hipnótico produce somnolencia y facilita
el inicio y el manteniendo de un estado de sueño. El pentobarbital sódico es un
barbitúrico de acción corta, tiene un efecto depresor no selectivo del sistema
nervioso central. Actúa potenciando la acción GABA, provocando
hiperpolarización que da como resultado sedación, inducción del sueño y
depresión respiratoria.

En la gráfica (Figura 3) efecto de pentobarbital sódico sobre la temperatura

colonal, conforme va transcurriendo el tiempo la temperatura colonal de las
ratas va disminuyendo en las tres vías de administración. La disminución en la
temperatura se debe a que el pentobarbital es un inhibidor del sistema nervioso
central provocado al estimular el sistema inhibitorio del neurotransmisor en el
cerebro (GABA). La regulación de la temperatura es realizada por el
hipotálamo, dependiendo de la perturbación, este actuará para bajar o
aumentar la temperatura corporal hasta volver al estado estable. Por lo tanto, sí
existe una disminución de la temperatura, quiere decir que el pentobarbital
sódico ha llegado hasta el sistema nervioso central y al hipotálamo, provocando
un bloqueo en las vías de respuesta. De modo que la gráfica (figura 3) nos dice
que la vía intragástrica la temperatura no tuvo diferencia significativa como para
decir que, si hizo efecto, esto se debe a que la absorción no es rápida en esta
vía dado que el fármaco de tipo anestésico. La vía intragástrica es una vía
enteral lo que quiere decir que el pentobarbital sódico se deposita en el
estómago, para ser absorbido en el intestino, llega al hígado y posterior a la
circulación sanguínea de tal forma que pueda llegar al hipotálamo, por esta
razón es una vía lenta para el efecto de anestesia. En la vía subcutánea solo
hay una diferencia significativa hasta el minuto 25, como el pentobarbital sódico
es de naturaleza liposoluble este al ser administrado en un lugar que contiene
grasas se disuelve y como esta parte del tejido también contiene irrigación
sanguínea el fármaco va pasando lentamente a la circulación, por lo cual su
efecto se retarda. Mientras en la vía intraperitoneal se obtuvo una diferencia
significativa de temperatura desde el minuto 5 hasta a el minuto 25 con
respecto a su basal, esto se debe a que le perineo es una membrana muy
irrigada de vasos sanguíneos, por tanto, presenta una absorción rápida y esto
hace que el pentobarbital sódico puede pasar directamente a torrente
sanguíneo y por ende al sistema nervioso central para llegar al hipotálamo con
rapidez y concentración de anestésico. Por ello se es que tanto el reflejo flexor
como el reflejo enderezamiento presentan el mayor porcentaje de pérdida de
reflejos en la vía intraperitoneal.

CONCLUSIONES

● Al aplicar el fármaco pentobarbital sódico, la rata no pudo regular su

temperatura a partir del minuto 5 y bajó considerablemente en
comparación con la basal
● La dosis administrada de pentobarbital sódico fue de efecto anestésico,
para la vía intraperitoneal
● La ausencia del efecto flexor confirmaba un estado de anestesia inducido
por el pentobarbital sódico
● La absorción efectiva del fármaco se ve reflejado en el decremento de la
temperatura colonal, ausencia del reflejo flexor y de enderezamiento
● La vía intraperitoneal es la única vía para lograr un efecto anestésico

REFERENCIAS

● Nicandro Mendoza Patiño, Farmacologia medica / Medical Pharmacology

(2008), Editorial: Médica panamericana, pág.834.
● Abraham Quezada Domínguez, Introducción Al Manejo de Animales de
Laboratorio: Roedores Y Pequeñas Especies (1997), Editorial:
Universidad Autónoma de Yucatán, pág.6
● Saénz Campos Desirée “Principios de Farmacología General y
Administración de Fármacos” 1°Ed. San José. Costa Rica. Editorial de la
Universidad de C.R. páginas 39-41
● Programa de estudios teórico-práctico 1994-1995. Manuales
Departamentales. Depto. De Farmacología, Facultad de Medicina,
UNAM.