Determinación  de  cafeína  en  bebidas  energizantes  por  el 

método de adición estándar.  

Cárdenas Camacho Michel Karina  

 
Laboratorio  de  Análisis  Instrumental  I,  Facultad  de  Química  Ambiental,  Universidad  Santo 
Tomás Seccional Bucaramanga. 
 

1. Resumen​.  La  práctica  consistió  en  la  aplicación  del  método  de  adición  estándar  en 
múltiples  puntos  y  se  hizo  a  partir  de  la  determinación  de  cafeína  en  dos  bebidas 
energizantes  de  red  bull  y  Mr  Tea,  para  ello  se  utilizó  el  método  espectrofotométrico 
de  absorción  de  ultravioleta  visible,  usando  para  este  caso  la  técnica  de  adición  de 
patrón  de  las  disoluciones  a  diferentes  concentraciones.  La  concentración  de  cafeína 
obtenida  en  el  red  bull  fue  de 102,8 ppm y la de Mr tea fue de 92,3 ppm, demostrando 
su inconsistencia con la etiqueta del producto.  

significativos en los resultados del análisis.

2. Introducción  Este método consiste en la adición de
El fin de esta ​práctica fue aplicar el
método de adición estándar, a partir de la
determinación de la concentración de
cafeína en dos bebidas energizantes,
utilizando el método espectroscópico de
absorción visible, así mismo comprobar la
información nutricional de los productos
en cuanto a la cafeína si coinciden o no.
El método de adición estándar es una
técnica de análisis cuantitativo que a
menudo se utiliza cuando la muestra de
interés tiene varios componentes que
resultan ser efectos matriz, donde los
componentes adicionales pueden reducir o
aumentar la señal de absorbancia del
analito, estos representan errores
cantidades conocidas y crecientes del
analito a la propia muestra problema, la
lectura y las correspondientes respuestas
instrumentales y la posterior construcción
de la recta se realiza por extrapolación de
la recta de calibrado al punto del eje x,
donde la respuesta es es cero se tiene que
construir una recta de adiciones estándar
por cada muestra analizada.
La ecuación para determinar la
concentración del analito por este método
es:
Cx = (b*Cs)
​(1)
(m*V s)
Donde ​b es el punto de corte en la serie de
datos, ​Cs representa la concentración del

 
 

estándar, ​m ​es la pendiente de la pendiente analito​.

de la gráfica (sensibilidad) y ​Vs es el
volumen fijo de la muestra.

En el método de adición estándar se utiliza

en muestras complejas donde los efectos
matriz son importantes, este método
implica añadir uno o más incrementos de
una solución estándar a una alícuota de
muestra y el valor del volumen en la
intersección de la línea recta con el eje ​x,​
es el volumen del reactivo estándar
equivalente a la cantidad de analito de la Dependiendo de esto se puede identificar
muestra problema, esto se puede ver las ecuaciones para hallar el intercepto en
también en forma gráfica así: cada uno de los ejes, así:
Gráfica 1: Curva de calibración entre la x − intercepto = −CaV o
(​ 5)
Vf
señal versus el volumen de analito.
y − intercepto = kCaV
Vf
o
​(6)

m − pendiente = k ​(7)

La espectrofotometría es un método
analítico utilizado para encontrar la
cantidad de analito en una solución, este se
basa a partir de la medición de cuanta luz
absorbe una sustancia química a analizar,
dependiendo de la concentración y
composición de la solución este haz
De acuerdo a esta gráfica el valor de los
luminoso va a generar una señal, y dicha
interceptos y la pendiente se calcula así:
respuesta se va a basar en la absorbancia
x − intercepto = −CaV o
​ ​(2) de la solución con lo cual viene
Cs
identificado y a partir de ella se determina
y − intercepto = −kCaV o
​(3) la concentración de la muestra analizada,
Cf
basándose en la Ley de Beer-Lambert.
kCs
m − pendiente = Vf ​(4)
Este método utiliza la luz en los rangos
visible y adyacentes (el ultravioleta UV)
Gráfica 2: Curva de calibración entre la
cercano y el infrarrojo (IR) cercano. La
señal del estándar y la concentración del
espectrofotometría ultravioleta visible
utiliza haces de radiación del espectro
electromagnético en el rango UV de 180 a
380 nm y en el de luz visible de 380 a 780
nm.​ ​(Perez Guillermo, 2018)1​

 
 

puede liberarse es a través de procesos

Figura 2: Espectro Electromagnético radiactivos o de conversiones internas en
visible. las moléculas del analito debido a la
presencia de este en la luz.

Químicamente la cafeína es un alcaloide

del grupo de las xantinas, concretamente
pertenece a la familia de las metilxantinas.
Éstas se caracterizan por tener un sistema
heterocíclico que contiene nitrógeno,
2​
(Elia Quirós Rosado, 2015) poseer carácter básico y mostrar
actividades biológicas muy intensas. Desde
Cada sustancia tiene su propio espectro de el punto de vista estructural, son derivados
absorción, el cual es una curva que de la purina, más concretamente,
muestra la cantidad de energía radiante provienen del anillo de la purina Página 2
absorbida, la absorbancia, por la sustancia de 9 que se forma a través de la
en cada longitud de onda del espectro condensación de una pirimidina con un
electromagnético, es decir, a una imidazol. Las xantinas poseen una
determinada longitud de onda de la energía estructura cristalina y su fórmula
radiante, cada sustancia absorbe una molecular es C​3​H​4​N​2​ y su estructura es:
cantidad de radiación que es distinta a la
que absorbe otro compuesto. Figura 4:Estructura molecular de la
cafeína.
En esta región del espectro
electromagnético, las moléculas se
someten a transiciones electrónicas, es
decir que la radiación producida por el
equipo incide directamente con los
electrones de los orbitales atómicos de la
solución, este proceso se puede identificar
como un proceso de dos etapas en la
primera ocurre la excitación electrónica y
en la otra la relajación que generalmente se
presenta como la conversión entre la
energía de excitación con el calor según la
siguiente ecuación: La ley de Lambert-Beer establece que la
Absorbancia de una sustancia está
M + hv→M * →M + C alor ​(1)
directamente relacionada con las
propiedades intrínsecas del analito,
Esta técnica es complementaria de la
específicamente son su concentración y la
espectrometría de fluorescencia, que trata
longitud de la trayectoria del haz de
con transiciones desde el estado excitado
radiación al atravesar la muestra, la
al estado basal, mientras que la
expresión matemática es:
espectrometría de absorción mide
transiciones desde el estado basal al estado I
A = log I0 ​(2)
excitado otra manera en que ​la energía

 

Donde ​I​0 representa
​ la intensidad de la luz
incidente e ​I​ la intensidad de la luz que
atraviesa la celda. También podemos
expresar la absorbancia en función de la
longitud de la cubeta y de la concentración
de soluto.
A=ℇ*∁*l ​(3)
Donde l es la longitud de la cubeta en
cm, c representa la concentración de soluto
en mol/l y ϵ es la absortividad molar
(coeficiente de extinción molar) medido
en l/mol.cm.
Figura 2: Representación del haz de luz
sobre la muestra
Por otro lado la transmitancia es la razón
entre la luz monocromática transmitida (I)
por una muestra y la energía o luz
incidente (Io) sobre ella. Tanto la energía
radiante incidente como la transmitida
deben ser medidas a la misma longitud de
onda, como se expresa en la ​fórmula 2​,
además es posible determinar el porcentaje
de transmitancia así:
I
%T = IO * 100% ​(4)
Las mediciones de absorbancia o
transmitancia se hacen por comparación
entre la muestra problema y un estándar
arbitrario o blanco. Como la referencia
debe poseer un porcentaje de transmitancia
de 100%, esta es llamada referencia de
100%, o una absorbancia de cero.
4. Materiales y Reactivos
 
-Cafeína comercial pura
-Agua destilada
-Espectrómetro UV-Visible (Agilent 8453)
-2 cubetas de cuarzo para el UV-Vis
-Balanza Analítica
-Pipetas volumétricas de 10 y 15 mL
-Vidrio de reloj
-Micro espátula
-Goteros
-Balones aforados de 50 y 100mL
-Vaso de precipitado de 250mL.
 
4. Metodología
Para  poder  encontrar  la  concentración  de 
cafeína  en  las  dos  bebidas  energizantes  se 
utilizó  el  método  analítico  espectrometría 
absorción  de  ultravioleta  visible  y 
calibrado  de  adición  estándar  en  múltiples 
puntos,este  método  se  basa  en  la  relación 
que  existe  entre  la  absorción  de  luz  por 
parte  de  un  compuesto  y  su concentración. 
Cuando  se  hace  incidir  luz monocromática 
(de  una  sola  longitud  de  onda)  sobre  un 
medio  homogéneo,  una  parte  de  la  luz 
incidente  es  absorbida  por  el  medio  y  otra 
transmitida,  como  consecuencia  de  la 
intensidad del rayo de luz. 
4.1  Fundamento  y  funcionamiento  del 
Espectrómetro Agilent 8453 
El  equipo  utilizado  para  llevar  a  cabo  la 
experiencia  fue  un  espectrómetro  de 
Ultravioleta  Visible  Agilent  8453,  el  cual 
consta  de  una  fuente  de  luz  “blanca” 
caracterizada  por  un  espectro  de  emisión 
continuo  en  un  intervalo  amplio  de 
longitudes  de  onda  (en  nuestro  caso  190 
nm-900  nm).  Un  monocromador  actúa 
como  filtro  óptico  transmitiendo  un  haz de 
luz  de longitud de onda fija λ e intensidad 
 

I​0  que  penetra  en  la  cubeta  de  análisis  aproximadamente  0,007g  y  0,003g  de  este 
donde  se  encuentra la muestra. Un detector  reactivo  y  se  aforó en un matraz a 100 mL, 
sensible  a  la  luz  mide  la intensidad del haz  seguidamente  se  procedió  a  efectuar  el 
a  la  salida I​f el cual ​analiza las transiciones  calibrado  por  adición  estándar, para ello se 
electrónicas  de  las moléculas a medida que  tomó  una  alícuota  de  1mL  la  muestra  de 
absorbe  la  luz  en  las  regiones  visible  del  red  Bull  con  una  variación  del volumen de 
espectro  electromagnético,  además  este  la  solución  estándar,  empezando  en  0,  y 
instrumento  permite  comparar  la  radiación  aumentando  el  volumen  de  dos  en  dos 
absorbida  o  transmitida  por  una  solución  hasta completar los 12 ml, cada solución se 
que  contiene  una  cantidad  desconocida  de  aforó  hasta 50 mL, lo mismo se realizó con 
soluto,  y  una  que  contiene  una  cantidad  la  muestra  de  Mr  tea,  como  se  ve  en  la 
conocida  de  la  misma  sustancia.  Todas  las  siguiente tabla: 
sustancias  pueden  absorber  energía 
radiante.  El  vidrio,  utilizado  en  las  celdas 
Tabla  1:  Patrones  de  adición  estándar
fue  de  cuarzo  por lo que es completamente 
transparente,  este  absorbe  longitudes  de 
onda  que  pertenecen  al  espectro  visible;  el 
agua  absorbe  fuertemente  en  la  región  del 
IR.  La  absorción  de  las  radiaciones  UV, 
visibles  e  IR  depende  de  la  estructura  de 
las  moléculas,  y  es  característica para cada 
sustancia  química.​(Agilent  technologies,   
2014)4 ​ Por  eso  una  vez  teniendo  las  disoluciones 
Figura  3  :Espectrofotómetro  ultravioleta  se  procedió  a hacer un barrido en el equipo 
visible  agilent  8453. partiendo  de  180  nm  hasta  300  nm pues se 
conoce  que  el  espectro  de  absorción  de  la 
cafeína  es  de  273  y  se  realizó  este  ajuste 
fin  el  fin  de  optimizar  los  resultados.  La 
matriz  para  cada  análisis  correspondió  a  la 
muestra  a  1ml  de  la  muestra  a  analizar 
diluidos  en  50  mL  de  agua,  por  lo  que  el 
blanco  correspondiente  a  cada  una  fueron 
  esos. 
 
5. Parte Experimental 
6. Resultados y Discusión. 
Para  calcular  la  concentración  de  cafeína 
La  práctica  consistió  en  la  determinación  en  la  bebida  de  red  Bull  con  el  método  de 
de  la  concentración  de  cafeína  en  dos  adición  estándar,  se  hicieron  7  muestras 
bebidas  energizantes  bastante  reconocidas  para  el  calibrado  esto  con  el  fin  de 
en  el  mercado,  por  medio  de  un  análisis  determinar  una  concentración  más  exacta 
espectrométrico.  Para  ello  primero  se  de  la  solución,  el  resultado  de  la 
prepararon  soluciones  estándar  de  cafeína  absorbancia  para  esta  muestra se evidencia 
comercial  una  a  140  ppm  para  el  análisis  en la siguiente figura: 
del  red  Bulls  y  la  otra  a  60  ppm  para  el 
análisis  del  Mr  tea  para  ello  se  pesó 

 
 

Figura  3:  Gráfica  de  absorbancia  de  la  cafeína  en  el  red  bull  Vs  longitud  de  onda.

  

Como  se  ve  en  la  gráfica,  esta  presenta  dos  picos,  lo  cual  indica  que  la cafeína se absorbe en 
dos longitudes de onda, la absorbancia en la gráfica se refleja en las siguientes tablas. 

Tabla  2:  absorbancia  en  el  pico  más alto,  De  acuerdo  a  las  tabla  2  y  3,  es  posible 
con longitud de onda entre  205 y 206 nm​. hacer  las  gráficas  de  concentración  versus 
absorbancia  esto  con  el  fin  de  ver  cuál  de 
las  dos  gráficas  presenta  una  mejor 
sensibilidad,  esto  se  puede  identificar  por 
aquella  que  tenga  una  mejor  pendiente, 
esto se puede ver en el siguiente gráfico: 

Figura  4:  Gráfica  de  concentración  vs 

absorbancia,  identificación  de  la 
  sensibilidad. 

Tabla  3:  absorbancia  en el pico más bajo, 

con  longitud  de  onda  de  273  nm.​

 
 

 
 

De  acuerdo  a  esta  gráfica  se obtiene que la 

curva  de  calibración  con  mejor 
sensibilidad  es  la que representa los puntos   
azules,  es  decir  la  que  está  a la longitud de  Donde  se  obtuvo  un  valor  de 
onda  de  205  nm,  ya  que  esta  tiene  una  concentración  de  cafeína  para  el  red  bull 
mejor  pendiente  de  0,1457,  sobre  este  de  aproximadamente  102,8  mg  por  cada 
valor  se  va  a  trabajar  para  calcular  la  litro. 
concentración  de  la  cafeína de acuerdo a la 
ecuación 1​,como se ve a continuación: 

Para el análisis de cafeína en la bebida de Mr tea, se tiene la siguiente gráfica de absorbancia: 

Figura 5 : Absorbancia de la cafeína en el Mr tea. 

De  acuerdo  a  la  gráfica  anterior  se  obtiene  como  se  ve la figura anterior es posible ver 
que las curvas de calibrado es:  que  la  gráfica  con  mejor  sensibilidad 
corresponde  a  la  que  representa  los  puntos 
a  273  nm  que tiene color naranja ya que su 
Figura  6:  ​Gráfica  de  absorbancia  vs 
pendiente  es  de  0,0868.  Como  se  hizo 
Volumen  de  patrón,  identificación  de  la 
anteriormente  utilizando  la  ​ecuación  1  se 
sensibilidad
obtiene  que  la  concentración  de  cafeína  en 
el Mr tea corresponde a: 

 
De  acuerdo  a  esto  se  dice  que  por  cada 
litro  de  solución  se  encuentra  97,2 
miligramos de cafeína.  
 
   
 
 

 
 

 
7. Conclusiones 
 
De  acuerdo  al  análisis  de  resultados  se  recomendable no tomar este tipo de
pudo  determinar  la  concentración  de  las  bebidas.
dos  muestras  de  bebidas  energizantes  por 
medio  del  método  de  adición  estándar  en 
m,  que  fue  muy  efectivo.  ya  que se obtuvo  8. Bibliografía
que  la  concentración  de  cafeína  para  la 
1 ​
bebida  energizante  de  red  bull  fue  de  103  Perez Guillermo. (2018). Espectrometría
ppm  y  si  se  busca  en  la  información  de  la  ultravioleta-visible. Retrieved from
etiqueta  de  este  producto  dice  que  una lata 
https://www.espectrometria.com/espectr
de  250mL  contiene  80  mg  de  cafeína,  lo 
que  indica  que  la  etiqueta  engaña  al  ometra_ultravioleta-visible
consumidor  ya  que  contiene  un  28%  más 
de  cafeína,  y  esta  solución  en  cantidades  - 2​ ​Elia Quirós Rosado. (2015). ​Espectro
asi  de  elevadas  es  ​supremamente dañina electromagnético.​ Retrieved from
para nuestro organismo ya que ​aumentar https://www.researchgate.net/figure/Figu
los niveles extracelulares de los ra-158-Espectro-electromagnetico_fig55_
neurotransmisores la noradrenalina y 272090105​: 
dopamina en la corteza prefrontal del
cerebro, lo que explica buena parte de sus
-​3 Universidad Nacional de la Patagonia. S.
efectos pocos favorables en nuestro
J. (2016). ESPECTROFOTOMETRÍA.
organismo ya que al consumirla se absorbe
y pasa rápidamente hacia el cerebro. No se Argentina: Universidad Nacional de la
acumula en el torrente sanguíneo ni se Patagonia S. J. B.
almacena en el organismo. Sale del cuerpo
en la orina muchas horas después de haber -​4 Agilent technologies. (2015). Guia de
sido consumida. usuario Agilent 8453. Alemania.
Retrieved from
Para el análisis en el Mr tea se obtuvo que https://www.agilent.com/cs/library/userman
la concentración fue de 97,2 ppm esto para uals/Public/g1115-95013.pdf
un litro, pero para la botella de 500ml se .
obtiene que es 48,2 ppm segun la
informacion nutricional de este producto ​
-​5 Espectrofotómetro, E. (2016).
no se encuentra esta concentración, pero
por sí solo según la OMS una planta de té Absorbancia y Transmitancia. 2016.
contiene 11 mg de cafeína, cosa que de por Retrieved from
sí ya debería estar incluido en el producto, https://elespectrofotometro.com/transmitanc
y como se evidencio en el análisis la ia-y-absorbancia/ 
concentración es muy alta, aunque se cree  
que por ser una bebida supuestamente té se  
considera que si es buena, pero por el  
contrario se evidencia que en nocivo para
nuestro organismo, por eso es

 

-Acevedo. R. (2000). determinacion de
cafeina en bebidas oscuras por
espectrofotometría. Retrieved from
http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/i
ndex.php/quim/article/viewFile/4283/3422
-Zúñiga, V. (2017). introduccion al analisis
instrumental, clasificación de los
métodos. Veracruz: Itesco Retrieved
from
https://www.academia.edu/15227397/INTR
ODUCCION_ANALISIS_INSTRUMENT
AL_CLASIFICACION_DE_LOS_METOD
OS 
-Red Bull, Informacion nutricional del red
bull, Canada (2018) recuperado de:
https://energydrink-es.redbull.com/cantida
d-cafeina-en-red-bull