BIOMETHANE  POTENTIAL  (BMP)    
ASSAY  PROTOCOL  
 

PREPARED  BY:  

Viviane  Yargeau,  ing.,  PhD.  

Associate  Professor  
Department  of  Chemical  Engineering  
McGill  University  
 

In  collaboration  with      

FOR  THE  PROJECT:  

“From  Waste  to  Wealth:  Sustainable  Wastewater  Management  in  Uganda”  funded  
by  Grand  Challenges  Canada  to  the  United  Nations  University  Institute  for  Water,  
Environment  and  Health”  

    © V. Yargeau 2014    
  
 
 
This  protocol  contains  recommended  methods  for  evaluating  
biomethane  production,  but  McGill  University,  Anaergia  and  UNU-­‐
INWEH  bear  no  responsibility  for  the  health  and  safety  of  
individuals  using  these  methods  in  a  laboratory  setting  outside  
our  institutions.  
 

It  is  recommended  to  wear  the  appropriate  personal  safety  equipment,  to  
work  in  a  chemical  fume  hood  whenever  possible  and  to  autoclave  
biological  waste  prior  to  disposal.  

       
 BMP  A SSAY  P ROTOCOL  

TOTAL  VOLATILE  SOLIDS  (VS)  ANALYSIS1  

DRYING  &  BAKING  THE  SAMPLE    
1. Bake  evaporating  dish  and  watch  glass  in  muffle  furnace  at  550°C  for  1  hr  (FIGURE  1).  
2. Cool  in  desiccator  and  weigh.  Record  mass  as  Wdish  (evaporating  dish  and  watch  glass).  
3. Homogenize  inoculum  source  (ie.  digestate)  in  blender.  
4. Weigh  out  25-­‐50  g  of  digestate  in  evaporating  dish,  cover  with  watch  glass  and  weigh.  Record  
mass  as  Wsample.  If  running  duplicates,  ensure  masses  do  not  differ  by  more  than  10%.  
5. Bake  material  in  oven  at  105°C  for  12hrs  (FIGURE  2).  
6. Cool  in  dessicator  and  weigh.  Record  mass  as  Wtotal_i.  
7. Bake  in  oven  again  for  1hr  at  105°C.  Cool  in  dessicator  and  weigh.  Record  mass  as  Wtotal_i+1.  
Repeat  this  step  until  the  difference  between  Wtotal_i  and  Wtotal_i+1  do  not  differ  by  more  than  
4%  or  50mg  (whichever  is  less).  Record  final  mass  as  Wtotal.  
8. Bake  sample  in  muffle  furnace  at  550°C  for  2hrs  (FIGURE  1).  
9. Cool  in  dessicator  and  weigh.  Record  mass  as  WVS_i.  
10. Bake  sample  in  muffle  furnace  at  550°C  for  30  mins.  Cool  in  dessicator  and  weigh.  Record  
mass  as  WVS_i+1.  Repeat  this  step  until  the  difference  between  WVS_i  and  WVS_i+1  do  not  differ  
more  than  4%  or  50  mg  (whichever  is  less).  Record  final  mass  as  WVS.  
11. Repeat  entire  sequence  for  each  waste  source  (fish  residue,  water  hyacinths,  etc.)  

CALCULATING  TOTAL  VOLATILE  SOLIDS  (VS)  CONTENT  

Calculate  the  VS  of  each  digestate  and  waste  source  in  terms  of  mg/kg  using  the  following  
equations:  
𝑚𝑔  𝑣𝑜𝑙𝑎𝑡𝑖𝑙𝑒  𝑠𝑜𝑙𝑖𝑑𝑠 𝑊!"!#$ − 𝑊!"
𝑉𝑆:   = ∗ 1000000  
𝑘𝑔   𝑊!"!#$ − 𝑊!"#ℎ

     
  FIGURE  1.  Muffle  furnace   FIGURE  2.  Drying  oven  

BIOMETHANE  POTENTIAL  (BMP)  ASSAY  

PREPARING  THE  BIODIGESTERS  2;  3  

Prepare  3  x  500  ml  Wheaton  bottles  (replicates)  for  each  waste  sample  to  be  tested  and  blanks  with  
only  fresh  digestate  (FIGURE  3).  

    Page  3  of  5  
 BMP  A SSAY  P ROTOCOL  

1.  Weigh  out  the  equivalent  of  20  g  VS-­‐inoculum  (to  obtain  80  g  VS-­‐inoculum/L  of  working  
digester  volume)  and  add  to  digester  (500  mL  Wheaton  bottles).  If  needed,  use  a  small  amount  
of  distilled  water  to  transfer  sample  into  digester.  Store  in  fridge  until  ready  to  use.    
2. Weigh  out  4  g  VS-­‐waste  (to  obtain  0.2  g  VS-­‐waste/g  VS-­‐inoculum)  and  homogenize  with  100  
mL  water  in  blender.  
3. Add  homogenized  waste  to  digester  and  raise  overall  volume  to  the  desired  working  volume  
(250  mL)  with  distilled  water.  
4. Purge  digester  by  bubbling  CO2  or  a  mixture  of  N2/CO2    (80/20,  v:v)  in  the  liquid  mixture  for  
5-­‐10  minutes.    Optional  step:  Insert  two  needles  into  the  butyl  rubber  stoppers  of  the  cap,  one  
feeding  CO2,  the  other  allowing  the  gas  to  escape  the  bottle).  Slowly  place  the  cap  on  the  
bottle  while  removing  the  bubbling  purge  from  the  bottle  and  quickly  screw  the  cap.    
Continue  purging  through  the  needle  for  5  minutes  and  then  remove  both  needles  from  the  
rubber  cap.    Ensure  this  method  did  not  create  a  pressure  build  up  in  the  bottle  (FIGURE  4).    
5. Incubate  in  water  bath  at  35°C  with  the  water  level  to  the  bottle  neck.  
6. After  a  30-­‐minute  equilibration  period,  using  the  syringe,  purge  digesters  of  any  pressure  
build  up.  
7. Shake  each  bottle  for  1  minute  every  day  (keeping  the  bottle  in  the  water).    
 

     
  FIGURE  3.  Material  to  prepare  biodigesters   FIGURE  4.  Flushing  of  bottles  with  CO2  

MONITORING  BIOGAS  PRODUCTION  3  

Every  second  day  for  the  first  week  and  then  twice  a  week  until  biogas  production  ceases  

1. Shake  each  bottle  for  1  minute  in  water  bath.  

2. Collect  the  gas  produced  with  a  frictionless  syringe  and  measure  total  amount  of  gas  
produced.    
3. Transfer  the  collected  gas  from  syringe  into  gas  bag  (FIGURE  5).    
4. If  required,  add  air  to  the  gas  bag  to  raise  overall  volume  to  300mL  (FIGURE  6).  Take  note  of  
the  amount  of  gas  added  to  account  for  dilution.    
5. Connect  methane  detector  to  gas  bag  using  appropriate  hosing.  Read  and  record  the  methane  
composition  of  gas  (Figure  7).  If  sample  was  diluted  in  Step  4,  ensure  this  dilution  factor  is  
accounted  for  when  determining  the  final  methane  concentration.    
 

    Page  4  of  5  
 BMP  A SSAY  P ROTOCOL  

     
  FIGURE  5.  Collecting  &  measuring  biogas   FIGURE    6.  3-­‐way  to  dilute  sample  
 

   
  FIGURE  7.  Methane  detector    
 

BMP  CALCULATION  
𝑉!"! 𝑚𝐿 = 𝐶!"! 𝑉!" + 𝑉!"#  
𝑚𝐿  𝐶𝐻! 𝑉!"! − 𝑉!"!,!"#$%
𝐵𝑀𝑃  ( )=  
𝑔  𝑉𝑆  𝑤𝑎𝑠𝑡𝑒 𝑀𝑎𝑠𝑠  𝑜𝑓  𝑉𝑆  𝑓𝑒𝑑  𝑖𝑛  𝑏𝑖𝑜𝑑𝑖𝑔𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟
𝑉!"!  :   Volume  of  methane  produced  in  bottle  (mL)  
𝐶!"!  :   Concentration  of  methane  in  the  biogas  collected,  after  dilution  (%)  
𝑉!"  :   Volume  of  biogas  collected  (mL)  
𝑉!"!  :   Volume  of  air  added  to  dilute  the  biogas  for  analysis  (mL)  
𝑉!"!,!"#$%  :   Volume  of  methane  produced  in  the  blanks  (digestate  only)  
Mass  of  VS:   Should  be  4  g  VS-­‐waste  as  indicated  in  step  2  of  Preparing  the  biodigesters  

REFERENCES  
 1.   Telliard,  W.  A.  (2001).  METHOD  1684:  Total,  Fixed,  and  Volatile  Solids  in  Water,  Solids,  and  
Biosolids  (USEPA  Office  of  Water,  E.  a.  A.  D.,  ed.),  Washington,  DC.  
2.   Esposito,  G.  (2012).  Bio-­‐Methane  Potential  Tests  To  Measure  The  Biogas  Production  From  
The  Digestion  and  Co-­‐Digestion  of  Complex  Organic  Substrates.  TOENVIEJ  The  Open  
Environmental  Engineering  Journal  5,  1-­‐8.  
3.   Inc.,  A.  (2013).  Biomethane  Potential  (BMP)  Assay  Procedure.  R&D,  Anaergia  Inc.  
 

    Page  5  of  5