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UNIDAD PROFESIONAL
INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA
MOLECULAR
Profesores:
GUTIÉRREZ HERNÁNDEZ GERMÁN FERNANDO
FLORES GÓMEZ ESTELA
Autores:
García Mendoza Erika Isabella
Mendoza Patiño Dulce María
Solache López Humberto Sared
Nájera Hernández Mariana Monserrath
Mariana
Semestre: 19/2
Grupo: 4BV1
Ubicación: Planta Piloto, Lab. De Biotecnología Molecular
Horario: Martes y Jueves 07:00-10:00
1
I. ÍNDICE
3
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS 4
REVISIÓN DE LITERATURA 4
MATERIALES Y MÉTODOS 5
RESULTADOS Y DISCUSIÓN 7
CONCLUSIONES 8
BIBLIOGRAFÍA 8
ANEXOS 9
2
INTRODUCCIÓN
Es por lo que se llevó a cabo esta práctica, para conocer el manejo de las
micropipetas (de varios volúmenes), para mantener la precisión y exactitud en las
experimentaciones en este laboratorio.
3
OBJETIVO GENERAL
Conocer, adecuadamente, el manejo y uso del equipo e instrumentación del
Laboratorio de Biotecnología Molecular, principalmente, micropipetas de varios
volúmenes.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Investigar y conocer los tipos, partes y funcionamiento de las micropipetas
que se utilizaron en este laboratorio.
Adquirir la destreza para manipular el equipo e instrumentación varia del
Laboratorio de Biotecnología Molecular.
Calibrar adecuadamente las micropipetas de varios volúmenes según la
metodología propuesta.
Determinar si la calibración de las micropipetas fue eficiente (exactos y
precisos), basándose en el CV (coeficiente de variabilidad) y el %E
(porcentaje de exactitud o error).
REVISIÓN DE LITERATURA
Las micropipetas.
Uno de los instrumentos de medidas pequeñas
más usados y que se debe conocer son las
micropipetas (fig. 2); estás permiten obtener
medidas de volúmenes en microlitros de ciertas
muestras.
Las micropipetas vierten volúmenes desde 1 a 1000 𝜇L. El líquido se aloja en una
punta de plástico desechable. Las puntas de propileno son estables a la mayoría de
las diluciones acuosas y de muchos disolventes orgánicos, excepto el cloroformo.
Las puntas no son resistentes a los ácidos nítricos o sulfuros concentrados.
Para usar una micropipeta, primero hay que acoplar una nueva punta a la caña de
la pipeta. Las puntas se guardan en una caja o en el dosificador, para que no se
contaminen al tocarlas con os dedos.
4
MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales
Juego de micropipetas de varios volúmenes (Nichiryo Le p10 y p200,
Accupet Pro p100 y Fisherbrand p1000) NOTA: en este caso, la p200
presentó goteo y la p10 no pudo ser calibrada por falta de tiempo.
Muestra de agua
Muestra de glicerol
Muestra de alcohol
3 vasos de precipitados de 20, 30 y 40 mL.
1 caja Petri
1 balanza analítica
Metodología
Llenado de micropipetas con las muestras
1. Se colocó la punta correspondiente a la micropipeta que se estuvo
manejando (azul, amarilla, blanca).
2. Se verificó en la ventana de la micropipeta si se seleccionó el volumen
deseado. Sino fue así, se debe colocar magnitud que se quiere de la muestra.
3. Se posicionó pulgar en el embolo.
4. Se bajó el embolo hasta el primer tope de la micropipeta.
5. Se colocó la punta de la micropipeta en el interior de la muestra (agua,
alcohol, glicerol), que fue previamente colocada en uno de los vasos de
precipitado, 1mm al interior de la muestra.
6. Lentamente se subió el embolo. NOTA: en el caso de la muestra del
glicerol, se subió con más lentitud el embolo, y una vez que este se
detuvo, se esperó unos segundos, pues las sustancias más densas
tardan más en subir por completo. Si este paso no se seguía, era posible
que se introdujera pequeñas burbujas a la micropipeta que dañarán la
medición de la muestra.
7. No soltar el embolo drásticamente, pues se podía salpicar la muestra.
8. Se retiró la punta de la micropipeta de la muestra.
5
burbujas, esto significaría que la expulsión de la muestra fue total y fue un
éxito.
6. Sin soltar el embolo de la posición del segundo tope, se retiró la micropipeta
(punta) del recipiente receptor de la muestra.
7. Lentamente, se soltó el embolo (para evitar que se descalibrará la
micropipeta).
8. Se Retiró o desechó la punta utilizada (dependiendo de la muestra medida).
Experimentación-calibración
1. Se prendió balanza analítica 20min antes de ser utilizada, y se verificó que
esta esté calibrada.
2. Se coloco en la ventana de la micropipeta que se calibró, la capacidad máxima
de la misma.
3. Se colocó en la balanza analítica una tapa de caja Petri y se taró.
4. Se tomó muestra de agua con la micropipeta.
5. Se colocó y pesó muestra en la caja Petri.
6. Se realizó este proceso 3 veces (triplicado) con las pipetas de los diferentes
volúmenes y se obtuvo los pesos respectivos de las muestras tomadas.
7. Se tomaron los datos.
8. Se calculó el CV y %E con las fórmulas propuestas en el protocolo.
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Tabla de datos de la calibración de las micropipetas p100 y p1000
7
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFÍA
Harris, D. (2007) “Análisis químico cuantitativo” 3ª edición. Editorial
Revertè. España, p.33-34.
ANEXOS
8
P10 Nichiryo 6.41 4.06 No calibrada
P100 Nichiryo 31 1.328 No calibrada
2
P200 Fisherbrand 1.45 1.187 No calibrada
P1000 Fisherbrand 0.63 0.1829 No calibrada
P100 Accupet pro 0.72 0.9209 Calibrada
3
P1000 Fisherbrand 4.62 0.6219 Calibrada
P10 Nichiryo 3,043 1.5801 No calibrada
P100 Accupet pro 1.1024 0.8817 No calibrada
4 Solo cumple
P200 Nichiryo 1.0856 0.0572
CV
P1000 Accupet pro 3.4093 0.3879 No calibrada
P10 Nichiryo 6.000 1.823 No calibrada
P20 Nichiryo 1.000 1.741 Calibrada
5 P200 Accumax 5.800 0.2423 No calibrada
Transferpette
P1000 0.010 0.2007 Calibrada
brand
P10 Accumax 0.3488 0.5812 Calibrada
P50 Finnipipette 1.5238 1.2959 No calibrada
6
P200 Accumax 5.6490 0.1594 No calibrada
P1000 Sciencemed 0.9039 0.2567 No calibrada
P1000 Buero 0.48 0.00071279 Calibrada
7 P200 Accumax 0.2525 0.0284 Calibrada
P100 Accumax 0.023 24.43 No calibrada