Universidad de Concepción

Facultad de Ciencias Químicas

Departamento de Química Analítica e Inorgánica

TERMINOLOGÍA DE CROMATOGRAFÍA

Dr. Jorge Yáñez Solorza

TERMINOLOGÍA CROMATOGRÁFICA

 Etapas de una cromatografía:

1. Siembra o inyección de muestra.
2. Elución de Fase Móvil y solutos.
3. Detección de componentes separados.
  Siembra o Inyección
 La siembra o inyección de la muestra corresponde a
la incorporación de la mezcla de solutos dentro del
sistema Fase Móvil- Fase Estacionaria.

 Se siembra en unidades de volumen, por ejemplo: mL

o µL.

Ejemplos:
 En una cromatografía planar, como la cromatografía en capa fina o papel la
muestra se siembra sobre la fase estacionaria en la parte inferior del papel o
sobre el nivel inicial de la fase móvil que asciende por efecto de
impregnación.

En una cromatografía en columna la muestra se siembra en la parte superior

de la columna y luego se agrega la fase móvil que desciende a través de la
columna por gravedad.
ELUCIÓN
 Proceso que consiste en hacer pasar la fase móvil (líquido o gas) a lo largo de
la fase estacionaria.

 Su fin es arrastrar los solutos a través de la columna y finalmente

sacarlos de ella.

 El consumo de fase móvil o eluyente durante este proceso se mide en

flujo, es decir volumen por unidad de tiempo, por ejemplo, 1 mL/min.

 La elución se puede realizar usando un solvente o una mezcla de solventes

miscibles que permita la separación óptima de los solutos.

 Muy importante en su capacidad de elución de la fase móvil es:

 composición química (polaridad)
 pH
 Flujo

 Estas variables deben ser optimizadas experimentalmente.

 FORMA DE ELUCIÓN SEGÚN EL TIPO DE CROMATOGRAFÍA

1. Cromatografía en capa fina: la elución es por

impregnación de la FM en FE.

2. Cromatografía en columna abierta: la elución se

produce por descenso de la FM a través de la FE,
simplemente por gravedad.

3. Cromatografía en columna cerrada: la elución se

produce al ser la FM impulsada mediante una bomba
través de la FE.
 ACTIVIDAD

 Realice grupos de 2 personas y

proponga 2 experimentos sobre
cromatografía (capa, columna,
etc.) posibles de realizar en un
colegio. (Indique cómo se
haría).
 DETECCIÓN
 Consiste en la demostración de la presencia del soluto en el
eluido mediante alguna evidencia física de este.

 Ejemplo:
 Propiedad óptica como color (absorción de luz), fluorescencia,
refracción de luz.
 Propiedad eléctrica como carga (conductividad).

 Los detectores entregan una respuesta eléctrica (voltaje o

corriente) al detectar los solutos que salen en el eluido (voltaje
v/s tiempo).

 Esta respuesta es proporcional a la concentración del soluto

detectado y puede ser representada gráficamente dando origen a
un cromatograma.
 DETECTORES MÁS COMUNES USADOS EN CROMATOGRAFÍA
LÍQUIDA

a) Detector ultravioleta –visible:

 Detecta compuestos coloreados o que absorven luz en el
rango ultravioleta o rango visible del espectro.

b) Detector de fluorescencia:
 Detecta compuestos fluorescentes.

c) Detector refractométrico:
 Mide índice de refracción de los compuestos, que es una
característica específica de cada compuesto, por ejemplo
en identificación de azúcares.

d) Detector de conductividad:
 Detecta compuestos con carga eléctrica o conducto.
 CARACTERÍSTICAS FUNDAMENTALES DE UN SISTEMA DE
DETECCIÓN

 Sensibilidad: Respuesta de un detector a una cantidad dada

de analito.
 La sensibilidad es una medida relativa que depende de las
condiciones de medida.

 Limite de detección: concentración mínima de un analito que

puede ser determinada por un detector.
 Según IUPAC corresponde 3 veces la desviación estándar de los
valores de 30 determinaciones del blanco, donde la concentración
del analito es cero.

 Selectividad: Capacidad de un detector o un reactivo de

responder a la presencia de un soluto o un tipo se solutos
específicos.

 Rango lineal: Rango de concentración de un analito donde la

respuesta del detector es proporcional a una variación de la
concentración(normalmente incrementos de 5%).
LÍMITE DE DETECCIÓN

 Límite de detección relativo

 Expresado en base a una concentración. Por ejemplo,
la concentración mínima detectable de cloruro en
agua de regadío por cromatografía iónica es 10 ng/mL
(ppb).

 Límite de detección absolutos

 Expresado en base a una cantidad. Por ejemplo, la
cantidad mínima detectable de cloruro en agua de
regadío por cromatografía iónica es 1 ng, ya que se
inyecta 0,1 mL de muestra para el análisis.
CROMATOGRAMA

 Un cromatograma es la presentación gráfica de

los compuestos después que éstos han sido
separados en la fase estacionaria y el proceso de
elución ha sido terminado.
TIPOS DE CROMATOGRAMAS

1. Cromatografía planar
 El cromatograma estará dado por los compuestos
separados en función de la distancia recorrida en la fase
estacionaria por cada uno de ellos.

 Este tipo de cromatogramas o revelados son típicos de la

cromatografía en capa fina o en papel, donde el
cromatograma será evidenciado después de aplicar un
reactivo colorante.

 El reactivo revelador reacciona con todos los solutos

separados y forma productos coloreados sobre la fase
estacionaria claramente distinguibles sobre la placa o
papel.
 Por ejemplo: el sulfuro de hidrógeno con metales
por formación de sulfuros insolubles y
coloreados. En este caso el cromatograma será
más bien un “revelado” de los solutos.
2. Cromatografía en columna
 Los compuestos que salen de la columna son detectados en el líquido
eluido.

 El detector del sistema, se encuentra a la salida de la columna y

genera una señal o respuesta en función a la concentración de cada
soluto detectado en el líquido eluido.

 Como tiempo inicial (t0), se considera al momento de la introducción

de la muestra al sistema cromatográfico y se termina cuando se
eluye el último compuesto separado desde la columna.

 Al terminar el proceso de elución, el resultado gráfico de la salida

de los compuestos separados es el cromatograma, donde se
representa:

respuesta o señal del detector v/s tiempo de elución

 Obviamente el soluto que presenta menor afinidad por la fase

estacionaria avanzará más rápido y saldrá primero de la columna
siendo éste el primero en ser detectado por el detector.
 Cada pico del cromatograma representa la elusión de
un soluto separado desde la columna.
 INFORMACION CUALI Y CUANTITATIVA DEL
CROMATOGRAMA

 Mediante el manejo dos datos del cromatograma se puede

extraer valiosa información cualitativa para la identificación
de los compuestos separados a través:
 tiempos de retención  identificación de compuestos.
 área del peaks o su altura  cuantificación de
compuestos.

 Tiempo de retención de los solutos

 Se define como el tiempo que demora todo soluto desde
su inyección hasta la llegada al detector pasando por la
columna.
 Cada soluto tendrá un tiempo de retención característico
que identificará su comportamiento cromatográfico y lo
diferenciará de los otros solutos.
 ACTIVIDAD
 Realice un esquema de un cromatograma
indicando la información cuali y cuantitativa que
representa.
 TIEMPO DE RETENCIÓN AJUSTADO

Tra = Tr´ =Tr -Tm

 Tm = tiempo que demora en salir la fase móvil de la columna.

 Tr = tiempo que demora en salir el soluto disuelto en fase móvil de la

columna.

 En cromatografía en capa fina los solutos se caracterizan por su coeficiente

de migración, para cuyo cálculo en vez de usar el tiempo como referencia se
usa la distancia recorrida por los solutos con respecto al avance del solvente.

 Dicho valor se conoce con el nombre de coeficiente de migración (Rf).

 Rf es una característica de cada soluto a T, P , solvente y Q constante

TEORÍA DE PLATOS TEÓRICOS

 Trata de explicar la separación de compuestos en

mezcla mediante la formación de sitios de
equilibrio, en donde se producen los repartos de
los solutos entre la fase móvil y estacionaria.

 Cada sitio de intercambio se llamará un “plato”,

término que deriva de los platos de una columna
de destilación, en donde se produce la
condensación del líquido destilado (equilibrio
líquido/gas).
 Un plato teórico en cromatografía está definido
como un evento teórico en el cual se produce un
equilibrio de intercambio (sitio de reparto), por
ejemplo, 1 tubo en una extracción por solventes.

 Como la cromatografía es un proceso continuo se

consideran segmentos imaginarios en la columna
(fase estacionaria) donde se forman sitios de
intercambio con su coeficiente de distribución
correspondiente.
  Cada segmento imaginario o sitio de reparto es un “plato teórico”, definido
como:
AEPT = L / N

 AEPT = altura equivalente de platos teóricos

 L = largo de la columna
 N = segmento de la columna donde hay un equilibrio.

 Normalmente una columna tiene muchos “platos teóricos” (miles).

 Mientras más platos teóricos tengan, mayor es su capacidad de separación

de componentes, ya que un mayor número de sitios de reparto conlleva a
una separación más efectiva.

 Las columnas modernas usan fases estacionarias con una gran cantidad de
platos teóricos para lograr una eficiente separación de compuestos
parecidos.

“ Platos teóricos - sitios de intercambio - separación más efectiva

“
 La gran cantidad de sitios de intercambio se ha logrado usando fases
estacionarias soportadas en gránulos de pequeño tamaño, para así
aumentar la superficie de contacto entre ambas fases.

 Las columnas actuales presentan tamaños de rellenos tan pequeños

(µm) en las columnas, la fase estacionaria opone una tremenda
resistencia al paso de la fase móvil (resistencia al paso de un fluido).

 Por lo tanto es necesario aplicar altas presiones para vencer esta

resistencia (> 100 atmósferas o bar).

 Estas condiciones extremas de pequeños tamaños de material de

relleno, altas presiones y alta capacidad de separación, requiere el
uso de sistemas altamente herméticos, resistente a altas presiones
y ambiente químico corrosivo.

 Debido a estas características se habla actualmente de la

cromatografía líquida de alta eficiencia, que se abrevia (HPLC)del
inglés High Preformance (Pressure) Liquid Chromatography
 ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA
 Imagine que usted es el profesor de un curso en
el colegio y quiere enseñar Cromatografía a sus
estudiantes. Proponga un experimento donde
quede claro el principio en el que se basa y el tipo
de cromatografía que quiere enseñar. Discuta con
sus compañeros y su profesor.