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Práctica 11 - Factores Físicos

Microbiología Experimental (Universidad Nacional Autónoma de México)

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Descargado por Mario Rangel (chikito.rangel@gmail.com)
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MICROBIOLOGÍA EXPERIMENTAL

Grupo: 6 Horario: Lunes y Miércoles (13:00 – 16:00) Equipo: 2

Integrantes: Correa García, Víctor Josué
Torres Santander, Fernando

Informe práctico 11: « Factores Físicos»

Los agentes ambientales influyen en la sobrevivencia, crecimiento y actividad bioquímica de los

microorganismos, esto nos permite entender cómo es que se lleva a cabo su distribución en la naturaleza y
nos permite controlarlos.
Los factores físicos que se involucran en estos procesos comprenden la temperatura, el pH, la presión
osmótica, la humedad, las radiaciones, la naturaleza y concentración de las sustancias químicas presentes,
aunque también tienen importante influencia la presencia de los demás seres vivos. Por ende, para poder
cultivar un microorganismo, se requiere aplicar en forma conjunta, una serie de factores físicos que
optimicen su desarrollo, sin embargo a menudo y por múltiples razones, la actividad es inoportuna e
indeseable, en estos casos es necesario aplicar agentes físicos en tal cantidad que permitan disminuir o
bien anular la actividad microbiana.
(Keywords: Punto térmico mortal, periodo térmico mortal, radiaciones UV, pH, ósmosis, temperatura,
halofilia).

Resultados realizada la inoculación, la caja se metió a

incubación a 37ºC durante 48 horas.
Durante el desarrollo de esta práctica se evaluó Los resultados obtenidos se muestran a
el crecimiento de tres microorganismos continuación:
diferentes modificando las condiciones a las que
se expusieron, el primero Clostridium sp. fue Temperatura (°C) Crecimiento
evaluado para determinar el periodo térmico Testigo Positivo
mortal y el punto térmico mortal, el segundo fue 50 Positivo
Serratia marcescens, en este se observó el efecto 60 Negativo
de las radiaciones UV y el posterior efecto de la 70 Negativo
exposición a los rayos solares. Finalmente, el 80 Negativo
último microorganismo utilizado fue Ebullición Negativo
Geobacillus stearothermophilus, con este *Imágenes Anexo No.1
microorganismo se evaluó el efecto del pH, de la
presión osmótica, la temperatura y la halofília Tabla 1. Resultados de Punto Térmico mortal
del microorganismo. para Clostridium sp.

- Punto térmico mortal - Periodo térmico mortal

En esta prueba se realizó la inoculación de 5
tubos de SSI mediante la utilización de 3 asadas
de la muestra del microorganismo Clostridium
sp., se colocaron a diferentes temperaturas con el
uso de baños maría. Tras mantenerlos durante 10
minutos en cada baño, se procedió a realizar la
inoculación por estría recta en una caja de TSA
dividida, dejando un sector de la caja como
Testigo para monitorear que el microorganismo
crece perfectamente a la temperatura de
incubación y en el medio utilizado. Una vez
La evaluación del periodo térmico mortal se
realizó mediante el uso de las suspensiones
preparadas para la evaluación del punto térmico
mortal en Clostridium sp.
El experimento consistió en dejar durante un
determinado tiempo las suspensiones con los
microorganismos en el baño maría de 60ºC y en
el de Temperatura de Ebullición. A los 5, 10, 20
y 30 minutos, se tomó una asada y se inoculó un
segmento de una caja Petri por estría recta. En
este caso, se dejó un segmento sin inocular como

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control de esterilidad y un segmento como
testigo, el cual al igual que en punto térmico - Efecto de la temperatura
mortal, sirvió para verificar que el
microorganismo creciera en el medio y en las Para determinar el efecto de la temperatura en el
condiciones de incubación (37 ºC durante 48 crecimiento, se utilizó una cepa de Geobacillus
horas). stearothermophilus. Con la cepa se realizó la
Los resultados obtenidos fueron los siguientes: inoculación de 4 tubos con caldo TSA utilizando
cuatro gotas con la pipeta Pasteur.
Crecimiento a
Tiempo Crecimiento
temperatura de Cada tubo se incubó a diferentes temperaturas y
(min) a 60 ºC
ebullición se obtuvo la siguiente grafica de crecimiento:
Control Negativo Negativo
Testigo Positivo Positivo Crecimiento de G. stearothermphilus
5 Negativo Negativo 2.5
10 Positivo Negativo
20 Negativo Negativo 2
30 Positivo Negativo

Crecimiento
*Imágenes Anexo No. 2 1.5

Tabla 2. Resultados del periodo térmico mortal 1

para Clostridium sp.
0.5
- Efecto de la radiación UV
0
En esta prueba, se llevó a cabo la inoculación 0 20 40 60
masiva de una suspensión de Serratia Temperatura ( ºC)
marcescens por medio de la técnica de hisopo en
una agar TSA. Esto se realizó por duplicado. Figura 6. Grafica de crecimiento de
Ambas caja de agar fueron divididas en 4 Geobacillus stearothermophilus.
segmentos iguales.
Las dos cajas fueron irradiadas con luz UV, cada
segmento se expuso a diferentes tiempos a la - Efecto osmótico
radiación y uno de ellos se utilizó como testigo
(no se irradio con luz UV). Una vez llevado a De la misma manera que en el efecto de la
cabo esto, una de las cajas se colocó a la luz del temperatura, se inocularon tres tubos de solución
sol durante 30 minutos y ambas cajas se con sacarosa a distintas concentraciones, con la
envolvieron con papel aluminio y dejaron cepa de Geobacillus stearothermophilus. Una
incubar a temperatura ambiente durante 48 vez inoculados, se metieron a incubación a 55 ºC
horas. durante 48 horas. Los resultados que se
Los resultados obtenidos fueron los siguientes: obtuvieron fueron los siguientes:

Sólo Radiación UV y Concentración de Turbidez

Tiempo
radiación posterior radiación Sacarosa (crecimiento)
(s)
UV solar 3% -
Testigo ++++ ++++ 7% +
10 ++++ ++++ 10% +
30 ++ +++
60 + ++ Tabla 4. Resultados del efecto de la presión
Tabla 3. Resultados del efecto de la radiación osmótica en una cepa de G. stearothermophilus
UV en Serratia marcescens.

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- Efecto del pH
Microorganismo Resultado
Para observar el efecto del pH en el crecimiento Clostridium sp. Gram (+)
de la cepa Geobacillus stearothermophilus, se Geobacillus sterothermophilus Gram (+)
realizó la inoculación de 3 diferentes tubos, los *Imágenes Anexo No. 4
cuales poseían diferentes pH. Estos tubos se
metieron a incubación durante 48 horas, a una Tabla 7. Resultados de tinción de Gram para
temperatura de 55 ºC. Los resultados que se los microorganismos utilizados.
obtuvieron fueron los siguientes:
Análisis de resultados
pH Turbidez (crecimiento)
3 ++ - Punto térmico mortal
7 +
9 - Con base en los resultados, el punto térmico
mortal de nuestra cepa de Clostridium sp. es
Tabla 5. Resultados del crecimiento de de 60 ºC debido a que, a partir de esta
Geobacillus stearothermophilus a distintos pH. temperatura ya no hubo crecimiento del
microorganismo.
- Halofilia
- Periodo térmico mortal
Para determinar el efecto de la concentración de
NaCl en la cepa de Geobacillus Los resultados obtenidos para esta prueba no
stearothermophilus, se llevó a cabo la son concluyentes en el caso de la evaluación
inoculación de tres tubos con NaCl a diferentes en la temperatura de 60 ºC, debido a que
concentraciones. Una vez inoculados, se obtuvimos crecimientos irregulares, ya que a
metieron a incubación a 55 ºC durante 48 los cinco minutos no hubo crecimiento del
horas. Los resultados obtenidos fueron los que se microorganismo (esto coincide con la prueba
muestran a continuación: de punto térmico mortal), sin embargo hubo
crecimiento del microorganismo en el
Concentración de NaCl Crecimiento tiempo de 10 y 30 minutos. La única
3.5% - explicación para esto es que al momento de
7% - la inoculación de la muestra no se llevó a
10% - cabo una buena homogenización de esta y
quizá la temperatura tampoco fue
Tabla 6. Resultados del crecimiento de homogénea en todo el tubo, ya que si el
Geobacillus stearothermophilus a diferentes crecimiento se hubiera debido a una
concentraciones de NaCl. contaminación de la muestra, se hubieran
observado colonias aisladas y no
- Tinción de Gram homogéneamente sobre la estría que se
realizó, otra posible razón es que la
Como parte de la práctica, se llevó a cabo una temperatura a la cual estaba el baño fuera
tinción de Gram de la cepa de Geobacillus menor por falta de monitoreo de ésta.
stearothermophilus y de la cepa de Clostridium
sp. obteniéndose lo siguiente: - Efecto de la radiación UV

Se sabe que las radiaciones afectan

directamente el material genético de os
microorganismos inhibiendo de esa manera
su crecimiento o modificando alguna
característica fenotípica (Ramírez, 2013).

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Como se observa en los resultados
obtenidos, para el caso de la caja en la que
solo se radió con luz UV, hubo un
crecimiento menor a partir de los 30
segundos en comparación con la caja a la
cual se le irradio luz solar, y para ambos
casos el crecimiento disminuyo aún más a
los 60 segundos. Esto se debe a que la luz
solar activa un mecanismo de
fotorreactivación, en el cual actúa una
enzima llamada fotoliasa, el objetivo de este
mecanismo dependiente de la luz es el de
corregir los dímeros de timina que se forman
durante la radiación con luz UV, esto
produce que las bacterias puedan sobrevivir
aun después de un tiempo prolongado a
radiaciones, pero es indispensable que la
bacteria sea expuesta a la luz ya que el
mecanismo requiere de manera forzosa
fotones, la inhibición del crecimiento no es
la única consecuencia de la exposición a los
rayos UV, también hay cambios en el
fenotipo expresado como puede ser el
cambio de coloración, de las colonias de un
rojo a un color blanquecino-incoloro.
- Efecto de la temperatura
stearothermophilus es un microorganismo
osmófilo ya que creció en los medios con
concentraciones altas de sacarosa, y en
cambio en concentraciones bajas de sacarosa
no hubo crecimiento. Lo anterior indica que
para que el microorganismo se desarrolle,
requiere de elevadas concentraciones de
soluto.
- Efecto del pH
Los resultados que se obtuvieron en esta
prueba, indican que Geobacillus
stearothermophilus es un microorganismo
acidófilo neutrotolerante; es decir crece
mejor a condiciones de acidez altas, pero
logra tolerar concentraciones neutras de pH
(pH = 7), sin embargo en la literatura se
encuentra que tiene una limitada tolerancia a
la acidez con un máximo de pH de 5.2
(Silva, 1999); los resultados anteriores
pudieron haberse visto afectados por la
cantidad de microorganismos inoculados,
pudo no haber sido homogénea en todos los
tubos lo que supondría un mayor desarrollo a
un pH ácido que un pH neutro si se inoculó
mayor cantidad en el tubo ácido en contra
parte con el pH neutro.

Los resultados del efecto de la temperatura

en el microorganismo Geobacillus - Halofília
stearothermophilus muestran que el
microorganismo crece en el rango de 28 ºC - Con respecto a la prueba de halofília,
55 ºC, sin embargo su temperatura optima es encontramos que el microorganismo
entre 37 ºC - 55 ºC por lo que se podría Geobacillus stearothermophilus es no
considerar como un microorganismo halófilo, debido a que no creció en ninguno
mesófilo o termófilo. Sin embargo, de los tubos con NaCl. La inhibición del
consultando la literatura, se ha encontrado crecimiento por el uso de NaCl se debe a que
que Geobacillus stearothermophilus es un esta sal normalmente desorganiza los
microorganismo termófilo debido a que su transportes de membrana y desnaturaliza
temperatura optima se encuentra a los 55°C proteínas.
(Abdul, 2002), el crecimiento a las
temperaturas menores de 55 °C pueden
deberse a la inoculación, esta pudo no haber Conclusiones
sido homogénea en los tubos, sin embargo se
nota que la mayor proliferación es en 55°C. El conocimiento y la manipulación de los
factores físicos resultan importantes en el
- Efecto osmótico laboratorio de Microbiología debido a que
permiten obtener mejores resultados cuando se
Con base en los resultados obtenidos, trabaja con algún microorganismo en específico,
encontramos que Geobacillus es decir, permitir el mejor desarrollo del

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microorganismo y de manera íntegra o de
manera contraria, resulta necesario conocerlos  Abdul, A.; Farid, M. y Chen, X.
para poder llevar a cabo su correcta eliminación Theoretical and experimental
o la disminución de la carga microbiana. investigation of the thermal inactivation
of Bacillus stearothermophilus in food
Bibliografía pouches. Journal of Food Engineering;
2002, 51(3):221-228.
 Ramírez, R., Luna, B., et. all. Manual de  ÁVILA, I. & SILVA, C. Methodologies
Prácticas de Microbiología General, 6ª to optimize thermal processing
ed.; Universidad Nacional Autónoma de conditions: An overview. In: Oliveira,
México: México, 2013; pp. 233-240. F.A.R. y Oliveira, J.C. (eds). Processing
 Alarcon R., Manual de Practicas de foods quality optimization and process
Microbiologia y Microbiologia de assessment. CRC Press. Boca Ratón,
Alimentos, 1ra ed.; Universidad FL, USA 1999. pp: 67-82.
Autónoma de Ciudad Juarez, 2004; pp.
25 – 27

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Anexo 1. Resultados para punto térmico mortal

Fecha: 29 / Octubre / 2015.

Muestra: Clostridium sp.
Medio: TSA
Descripción: Resultados obtenidos para la prueba de
punto térmico mortal. En la imagen se observa
crecimiento en el sector destinado para el testigo, y en el
sector en el que se inoculo el microorganismo a 50 ºC,
sin embargo en las temperaturas posteriores (60°C,
70°C, 80°C y ebullición) no se observa crecimiento.

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Anexo 2. Resultados para periodo térmico mortal

Fecha: 29 / Octubre / 2015.

Muestra: Clostridium sp.
Medio: TSA
Descripción: Resultados obtenidos para periodo térmico
mortal a 60 ºC para Clostridium sp. En la imagen se
observa crecimiento en los segmentos destinados para el
testigo, 10 minutos y 30 minutos.

Fecha: 29 / Octubre / 2015.

Muestra: Clostridium sp.
Medio: TSA
Descripción: Resultados obtenidos de periodo térmico
mortal en la temperatura de ebullición para Clostridium
sp. En la imagen se observa que únicamente hay
crecimiento en el testigo, el cual no fue sometido a
ninguna temperatura.

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Anexo 3. Resultados para efecto de las radiaciones

Fecha: 29 / Octubre / 2015.

Muestra: Serratia marcescens
Medio: TSA
Descripción: Resultados obtenidos para la caja
C inoculada con Serratia marcescens a la cual solo se le
irradio luz UV. Como se puede observar, el crecimiento
10’’ disminuye mientras más tiempo se expone a las
radiaciones.

Fecha: 29 / Octubre / 2015.

Muestra: Serratia marcescens
Medio: TSA
Descripción: Resultados obtenidos para la caja
inoculada con Serratia marcescens a la cual se le irradio
luz UV y posteriormente se expuso a la luz solar. Como
se puede observar, el crecimiento disminuye mientras
más tiempo se expone a las radiaciones, sin embargo se
obtiene una cantidad significativa de colonias, debido a
la exposición a la luz solar.

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Anexo 4. Tinción de Gram de los microorganismos utilizados.

Fecha: 27 / Octubre / 2015

Muestra: Clostridium sp.
Tinción: Gram
Aumento: 1000 X
Descripción: En la imagen se observan algunos
bacilos Gram positivos, los cuales no poseen
alguna asociación microbiana.

Fecha: 4 / Noviembre / 2015

Muestra: Geobacillus stearothermophilus.
Tinción: Gram
Aumento: 1000 X
Descripción: En la imagen se observan algunos
bacilos cortos Gram positivos, los cuales no poseen
alguna asociación microbiana aparente.

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