Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
MONOGRAFÍA
ANTICUERPOS MONOCLONALES Y
COPROANTÍGENOS
INTEGRANTES :
GONZALES VELÁSQUEZ Grescia
GARNIQUE VÁSQUEZ Estefani
PUICAN TERÁN Shirley
MENDOZA HUAMÁN Fátima
2
esenciales en el ámbito clínico y biotecnológico, y han probado ser útiles en el
diagnóstico y tratamiento de enfermedades infecciosas, inmunológicas y neoplásicas,
así como también en el estudio de las interacciones patógeno-hospedero y la
marcación, detección y cuantificación de diversas moléculas.
Y es que desde su descubrimiento hacia finales del siglo pasado los anticuerpos
han cautivado la atención de médicos, bioquímicos y científicos en el área de las
biociencias y la historia recoge testimonios de ello. Por ejemplo, el primer premio Nobel
otorgado en el área de Fisiología o Medicina lo recibió Emil von Behring, precisamente
gracias al trabajo en el que reportó el descubrimiento de los anticuerpos. Desde
entonces y hasta el presente, quince premios Nobel han sido otorgados a individuos
que han hecho aportes significativos en el ámbito de la inmunología. Siete de estos
fueron entregados a personas cuyo trabajo estuvo directamente relacionado con
anticuerpos.
Sin duda, este interés surgió de la inmensa potencialidad que, desde un inicio,
les fue reconocida a estas moléculas para ser usadas en aplicaciones diagnósticas y
terapéutico-profilácticas.
4
ÍNDICE
Resumen 2
Índice 5
Presentación 6
Capítulo I
Capítulo II
Capítulo III
Coproantígenos 53
Conclusiones
Referencias Bibliográficas.
PRESENTACIÓN
Ya han transcurrido 100 años desde que surgió la idea de utilizar anticuerpos
como “balas mágicas” para el tratamiento de enfermedades. La tecnología crucial que
hizo posible esta idea fue desarrollada por Köhler y Milstein hace 25 años, quienes
describieron una metodología para producir anticuerpos monoclonales. Sin embargo,
durante casi 20 años y a pesar de los grandes esfuerzos que se realizaron, sólo se han
aprobado algunos productos de uso clínico basados en anticuerpos. El principal
obstáculo en el camino para alcanzar esta meta ha sido la reacción inmunitaria de los
pacientes contra estas moléculas.
Además, se hizo evidente que moléculas tan grandes como las inmunoglobulinas
no son idóneas para determinadas aplicaciones clínicas como, por ejemplo, la
quimioterapia dirigida de tumores sólidos, debido a su poca capacidad de penetración.
El progreso de la biología molecular y la ingeniería de anticuerpos ha hecho posible la
humanización de estas moléculas en la actualidad. A mediados de la década de 1980,
las primeras moléculas quiméricas —anticuerpos humanos con dominios variables
murinos— permitieron reducir notablemente las respuestas humorales de anticuerpos
humanos antiratón (respuesta HAMA, del inglés human anti-mouse antibody reaction).
Unos años después se logró mejorar estos anticuerpos, los cuales solamente poseían
de origen murino las regiones determinantes de la complementaridad (regiones CDR,
del inglés complementarity determining region) del anticuerpo con su antígeno. Por
consiguiente, desde 1997, se han autorizado varios anticuerpos quiméricos y
humanizados como productos terapéuticos. Desde comienzos de la década de 1990, la
introducción de la tecnología de presentación de péptidos y proteínas en la superficie
de fagos ha tenido un impacto mayor en este campo.
6
CAPÍTULO I
ANTICUERPOS MONOCLONALES
1.1. GENERALIDADES
que es la de la propia inmunología, y se remonta a finales del siglo XIX. En esa época,
los microbiólogos estudiaban los mecanismos de defensa del organismo contra los
Kitasato sentaron en los años noventa del siglo xix las bases de la inmunidad humoral
diftérica o la tetánica. Ehrlich, a finales de siglo, consolidó la idea de que las toxinas
generaban antitoxinas séricas que se comportaban según las leyes de la química; las
reaccionaban frente a las toxinas de manera específica como una llave con su
En los años treinta del siglo XX Landsteiner, el descubridor del sistema ABO,
identifica todas esas funciones y las centra en una sola molécula, los anticuerpos, y al
tiempo va sustituyéndose el nombre de toxina por el de antígeno. Años más tarde, este
mismo autor, junto con Pauling, desarrolla la teoría instruccionista de formación de los
origen celular de los anticuerpos en las células B y plasmáticas. Años más tarde se
Frente a la teoría instruccionista, Jerne propuso en los años cincuenta que los
selección de los más adecuados. Poco después, Burnett y Talmage adelantan la teoría
de la selección clonal que completa y expande las ideas de Jerne, y que presupone
que cada célula B produce un solo tipo de anticuerpo con una especificidad concreta, el
celular; más adelante, la exposición a los antígenos hace que esas células B proliferen.
los anticuerpos ocurre en 1975 cuando Milstein y Köhler decubren en Cambridge los
generación de su diversidad.
8
Un anticuerpo es una glicoproteína perteneciente al grupo de las
puentes disulfuro. Cada una de estas cadenas posee regiones con un alto grado de
que contienen los residuos que establecen contacto con los determinantes antigénicos.
(M1, M2, M3, M4), que acotan las tres CDR. La estructura constituida por la proyección
tridimensional de las CDR de ambas cadenas forma el sitio activo que interactúa con el
antígeno.
tipos de fragmentos proteicos. Uno de ellos cristaliza de forma espontánea, por lo que
binding, en inglés).
reacciones. En la clínica, uno de los usos más frecuentes ha sido el del diagnóstico,
10
dada su exquisita especificidad y su capacidad prácticamente ilimitada para reconocer
detección de trombos.
de destruir células, incluidas las tumorales, mediante distintos mecanismos. Por esta
tisulares, etc.
Monitorización de drogas
Alergia
Diagnóstico
Hematología
Inmunoescintografía (=Inmunogammagrafía)
Aplicaciones forenses
Cáncer
Degradación del colesterol
Modulación de hormonas
Otras:
Modulación de receptores
industrial)
de anticuerpos
12
Los anticuerpos monoclonales no son útiles frente a Ag polimórficos, es decir,
que, pese a ser perfectamente válidos para todos los usos indicados, no son útiles para
humanos, lo que reviste importantes problemas por razones tanto éticas como técnicas.
Los anticuerpos son proteínas que envuelven una estructura bioquímica compleja
demarcada por la unión de cuatro cadenas proteicas: dos pesadas (CH), y dos ligeras
(CL), unidas mediante puentes disulfuro (figura 1). Funcionalmente, los anticuerpos se
dividen en una fracción que involucra el reconocimiento antigénico, denominada Fab, y
una fracción cristalizable (Fc) que media funciones efectoras como la citotoxicidad
celular que depende del anticuerpo
Figura 1 (antibody dependant cellular cytotoxicity, ADCC) y la
Estructura general de los anticuerpos
citotoxicidad que depende del complemento (CD).
1 Inmunogenicidad impuesta por las secuencias que se conservan en Ac ratón, y no se dan en Ac de humanos.
VL: fracción variable de la cadena ligera; VH: fracción variable de la cadena pesada;
CH1, CH2: dominios de la cadena pesada en los que se concentran las funciones de
Tabla 1
Productos usados en inmunización pasiva
14
Las regiones Fab están conformadas por una región variable y otra conservada. La
región variable tiene una diversidad casi infinita para el reconocimiento de antígenos,
Los anticuerpos no sólo son componentes fundamentales del sistema inmune sino
que, junto con el estudio y el descubrimiento de sus funciones, han servido como
de investigación.
tejidos;
3. identificar las interacciones moleculares con los productos de genes, por ejemplo, la
inmuno-precipitación;
4. identificación de marcadores fenotípicos únicos de un tipo celular particular; ésta es
16
1.4. PRODUCCIÓN Y DESARROLLO DE LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES
creada en 1975 por Georges Köhler y César Milstein, que consistía en la generación de
contra un antígeno específico, fruto de la fusión de dos células diferentes por medios
Figura 2
Producción de anticuerpos monoclonales por medio de la técnica de hibridación.
producido por la tecnología del hibridoma para uso clínico, en pacientes con rechazo
Consecuente con ello, se han desarrollado diferentes técnicas para minimizar los
18
de métodos in vitro de generación de anticuerpos monoclonales en bacterias mediante
ratones, con la tecnología del ADN recombinante, en la cual los genes que codifican la
región variable de las Ig de ratón se unen con genes que codifican la región constante
humana para, luego, ser insertados en células de mieloma, donde producirán nuevas
moléculas de anticuerpo que tendrán una parte humana pero que tienen la unión
anticuerpo quimérico.
Figura 3
Anticuerpo quimérico en el que se conserva la región variable de ratón de las
cadenas pesadas y ligeras (VH y VL) y se une con una región constante de las cadenas
humana.
humanos.
Sin embargo, algunos estudios han reportado que esta transferencia puede generar
una afinidad variable hacia el antígeno; estos tipos de anticuerpos los han hecho
afinidad antigénica y anticuerpos que la han disminuido. Este proceso debe llevar
20
molecular de las regiones receptoras y donantes. Aunque la humanización de
han reportado respuestas exageradas con el 9% de los productos que se han usado.
HUMANOS
monoclonales humanos por esta tecnología ha sido difícil, debido a que los hibridomas
humanos y las líneas celulares derivadas de mieloma múltiple han sido difíciles de
cadena única, Fab y ScFv, en bacterias, gracias a las bibliotecas de bacteriófagos que
Actualmente, la tecnología del fago es una de las más utilizadas y bien establecidas
fagos con genes que codifican las regiones variables de Ig, ha probado ser útil en la
optimizadas.
Las regiones ScFv son las candidatas usadas en esta tecnología, por contener los
proveen, entonces, unos repertorios de anticuerpos con alta afinidad para un amplio
tamaños de 6,7 x 109, los cuales pueden ser usados en laboratorios de biología
molecular.
transgénicos, a los cuales se les han reemplazado los genes de las regiones variables
por humanas, en las que los ratones llevan a cabo la recombinación de los genes VDJ
que son los responsables de la codificación y ensamblaje de las Ig; estos anticuerpos
producidos tienen una alta afinidad con secuencias terminales humanas (Figura 4).
22
Figura 4
monoclonales
pesadas y ligeras a partir de un repertorio de células B que no han sido reclutadas por
para ser expresados junto con una proteína de superficie para, luego, hacer la
selección de los bacteriófagos que presenten mayor afinidad por el antígeno a estudio
(YAC) que albergan fragmentos grandes de los genes de Ig de ambas cadenas pesadas
y livianas humanas, los cuales se introducen en una línea germinal de ratones para
nucleotídica.
más grande de la industria farmacéutica. En 2003 y 2004, este desarrollo alcanzó 48%
de incremento.
Dentro del uso clínico se han aprobado cerca de 29 anticuerpos monoclonales para uso
24
Tabla 2
Anticuerpos monoclonales aprobados para uso terapéutico
27
Los productos oncológicos seguirán dominando el mercado; sin embargo, se
optimizadas.
Estados Unidos en junio de 1986 para la prevención del rechazo en los trasplantes de
antimelanoma 225.28S combinados con tecnecio radiactivo (Tc 99) para formar un
caso de sospecha de melanoma ocular; en el 2000 fue retirado del mercado por la
cánceres de ovario. Al ser marcado con indio radioactivo (In 111), permite la detección por
del mercado.
comercializado.
CLÍNICO
choque séptico; sin embargo, los datos clínicos son conflictivos, y dificultan la
29
Oregovomab: es un anticuerpo monoclonal de ratón que reconoce el antígeno
pacientes con carcinoma avanzado de ovario. Junto con el tenecio 99, en algunos
tratamiento de la sepsis y el choque séptico. Sin embargo, los datos clínicos han sido
leucocitario humano HLADR; está indicado en pacientes con recaídas con linfomas no
estos pacientes. Algunos datos limitados sugieren los beneficios del bectumomab
1.9. PERSPECTIVAS
celular.
Nos encontramos dentro de una revolución y somos testigos de sus avances con el
31
Zepulkowski, del Departamento de Hematología de la Universidad de Cambrigde,
están dando los primeros pasos en el desarrollo de nanoanticuerpos (la partícula más
han dado lugar a un gran número de patentes que, actualmente, están autorizados y
las inmunoglobulinas (Ig) o anticuerpos (Ac) juegan un papel central. Estas moléculas
y organismos extraños, tales como toxinas bacterianas y virus. Ello lo logran gracias a
que, una vez que ligan el antígeno (Ag), los Ac interactúan con receptores presentes
33
ellas posee, además de un metabolismo y fisiologías características, rasgos
básica común que bien puede ser ejemplificada por la molécula IgG. Básicamente, la
respectivamente.
Se han identificado dos tipos de cadena liviana, kappa (κ) y lambda (λ), y cinco
clases de cadena pesada, mu (µ), gamma (γ), alfa (α), delta (δ) y epsilon (ε). Cada
covalentes (del tipo puente disulfuro) entre sí y con las cadenas livianas.
unos 100-110 aminoácidos que presenta de manera muy conservada dos residuos de
en las cadenas Ig, el dominio variable (V) y el dominio constante (C). Esta
constante (CL) mientras la cadena pesada posee tres o cuatro dominios constantes
35
El dominio Ig ha sido explotado más allá del ámbito de los Ac, de manera que
estructura dominios Ig, Entre estas proteínas se cuentan, además de los Ac, el receptor
todas las cadenas pesadas (complejo H), y dos complejos para las cadenas livianas,
uno para la cadena κ (complejo κ) y otro para la cadena λ (complejo λ). El complejo H
y CH .
En forma similar, los complejos κ y λ contienen elementos VL, JL, y CL, pero no
respectivamente.
Por otro lado, los dominios V son producidos a partir de la combinación de los
generar un exón VL que codifica el dominio V L de la cadena liviana. Algo similar ocurre
37
2.4. ANTICUERPOS MONOCLONALES DE PRIMERA GENERACION
formadas por distintas clases de Ig en las que está presente una variedad de
que en una prueba analítica el chance de obtener falsos positivos, es decir, “reconocer
monoclonales.
B con células mielomatosas (células tumorales inmortales). Ellos demostraron que los
cultivo y para producir anticuerpos, y que además es posible aislar del producto
interesado. Así nacieron los AcMo que, posteriormente, han sido denominados de
generación.
La técnica original descrita por Kohler y Milstein permite la obtención de AcMo
laboratorio (cepa Balb/c) con el antígeno para el cual se desea producir los
anticuerpos. Una vez que se tiene la certeza del status inmune de estos animales (por
heterogénea en cuanto a los anticuerpos que secreta. Con el objeto de seleccionar los
39
Esta clonación consiste en sembrar los hibridomas en microcultivos a una
densidad celular tan baja que se garantiza que las células integrantes de la población
obtenida en cada microcultivo sean todas idénticas, es decir conformen un clon. Los
Numerosas revisiones han sido publicadas en las que se examina la producción y uso
de estos reactivos.
dos atributos que han contribuido al éxito de los AcMo como reactivos analíticos. En
primer lugar, los AcMo son sustancias químicamente bien definidas, su naturaleza y
antes advertir que se trata de una muestra pequeña tomada de un universo mucho
claramente mediante criterios clínicos e histológicos bien establecidos, hay otros casos
como las leucemias linfoblásticas agudas y los linfomas del tipo no-Hodgkin en los que
41
T circulantes en la sangre que portan este marcador de superficie CD4. La prueba de
rutina empleada para la estimación del número de linfocitos T CD4+ utiliza AcMo
fluorescentes anti-CD4 humano para teñir y luego examinar por citometría de flujo o en
solubles cuya detección en fluidos biológicos (sangre, orina, etc.) es de interés médico-
los que una enzima (ELISA), un radioisótopo (RIA) o un colorante (“dipstick”) sirven
aparición de una respuesta inmune humana anti-AcMo, que obstaculiza la eficacia del
histocompatibilidad y los antígenos del sistema sanguíneo Rh, que no son distinguidos
posible producir AcMo que sean de utilidad práctica con especificidad por estos
antígenos. De esta manera, una de las razones más importantes que ha impulsado el
molecular y ADN recombinante. Dicho de otra manera, los AcR son generados a través
inmortalizar la célula productora del Ac como es el caso para los AcMo de primera
generación.
43
La concepción, el diseño y la ingeniería de moléculas artificiales basadas en Ig
genético, los genes estructurales que codifican las Ig se prestan para hacer el trabajo
regiones intrónicas. Resulta así, por ejemplo, relativamente fácil manipular las
los AcR lo constituyen, sin lugar a dudas, los avances que han ocurrido en el campo de
moléculas completas de Ac, similares a las que se consiguen en forma natural, en las
que están presentes los dos elementos estructurales que permiten la funcionalidad de
la molécula, esto es las porciones Fab y Fc. Los Ac quiméricos y humanizados son
ejemplos representativos de este grupo. El otro grupo está formado por un conjunto
tipo Fab, Fv de cadena sencilla -scFv-, “diabodies”, “triabodies”, etc.), o como proteínas
nuevas provistas por una toxina, una enzima, un receptor celular, una citoquina, etc.).
constantes de las cadenas pesada y liviana provienen de una Ig humana y las regiones
45
variables VH y VL son obtenidas de un AcMo múrido. El objetivo que se persigue con la
reemplazar estas regiones por las equivalentes de origen humano se busca que la
molécula resultante sea menos “extraña” para los seres humanos y así facilitar su uso
fragmento Fc, los AcQ debieran comportarse en forma óptima al ser administrados en
humanos.
utilizando como molde ARN total o ARN mensajero (ARNm) obtenido de un hibridoma
clonación de los genes V H y VL del ratón, del humano y otras especies. Estas familias
expresión de los genes V amplificados por PCR (Montaño y Morrison). Una serie de
vectores tipo “cassette” están disponibles donde los genes V pueden ser fácilmente
algunas moléculas quiméricas aún son capaces de inducir una respuesta inmune
47
producción de AcH fue desarrollada en el laboratorio de G. Winter en Inglaterra poco
procedimientos tales como “CDR grafting” (transplante de CDR), “Ab reshaping” y “Ab
resurfacing/veneering”.
las asas hipervariables que corresponden a las RDC, mientras que las regiones M solo
La ventaja que esto tiene es que los epitopos asociados a las regiones M múridas, los
múridas. Esta información se usa para diseñar y crear genes V sintéticos en los que las
biomédico estos reactivos abarcan la mayoría de las aplicaciones analíticas en las que
permanente.
Por otra parte, las expectativas creadas alrededor de los AcR son considerables.
Este es un campo que está en constante progreso e innovación. Se espera que estas
moléculas sean capaces de llenar el vacío dejado por los AcMo de primera generación
año 1998 más de 30% de las proteínas en proceso de ensayos clínicos fueron AcR.
49
incipiente, numerosas aplicaciones potenciales son evaluadas en la actualidad tanto en
Es de esta manera muy probable que más pronto que tarde seamos testigos de
profilácticas con una altísima versatilidad, basadas en moléculas de Ac, que puedan
humanas.
CAPÍTULO III
COPROANTÍGENOS
produzca anticuerpos contra sí mismo. Un antígeno puede ser una sustancia extraña
proveniente del ambiente, como químicos, bacterias, virus o polen. También se puede
formar dentro del cuerpo, como con las toxinas bacterianas o las células tisulares.
Un antígeno ("anti", del griego αντι- que significa 'opuesto' o 'con propiedades
contrarias' y "geno", de la raíz griega γεν, generar, producir; que genera o crea
51
causar una respuesta inmunitaria. La definición moderna abarca todas las sustancias
que pueden ser reconocidas por el sistema inmune adaptativo, bien sean propias o
ajenas.
Un antígeno suele ser una molécula ajena o tóxica para el organismo (por
ejemplo, una proteína derivada de una bacteria) que, una vez dentro del cuerpo, atrae
los mismos.
Para que un antígeno sea reconocido por un anticuerpo, estos interactúan por
la molécula del anticuerpo es el parátopo. (Una analogía habitual para describir estas
define como cualquier molécula o fragmento molecular que puede ser reconocido por
células B) del sistema inmune adaptativo. Las células presentan antígenos al sistema
activar diferentes tipos de leucocitos. Por ejemplo, para el reconocimiento por parte de
los receptores de células T (TCR), los antígenos (mayoritariamente proteínas) deben
Los antígenos por sí solos no son capaces de provocar una respuesta inmune
de las vacunas juegan un papel esencial para la activación del sistema inmune innato.
inmune innata, para más adelante continuar con la activación del sistema inmune
células B) una vez que estos han sido producidos. Los conceptos superpuestos de
(producción de anticuerpos) y/o una mediada por células (activación de linfocitos T).
final de la respuesta inmune (por ejemplo, los anticuerpos ya formados y/o receptores
53
Los antígenos son usualmente proteínas o polisacáridos. Esto incluye partes de
las heces del paciente y que son susceptibles de su detección por técnicas
productos eliminados (secreción, superficie o somáticos) por los parásitos que invaden
infección activa (Langley y Hillyer, 1989). El ensayo inmunoenzimático sobre fase sólida
en los últimos 10 años la técnica de mayor uso por su elevada sensibilidad, versatilidad
fasciolosis
Se han desarrollado métodos de coproantígenos para el diagnóstico tanto de
esquemática, en primer lugar, los anticuerpos preparados contra las moléculas del
heces sospechosas. Por último, los complejos inmunes se detectan con el mismo
al previamente utilizado.
reacción. En esta zona se encuentra una franja con anticuerpos monoclonales contra el
55
Las pruebas inmunocromatográficas son más rápidas y sencillas, no necesitan
que destacar algunas ventajas del ELISA-Ag, como que permite procesar
excelentes;
patógena).
concluyente. No obstante, aunque estas pruebas son más caras que los métodos
microscópicos tradicionales, los costes de trabajo del personal son menores, sobre
todo en las técnicas rápidas, por lo que el análisis de comparación de costes de las
CONCLUSIONES
del sistema inmune, producidas por las células B, con la capacidad de reconocer
57
Actualmente, la incorporación de las técnicas de biología molecular e ingeniería
totalmente humanos.
aprobados por la Food and Drug Administration (FDA) de los Estados Unidos para uso
en humanos
anticuerpos permite nuevos diseños que pueden ampliar sus posibles aplicaciones en
medicina
abordaje de dianas muy precisas que pueden determinar cambios celulares muy
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
59
5. EMEA. Comité de medicamentos de uso humano. Informe públicoeuropeo
de evaluación (EPAR) ZENAPAX Denominación Común Internacional (DCI):
Daclizumab. EMEA© 2005. EMEA/H/C/198. Disponible en:
http://www.emea.eu.int/humandocs/PDFs/EPAR/ Zenapax/017599es1.pdf
Enlaces:
http://www.cof.es/pam231/revision_anticuerpos.htm
obtención y usos.
http://edicion-micro.usal.es/web/educativo/m_especial/recursos.html Textos
de anticuerpos e inmunosueros.
http://edicion-micro.usal.es/web/educativo/m_especial/10texto3.htm
humanizados).
http://mathbio.nimr.mrc.ac.uk/jsaldan/intro.html Estructura y diseño de
anticuerpos.
61