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Ciencia
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Procesos & Impactos
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Los datos sobre los efectos de las nanopartículas basadas en Cu en las plantas terrestres es muy limitado. Por otra parte, aún no se han reportado
los efectos de las nanopartículas a base de Cu sobre la calidad nutritiva de los cultivos alimentarios. En esta investigación se encontró que todas
las nanopartículas a base de Cu reducido tamaño de la raíz de la alfalfa ad lechuga. También encontramos efectos específicos de la especie de
los PN base Cu sobre elementos de absorción de nutrientes y la translocación. Por un lado, todos los NPs basados en Cu reducen P y Fe en hojas
de lechuga; Por otra parte, todos los NPs basados en Cu reducen Fe pero aumentaron P, S, y Cu en hojas de alfalfa. Además, la actividad de CAT
enzima estrés no se vio afectada en lechuga y marcadamente reducida en rodaje alfalfa.
Publicado el 28 de noviembre de 2014. descargado por la Universidad Politécnica de Valencia en 12/04/2014 08:23:24.
Ciencia Ambiental: Procesos & Impactos Aceptado Manuscrito

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1 Efectos Tóxicos de nanopartículas o compuestos a base de cobre a la lechuga
2 ( Lactuca sativa) y Alfalfa ( Medicago sativa)
4 Hong Jie una, Cyren Rico b, d, Zhao Lijuan b, d, Adeyemi S. Adeleye discos compactos, Arturo A. Keller discos compactos, José R.
5 Peralta-Videa a, b, d, Jorge L. Gardea-Torresdey a, b, d *
6

una programa de doctorado de Ingeniería y Ciencias del Medio Ambiente, de la Universidad de Texas en El Paso, 500
7
8 W. Univ. Av., El Paso, Texas 79968
segundo Departamento de Química de la Universidad de Texas en El Paso; 500 W. Univ. Av., El Paso, TX
9
10 79968
do Bren School de Ciencia Ambiental y Gestión de la Universidad de California, Santa Bárbara,

11
12 CA 93106-5131, EE.UU.
re Centro de implicaciones ambientales de la nanotecnología (UC CEIN), EE.UU.

13
14 * Autor correspondiente (J. Gardea-Torresdey) jgardea@utep.edu; teléfono 915-747-5359 fax (915)
15 747-5748
dieciséis
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27
28 A la cesta
29 Cu NPs / compuestos aumento de rodaje alfalfa Cu, P, y S, reducida lechuga rodaje P, y la alfalfa y
30 lechuga disparar Fe.
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32 RESUMEN
33 El aumento de la producción y uso de nanopartículas (NPs) han generado preocupaciones acerca de su
34 impactos en los organismos vivos. En este estudio, norte Cu, mayor Cu, norte CuO, mayor CuO, Cu (OH) 2 ( cUPRO
35 2005, Kocide 3000) y CuCl 2 fueron expuestos durante 15 días a 10 días de edad adulta hidropónico
36 lechuga ( Lactuca sativa) y la alfalfa ( Medicago sativa). Cada compuesto se aplicó a los 0, 5, 10,

37 y 20 mg / L. En la cosecha, se midió el tamaño de las plantas y se determinó la concentración de
38 Cu, macro y microelementos mediante ICP-OES. Actividad de catalasa y peroxidasa de ascorbato fue
39 también determinado. Los resultados mostraron que todos los NPs de Cu / compuestos reducen la longitud de la raíz por 49% en
40 ambas especies de plantas. Todos los NPs de Cu / compuestos aumentó Cu, P, y S (> 100%,> 50%, y> 20%,
41 respectivamente) en alfalfa brotes y la disminución de P y Fe en rodaje lechuga (> 50% y> 50%,
42 respectivamente, con exclusión de Fe en CuCl 2 tratamiento). Ensayos bioquímicos demostraron una reducción de la catalasa
43 la actividad en la alfalfa aumento de la actividad ascorbato peroxidasa (raíces y brotes) y en las raíces de ambos
44 especies de plantas. Los resultados sugieren que Cu NPs / compuestos no sólo redujeron el tamaño de las plantas pero
45 alterada contenido de nutrientes y la actividad enzimática en ambas especies de plantas.
46 palabras clave: Las nanopartículas; Cobre; Alfalfa; Lechuga; La absorción de nutrientes
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4
48 INTRODUCCIÓN
49 Las nanopartículas (NP) son materiales con al menos dos dimensiones entre 1 y 100 nm. 1 los
50 pequeño tamaño y gran área de superficie proporcionan NPs diferente fuerza física, la reactividad química,
51 conductividad eléctrica, magnetismo y efectos ópticos, en comparación con materiales a granel. 2, 3 Estas
52 propiedades especiales permiten la utilización de PN en la electrónica, la ingeniería, la producción de energía, catálisis,


53 productos farmacéuticos, cosméticos, textiles, industria de alimentos y productos agrícolas, entre otros. 4-6
54 Las estadísticas recientes indican que 1.317 productos que contienen PN estaban en el mercado en 2010, 7 y
55 se ha estimado que hubo un lanzamiento mundial de 22.000-80.400, 1100-29200, y de 590 a 4800
56 toneladas métricas de nanomateriales artificiales en el suelo, el agua y la atmósfera, respectivamente. 8 los
57 aumento de la utilización NP ha planteado preocupaciones acerca de su liberación en el medio ambiente y
58 posibles impactos sobre los organismos vivos. 9, 10
59 (nanopartículas de cobre norte Cu) y de óxido de cobre nanopartículas ( norte CuO) son ampliamente utilizados en diferentes
60 campos. 11-14 Muy pocos estudios han informado de los efectos de estos dos PN base Cu a terrestre
61 plantas. 10, 15-21 Shah y Belozerova 15 encontró que la relación tallo / raíz en plantas de lechuga tratado por
62 15 días con 0,013% (w / w) norte Cu en el suelo era 2.7, mientras que en las plantas de control la proporción era de 1,4. Esta
63 sugiere norte Cu afecta el crecimiento de la lechuga. Otro informe indica que, en comparación con el control, 1000
64 mg norte Cu / L redujo en 77% la longitud de la raíz y por 90% de la biomasa de calabacín ( Cucurbita pepo)
cinco en el cultivo hidropónico. 10 Del mismo modo, Musante y negro dieciséis observó que norte no sólo Cu afectados
sesenta y crecido
66 longitud de la raíz y la biomasa de calabacín, sino que también reducen el volumen de transpiración en un 51% en las plantas
67 expuesto a 100 mg norte Cu / L y 61% en las plantas tratadas con 500 mg norte Cu / L. Lee et al. 17 reportado
68 que la longitud de las plántulas de frijol Mung ( Phaseolus radiatus) y trigo ( Triticum aestivum L.)
69 se redujeron en 60% y 75%, respectivamente, cuando se exponen a 1000 mg norte Cu / L. Ellos también
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70 una menor reducción observada en el crecimiento de brotes en comparación con la raíz, lo que podría estar asociado con una baja
71 translocación de PN desde la raíz hasta dispara. 18 norte CuO también ha demostrado que afectan a plantas en diferentes
72 formas. Los informes indican que norte CuO no afectó la germinación de semillas de calabacín 10 y maíz ( Zea
73 mays L.) 18; Sin embargo, otros informes mencionan la reducción de longitud de la raíz en el trigo 19 y la lenteja de agua
74 ( Landoltia punctata), 20 y daño del ADN en el rábano ( Raphanus sativus), raigrás perenne

75 ( Lolium perenne), y raigrás anual ( Lolium rigidum). 21
76 La actividad de las enzimas antioxidantes tales como la catalasa (CAT) y ascorbato peroxidasa (APX) puede
77 se verá afectada de plantas Cu expuestas. Estas enzimas, que se produce en exceso bajo abiótico o biótico
78 estrés, 22 proteger las plantas de especies reactivas de oxígeno daños (ROS). El exceso de ROS pueden dañar
79 proteínas, lípidos y ADN. 23 Hou et al. 24 informó que el Cu 2+, hasta 10 mg / L, el aumento de CAT
80 actividad en la lenteja de agua de una manera dependiente de la concentración; sin embargo, una reducción en la actividad CAT
81 se observó cuando Cu 2+ fue mayor que 10 mg / L. Se observó una tendencia similar en la actividad APX
82 en la lenteja de agua se trató con sulfato de cobre. 25 norte CuO también se encontraron para aumentar la actividad CAT en
83 Pepino ( Cucumis sativus) y el trigo. 26, 27 Además de los efectos de norte CuO sobre el crecimiento de las plántulas
84 y la actividad APX CAT y, no se encontraron informes sobre los efectos de Cu NPs / compuestos sobre
85 la absorción de nutrientes por las plantas de cultivo.
86 La literatura reciente ha demostrado que las formas nanoparticuladas de Cu son más eficaces contra
87 hongos patógenos que las formas a granel correspondiente. 28 Por lo tanto, muy probablemente, en un futuro próximo, hay
88 será un uso intensivo de las norte Cu y norte CuO en las prácticas agrícolas. Además, cupro 2005 y
89 Kocide 3000 (Cu (OH) 2- materiales basados) se han catalogado como especies de nanopartículas de Cu.
90 Estos compuestos se utilizan intensamente en la producción agrícola debido a su fungicida
91 propiedades. 29-31 Por lo tanto, la posibilidad de contaminación NPs a base de Cu de suministro de alimentos y la entrada
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92 en la cadena alimentaria está aumentando. Sin embargo, no se entiende bien aún si sus efectos son
93 diferentes de las de los materiales a granel de Cu. Por lo tanto, tres NPs Cu-base y otros compuestos de Cu
94 fueron evaluados en lechuga ( Lactuca sativa) y la alfalfa ( Medicago sativa). Las plantas se
95 seleccionados debido a que son producidos y expuestos a pesticidas intensamente. La alfalfa es una de las
96 la mayoría de los cultivos forrajeros importantes en todo el mundo 32 y la lechuga se cultiva en todo el mundo y se come en una prima

97 forma por muchas personas. En este estudio, las raíces y retoños elongaciones se midieron con una regla,
98 absorción de macro y micronutrientes mediante el uso de emisión de plasma inductivamente-óptico pareja
99 espectroscopia (ICP-OES), y la actividad enzimática con UV-Vis.
100 MATERIALES Y MÉTODOS
101 Caracterización de Cu NPs / Compuestos y la preparación de suspensiones / soluciones
102 Las partículas de Cu se utilizan en este estudio incluyen nanopartículas de CuO (denotado norte CuO), micras de tamaño
103 Cu y CuO (denotado mayor Cu y CuO, respectivamente, todo obtenido de Sigma Aldrich),
104 nanopartículas de Cu (US Investigación Nanomateriales, denotado norte Cu), Kocide 3000 (Dupont,
105 Wilmington, DE), y cupro 2005 (SePRO, Carmel, IN). grado reactivo CuCl 2 se obtuvo la sal
106 de Sigma Aldrich. El tamaño y la carga superficial de las partículas a pH 7 (tampón 0,5 mM fosfato)
107 se determinaron mediante la medición de diámetro hidrodinámico (HDD) y potencial zeta (ζ) utilizando una
108 Zetasizer Nano-ZS90 (Malvern, Reino Unido). Un estudio previo 33 mostró que tampón de fosfato, en el
109 la concentración usada, sólo tenía efectos mínimos sobre las mediciones de potencial zeta. partícula primaria
110 tamaño y la morfología se determinaron a través de microscopía electrónica de barrido (FEI XL40 Sirion)
111 equipado con una sonda de Oxford INCA energía dispersiva espectroscopia de rayos X (EDS). Cobre
112 contenido (wt.%) de cada partícula se determinó por medio de ICP-AES (iCAP 6300, Thermo Scientific). 34,
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7
35 La estructura de fase de cobre y cristal principal de las partículas se determinó mediante difracción de rayos X
113
114 (XRD, Bruker D8 Advance).
115 Cu NPs / suspensiones compuestos / soluciones se prepararon a 0, 5, 10, y 20 mg / L en modificado
116 solución nutritiva de Hoagland 36 y se homogeneizaron por sonicación en un baño de agua (cresta Ultrasonics,
117 Trenton, NJ) a 25 ° C durante 30 min. Hubo cuatro réplicas por tratamiento.

118
119 La germinación de semillas y crecimiento de las plantas
120 Semillas de alfalfa ( Medicago sativa variedad L.) Mesa y negro sin semillas de lechuga Simpson ( lactuca
121 sativa L.) se agitaron en solución Clona 4% durante 30 min, se aclaró con agua desionizada (DI) tres
122 veces y se mantuvieron en DI durante 24 h. Posteriormente, las semillas se rodaron en la germinación húmedo en autoclave
123 toallas de papel, como se describe por Carrrillo-Castaneda et al. 37 Diez gotas de antimicótico / antibiótico
124 solución (Sigma 5955) se añadieron a las semillas antes de que se enrolla el papel. Los rollos se pusieron
125 en frascos Mason que contenían aproximadamente 10 ml de DI, se incubaron en la oscuridad durante cuatro días y
126 expone a la luz durante un día. Después de eso, las plantas jóvenes se transfirieron a cajas Magenta
127 que contiene 300 ml de solución nutritiva de Hoagland modificada. Todas las cajas y las tapas estaban cubiertas
128 con papel de aluminio para evitar el crecimiento de algas. bombas de acuario se utilizaron para airear las cajas, que
129 se pusieron en una cámara de cultivo ambientales (TC2 microcontrolador, Chagrin Falls, OH) con
130 intensidad de luz de 300? mol m- 2 s- 1, 25/20 ºC días de temperatura / noche, y 65% de humedad relativa.
131 Después de 10 días de crecimiento en la solución de nutrientes, las plántulas se transfirieron a cajas Magenta
132 que contiene los NPs de Cu / compuestos suspendidos en una solución nutritiva y se cultivaron durante 15
133 dias. Posteriormente, las plantas se retiraron del medio de crecimiento, se lavaron con agua del grifo y
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134 se enjuagó con DI. La longitud de la raíz primaria y disparar para cada plántula se midió con un
135 gobernante y las muestras se guardan para análisis adicionales. Había 20 jóvenes plantas por repetición.
136
137 Preparación de muestras para ICP-OES
138 Al final del tiempo de exposición, las plantas se retiraron del medio de crecimiento, se lavó con grifo

139 agua y se enjuagó con DI, como se ha descrito previamente en la literatura. 18, 19, 21 Posteriormente, el
140 muestras se pusieron en sobres de papel, seca en estufa a 70 ℃ durante 72 h, se pesó, y se digirió con
141 HNO puro plasma 3 ( 65%) y H 2 O 2 ( 30%) (1: 4). Norma de referencia de materiales NIST 1547
142 (Gaithersburg, MD) y las muestras cargadas con 5, 10, y L de Cu NPs se procesaron / 20 mg y
143 leer como muestras para control de calidad (QC) y garantía de calidad (QA). La digestión se realizó en
144 un sistema de reacción de microondas CEM acelerado (Marte X, Mathews, Carolina del Norte). Las digestiones se
145 ajustado a 15 ml con agua DI y se analizó para Cu, micro y macroelementos concentraciones
146 usando espectroscopia de emisión óptica con plasma acoplado inductivamente (ICP-OES, PerkinElmer Optima
147 DV 4300, Shelton, CT)
148
149 Los ensayos enzimáticos
150 Determinación de la actividad específica de la catalasa
151 La actividad de la enzima (1.11.1.6 CE) CAT se midió según Gallego et al. 38 Planta
152 las muestras fueron molidas en 0,1 M KH 2 correos 4 tampón (pH 7,0) y se centrifugó a 4500 rpm durante 5 min
153 (Eppendorf AG banco de centrífuga 5417 R, Hamburgo, Alemania). El sobrenadante se separó, se
154 añadido con mM H 73 2 O 2, y se mide a 240 nm a través de UV / Vis (Perkin Elmer Lambda 14
155 Espectrómetro).
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156 Determinación de la actividad peroxidasa de ascorbato
157 Se determinó la actividad de la enzima APX (1.11.1.11 CE) siguiendo el método de Nakano y
158 Asada. 39 Las muestras de tejido se homogeneizaron en tampón de fosfato (pH 7,4) con una relación de 10% w / v.
159 El homogeneizado se centrifugó a 4 ºC durante 25 min a 14.000 rpm. Entonces, 100 l de la
160 sobrenadante se añadió con 886 l de KH 2 correos 4 tampón (0,1 M, pH 7,4), 4 l de ascorbato 25 mM,

161 y 10 l de 17 mM H 2 O 2. La absorbancia se registró a 290 nm usando espectrómetro UV / VIS.
162
163 Análisis de las Estadísticas
164 Los datos (medios de cuatro replicados / tratamientos) se analizaron mediante ANOVA de una vía,
165 seguido de Tukey-honestamente significativa Diferencia prueba de comparaciones múltiples (SPSS 19.0
166 paquete, Chicago, IL).
167
168 RESULTADOS Y DISCUSIÓN
169
170 Caracterización de los Cu NPs / Compuestos
171 Las principales propiedades fisicoquímicas de las partículas se presentan en la Tabla S1. norte CuO tiene partículas
172 entre el 10 - 100 nm, pero las partículas mucho más grandes se encontraron en norte Cu (hasta 10 m; Figura 1). UNA
173 fracción razonable de partículas de CuO a granel eran menos de 1 m (como se indica por SEM y
174 dispersión de luz dinámica de análisis) pero las partículas de Cu a granel eran mucho más grandes y diversas en
175 morfología. Bulk Cu contiene dendrítica, similar a una placa, y las partículas de forma irregular (Fig. 1).
176 Kocide 3000 y cupro 2005 consisten principalmente en partículas esféricas de tamaño micrométrico, y el principal
177 fase de cobre en ellos son ortorrómbica Cu (OH) 2. Mientras mayor Cu sólo contenía Cu como el principal
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10
178 fase, la presencia de Cu 2 O se observó en norte Cu, posiblemente debido a la mayor reactividad de la
179 nanopartículas que pueden conducir a la oxidación leve durante la síntesis y / o almacenamiento. Todos
180 partículas fueron cargadas negativamente a pH 7 como se confirma por medición del potencial zeta. los
181 se observó presencia de una pequeña cantidad de carbono en las nanopartículas, posiblemente de una
182 agente tensioactivo utilizado por el fabricante para estabilizar los NPs. Además de carbono, Kocide 3000 y

183 Cupro 2005 también contienen oxígeno, sodio, aluminio y silicio (Figura 2).
184
185 Efectos de Cu NPs / compuestos sobre root / elongación de los brotes
186 El tamaño de las raíces de la alfalfa y plantas de lechuga tratados durante 15 días con Cu NPs / compuestos es
187 se muestra en la Figura S1. Después de 15 días de tratamiento, las raíces de las plantas tratadas con Cu
188 NPs / compuestos, mostraron el color marrón en comparación con los controles. Como se ve en la Figura S1, en absoluto
189 concentraciones, todos los NPs / compuestos de Cu redujeron significativamente longitud de la raíz en ambas especies de plantas.
190 La raíz más corta en la lechuga (15,9 ± 2,4 cm) y alfalfa (16,2 ± 0,2 cm) se produjo en las plantas tratadas
191 con 20 mg / L norte CuO y norte Cu, respectivamente. La reducción de la longitud de la raíz era 49,5% ± 7,8% en
192 lechuga y 47,6% ± 1,0% en alfalfa. Se han publicado resultados similares para el frijol mungo, calabacín,
193 y el trigo. 10, 16, 17 Lee et al. 17 reportó que norte Cu a 200 mg / L afectó a las raíces de trigo, mientras
194 sólo a 800 mg / L reducida longitud de brotes de trigo. Otro informe indica que 10 mg norte CuO / L
195 reducida la longitud de la raíz y disparar en plántulas de rábano en un 46% y 4%, respectivamente. 21
196 Por otra parte, 1000 mg norte CuO / L, disminución de la raíz y brote longitud de rábano por 97% y 79%,
197 respectivamente. En nuestro estudio, aunque la concentración de Cu fue alta en alfalfa brotes, en comparación con
198 lechuga, no hubo una reducción longitud de brotes; sin embargo, mayor Cu, cupro 2005, Kocide 3000, y
199 CuCl 2 a 20 mg / L, redujo significativamente la lechuga longitud del brote (Apoyo a la Información S2).
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200 Esto sugiere una respuesta específica de la especie a la toxicidad de Cu. Un informe anterior indicó que en
201 Vigna unguiculata, Cu causó una reducción en el crecimiento de los brotes, ya que también causó una reducción en
202 Fe. 40 En nuestro estudio, casi todos los NPs de Cu / Fe compuestos reducidos en los tejidos de la lechuga y alfalfa
203 (La captación de hierro se muestra en la Figura 6 y se discutirá más adelante). Nuestra hipótesis es que
204 las diferencias en la acumulación de Cu (Figura 3) fueron responsables de los diferentes efectos de Cu

205 NPs / compuestos sobre el crecimiento de plantas en ambas especies de plantas. El cobre en los tejidos provoca directa
206 producción de ROS por medio de Fenton e induce la inhibición del crecimiento de la raíz. 41
207
208 La absorción de Cu por la alfalfa y lechuga
209 La Figura 3 muestra la concentración de Cu en las raíces y los brotes de alfalfa y lechuga hydroponically crecido
210 durante 15 días con Cu NPs / compuestos a 0, 5, 10, 20 mg / L. Como se muestra en esta figura, Cu aumentó
211 en las raíces como la concentración de tratamiento en el medio aumenta. Las concentraciones más altas de Cu
212 (20.000 mg / kg y 12.000 mg / kg para la lechuga y la raíz de la alfalfa, respectivamente) se produjeron en plantas
213 tratado con 20 mg / L de CuCl 2, que era muy probable debido a la biodisponibilidad de los iones Cu
214 (Tabla S2). La comparación de la absorción de Cu en las raíces de las dos especies de plantas de todas las formas de Cu,
215 excepto CuCl 2, se puede observar que no había especies de plantas y efectos de la concentración de tratamiento
216 (Tablas S2 y S4). En la raíz de la lechuga, la acumulación de Cu norte Cu a 5 mg / L y 20 mg / L era
217 más alto, en comparación con los otros compuestos (Tabla S2, pag ≤ 0,05). Sin embargo, no había una clara
218 diferencia en la acumulación de Cu en la raíz de alfalfa, en todas las concentraciones de tratamiento (Tabla S4). Wang
219 et al. 18 reportadas 1,8 veces más de Cu en las raíces del maíz tratado con norte CuO en comparación con CuO granel. los
220 acumulación de Cu en el rodaje de alfalfa siguió una tendencia similar que en la raíz (Figura 3D). Excepto por
221 Cupro 2005 y CuO mayor, todos los compuestos, en todas las concentraciones, aumento significativo de Cu
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222 acumulación en alfalfa brotes, en comparación con el control. En el caso de disparar la lechuga, solamente norte Cu en 10
223 y 20 mg / L aumentó significativamente la acumulación de Cu, respecto al control (Figura 3B). diferencias
224 en Cu translocación de diversos compuestos de Cu se ha informado anteriormente. Los brotes de
225 trigo expuesto a norte CuO acumuló más Cu (375 mg / kg) que las plantas tratadas con CuO mayor
226 (254 mg / kg). 27 Tal vez el tamaño más pequeño de NPs (Tabla S1) permitió mayor absorción y

227 translocación dentro de la planta. En nuestro experimento, la exposición a norte Cu a 20 mg / L produjo
228 significativamente mayor concentración de Cu, tanto en la sesión de lechuga (Tabla S3) y disparar alfalfa
229 (Tabla S5), en comparación con Cu mayor a 20 mg / L. Asimismo, en todos los tratamientos, la alfalfa transloca
230 aproximadamente 3 a 5% de Cu de la raíz a disparar, mientras que sólo el 0,5 a 0,6% se transloca en la lechuga. Esta
231 sugiere que la absorción y translocación de Cu se asocia con el compuesto de cobre y de la planta
232 especies. En este estudio, tamaño de partícula podría ser un factor importante que influye en la absorción de Cu (Tabla S1).
233
234 Efectos de Cu NPs / compuestos sobre la absorción de elementos nutrientes
235 En las condiciones de esta investigación, Cu NPs / compuestos no alteró la absorción de Ca, Mg, Mo,
236 Mn, Zn, y Na en la lechuga y alfalfa expuestos durante 15 días a los tratamientos de Cu. sin embargo, el
237 absorción de P (Figura 4), S (Figura 5), y Fe (Figura 6) se vio afectada significativamente.
238 absorción de fósforo. Todos los compuestos de Cu, a todas las concentraciones, la reducción de la absorción de P en las raíces de ambos
239 especies de plantas (Figura 4A y 4C). Por otra parte, P no se detectó en las raíces de las dos especies de plantas en
240 10 y 20 mg / l de concentraciones de tratamiento. Resultados similares fueron reportados por Ali et al. 42 quien encontro
241 que el contenido de P disminuyó en la raíz del maíz expuestos durante 15 días a 15,7, 78,5 y 157? M de Cu.
242 Esto podría ser debido a la formación de fosfato de Cu, que no puede ser absorbido por las raíces de plantas 43 o
243 dañar el plasmalema de células de la raíz, lo que resulta en la pérdida de iones. 42 El fósforo también se redujo en
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244 brotes de Cu trataron plantas de lechuga (Figura 4B) pero aumentó en alfalfa rodaje (Figura 4D). A las 5
245 y 10 mg / L de tratamientos, norte Cu aumentó la acumulación de P en rodaje alfalfa, en comparación con Cu mayor
246 (Tabla S5, pag ≤ 0,05). A las 10 y tratamientos de 20 mg / L, CuCl 2 resultado en mayor acumulación P en
247 alfalfa rodaje pero menor acumulación de P en rodaje lechuga (Tabla S3, pag ≤ 0,05). Cobre
248 concentración en rodaje alfalfa fue mucho mayor que en rodaje lechuga (Figura 3), lo que sugiere

249 diferentes mecanismos de transporte. La absorción por las raíces de P de la solución se controla mediante especializado
250 transportadores, mientras que el movimiento dentro de los tejidos de la planta se debe a otros transportadores. 44 PHT1
251 transportadores son específicos para la adquisición de P a partir de la solución del suelo; mientras que los transportistas son PHT2
252 P responsable de la translocación a las partes de la planta sobre el suelo. 45 En nuestro estudio, parece que todo el Cu
253 NPs / compuestos, en todas las concentraciones abajo-regulados PHT1 en ambas especies de plantas, como el P
254 concentración en las raíces fue significativamente menor en comparación con el control ( pag ≤ 0,05). Según la figura 4A,
255 mayor CuO ejercía efectos menores en lechuga, en comparación con los otros tratamientos; Sin embargo, en la alfalfa,
256 efectos más bajos fueron encontrados con tratamientos de Cu a granel (Figura 4C). Los datos sobre las figuras 4B y 4D
257 sugieren que la modulación de la expresión PHT2 se vio afectada por las especies de plantas y la forma Cu
258 más que por la concentración utilizada. Como se ve en estas figuras, todos los compuestos en absoluto
259 concentraciones aumentaron P en alfalfa brotes, lo que sugiere la regulación de PHT2 (Figura 4D). En
260 Por otro lado, la concentración de P en rodaje de control, norte Cu, y plantas de lechuga Cu tratados a granel eran
261 similares, lo que sugiere ninguna regulación de PHT2. Esto sugiere una especie de respuesta específica a un exceso
262 Cu.
263 la captación de azufre. Como se muestra en la Figura 5, todos los tratamientos de Cu aumento de la concentración S en la raíz de la lechuga
264 (Figura 5A), raíz de alfalfa (Figura 5B), y disparar alfalfa (5C), pero no afectó a la acumulación de S en
265 rodaje lechuga (resultados no mostrados). No hubo diferencias obvias en la acumulación entre S
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14
266 PN y tratamientos de materiales a granel en la raíz de la lechuga. Sin embargo, más alta acumulación S se encontró en
267 raíz de alfalfa tratada con la más alta concentración de CuCl 2. En sesión de la alfalfa, 2005 y cupro
268 CuCl 2 a las 10 y 20 mg / L exhibió la mayor acumulación S, a excepción de norte Cu a 10 mg / L. A las 5
269 y 10 mg / L de tratamientos, norte Cu S aumento de la acumulación de rodaje de alfalfa, en comparación con la otra
270 tratamientos (Tabla S5, pag ≤ 0,05). La exposición de las plantas a metales tóxicos puede afectar a la captación y

271 asimilación de S debido a la formación de fitoquelatinas y metalotioneínas ricos en azufre. 46, 47
272 De acuerdo con otro estudio, 48 plantas aumentan S captación para mitigar la toxicidad Cu; pero también podría Cu
273 inducir sobre la expresión de los transportadores de sulfato que afectan a la vía de transducción de señales,
274 resulta en una mayor acumulación S. Como se informó anteriormente, el cobre se activa la biosíntesis de
275 fitoquelatinas e interfiere con la acumulación de S. 49 En la col china, la alta concentración de Cu
276 hasta reguladas actividad de los transportadores de sulfato Sultr1; 2 y Sultr2; 2 en las raíces; sin embargo, sólo
277 los brotes mostraron un aumento en sulfato. 49 Es muy probable que estos y otros miembros del sulfato
278 transportador de la familia se activaron en la lechuga y alfalfa. Sin embargo, el hecho de que S no aumentó
279 en brotes de lechuga sugiere ninguna regulación de Sultr2; 2 en esta planta, 45 como este transportador “es
280 localizada específicamente en el floema de las raíces y en células de la vaina haz vascular de hojas “. 50
281 la absorción de hierro. Como se muestra en la Figura 6, a excepción de CuCl 2, todos los tratamientos redujeron significativamente Cu
282 concentración de Fe en los brotes y raíces de alfalfa y lechuga. CUPRO 2005 y 3000 a 20 Kocide
283 mg / L provocó la acumulación de Fe más bajo en el rodaje de la lechuga (512 ± 10 mg / kg) y alfalfa (203
284 ± 13 mg / kg), respectivamente. Es posible que Fe, que es más activo que el Cu, formado insoluble
285 hidróxidos que fueron retenidos en las raíces. 51 CuCl 2 no cambió la concentración de Fe en ambas plantas,
286 excepto a 20 mg / L en rodaje alfalfa. Estudios anteriores han demostrado que el sulfato de cobre puede causar Fe
287 La deficiencia del arroz ( Oryza sativa L.) y frijol ( Phaseolus vulgaris L.). 52 Patsikka et al. 53 además
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15
288 informó de que el tratamiento Cu reduce la concentración de clorofila en la hoja y el tilacoide
289 la red de membrana en los granos. Sin embargo, los efectos adversos fueron revertidas mediante la adición de exceso de Fe.
290 Ouzounidou et al. 54 informó que el aumento de la concentración de Fe en las hojas de espinaca redujo la
291 efectos tóxicos de Cu sobre la fotosíntesis. Además, Schmidt et al. 55 declaró que “Cu puede desplazar
292 Fe de quelantes de moléculas en el medio de crecimiento, la inhibición de la inducción de estrés Fe


293 respuesta “. Esto sugiere que el Cu y Fe podrían compartir la misma vía de absorción. 56
294
295 Las actividades enzimáticas
296 Después de entrar en células de la raíz, CuNPs / compuestos y los iones Cu liberados pueden causar la formación
297 de especies reactivas de oxígeno (ROS), el cambio de la actividad de enzimas de estrés. La Figura 6 muestra la
298 la actividad de CAT en los tejidos de alfalfa (no había efecto sobre CAT en los tejidos de lechuga) y APX en
299 lechuga y raíces de alfalfa (no hubo ningún efecto sobre la actividad APX disparar en ambas especies de plantas). Como se vio
300 en esta figura, todos los tratamientos de Cu, a todas las concentraciones, redujo significativamente la actividad CAT en
301 rodaje alfalfa, comparado con el control (Figura 7 A). La mayor reducción se encontró con norte CuO en
302 10 mg / L. Una tendencia similar se observó en la raíz de alfalfa, donde fueron los resultados más llamativos
303 producido por cupro 2005 y CuO granel a 5 mg / L (Figura 7B). A 10 mg / L de Cu a granel, norte CuO, y
304 Kocide 3000 no redujo la actividad de CAT en la raíz de la alfalfa, en comparación con el control; mientras que a 20 mg / L,
305 todos los tratamientos, excepto norte CuO, redujo significativamente la actividad de CAT, comparado con el control. Kim et
306 Alabama. 26 también informó de que norte CuO en / L actividad aumento CAT 500 y 1000 mg en C ucumis sativus. En
307 nuestro estudio, CaCl 2 impuesto una reducción dependiente de la concentración en la actividad de CAT raíz alfalfa,
308 que a 20 mg / L redujo en un 87% (Figura 7B). Hou et al. 24 informó que el Cu 2+ a 5 mg / L
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dieciséis
309 aumento de la CAT en la lenteja de agua, pero a 10 mg / L inhibió la actividad de CAT. Esto sugiere que los efectos de
310 Cu sobre la actividad de CAT están asociados a las especies de plantas y la forma de Cu.
311 La actividad APX en las raíces de lechuga (Figura 7C) y alfalfa (Figura 7D) mostraron contraste
312 resultados, en comparación con la actividad de CAT en la raíz de la alfalfa (Figura 7B). En todas las concentraciones, todos Cu
313 tratamientos aumentaron significativamente la actividad APX en la raíz de la lechuga, en comparación con el control, a excepción de

314 CuO mayor (Figura 7C). En la raíz de la lechuga (Figura 7C), CuCl 2 a 20 mg / L tuvo menor impacto en APX
315 actividad, en comparación con 10 mg / L, pero aún así la diferencia fue significativa ( pag ≤ 0,05), en comparación con
316 controlar. En la raíz de la alfalfa (Figura 7D), la actividad APX aumentó significativamente en todos los tratamientos de Cu,
317 excepto tanto con Cu (OH) 2 compuestos. Notoriamente, en la raíz de alfalfa, cuatro compuestos a 20 mg / L
318 presentó una disminución de la actividad APX; sin embargo, la actividad fue todavía significativamente más alto,
319 en comparación con el control. Resultados similares fueron reportados en Brassica juncea expuesto a Cu; 57 pero en
320 lenteja de agua, se encontró que la actividad APX fue inhibida por Cu a 0,25? M. 25 Estos resultados
321 sugieren que, en cierta medida, en la lechuga y alfalfa raíces, CAT y APX están regulados hacia abajo y
322 hasta regulado, respectivamente, por el mismo estímulo externo, en este caso el tratamiento Cu.
323 Además, en ambas especies de plantas, la actividad APX más alta se registró con Cu NPs, que
324 indica esta forma de Cu induce la producción de más ROS en plantas de lechuga.
325
326 En resumen, este estudio ha demostrado que todos los tratamientos de Cu, incluso a baja concentración (5 mg / L),
327 reducida longitud de la raíz en el cultivo hidropónico de lechuga y alfalfa. A alta concentración (20
328 mg / L), ambas especies de plantas absorbe más Cu cuando fueron tratados con norte Cu de Cu a granel. Cu
329 NPs / compuestos reducida P y la acumulación de Fe en los tejidos vegetales, mientras que la concentración de S aumentó
330 en la sesión de alfalfa y en las raíces de las dos especies de plantas. La actividad de CAT enzima estrés no era
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17
331 afectados en la lechuga ya una drástica reducción en la sesión de la alfalfa. La actividad APX en la lechuga y alfalfa
332 raíces aumentaron en todos los tratamientos de Cu, a excepción de mayor Cu en la lechuga y Cu (OH) 2 en la raíz de la alfalfa.
333
334 EXPRESIONES DE GRATITUD
335 Este material está basado en trabajo apoyado por la Fundación Nacional para la Ciencia y la

336 Agencia de Protección Ambiental bajo Acuerdo de Cooperación número de DBI-0830117. Alguna
337 opiniones, resultados y conclusiones o recomendaciones expresadas en este material son las
338 el autor (s) y no reflejan necesariamente los puntos de vista de la National Science Foundation o la
339 Agencia de Protección Ambiental. Este trabajo no ha sido sometido a revisión y no EPA
340 aprobación oficial debe inferirse. Los autores también reconocen el número de concesión del USDA
341 2011-38422-30835 y la NSF subvención # CHE-0840525. Este trabajo también fue apoyado por Grant
342 2G12MD007592 de los Institutos Nacionales de Salud de las Minorías y Disparidades de Salud
343 (NIMHD), un componente de los Institutos Nacionales de Salud (NIH). JL Gardea-Torresdey
344 reconoce la familia Dudley para la Investigación cátedra dotada y la Academia de
345 / Oficina de Ciencias Aplicadas del Ejército de EE.UU. Investigación, Investigación y programa de Ingeniería de Aprendizaje
346 (REAP) en UTEP, subvención # W11NF-10-2-0076, sub-subvención 13-7.
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442
443
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21
444 Figuras legendarias
445 Figura 1. micrografías SEM de partículas utilizadas en este estudio.
446 Figura 2. espectroscopia de energía dispersiva de rayos X (EDS) de las partículas utilizadas en este estudio.
447 Figura 3. La concentración de cobre en la raíz de la lechuga ( UNA), disparar lechuga ( SEGUNDO), raíz de la alfalfa ( DO), y alfalfa
448 disparar ( RE) expuesto durante 15 días en el cultivo hidropónico a 0, 5, 10, 20 mg / L de Cu NPs o compuestos.

449 Los datos son medias de cuatro repeticiones ± SE. Las diferentes letras indican diferencias estadísticas en pag ≤
450 0.05. * Muestra una diferencia significativa en comparación con los otros tratamientos.
451 Figura 4. La concentración de fósforo en la raíz de la lechuga ( UNA), disparar lechuga ( SEGUNDO), raíz de la alfalfa ( DO), y
452 disparar la alfalfa ( RE) expuesto durante 15 días en el cultivo hidropónico a 0, 5, 10, 20 mg / L de Cu NPs / compuestos.
453 Los datos son medias de cuatro repeticiones ± EE. Las diferentes letras indican diferencias estadísticas en pag ≤
455 Figura 5. concentración de azufre en la raíz de la lechuga ( UNA), raíz de la alfalfa ( SEGUNDO), y alfalfa brotes ( DO) expuesto
456 durante 15 días en el cultivo hidropónico a 5, 10, 20 mg / L de Cu NPs / compuestos. Los datos son promedios de cuatro
457 replica ± SE. Las diferentes letras indican diferencias estadísticas en pag ≤ 0,05. * Muestra significativa
458 diferencia en comparación con los otros tratamientos.
459 La Figura 6. La concentración de hierro en la raíz de la lechuga ( UNA), disparar lechuga ( SEGUNDO), raíz de la alfalfa ( DO), y alfalfa
460 disparar ( RE) expuesto durante 15 días en el cultivo hidropónico con 0, 5, 10, 20 mg / L de Cu NPs / compuestos.
461 Los datos son medias de cuatro repeticiones ± EE. Las diferentes letras indican diferencias estadísticas en pag ≤
463 La Figura 7. actividad de la enzima antioxidante en alfalfa y lechuga tratada durante 15 días en el cultivo hidropónico
464 con 0, 5, 10, 20 mg / L de Cu de NPs / compuestos. La actividad CAT en la sesión de la alfalfa (A) y la raíz de la alfalfa
465 (SEGUNDO); la actividad APX en la raíz de la lechuga (C) y la raíz de la alfalfa (D). Los valores son medias de cuatro repeticiones ±
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22
466 SE. La actividad CAT en los tejidos de lechuga y la actividad APX en los brotes de ambas especies vegetales no fueron
467 afectado.
468
469
470

471
472
473
474
475
476
477
478
479
480
481
482
483
484
485
486
487
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23
488
489 nano CuO micro CuO
490
491
492

493
494
495
496
nano Cu micro Cu
497
498
499
500
501
502
503
504 Kocide 3000 cUPRO 2005
505
506
507
508
509
510
511 Figura 1. micrografías SEM de las partículas utilizadas en este estudio

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512
513
514
Cu CuO Cu
515
516

517
518
519
520
521
522
Nano nano Micro Micro
523
524
525
526
527
528 cUPRO
Kocide
2005
529
530
531
532
533
534 Figura 2. espectroscopia de energía dispersiva de rayos X (EDS) de las partículas utilizadas en este estudio.
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Ciencia Ambiental: Procesos & Impactos
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Esto es un Manuscrito aceptado, que ha sido a través del proceso de revisión

Los manuscritos aceptados se publican en línea poco después de la aceptación, antes de la

Puede encontrar más información acerca de Los manuscritos aceptados en el

o por las consecuencias derivadas de la utilización de cualquier información que contiene.

Ciencia Ambiental: Procesos & Impactos Aceptado Manuscrito

1 Efectos Tóxicos de nanopartículas o compuestos a base de cobre a la lechuga

2 ( Lactuca sativa) y Alfalfa ( Medicago sativa)

5 Peralta-Videa a, b, d, Jorge L. Gardea-Torresdey a, b, d *

Ciencia Ambiental: Procesos & Impactos Aceptado Manuscrito

do Bren School de Ciencia Ambiental y Gestión de la Universidad de California, Santa Bárbara,

re Centro de implicaciones ambientales de la nanotecnología (UC CEIN), EE.UU.

14 * Autor correspondiente (J. Gardea-Torresdey) jgardea@utep.edu; teléfono 915-747-5359 fax (915)

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33 El aumento de la producción y uso de nanopartículas (NPs) han generado preocupaciones acerca de su

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45 alterada contenido de nutrientes y la actividad enzimática en ambas especies de plantas.

46 palabras clave: Las nanopartículas; Cobre; Alfalfa; Lechuga; La absorción de nutrientes

52 propiedades especiales permiten la utilización de PN en la electrónica, la ingeniería, la producción de energía, catálisis,

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55 se ha estimado que hubo un lanzamiento mundial de 22.000-80.400, 1100-29200, y de 590 a 4800

56 toneladas métricas de nanomateriales artificiales en el suelo, el agua y la atmósfera, respectivamente. 8 los

57 aumento de la utilización NP ha planteado preocupaciones acerca de su liberación en el medio ambiente y

58 posibles impactos sobre los organismos vivos. 9, 10

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85 la absorción de nutrientes por las plantas de cultivo.

90 Estos compuestos se utilizan intensamente en la producción agrícola debido a su fungicida

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98 absorción de macro y micronutrientes mediante el uso de emisión de plasma inductivamente-óptico pareja

99 espectroscopia (ICP-OES), y la actividad enzimática con UV-Vis.

100 MATERIALES Y MÉTODOS

101 Caracterización de Cu NPs / Compuestos y la preparación de suspensiones / soluciones

114 (XRD, Bruker D8 Advance).

115 Cu NPs / suspensiones compuestos / soluciones se prepararon a 0, 5, 10, y 20 mg / L en modificado

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119 La germinación de semillas y crecimiento de las plantas

137 Preparación de muestras para ICP-OES

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147 DV 4300, Shelton, CT)

149 Los ensayos enzimáticos

150 Determinación de la actividad específica de la catalasa

153 (Eppendorf AG banco de centrífuga 5417 R, Hamburgo, Alemania). El sobrenadante se separó, se

156 Determinación de la actividad peroxidasa de ascorbato

159 El homogeneizado se centrifugó a 4 ºC durante 25 min a 14.000 rpm. Entonces, 100 l de la

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163 Análisis de las Estadísticas

166 paquete, Chicago, IL).

168 RESULTADOS Y DISCUSIÓN

170 Caracterización de los Cu NPs / Compuestos

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185 Efectos de Cu NPs / compuestos sobre root / elongación de los brotes

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208 La absorción de Cu por la alfalfa y lechuga

216 (Tablas S2 y S4). En la raíz de la lechuga, la acumulación de Cu norte Cu a 5 mg / L y 20 mg / L era

224 en Cu translocación de diversos compuestos de Cu se ha informado anteriormente. Los brotes de

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234 Efectos de Cu NPs / compuestos sobre la absorción de elementos nutrientes

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268 CuCl 2 a las 10 y 20 mg / L exhibió la mayor acumulación S, a excepción de norte Cu a 10 mg / L. A las 5

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275 fitoquelatinas e interfiere con la acumulación de S. 49 En la col china, la alta concentración de Cu

288 informó de que el tratamiento Cu reduce la concentración de clorofila en la hoja y el tilacoide

292 Fe de quelantes de moléculas en el medio de crecimiento, la inhibición de la inducción de estrés Fe