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ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA
RESPONSABLE (S):
TALAVERA QUISPE, Silvia Alessandra
COLQUI LAZO, Christel
PEREZ HINOJOSA, Linda
LAGOS ARIAS, Ibrahim
CALDERON CONDORI, Leonel
CONDORI ESPINAL, Jorge Miguel
DOCENTE:
Biologa. Mercy Rojas Moreno
HUANCAYO – PERÚ
2016
INTRODUCCIÓN
Los compuestos orgánicos hacen referencia a todos aquellos compuestos o especies químicas
que en su composición contienen carbono y que se asocian de una u otra forma a la vida, aunque
esta es un definición por excelencia no todos los compuestos que contienen carbón se consideran
orgánicos es el caso de anhídrido carbónico, los carbonatos y los cianuros. Las macromoléculas
más representativas son: Carbohidratos, Lípidos3 y Proteínas.
En el presente informe se muestra la gran diversidad de las bacterias las cuales constan de
enzimas, y estas poseen propiedades fisiológicas y bioquímicas, las mismas que evidencian en la
expresión de los genes del ADN de la bacteria, para detectar dichas propiedades existen pruebas
bioquímicas, estas nos sirven para detectar si la bacteria puede degradar ciertos medios los
cuales contienen proteínas, lípidos o carbohidratos.
Realizar estas pruebas es muy importante en la microbiología, ya que nos permite establecer
diversos criterios para poder clasificarlos adecuadamente para su clasificación taxonómica y de
esta forma identificar el tipo de bacteria. Y esto se detallara a lo largo del presente informe.
EQUIPOS/MATERIALES y REACTIVOS A UTILIZAR EN LA PRÁCTICA:
CANTIDAD
DESCRIPCIÓN
DESCRIPCIÓN
04
Tubos inclinados de AN sembrados con E. coli de 24 h (1
tubo/mesa)
04 Tubos inclinados de AN sembrados con B. subtilis de 24 h (1
tubo/mesa)
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
a. HIDROLISIS DE CARBOHIDRATOS
C. AGAR ALMIDON
Agar común 1000ml
Almidón 2g
Incubación: En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 °C. Después de la incubación se debe
agregar lugol a toda la placa para hacer la lectura.
b. HIROLISIS DE PROTEINAS
A. AGAR UREA
Peptona 1g.
NaCl 5g.
Glucosa 1g.
Rojo fenol 6ml (1/500)
Agar agar 15g
Urea 20g.
Fosfato monobásico de potasio 2g.
Agua destilada 1000ml
Prodedimiento. Disolver 15g de agar en 900ml. de agua destilada y esterilizar a 121ºC a 15lb
por 15 minutos. Luego enfriar a 50º-55ºC. En los 100ml restantes se agregan 20g de urea y
esterilizar por filtración. Finalmente se le agrega el agar.
Siembra: A partir del cultivo puro de 18-24 horas, estriar la superficie del pico de flauta. Se
recomienda no punzar la capa profunda para controlar el color.
Preparar 2 tubos, y sembrar en cada tubo los siguientes microorganismos:
3. E. coli
4. B. subtilis
B. AGAR CASEINA
Agar común…………………………………………1000 ml
Caseína ……………………………………………... 2,5 g
ClCa 2…………………………………………………0,05 g
Leche en polvo ……………………………………….10 g
c. HIDROLISIS DE LIPIDOS
A. AGAR LECITINA
Emulsión de yema de huevo: Sumergir el huevo en una solución alcohólica al 70% durante 30
minutos. Luego se hace un orificio en la cascara, con ayuda de una pinza estéril,
posteriormente se elimina la clara de huevo. Colocar la yema en una probeta estéril y se agrega a
la misma un volumen igual de NaCl 0.85%. Con una bagueta estéril se disuelve toda la
suspensión (en condiciones de asepsia) y mezclar con en el agar lecitina previamente preparado.
Siembra: A partir del cultivo puro de 18-24 horas, sembrar por puntura el microorganismo en la
mitad de la placa cada microorganismo.
Sembrar en cada placa los siguientes microorganismos:
5. Bacillus subtilis
6. E. coli
Incubación: En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 °C. o hasta observar desarrollo. 3.
Observar la presencia o ausencia de halos de precipitado insoluble o traslúcido alrededor del área
de crecimiento de los microorganismos testeados.
Bacillus subtilis, no posee la enzima lecitinasa, la cual es una fosfolipasa que hidroliza la lecitina de
la yema de huevo, cuyos productos precipitan dando un halo blanco alrededor de las colonias.
B. AGAR TRIBUTIRINA
Peptona 0,5g
Extracto de levadura 0,3g
Tributirina 1,0ml
Agar agar 1,5g
Agua destilada 100ml
*Ajustar a pH 7,2 0,1
Se prepara el medio, se esteriliza en la autoclave y se sirve en placas.
Siembra: Se procede a rociar caspa de la cabeza de algún compañero en cada placa conteniendo
el medio Agar Tributirina.
Incubación: En aerobiosis, durante 48- 72 horas a 35-37 °C.
Este medio se utiliza para la identificación de microorganismos lipolíticos. La degradación de la
tributirina produce halos de aclaramiento alrededor de las colonias, en contraste con el resto del
medio que permanece turbio. La incubación es de hasta 72 horas en condiciones óptimas.
RESULTADOS
HIDROLISIS DE CARBOHIDRATOS
Luego de agregar el Rojo de Metilo a la muestra de Bacillus Subtillis con glucosa en el caldo base
de fermentación se observó que este se tornó de un color rojizo. Por lo que se obtuvo un resultado
negativo alcalino.
B. AGAR TSI
Luego de agregar el Rojo de Fenol al agar TSI conteniendo el E. Coli, se observó cambio de color
a rojizo. Por lo que se obtuvo un resultado positivo acido tanto en la lactosa, sacarosa y glucosa.
Luego de agregar el Rojo de Fenol al agar TSI conteniendo el Bacilus Subtitllis, se observó
cambio de color en la parte inferior y permaneció de color amarillo. Por lo que se obtuvo un
resultado negativo alcalino tanto en la lactosa, sacarosa y glucosa.
C. AGAR ALMIDON
Luego de agregar Lugol al agar Almidon con la siembra de B. Subtillis, se observó que en los
contornos de la siembra se tornó de un color oscuro, por lo que se obtuvo una prueba positiva.
Luego de agregar Lugol al agar Almidon con la siembra de E. Coli, se observó que la siembra no
cambio de color y permaneció igual, por lo que se obtuvo una prueba negativa.
HIDROLISIS DE PROTEINAS
A. AGAR UREA
Luego de sembrar E.coli en la muestra de agar Urea, se agregó rojo de metilo y se observó que
cambio a un color rojo, por lo que se obtuvo un resultado negativo acido.
Luego de sembrar B. Subtilis en la muestra de agar Urea, se agregó rojo de metilo y se observó
que no hubo cambio alguno en el color y en su apariencia, por lo que se obtuvo un resultado
positivo acido.
HIDROLISIS DE LIPIDOS
A. AGAR LECITINA
B. AGAR TRIBUTIRINA
Luego de agregar muestras de caspa al agar tributirina, se observó que alrededor de las colonias
de caspa se tornó de color claro y se pudo diferenciar claramente del resto del medio. Por lo que
si se dio la degradación de la tributirina.
DISCUSIÓN
En algunos casos fue un poco difícil el reconocimiento de los cambios visuales tanto en las
placas como en los tubos.
Es posible que en los procedimientos, sobre todo en el caso de la hidrolisis de
carbohidratos, no se siguió los pasos adecuadamente. Lo que al final dificulto la obtención
de los resultados finales
Sería recomendable hacer las pruebas usando el rojo de fenol para también observar en la
práctica los resultados a obtener.
En el caso de la siembra en las placas depende de la efectividad de la técnica para la
siembra para observar mejor los resultados.
CONCLUSIÓN
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
I. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
LANSING M. PRESCOTT. 2004 Microbiología. Quinta Edicion. Mc Graw Hill. (Biblioteca UC:
616.01 / P85 2004)