Microarreglos

GENOMA HUMANO 3000 millones de bases

Fragmentación cada 500 nucleótidos sería necesaria

la secuenciación de 6 millones de fragmentos

Solución: nueva herramienta los microarreglos.

Figura 2
 Diseñaron los microarreglos que hace posible
1999 analizar todos los genes de un organismo
determinado en un solo experimento.
Figura 3
Brown P.O. / Botstein D.

UTILIDADES: ➔ ANÁLISIS Y MONITOREO DE LA EXPRESIÓN DE GENES

➔ MAPEO DE POLIMORFISMOS
➔ CONOCER MECANISMO MOLECULAR POR EL CUAL ACTÚA UN FÁRMACO
 microarreglos
FUNDAMENTO: hibridación de ácidos nucleicos y su
detección por fluorescencia mediante análisis de imagen

➔ 10 mil genes por cm2 en una pequeña superficie

➔ INTERPRETACIÓN INSTANTÁNEA DE LA EXPRESIÓN DE MÚLTIPLES GENES
Figura 4
TIPOS DE MICROARREGLOS
➔ MICROARREGLOS DE PROTEÍNAS
➔ MICROARREGLOS EN TEJIDOS
➔ MICROARREGLOS DE OLIGONUCLEÓTIDOS
➔ MICROARREGLOS DE ADNc
Figura 5
 METODOLOGÍA
1- IMPRESIÓN DE LOS MICROARREGLOS

UNION SONDAS A LAMINAS

Figura 6

LAMINAS -> (AMINAS O ALDEHÍDOS)

80ºC -> 4 horas
2- OBTENCIÓN ARN
MUESTRA CONTROL

EXTRACCIÓN ARNm

FUENTE DE LA MUESTRA MUESTRA PROBLEMA

 3- SÍNTESIS ADNc Y MARCAJE
Cy2 Cy5
TRANSCRIPTASA DESOXINUCLEÓTIDOS TRANSCRIPTASA DESOXINUCLEÓTIDOS
INVERSA INVERSA

RETROTRANSCRIPCIÓN

MUESTRA CONTROL MUESTRA PROBLEMA

CIANINA:
FAMILIA SINTÉTICA DE
COLORANTES
Figura 7
 5- LECTURA DEL MICROARREGLO
MUESTRA PROBLEMA

Figura 9

MUESTRA CONTROL
Figura 10
 ¿QUÉ TAN COMPLEJO PUEDE
LLEGAR A SER UN BIOCHIP?

Figura 11
 VENTAJAS
- permite conocer la expresión de gran número de genes al mismo tiempo.

- Análisis del genotipo de resistencia y la presencia de factores de patogenicidad.

- MEDICINA PERSONALIZADA / TRATAMIENTOS ESPECIALIZADOS.

- MAYOR ENTENDIMIENTO DE ENFERMEDADES COMPLEJAS.

- permite detectar a la vez un amplio número de microorganismos.

 DESVENTAJAS
la interpretación de la gran cantidad de datos generados es
complicada incluso para los estadísticos.

no permite estudiar a profundidad cada gen.

En ningún caso los resultados obtenidos son definitivos y

deben ser corroborados por otros métodos
PRECAUCIONES UNICELULAR

Figura 12

➢ ORIGEN DE LA MUESTRA PLURICELULAR

➢ COMPARACIÓN ENTRE MUESTRAS

Figura 13

A
≠COLOR
B
(MICROARREGLO)
A B C A B B C A C

CONTROL PROBLEMA CONTROL PROBLEMA PROBLEMA CIRCUITO

➢ CONFIABILIDAD DE LOS RESULTADOS

20 a 30% EXPERIMENTO SWAP A B A B

FALSOS POSITIVOS REDUCCIÓN DEL 10% PRUEBA 1 PRUEBA 2

Artritis idiopática juvenil de inicio sistémico (AIJiS)

Figura 14
al menos dos
semanas de
duración
(39-40 °C)

10% - 20% de los casos de artritis ACTIVIDAD

que se inician en la infancia SISTÉMICA
 INTERLEUCINA, IL-1
- CITOCINA [PROTEÍNA]
-RESPUESTA A ESTRÉS O LESIÓN
-MEDIADOR DE RESPUESTA
Figura 15
INFLAMATORIA (FIEBRE)
ANAKINRA
- ANTAGONISTA RECEPTOR IL-1
-BLOQUEA ACTIV.BIOLÓGICA DE IL-1
-BLOQUEA INFLAMACIÓN
Figura 16

MICROARREGLO
pbmc

REPLICACIÓN
Figura 17
DONANTES SUERO PACIENTES
SANOS CON ARTRITIS Figura 18

transcripción de numerosos genes relacionados con la inmunidad innata (SOBRE

EXPRESADOS), incluidos varios miembros de la familia de la IL-1.
el empleo de microarreglos permitió
identificar la IL-1 como uno de los
principales mediadores de la cascada
inflamatoria en esta enfermedad,
proporcionando además una base
racional para el uso de antagonistas Figura 19

de la IL-1 en su tratamiento.
RESUMEN:

Figura 20
 BIBLIOGRAFIA
Figura 1: http://wine.landfood.ubc.ca/core-facilities/dna-microarray/
Figura 2: https://genetix.com.co/biologia-molecular/
Figura 3: (https://vaticanconference2018.com/patrick-brown-md-phd/)(https://en.wikipedia.org/wiki/David_Botstein#/media/File:Plos_botstein.jpg)
Figura 4: https://learn.genetics.utah.edu/content/labs/microarray/
Figura 5: https://media.istockphoto.com/vectors/female-chemist-using-computer-in-laboratory-vector-illustration-vector-id982124612?s=2048x2048
Figura 6: https://www.researchgate.net/publication/265537229_MICROARREGLOS_DE_DNA
Figura 7: https://www.jacksonimmuno.com/technical/products/conjugate-selection/cyanine
Figura 8: https://app.emaze.com/@ALCORRWI/microarreglos#12
Figura 9: https://accessmedicina.mhmedical.com/book.aspx?bookID=1803#124154593
Figura 10: https://www.researchgate.net/publication/265537229_MICROARREGLOS_DE_DNA
Figura 11: https://es.wikipedia.org/wiki/Chip_de_ADN#/media/File:Microarray2.gif
Figura 12: https://www.deviantart.com/tocachi-green-pencil/art/Protozoo-Ciliado-Ciliated-Protozoan-722206957
Figura 13: https://www.nemokennislink.nl/publicaties/elektronentransport-tijdens-fotosynthese-verloopt-chaotisch/
Figura 14: http://especiales.semana.com/artritis-juvenil/
Figura 15: https://es.wikipedia.org/wiki/Interleucina-1#/media/File:IL1b_Crystal_Structure.png
Figura 16: https://es.wikipedia.org/wiki/Anakinra#/media/File:Anakinra.png
Figura 17: http://www.centralx.es/p/imagen/celulas/celulas-sanguineas/leucocitos/leucocitos-mononucleares/monocitos/
Figura 18: https://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:De-Gene.png
Figura 19: https://recast.ai/blog/the-arms-race-of-ai/learning/
Figura 20: https://accessmedicina.mhmedical.com/book.aspx?bookID=1803#124154593