Universidad de Concepción

Facultad de Farmacia
Departamento de Análisis Instrumental

Informe de Laboratorio N°6:

Determinaciones
Absorciométricas en el
ultravioleta

Integrantes: Maribel Muñoz

Sofia Vasquez.

Profesor: Luis Bustamante

Carrera: Tecnología Médica

Fecha: 28 Diciembre 2018

 Resumen:

En este práctico de laboratorio se realizaron determinaciones absorciometricas en el ultravioleta. En

primer lugar se identificó un compuesto desconocido mediante el análisis cuantitativo del
espectrograma. El compuesto identificado correspondió a Biftalato de Potasio, el cual arrojó un
máximo de absorbancia de 0,844 a una longitud de onda de 280,5 nm y el correspondiente
coeficiente de absortividad 7,0 cm2/mg. Posteriormente se realizaron aplicaciones cuantitativas,
luego de realizar la curva de calibración, se realizó la medición de la muestra problema que tuvo una
absorbancia promedio de 0,414. Con los datos obtenidos se logró determinar la concentración de la
muestra problema mediante tres métodos, los resultados fueron los siguientes:
𝑔
- Método absoluto: 2,84 𝑥 10−1
𝐿
𝑔
- Método del factor: 2,82 𝑥 10−1
𝐿
𝑔
- Método de la curva de calibración: 2,82 𝑥 10−1
𝐿

Después también se determinó la concentración, pero esta vez mediante adición estándar y la
𝑔
concentración obtenida según el método de la curva de calibración fue 3,0𝑥10−1 .En cuanto a los
𝐿
parametros de calidad se obtuvo:

Límite de detección: 4,662x 10 -4 g/L

Límite de cuantificación: 1,554 x 10 -3 g/L
Rango lineal: 2, 4 x10-2 g/L – 1, 69x10-1 g/L
Sensibilidad: s= 7,0857.
Precisión: sd MP: ± 0,002
Introducción:

La absorciometría se basa en la medición de la absorción sufrida cuando una radiación

electromagnética atraviesa una sustancia determinada. Estas mediciones se pueden realizar tanto
en el visible como en el ultravioleta. La base de la espectroscopia visible y ultravioleta consiste en
medir la intensidad del color o de la radiación absorbida en UV a una longitud de onda específica
comparándola con otras soluciones de concentración conocida (soluciones estándar) que contengan
la misma especie absorbente. Para tener esta relación se emplea la Ley de Beer, que establece que
para una misma especie absorbente en una celda de espesor constante, la absorbancia es
directamente proporcional a la concentración.

La luz visible o UV es absorbida por los electrones de valencia, estos son promovidos a estados
excitados. Al absorber radiación electromagnética de una frecuencia correcta, ocurre una transición
desde uno de estos orbitales a un orbital vacío. Las diferencias entre energías varían entre los
diversos orbitales. Algunos enlaces, como los dobles, provocan coloración en las moléculas ya que
absorben energía en el visible así como en el UV, como es el caso del β-caroteno.

Algunas aplicaciones de absorciometría la UV- visible, en análisis cualitativo y cuantitativo de

colorantes ocupados en las comidas ejemplo, curcumina. También se utiliza en el análisis de
muestras clínicas como por ejemplo las mediciones de analitos como ácido úrico, proteínas totales
en el suero, glucosa, entre otros.

En el practico N°5 se realizaron determinaciones en el visible, en cambio y en este práctico, el N°6

se realizaron determinaciones en el ultravioleta, por ende las mediciones deben realizarse dentro de
un rango 200 - 380 nm.
 Objetivos:

 Aplicaciones cuantitativas y cualitativas en el ultravioleta

 Estimar parámetros de calidad del método utilizado
 Determinar la identidad de una muestra problema de un analito
 Comparar con la literatura entregada, los datos de la muestra problema entregada
 Determinar la concentración de una muestra problema de un analito previamente
identificado
 Realizar una curva de calibración de un analito
 Realizar la curva de calibración de un analito utilizando una disolución de patrón estandar
dada
 Verificar el cumplimiento de la Ley de Lamber-Beer mediante el cálculo del porcentaje de
error en las experiencias a realizar
 Determinar la concentración de la muestra problema mediante el método de adición
estándar
Materiales y métodos:

Materiales:
 Bureta
 Matraz
 Pipeta
 Propipeta
 Embudo
 Muestra Problema Nº: 424
 Concentración MP: 602,5 mg/L
 Dilución: 1+4
 Instrumento: Espectrofotómetro
 Modelo y número de serie: Shimadzu UV mini 1240 Lámpara: Deuterio
 Espesor de cubeta: 1 cm
 Material óptico de la cubeta: Cuarzo
 Disolvente: H2O destilada
 Concentración de solución para el espectrograma: 602,5 mg/L

Métodos:

1) Identificación de un compuesto desconocido : Análisis cuantitativo Espectrograma:

Procedimiento:
Preparar la solución blanco y la muestra a examinar.
Encender, dejar estabilizar el espectrofotómetro y calibrar al 0% y 100% con la solución blanco.
Con la absorciometría obtenida de la lectura, calcular la concentración de la sustancia a investigar.
Efectuar lecturas del %T desde 380 nm a 220 nm en intervalos de 20 nm. En torno a los máximos
de absorbancia efectuar lectura de intervalos 5 nm.
Comparar los coeficientes de absortividad de la MP con los obtenidos de la literatura para identificar
la muestra problema.
 Identificación del compuesto:

Tabla 1: Datos para identificar MP

Datos teóricos Datos prácticos

Longitud Coeficiente de Longitud Coeficiente de
de Absorbancia absortividad (a) de onda Absorbancia absortividad (a)
onda
280 0,983 6,7 cm2/mg 280,5 0,844 7,0 cm2/mg
233 3,623 24,69 cm2/mg 231,0 3,429 28,5 cm2/mg
Para
identificar la muestra problema fue necesario comparar los coeficientes de absortividad (a) de
nuestra muestra con los obtenidos de la literatura, lo cual dio los siguientes resultados:

Biftalato de potasio: Muestra problema.

A= a × b × c
𝐴 0,983 𝐴 0,844
a1 = = = 6,7 cm2/mg a1 = = = 7,0 cm2/mg
𝑏×𝑐 0,1467 𝑔/𝐿 𝑏×𝑐 0,1205 𝑔/𝐿

𝐴 3,623 𝐴 3,429
a2 = = = 24,69 cm2/mg a2 = = = 28,5 cm2/mg
𝑏×𝑐 0,1467 𝑔/𝐿 𝑏×𝑐 0,1205 𝑔/𝐿

Se observa que los coeficientes de absortividad son muy similares entre si, por lo tanto la muestra
problema corresponde a Biftalato de potasio.

Tabla 2: Datos para espectrograma

En la imagen se observan dos longitudes de onda a la cual la muestra tuvo

una máxima absorbancia, por efectos prácticos se decidió utilizar como
longitud de trabajo la primera longitud de 280,5 nm.

El valor de la máxima transmitancia equivale al minino de absorbancia, este

se obtuvo a la longitud de 265,0 nm con una absorbancia de 0,582 como
se muestra en la tabla 3
 Grafico 1: Espectrograma MP
Absorbancia/Longitud de onda

Tabla 3: Datos para espectrograma

En esta tabla de observa la longitud de onda en la cual la MP tuvo

una mayor transmitancia, la cual fue de 265,0 nm.

Los valores mínimos de transmitancia corresponden a los máximos

de Absorbancia los cuales fueron encontrados en dos longitudes de
onda: 280,5 y 231,0 nm como se muestran en la tabla 2, con una
transmitancia de 17,3 y 0,037 respectivamente.

Grafico 2: Espectrograma MP
Transmitancia/longitud de onda.
 Resultados identificación de compuesto:

Datos teóricos: Datos prácticos:

Longitud de onda máxima: 280 nm Longitud de onda máxima: 280.5 nm

Longitud de onda mínima: No mencionada en la Longitud de onda mínima: 265 nm
literatura. Coeficiente de absortividad: 7 cm 2/mg
Coeficiente de absortividad: 6.7 cm 2/mg
Compuesto: Biftalato de potasio

2) Aplicaciones cuantitativas: Curva de calibración y estimación parámetros de calidad

a) Curva de calibración:

Longitud de onda de trabajo: 280,5 nm

Disolución estándar: Biftalato de potasio
Espesor de la cubeta: 1cm
Concentración: 0,6025g/L
Disolvente: agua
Absortividad práctica: 7 cm2/mg

Cálculos
2
Para una Absorbancia de 0,2 , a=7,5 𝑐𝑚 ⁄𝑚𝑔 y según LLB:

A=a x b x c
0,2 = 7,5 cm2/mg x 1cm x C1
C1 = 2,9 x10-2 g/L (Concentración teórica)
Luego:
C1 x V1 = C2 x V2
0,6025 g/L x V1 = 2,9 x10-2 g/L x 25 mL
V1 = 1,2 ml ≈ 1,0 mL (Volumen patrón de Biftalato de potasio a tomar)
Finalmente, para calcular la concentración real de esos 1,0 mL, tenemos:
C1 x V1 = C2 x V2
0,6025 g/L x 1 mL = C2 x 25 mL
C2 = 2,40 x 10-2 g/L
(Concentración real de la solución preparada, que tiene una absorbancia de 0,2)
Mismo procedimiento para Absorbancia de 0,4 – 0,6 – 0,8 – 1,0 – 1,2
Como el espectrómetro nos entregaba de forma certera la absorbancia, se procede a determinar el
%T. Este se efectuó con la fórmula:
A=2-log (%T); la cual despejando %T se obtiene que  %T = 10(2-A)
Para la primera medición, el espectrómetro nos dio una absorbancia de 0,179 por lo tanto:
%T = 10(2 - 0,179) = 66,2 % de T
 Mismo procedimiento para las absorbancias teóricas de 0,4 – 0,6 – 0,8 – 1,0 y 1,2.
Luego se procede a calcular el valor del coeficiente de absortividad “a” en cada medición:
𝐴
LLB  𝐴 = 𝑎 𝑥 𝑏 𝑥 𝑐 Despejando “a” se tiene: 𝑎 =
𝑏𝑥𝑐

Para la primera medición de la solución de Biftalato de potasio(práctico), de concentración 2,53x10-

3 g/L y a una =226 nm, se tiene:

𝐴 0,179
𝑎= = = 7,5 𝑐𝑚2 /𝑚𝑔
𝑏𝑥𝑐 1 𝑐𝑚 𝑥 2,40𝑥10−2 𝑔𝐿

Mismo procedimiento para los demás puntos

Tabla 4: Datos para la curva de calibración

Volumen Volumen
de patrón de patrón Concentración Concentración
Absorbancia
requeridos medidos Teórica(g/L) Real (g/L) %T A 𝜺 a (cm2/mg)
(mL) (mL)
0,2 1,2 1,0 2,9E-02 2,40E-02 66,2 0,179 1532 7,5
0,4 2,37 2,4 5,7E-02 5,80E-02 37,4 0,427 1511 7,4
0,6 3,57 3,6 8,6E-02 8,70E-02 23,4 0,631 1491 7,3
0,8 4,72 4,7 1,14E-01 1,13E-01 14,8 0,830 1491 7,3
1,0 5,93 6,0 1,43E-01 1,45E-01 8.95 1,048 1470 7,2
1,2 7,1 7,0 1,71E-01 1,69E-01 6,30 1,201 1450 7,1
0,416
0,412
Muestra 0,413 ______
problema _
Nº 424 38,5 X=0,414

Grafico 3: Curva de calibración: Biftalato de potasio

1.400
1.201 y = 7,0857x + 0,0145
1.200 1.048 R² = 0,9996

1.000 0.83
Absorbancia

0.800 0.631
0.600 ABS
0.427
Linear (ABS)
0.400
0.179
0.200

0.000
0.00E+00 5.00E-02 1.00E-01 1.50E-01 2.00E-01
Concentración patrón (g/L)
Al hacer el gráfico de dispersión y calcular la línea de tendencia, podemos ver que se asemeja casi a una línea
recta en toda su totalidad. Por lo tanto concluimos que se cumple la Ley de Lambert-Beer, lo que permite interpolar
la concentración de la muestra problema a partir de la curva de calibración

Para trabajar con la muestra problema se midieron 5 ml de Biftalato de potasio, se diluyó hasta 25 mL en un matraz
aforado, por lo tanto, el factor de dilución es 5. Luego se procedió a medir tres veces su absorbancia a partir de la
longitud de onda de trabajo de =280,5 nm. Nos entregó los siguientes resultados:

AMP= 0,416 - 0,412 – 0,413; el promedio de las absorbancias medidas corresponde a : 0,414 = Absorbancia de
la muestra problema.
%T=10(2-A) = 10(2 – 0,414) = 38,5%

Cálculos para determinar la concentración de la muestra problema

o Método absoluto:
Por LLB A= a x b x c y obteniéndose una A de la MP de =0,414 a una =280,5 nm (previamente determinada)
2
y un a = 7,3 𝑐𝑚 ⁄𝑚𝑔 (promedio de los a):

𝐴 0,414
𝑐= = 2 = 5,67𝑥10−2 𝑔/𝐿
𝑏𝑥a 1𝑐𝑚 𝑥 7,3 𝑐𝑚 ⁄𝑚𝑔

Luego, teniendo en cuenta el factor de dilución (f.d) = 5, para la concentración original de la MP se tiene que:
𝑔 𝒈
𝑐 𝑥 𝑓𝑑 = 5,67𝑥10−2 𝑥 5 = 𝟐, 𝟖𝟒 𝒙 𝟏𝟎−𝟏
𝐿 𝑳

o Método del factor: Sea CMP = Concentración de la muestra problema, comparando con una absorbancia y
su correspondiente concentración de patrón, ya conocidas (A P y CP respectivamente):

A una AP=0,427  CP = 5,80 x 10-2 g/L

AMP=0,414  CMP

𝐴𝑀𝑃 𝑥 𝐶𝑃 0,414 𝑥 5,80x10−2 g/L

𝐶𝑀𝑃 = = = 0,414 𝑥 1,36𝑥10−1 = 5,63𝑥10−2 𝑔/𝐿
𝐴𝑃 0,427
𝐶𝑃
Con factor= = 1,29 x 10-2
𝐴𝑃

Luego, teniendo en cuenta el factor de dilución (f.d) = 5, para la concentración original de la MP se tiene que:
𝑔 𝒈
𝑐 𝑥 𝑓𝑑 = 5,63𝑥10−2 𝑥 5 = 𝟐, 𝟖𝟐 𝒙 𝟏𝟎−𝟏
𝐿 𝑳

o Método curva de calibración:

De la información otorgada por la línea de tendencia, calculada por Excel, nos entrega la recta de la forma

𝑦 = 𝑛 + 𝑚 𝑥 , que se homóloga con la LLB

A = 0 + (a x b) x c
Se puede ver que la pendiente de la curva de calibración (ecuación de la línea de tendencia) corresponde al valor
del coeficiente de absortividad “a”, pues el espesor de la cubeta es 1 cm, simplemente queda el valor de “a”. Así
tenemos la ecuación de la línea de tendencia, que representa la recta de la curva de calibración
y = 7,0857x + 0,0145

Cuya pendiente de curva de calibración es 7,0857

Como medimos la absorbancia de la muestra problema podemos calcular y conocer su concentración y para ello
utilizamos la ecuación que nos entrega el gráfico:

Y= 7,0857x + 0,0145

0,414= 7,0857x + 0,0145

0,414−0,0145
𝑥= = 5,64 𝑥10−2 𝑔/𝐿
7,0857

25
Luego, teniendo en cuenta el factor de dilución (f.d)= = 5, para la concentración original de la MP se tiene
5
que:
𝑔 𝒈
𝑐 𝑥 𝑓𝑑 = 5,64 𝑥10−2 𝑥 5 = 𝟐, 𝟖𝟐 𝒙𝟏𝟎−𝟏
𝐿 𝑳

o Método curva de calibración:

De la información otorgada por la línea de tendencia, calculada por Excel, nos entrega la recta de la forma

𝑦 = 𝑛 + 𝑚 𝑥 , que se homóloga con la LLB

A = 0 + (a x b) x c

Se puede ver que la pendiente de la curva de calibración (ecuación de la línea de tendencia) corresponde al valor
del coeficiente de absortividad “a”, pues el espesor de la cubeta es 1 cm, simplemente queda el valor de “a”. Así
tenemos la ecuación de la línea de tendencia, que representa la recta de la curva de calibración

y = 7,0857x + 0,0145

Cuya pendiente de curva de calibración es 7,0857

Como medimos la absorbancia de la muestra problema podemos calcular y conocer su concentración mediante
el método de la curva de calibración y para ello utilizamos la ecuación que nos entrega el gráfico:

Y= 7,0857x + 0,0145

0,414= 7,0857x + 0,0145

0,414−0,0145
𝑥= = 5,64 𝑥10−2 𝑔/𝐿
7,0857

25
Luego, teniendo en cuenta el factor de dilución (f.d)= = 5, para la concentración original de la MP se tiene
5
que:
𝑔 𝒈
𝑐 𝑥 𝑓𝑑 = 5,64 𝑥10−2 𝑥 5 = 𝟐, 𝟖𝟐 𝒙𝟏𝟎−𝟏
𝐿 𝑳
 b) Parámetros de calidad:

Tabla 5: Mediciones de blanco

Nº de Absorbancia
mediciones
1 0.005
2 0.002
3 0.005
4 0.004
5 0.005
6 0.002
7 0.002
8 0.002
9 0.000
10 0.002
Desviación 0.001101
estándar
Límite de detección:
3 𝑥 𝑑𝑠 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 3 𝑥 0.001101
= = 4,662x 10 -4 g/L
𝑚 7,0857
Límite de cuantificación:
10 𝑥 𝑑𝑠 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 10 𝑥 0.001101
= = 1,554 x 10 -3 g/L
𝑚 7,0857
Rango lineal: 2, 4 x10-2 g/L – 1, 69x10-1 g/L
Sensibilidad: La sensibilidad es igual a la pendiente, por lo
tanto s= 7,0857.
Precisión: sd#MP1: 0,416
#MP2: 0,412
#MP3:0,413
sd MP: ± 0,002

3) Aplicaciones cuantitativas: Adición estándar:

Procedimiento: Realizar una dilución adecuada de la muestra problema, de modo que esta se ubique
en el primer tercio de la curva de calibrado, además calcular los volúmenes adecuados de patrón
para obtener dos soluciones que contengan la muestra problema y el patrón y se ubiquen en segundo
y último tercio de la curva.

Tabla 6: Datos curva de Adición estándar

Disolución Volumen Volumen Volumen Concentración A

MP medido patrón final patrón
agregado agregado
mL mL mL mg/L
Blanco - - - -
MP (primer tercio 5 0 25 0 0.416
cc)
MP 1° adición 5 2.4 25 0.058 g/L 0.787
(segundo tercio
cc)
MP + 2° adición 5 3.6 25 0.087g/L 1.016
(Último tercio)
 Grafico 4: Curva de adición estándar

1.2
1
1 y = 6,8251x + 0,4098
R² = 0,9971
0.787
0.8
Absorbancia

0.6 Series1
0.416
0.4 Linear (Series1)

0.2

0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1
Concentracion añadida g/L

El gráfico muestra la absorbancia de la MP, junto a la absorbancia de soluciones que contienen la

MP más una concentración de solución de patrón de Biftalato de potasio conocida.

En este gráfico de adición estándar, se aprecia la absorbancia v/s concentración de patrón añadido,
se observan los puntos correspondientes a la tabla. Además de añadió la línea de tendencia y se
obtuvo la ecuación de la recta de dicha línea, junto con el R2.

Para poder determinar la concentración de la muestra problema, es necesario extrapolar los

resultados, en donde la absorbancia sea cero para poder determinar el valor de “x” correspondiente
a la concentración de la MP. Para eso, se extendió la gráfica hacia la izquierda, como se ve a
continuación:

Grafico 5: Curva de adición estándar extrapolada

1.2
1
1 y = 6,8251x + 0,4098
0.787
R² = 0,9971
Absorbancia

0.8

0.6 Series1
0.416
0.4 Linear (Series1)

0.2

0
-0.1 -0.05 0 0.05 0.1
Concentracion añadida g/L

El método de adición estándar consistió en medir un volumen y concentración fijo de MP (esto es 5

mL de MP diluídos en 25 mL), junto con volumen de un Patrón de Biftalato de potasio de
concentración conocida. El objetivo es obtener puntos para luego realizar un gráfico de concentración
de patrón añadido v/s absorbancia.
En primer lugar, teníamos la absorbancia de la MP sin nada añadido.

Luego, se añadió 5 mL de muestra problema más 2,4 mL de Patrón de Biftalato de lo que equivale
a 5,8 x 10-2 g/L de patrón añadido, todo eso llevado a 25 mL

Finalmente, se añadió 5 mL de muestra problema más 3,6 mL de Patrón de Biftalato de potasio, lo

que equivale a 8,7 x 10-2 g/L de patrón añadido, todo eso llevado a 25 mL. Por lo tanto, todas las
determinaciones cuentan con un factor de dilución igual a 5.

La finalidad de esta operación es de obtener puntos que estuvieran dentro de los tres tercios c/u de
la absorbancia entre 0,2 y 1,2. Para ello se dividió el gráfico de las ordenadas en 3 y se buscaron
(de acuerdo a la tabla 6) , patrones cuya absorbancia más la de la MP dieran dentro de c/u de los
tercios.

Luego se procede a graficar concentración de patrón añadido v/s absorbancia. Hecho el gráfico, para
poder determinar la concentración de la muestra problema, es necesario extrapolar en la curva de la
adición estándar:

o Método gráfico:

De la información otorgada por la línea de tendencia, calculada por Excel, nos entrega la recta de
la forma

𝑦 = 𝑛 + 𝑚 𝑥 , que se homóloga con la LLB

A = 0 + (a x b) x c

Se puede ver que la pendiente de la curva de calibración (ecuación de la línea de tendencia)

corresponde al valor del coeficiente de absortividad “a”, pues el espesor de la cubeta es 1 cm,
simplemente queda el valor de “a”. Así tenemos la ecuación de la línea de tendencia, que
representa la recta de la curva de calibración

y = 6,8251x + 0, 4098(1)

Cuya pendiente de curva de calibración es 6,8251

Como necesitamos calcular la concentración de la muestra problema, en el gráfico 5 se iguala Y=0

para conocer el valor de X

Se procede a reemplazar en la ecuación (1) y al despejar x obtenemos la concentración de la

muestra problema:

Y= 6,8251x + 0, 4098

0,416-0,4068= 6,8251x
−0,4098 𝑔
𝑥= = −6,0𝑥10−2 = CMP
6,8251 𝐿

Pero, como la concentración no es negativa, se acepta que la concentración es 0,060/𝐿

25
Luego, teniendo en cuenta el factor de dilución (f.d)= = 5, para la concentración original de la
5
MP se tiene que:
𝑔 𝑔
𝑐 𝑥 𝑓𝑑 = 6,0𝑥10−2 𝑥 5 = 𝟑, 𝟎𝒙𝟏𝟎−𝟏
𝐿 𝐿

𝑔
Concentración por el método gráfico (curva de dilución estándar): 𝟑, 𝟎𝒙𝟏𝟎−𝟏
𝐿
 Discusión:

En el práctico se realizaron 3 actividades, donde la primera consistió en identificar un compuesto

desconocido, para lo cual se debió realizar un espectrograma y así obtener los datos necesarios
para calcular el coeficiente de absortividad.
Las longitudes de onda que nos expresaron máximos fueron 280,5 nm (absorbancia 0,844) y 231
nm (absorbancia 3,429), por lo que trabajando con estos valores y la concentración de la dilución
1+4, se obtuvieron los dos coeficientes de absortividad “a” (7,0 para 280,5 nm y 28,5 para 231 nm)
y así comenzamos con la búsqueda bibliográfica para identificar el contenido de nuestra solución,
buscando cotejar los datos de “a” con alguna de las muestras problemas posibles. Fue necesario
comparar los valores de “a” porque este es independiente de las concentraciones del analito y solo
depende de la longitud de onda, por lo que simplemente vimos los máximos en la bibliografía y fuimos
analizando cada muestra.
Entre los posibles compuestos encontrábamos la Sulfanilamida, Salicilato de sodio, Biftalato de
potasio, Cafeína, Sulfatiazol, ácido sulfosalicílico, ácido nicotínico y el ácido benzoico.
En una primera instancia se pensó que el compuesto era Ácido nicotínico, ya que los espectrogramas
eran muy similares, pero luego al calcular y comparar los coeficientes de absortividad (a) estos eran
muy distintos, indicando que el compuesto que buscábamos era otro. De esta misma forma se
encontró que el analito correspondía a Biftalato de potasio, pues sus a eran muy similares.
Sin embargo había una pequeña variación entre lo observado en la bibliografía y lo entregado por la
práctica. Esto se debió a que en la práctica se arrojó una longitud de onda de máxima absorbancia
ligeramente diferente, por lo tanto, como “a” depende de la longitud de onda es posible que esta
variación derivó de ello.

Si bien ambas longitudes de ondas nos permitieron determinar la identidad de la muestra problema,
seleccionamos 280,5 nm como nuestra longitud de onda de trabajo para el resto del laboratorio.
Pese a que longitud de 233 nm fue la que arrojó una mayor absorbancia, no se eligió pues al estar
más cerca de la longitud de onda de trabajo tenía muchas variaciones y eso se reflejó por ejemplo
al calcular la absortividad esta tenía una diferencia mayor respecto a la indicada por la literatura.

Posteriormente se nos entregó un estándar de Biftalato de potasio de concentración conocida para

realizar la curva de calibración. De acuerdo a los datos obtenidos de la curva pudimos verificar la
calibración, puesto que al calcular el porcentaje de error este resultó ser de aproximadamente un 2,4
% siendo este menor a 5% lo que nos indica que los datos se encuentran dentro del rango lineal y
por lo tanto es posible realizar posteriormente la medición de la muestra problema para poder
conocer su concentración. La muestra problema fue preparada y medida 3 veces, y en promedio
arrojó una absorbancia de 0,414. Obtenido este dato, es posible calcular su concentración. Para ello,
se calculó mediante el método de la curva de calibración, método del factor y método absoluto. En
𝑔
los primeros la concentración calculada fue la misma siendo esta 2,82 × 10−1 ⁄𝐿 y con el método
𝑔
absoluto se obtuvo 2,84 × 10−1 ⁄𝐿.

La desviación estándar de las tres muestras problema dio un resultado de ± 0,002, como vemos, la
diferencia es muy pequeña, por lo tanto nos asegura que los resultados obtenidos son bastante
cercanos la concentración real de la muestra.

En la última experiencia se realizó una medición por adición estándar de la muestra problema,
tomando como matriz la muestra de patrón de Biftalato de potasio. Se prepararon 3 soluciones y que
cada una debía tener una absorbancia en los tres tercios de los valores de la absorbancia en la curva
de calibración: la primera con la muestra problema, la segunda que tuviera la muestra problema más
una solución de patrón (en este caso 2,4 mL), pues nos daba una absorbancia estimada de 0,787.
Y la tercera solución que contuviera la MP más una segunda solución de patrón (que fue de 3,6 mL
de patrón), para que así nos diera una absorbancia de 1,016.
Al calcular los datos, tabular y graficar en un gráfico de absorbancia v/s concentración de patrón
añadido mediante Excel, se logró una recta que intercepta el eje Y. Esa intersección corresponde a
la absorbancia de la MP en ausencia de solución patrón. La idea de esta curva es encontrar la
intersección de la recta con el eje X, pues de esta manera se puede conocer la concentración de la
MP. Esto se logra mediante la extrapolación que, como tal, resulta un método poco exacto, pues no
se puede saber con los datos que tenemos, qué pasa con la concentración en una zona fuera de
escala de medida. Además se puede corroborar comparando estos resultados con la estimación
promedio de los datos obtenidos mediante la curva de calibración previamente realizada.

En comparación con la curva de calibración donde la concentración por el método de la curva de

𝑔 𝑔
calibración fue de 2,82 × 10−1 ⁄𝐿y el de calibración estándar de 3,0 × 10−1 ⁄𝐿 , la cual dio una
𝑔
variación de 0,18 ⁄𝐿. Respecto a esto se puede acotar que este resultado es más confiable que
el mencionado anteriormente, ya que los puntos obtenidos en esta curva no tuvieron ninguna
desviación, a diferencia de los puntos gráfico de adición estándar, donde sí se observaron pequeñas
desviaciones de los puntos con respecto a la línea de tendencia trazada, esto debido netamente a
un error de manipulación de los volúmenes, enrase, etc.

Sin embargo si no hubiéramos tenido errores en estas manipulaciones de volúmenes, la

concentración más fiable seria la calculada mediante la curva de calibración estándar, ya que esta
considera la matriz del analito, siendo proporcionando un resultado más exacto.

Conclusión:

En este laboratorio se trabajó en el rango de ultravioleta donde se realizaron aplicaciones

cuantitativas y cualitativas.
Se logró determinar la identidad de un compuesto desconocido a través de la comparación de los
coeficientes de absortividad prácticos, con los de la literatura, encontrando así que la muestra
problema corresponde a Biftalato de potasio.
Una vez identificado el compuesto se realizó un gráfico de curva de calibración y se calculó la
concentración mediante el método absoluto, curva de calibración, utilizando la pendiente del gráfico
obtenido y método del factor, obteniendo valores muy similares para todos los métodos realizados,
obteniendo en promedio un valor de 2,83 x 10-1 g/L.
Se observó que la ley de Lamber-Beer se cumplía para todos los puntos de la curva, ya que al
calcular el porcentaje de error de cada punto, estos eran menor a un 5%.
Posteriormente se realizó una curva de calibración estándar, donde se midió la absorbancia versus
la concentración añadida, este método considera la matriz del analito, lo cual lo hace mucho más
exacto respecto a los resultados que entrega.
Se calculó la concentración de la muestra problema, extrapolando el gráfico hasta llevar y=0, donde
mediante el método curva de calibración se obtuvo un resultado de 3,0 x10-1 g/L
Esto nos permite comparar los resultados obtenidos de la concentración entre ambas curvas de
calibración, observando una variación de 0,17 g/L.
Respecto a la diferencia que se obtuvo entre los resultados de la concentración de la MP de ambas
curvas se consideró como más verdadero el resultado obtenido en la primera curva, ya que como ya
se mencionó anteriormente en la curva de calibración estándar hubieron errores en el manejo de los
volúmenes, obteniendo pequeñas desviaciones con respecto a la linealidad del gráfico.
Finalmente es necesario acotar que saber en qué rango de luz se va a trabajar, y cuáles son las
longitudes de onda de cada rango, es muy importante, ya que estas serán muy distintas, por ejemplo
al comparar en el espectro visible, con el UV.
 Anexo:

Cálculos actividad 1:

Para identificar la muestra problema fue necesario comparar los coeficientes de absortividad (a) de
nuestra muestra con los obtenidos de la literatura, lo cual dio los siguientes resultados:

Biftalato de potasio: Muestra problema.

A= a × b × c
𝐴 0,983 𝐴 0,844
a1 = = = 6,7 cm2/mg a1 = = = 7,0 cm2/mg
𝑏×𝑐 0,1467 𝑔/𝐿 𝑏×𝑐 0,1205 𝑔/𝐿

𝐴 3,623 𝐴 3,429
a2 = = = 24,69 cm2/mg a2 = = = 28,5 cm2/mg
𝑏×𝑐 0,1467 𝑔/𝐿 𝑏×𝑐 0,1205 𝑔/𝐿

Cálculos actividad 2
Curva de calibración:
2
Para una Absorbancia de 0,2 , a=7,5 𝑐𝑚 ⁄𝑚𝑔 y según LLB:

A=a x b x c
0,2 = 7,5 cm2/mg x 1cm x C1
C1 = 2,9 x10-2 g/L (Concentración teórica)
Luego:
C1 x V1 = C2 x V2
0,6025 g/L x V1 = 2,9 x10-2 g/L x 25 mL
V1 = 1,2 ml ≈ 1,0 mL (Volumen patrón de Biftalato de potasio a tomar)
Finalmente, para calcular la concentración real de esos 1,0 mL, tenemos:
C1 x V1 = C2 x V2
0,6025 g/L x 1 mL = C2 x 25 mL
C2 = 2,40 x 10-2 g/L
(Concentración real de la solución preparada, que tiene una absorbancia de 0,2)
Mismo procedimiento para Absorbancia de 0,4 – 0,6 – 0,8 – 1,0 – 1,2
Como el espectrómetro nos entregaba de forma certera la absorbancia, se procede a determinar el
%T. Este se efectuó con la fórmula:
A=2-log (%T); la cual despejando %T se obtiene que  %T = 10(2-A)
Para la primera medición, el espectrómetro nos dio una absorbancia de 0,179 por lo tanto:
%T = 10(2 - 0,179) = 66,2 % de T
Mismo procedimiento para las absorbancias teóricas de 0,4 – 0,6 – 0,8 – 1,0 y 1,2.
Luego se procede a calcular el valor del coeficiente de absortividad “a” en cada medición:
 𝐴
LLB  𝐴 = 𝑎 𝑥 𝑏 𝑥 𝑐 Despejando “a” se tiene: 𝑎 =
𝑏𝑥𝑐

Para la primera medición de la solución de Biftalato de potasio(práctico), de concentración 2,53x10-

3 g/L y a una =226 nm, se tiene:

𝐴 0,179
𝑎= = = 7,5 𝑐𝑚2 /𝑚𝑔
𝑏𝑥𝑐 1 𝑐𝑚 𝑥 2,40𝑥10−2 𝑔𝐿

Mismo procedimiento para los demás puntos

Cálculos para determinar la concentración de la muestra problema

o Método absoluto:
Por LLB A= a x b x c y obteniéndose una A de la MP de =0,414 a una =280,5 nm (previamente determinada)
2
y un a = 7,3 𝑐𝑚 ⁄𝑚𝑔 (promedio de los a):

𝐴 0,414
𝑐= = 2 = 5,67𝑥10−2 𝑔/𝐿
𝑏𝑥a 1𝑐𝑚 𝑥 7,3 𝑐𝑚 ⁄𝑚𝑔

Luego, teniendo en cuenta el factor de dilución (f.d) = 5, para la concentración original de la MP se tiene que:
𝑔 𝒈
𝑐 𝑥 𝑓𝑑 = 5,67𝑥10−2 𝑥 5 = 𝟐, 𝟖𝟒 𝒙 𝟏𝟎−𝟏
𝐿 𝑳

o Método del factor: Sea CMP = Concentración de la muestra problema, comparando con una absorbancia y
su correspondiente concentración de patrón, ya conocidas (A P y CP respectivamente):
A una AP=0,427  CP = 5,80 x 10-2 g/L

AMP=0,414  CMP

𝐴𝑀𝑃 𝑥 𝐶𝑃 0,414 𝑥 5,80x10−2 g/L

𝐶𝑀𝑃 = = = 0,414 𝑥 1,36𝑥10−1 = 5,63𝑥10−2 𝑔/𝐿
𝐴𝑃 0,427
𝐶𝑃
Con factor= = 1,29 x 10-2
𝐴𝑃

Luego, teniendo en cuenta el factor de dilución (f.d) = 5, para la concentración original de la MP se tiene que:
𝑔 𝒈
𝑐 𝑥 𝑓𝑑 = 5,63𝑥10−2 𝑥 5 = 𝟐, 𝟖𝟐 𝒙 𝟏𝟎−𝟏
𝐿 𝑳

o Método curva de calibración:

De la información otorgada por la línea de tendencia, calculada por Excel, nos entrega la recta de la forma

𝑦 = 𝑛 + 𝑚 𝑥 , que se homóloga con la LLB

A = 0 + (a x b) x c
Se puede ver que la pendiente de la curva de calibración (ecuación de la línea de tendencia) corresponde al valor
del coeficiente de absortividad “a”, pues el espesor de la cubeta es 1 cm, simplemente queda el valor de “a”. Así
tenemos la ecuación de la línea de tendencia, que representa la recta de la curva de calibración

y = 7,0857x + 0,0145

Cuya pendiente de curva de calibración es 7,0857

Como medimos la absorbancia de la muestra problema podemos calcular y conocer su concentración y para ello
utilizamos la ecuación que nos entrega el gráfico:

Y= 7,0857x + 0,0145

0,414= 7,0857x + 0,0145

0,414−0,0145
𝑥= = 5,64 𝑥10−2 𝑔/𝐿
7,0857

25
Luego, teniendo en cuenta el factor de dilución (f.d)= = 5, para la concentración original de la MP se tiene
5
que:
𝑔 𝒈
𝑐 𝑥 𝑓𝑑 = 5,64 𝑥10−2 𝑥 5 = 𝟐, 𝟖𝟐 𝒙𝟏𝟎−𝟏
𝐿 𝑳

o Método curva de calibración:

De la información otorgada por la línea de tendencia, calculada por Excel, nos entrega la recta de la forma

𝑦 = 𝑛 + 𝑚 𝑥 , que se homóloga con la LLB

A = 0 + (a x b) x c

Se puede ver que la pendiente de la curva de calibración (ecuación de la línea de tendencia) corresponde al valor
del coeficiente de absortividad “a”, pues el espesor de la cubeta es 1 cm, simplemente queda el valor de “a”. Así
tenemos la ecuación de la línea de tendencia, que representa la recta de la curva de calibración

y = 7,0857x + 0,0145

Cuya pendiente de curva de calibración es 7,0857

Como medimos la absorbancia de la muestra problema podemos calcular y conocer su concentración mediante
el método de la curva de calibración y para ello utilizamos la ecuación que nos entrega el gráfico:

Y= 7,0857x + 0,0145

0,414= 7,0857x + 0,0145

0,414−0,0145
𝑥= = 5,64 𝑥10−2 𝑔/𝐿
7,0857

25
Luego, teniendo en cuenta el factor de dilución (f.d)= = 5, para la concentración original de la MP se tiene
5
que:
𝑔 𝒈
𝑐 𝑥 𝑓𝑑 = 5,64 𝑥10−2 𝑥 5 = 𝟐, 𝟖𝟐 𝒙𝟏𝟎−𝟏
𝐿 𝑳
 Parámetros de calidad:

Tabla 7: Mediciones de blanco

Nº de Absorbancia
mediciones
1 0.005
2 0.002
3 0.005
4 0.004
5 0.005
6 0.002
7 0.002
8 0.002
9 0.000
10 0.002
Desviación 0.001101
estándar
Límite de detección:
3 𝑥 𝑑𝑠 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 3 𝑥 0.001101
= = 4,662x 10 -4 g/L
𝑚 7,0857
Límite de cuantificación:
10 𝑥 𝑑𝑠 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 10 𝑥 0.001101
= = 1,554 x 10 -3 g/L
𝑚 7,0857
Rango lineal: 2, 4 x10-2 g/L – 1, 69x10-1 g/L
Sensibilidad: La sensibilidad es igual a la pendiente, por lo
tanto s= 7,0857.
Precisión: sd#MP1: 0,416
#MP2: 0,412
#MP3:0,413
sd MP: ± 0,002

Cálculos actividad 3

o Método gráfico:

De la información otorgada por la línea de tendencia, calculada por Excel, nos entrega la recta de
la forma

𝑦 = 𝑛 + 𝑚 𝑥 , que se homóloga con la LLB

A = 0 + (a x b) x c

Se puede ver que la pendiente de la curva de calibración (ecuación de la línea de tendencia)

corresponde al valor del coeficiente de absortividad “a”, pues el espesor de la cubeta es 1 cm,
simplemente queda el valor de “a”. Así tenemos la ecuación de la línea de tendencia, que
representa la recta de la curva de calibración

y = 6,8251x + 0, 4098(1)

Cuya pendiente de curva de calibración es 6,8251

Como necesitamos calcular la concentración de la muestra problema, en el gráfico 5 se iguala Y=0
para conocer el valor de X.
Se procede a reemplazar en la ecuación (1) y al despejar x obtenemos la concentración de la
muestra problema:
Y= 6,8251x + 0, 4098

0,416-0,4068= 6,8251x
−0,4098 𝑔
𝑥= = −6,0𝑥10−2 = CMP
6,8251 𝐿

Pero, como la concentración no es negativa, se acepta que la concentración es 0,060/𝐿

25
Luego, teniendo en cuenta el factor de dilución (f.d)= = 5, para la concentración original de la
5
MP se tiene que:
𝑔 𝑔
𝑐 𝑥 𝑓𝑑 = 6,0𝑥10−2 𝑥 5 = 𝟑, 𝟎𝒙𝟏𝟎−𝟏
𝐿 𝐿
𝑔
Concentración por el método gráfico (curva de dilución estándar): 𝟑, 𝟎𝒙𝟏𝟎−𝟏
𝐿