Determinação laboratorial dos marcadores moleculares do VHC

Introdução:
A hepatite C, com cerca de 170 milhões de infetados no Mundo inteiro, constitui uma
causa importante de morbilidade e de mortalidade sendo um grave problema de Saúde
Pública. Em Portugal as estimativas apontam para 140-150 mil casos de infeção pelo
vírus da hepatite C (VHC), o que corresponde a uma prevalência de 1.5%.
Com o desenvolvimento das técnicas de biologia molecular a determinação da
cargavirica e dos genótipos do VHC tornou-se uma mais valia para a monitorização dos
doentes seropositivos.Posteriormente estudos revelaram que o polimorfismo da IL28B
influencia a resposta à terapêutica sendo muito importante a sua determinação antes do
inicio da mesma.

Objetivo:
Esta apresentação tem como objetivo dar a conhecer os marcadores moleculares do
VHC que são efetuados no Laboratorio de Biologia Molecular do Centro Hospitalar de
Lisboa Central (H.S.José). Nomeadamente:
- Genotipagem do VHC: é realizada com recurso a uma técnica de PCR clássica em que
após a extração do ácido nucleico o genoma é amplificado e o produto visualizado
através de uma técnica de LiPa (Line probe assay). Deve ser efetuada em todos os
doentes que vão iniciar terapêutica.
- Carga virica: Através de uma técnica de PCR em tempo real é possível a deteção e
quantificação do ARN do VHC que corresponde a um parâmetro de viremia. Utilizando
a PCR é possível detetar a viremia antes da seroconversão imunológica, assim como
detetar flutuações de carga viral em pacientes com infeção crónica por VHC submetidos
a terapeutica antiviral.
-Determinação do polimorfismo da IL28B: é efetuada através de uma técnica de PCR
em tempo real. Consiste na amplificação de um fragmento longo de 139 pares de bases
com sondas específicas usando um oligómero SingleProbe específico para o alelo -3176
C. Os fragmentos de PCR resultantes são analisados com a SimpleProbeR no canal 530.
Obtêm-se os genótipos através de uma curva de melting com pontos de melting -Tm-
específicos. Variação genética da IL28B está associada à resposta ao tratamento do
VHC sendo de todo o interesse pesquisar o genótipo dos doentes que vão iniciar
tratamento.

Conclusão:
A determinação laboratorial dos marcadores moleculares do VHC é imprescindível para
a avaliação dos doentes infectados pelo VHC. No Laboratório de Biologia Molecular do
Centro Hospitalar de Lisboa Central (H.S.José) a determinação das cargas virais e da IL
28B são efectuadas com PCR em tempo real e os genótipos do VHC com recurso a um
PCR clássico.
Estas determinações vão auxiliar os clinicos na monitorização dos individuos infetados
e na escolha e dosagem dos fármacos mais adequados ao sucesso do seu tratamento.