HEMOGRAMA AUTOMATIZADO

Lic. TM Boris Valdivia Vizarraga

UNMSM
Hospital Nacional “ Guillermo Almenara Irigoyen “
ESSALUD
 Introducción
• El desarrollo de los Autoanalizadores hematológicos
comenzó en la década de los 50 con los hermanos
Wallace y Joseph Coulter, quienes inventaron en 1956
el primer contador automático de células sanguíneas

• Hasta 1973 los hermanos coulter mantuvieron sus

diseños en forma exclusiva, desarrollándolos y
mejorándolos

• Posteriormente otros fabricantes introducen nuevos

modelos basados en el mismo principio

• En 1980 se introduce el diferencial 3 Diff además del

estudio de la serie roja con los cómputos de eritocitos, la
determinación de la hemoglobina y el cálculo de los
índices eritrocitarios
Hermanos Wallace y Joseph
Coulter
Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff
Parametro Abreviarura Unidades

Recuento total de glóbulos blancos WBC x 10 3 / ul

Porcentaje de neutrófilos NEUT % %

Porcentaje de linfocitos LYNPH % %

Porcentaje de monocitos MONO % %

Porcentaje de eosinófilos EO % %

Porcentaje de basofilos BASO % %

Valor absoluto de neutrófilos NEUT # x 10 3 / ul

Valor absoluto de linfocitos LYNPH # x 10 3 / ul

Valor absoluto de monocitos MONO # x 10 3 / ul

Valor absoluto de eosinófilos EO # x 10 3 / ul

Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff
Parametro Abreviarura Unidades

Valor absoluto de basófilos BASO # x 10 3 / ul

Recuento total de glóbulos rojos RBC x 10 6 / ul

Hemoglobina HGB G / dl

Hematocrito HCT %

Volumen Corpuscular Medio MCV fL

Hemoglobina Corpuscular Media HCM pg

Concentración de HGB Corpuscular Media MCHM g / dl

Ancho de Distribución Eritrocitaria RDW - SD fL

Ancho de Distribución Eritrocitaria – CV RDW – CV %

Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff
Parametro Abreviarura Unidades

Recuento total de Plaquetas PLT x 10 6 / ul

Volumen Plaquetario Medio MPV fL

Ancho de Distribución Plaquetario PDW %

 Principio de Medición
por el Método
de la
Impedancia Eléctrica

El número de pulsos
eléctricos indica la
cantidad de partículas
que pasan a través de la
apertura y el tamaño de
los pulsos es
proporcional al volumen
de las partículas
 Un pequeño voltaje aparece
A travez de los electródos

Señal celular

Apertura

Cuando una célula suspendida en una solución electrolítica pasa a través

De la apertura, el cambio de la impedancia eléctrica es detectado como un
Pulso. El número total de pulsos corresponde al conteo total de células y
La altura de cada pulso es proporcional al correspondiente volumen celular
 Apertura

Célula 1
Célula 2
Apertura

Cuando 2 o mas células son detectadas en

La apertura, la célula 1 y célula 2 son
Detectadas como un gran pulso, por lo tanto
Una de las células no es contada ( perdida
De coincidencia ). El grado de perdida de
Coincidencia depende de la concentración
Celular .
• Los sistemas
COULTER poseen 2
baños, uno de
eritrocitos y otro de
leucocitos, en el baño
de eritrocitos se
encuentra una
apertura de 50 µm y
en el de los leucocitos
otra de 100 µm.
Ley de Ohm : V=IR

El voltaje generado es directamente proporcional

al tamano de la particula. Por lo tanto para cada
celula se le puede determinar su recuento y
tamaño
 IMPEDANCIA
BUENO PARA PLAQUETAS Y ERITROCITOS

Permite la medicion de
parametros objetivos en
estas dos poblaciones

MCV: Tamano eritrocitos

MCH y MCHC: Hb en GR
RDW: Anisocitosis
MPV: Volumen plaquetario
Eritrocitos Dimórficos

Falla renal crónica con

transfusión reciente

Microcitosis

Betatalasemia
VOLUMETRIA

No se puede obtener el recuento celular absoluto a

menos que se conozca el volumen preciso de sangre
total diluida que atraviesa la abertura durante el ciclo
de recuento
Método de Conteo Celular por
Dispersión de la Luz
• Medida a 0º
sirve para medir el tamaño
celular
• Medida a 10º
mide la complejidad celular
• Medida a 90º
mide la superficie celular y la
estructura interna
( granularidad )
• Medida a 90ºD
mide determinados tipos de
granularidad celular
FOCALIZACIÓN HIDRODINÁMICA

• A medida que las células

penetran en el área de
visualización específica,
se produce la interacción
con el rayo láser con
ángulos diferentes, que
suministran información
sobre el tamaño de la
célula, la estructura
interna, la granularidad y
la morfología de la
superficie.
• CITOMETRIA DE FLUJO
“ Una subdisciplina de
la citología analítica,
con orientación
metodológica, que mide
las células en
suspensión, dentro de
un vehículo líquido, a
su paso por una
estación de medida ”
NCCLS
 RADIOFRECUENCIA ( Conductividad )
La conductividad de las
ondas de radio
A través de las células, nos
revelan su composición
interna

Una frecuencia alta, generada por

un oscilador de cristal,
sobreimpuesta a la corriente
directa, que incide sobre
las células para medir su
densidad.
 TECNOLOGÍA
VCS

• IMPEDANCIA
• SCATTER LIGHT
• RADIOFRECUENCIA
 Estudio de la Serie Roja
• Los años y evaluaciones han dado total
aprobación a la impedancia eléctrica para el
estudio de las serie roja, en la obtención del
computo de eritrocitos
• Hematocrito electrónico
• Hemoglobina
• VCM, HCM, CHCM
• Nuevos índices como RDW
• Gráficos de distribución de la población
eritroide, histogramas que se obtienen de los
parámetros de volumen celular Vs distribución
de frecuencia
Recuento de Glóbulos Rojos
Cuando una célula
pasa a través de una
apertura por la cual
fluye una corriente
eléctrica continua y
constante, en un
medio electrolítico que
puede ser isotónico o
no isotónico, generara
una variación en la
velocidad de flujo de
esta corriente eléctrica
( impedancia ) que será
directamente
proporcional al
volumen de la célula e
inversamente
proporcional al
• En el hemograma automatizado por la
metodología usada el valor de Hto es menor al
método del capilar. Disminuye 5% ( 1 – 2
unidades del Hto )
• La CHCM deja el significado del método manual
debido a la menor variabilidad debido a que el
Hto se obtiene electrónicamente
• Solo es significativa si presenta variaciones muy
importantes ( < 29% ) o elevaciones extremas
( > de 37% ) como se observa en la
esferocitosis
• Entonces en un caso de anemia la
clasificación inicial se realiza con las cifras
de HB, Hto, constantes corpusculares ,
RDW y el histograma
• Toda esta información muy valiosa para el
clínico debe ser corroborada por el
examen microscópico de la serie roja,
atendiendo a las alarmas que estos
equipos mostrarán en sus pantallas .
 Para tener en cuenta :
• A pesar del avance tecnológico alcanzado, los
autoanalizadores hematológicos presentan
limitaciones :

1. No detectan poiquilocitosis

2. No detectan inclusiones eritrocitarias

3. Lo que nos presentan los fabricantes son distintos

tipos de alarmas con diversa sensibilidad, que tienen
que ver con el tamaño celular, línea celular, error intra-
método y/o de proceso.

4. Finalmente, no se debe por ningún motivo, dejar de

realizar el examen microscópico de las células
 Estudio de la Serie Roja
• Por lo tanto, la observación microscópica nos permite
confirmar lo señalado por los índices hemáticos, asi
como, establecer la presencia de anormalidades
• Deben considerarse además una serie de interferencias
que alteran el hemograma automatizado :

• 1. lipemia
• 2. ictericia severa
• 3. hemólisis
• 4. auto-aglutinación por anticuerpos fríos
• 5. plaquetas gigantes
• 6. leucemias
• 7. otras anormalidades
ANEMIA MCV RDW CV RDW SD

Deficiencia de B12/folato, hemólisis elevado elevado elevado

Causa inmune, aglutinación de GR
Por anticuerpos fríos, anemia aplásica

Insuficiencia severa de fierro bajo elevado elevado

Hemoglobinopatías heterocigóticas normal normal bajo

Hemoglobinopatías homocigótas normal elevado elevado

Mielofibrosis / anemia sideroblástica normal elevado elevado

Anemia hemolítica normal normal elevado

Anemia secundaria normal normal normal

Talasemia y Hemoglobina S combinada bajo elevado elevado

Talasemia bajo normal bajo

Talasemia
 Estudio de las Plaquetas
• El computo se hace habitualmente por
impedancia
• La condición de una muestra en
circunstancias de tiempo, temperatura,
homogenización, relación sangre total /
anticoagulante, y la no formación de
hemólisis y espuma. Son indispensables
para un resultado confiable
Recuento de Plaquetas
En los instrumentos
tipo impedancia las
partículas analizadas
son suspendidas en
una solución
electrolítica y la
dilución es pasada a
través de una apertura
que liga dos cámaras,
una que tiene un
electrodo positivo y
otra un electrodo
negativo.
Al pasar por el orificio
las células causan un
incremento
momentáneo en la
resistencia eléctrica,
que es registrado
 Cell Dyn Series ( ABBOTT )

La alarma LRI aparece acompañando a la cifra de plaquetas para

indicar interferencias en la región baja ( LRI ); se debe a la
acumulación de datos en la región de 2 – 3 fl. Se activa por una o
varias de las siguientes causas :
 microplaquetas hemólisis
 fragmentos celulares residuos en el orificio del transductor
 crioglobulinas inclusiones intraeritrocitarias
 Cell Dyn Series ( ABBOTT )

La alarma URI aparece acompañando a la cifra de plaquetas para indicar

interferencias en la región alta ( URI ); se debe a la acumulación de
plaquetas y eritrocitos entre los 20 y 40 fl. Esta alarma se activa por las
siguientes causas :
 Macroplaquetas
 Eritrocitos Microcíticos
Agregados plaquetarios
Eritrocitos Fragmentados
Satelitósis Plaquetaria
Histogramas de Plaquetopenias
•COULTER utiliza su tecnología patentada de SWEET FLOW
que consiste en hacer circular una corriente de diluyente en
la parte inmediatamente posterior de la apertura de
eritrocitos, a fin de que las plaquetas como son tan pequeñas
no permanezcan en el área de recuento y por lo tanto no se
cuenten más de una vez
• Ante un recuento plaquetario disminuido, se debe de
hacer un examen microscópico de toda la lámina y/o
recuento en cámara.

• Las plaquetas se comportan de manera particular, ya

que cambian de forma desde el momento de su
extracción, para luego estabilizarse, despues de varias
horas pierde confiabilidad.

• Los cambios reales dependen de la alteración en la

generación medular de plaquetas

• Presenta alteraciones en pacientes con plaquetas

gigantes

• El PDW o ancho de distribución plaquetaria,

corresponde a la amplitud de distribución o anisocitosis
plaquetaria y se encuentra alterado en PTI,
Mielodisplasia, Mieloproliferación
• Debe tenerse presente que algunas condiciones con
producción defectuosa medular liberan plaquetas muy
pequeñas y entonces el PDW, VPM y P-LCR presentan
valores muy bajos

• En trombocitopenias es muy útil el histograma, ya que el

equipo no realiza los cálculos

• Es definitivo que toda alteración plaquetaria debe

realizarse al examen microscópico

• Alteraciones en el recuento automatizado :

• 1. pseudotrombicitopenia
• 2. microcitos
• 3. fragmetos eritrocitarios
• 4. inclusiones eritrocitarias
• 5. microcoagulos
• 6. heparina
 Estudio de la Serie Blanca
• Es en el estudio diferencial de leucocitos donde se han
desarrollado mas y nuevas tecnologías, con el fin de
detectar con mayor precisión : tamaño, forma,
morfología nuclear, granularidad y estructuras
complejas.

• La cuenta total de leucocitos se da con la impedancia en

la mayoría de aparatos

• Algunos aparatos usan la impedancia para medir el

volumen nuclear y realizar un diferencial 3 Diff, que
muestra linfocitos, granulocitos y células mixtas

• Estos diferenciales se acompañan de histogramas y

deben ser tomados en cuenta, pero nunca ser los
definitivos. Mas usados en pacientes saludables
 Estudio de la Serie Blanca
• Los datos mas confiables para el leucograma
electrónico los ofrecen los diferenciales 5 Diff
• Estos ofrecen análisis por medi de :
• 1. rayo láser ( scatter light )
• 2. radiofrecuencia
• 3. impedancia
• 4. citoquímica
• 5. canales de lobularidad
• La utilización de citoquímica para detectar los
granulocitos se encuentra en algunos
instrumentos, con el uso de la peroxidasa, en
conjunto con un canal de lobularidad, para
basófilos

• Análoga a la especificidad de los antígenos, la

composición y cantidad relativa de diferentes
clases de lípidos en la membrana de los
leucocitos, muestra patrones característicos, que
son diferentes para cada tipo de célula

• Una reacción cito-química, basada en estas

características de la membrana es la mejor
forma de estos instrumentos para diferenciar
granulocitos maduros de los inmaduros
• Causas de interferencia en serie blanca :

• 1. crioglobulinas
• 2. criofibrinógeno
• 3. proteínas monoclonales
• 4. eritroblastos
• 5. agregados plaquetarios
• 6. eritrocitos no lisados
• 7. microcoagulos
• 8. heparina circulante
 Limitaciones del recuento manual de
leucocitos
• Rumke C.L. The statistical expected variability in differential
leucocyte counting en Kopke JA Differential Leucocyte Counting
CAP 1978
• Bacus JW. The observer error in peripheral blood leucocyte
classification Am J Clin Path 1973, 59, 223-230
• Talstad I, Problems in microscopic and automatic differentiation of
blood and cell suspensions Scand J Haematol, 1981, 26, 398-406
• Bentley S.A. Quality control and the differential leucocyte count. Clin
Lab Haemat, 1990, 12 Suppl 1, 101-109
• Kopke JA, Dotson MA, Shifman MA, A critical evaluation of the
manual/visual differential leucocyte counting method Blood Cells,
1985, 11, 173- 186
• Goossens W, Van Hove L, Verwilghen RL, Monocyte counting,
discrepancies in results obtained with differential automated
instruments , J Clin Pathol, 1991, 44, 224-227
HISTOGRAMAS
 Histogramas
• De Glóbulos Rojos.

Histograma Normal
de Distribución de
Globulos rojos.

VCM

RDW
 Histogramas
• De Glóbulos Rojos.

Desplazamiento a la Izquierda:
Microcitosis

VCM
 Histogramas
• De Glóbulos Rojos.

Desplazamiento a la Derecha:
Macrocitosis

VCM
 Histogramas
• De Glóbulos Rojos.
RDW Mayor de 15%:
Anisocitosis

RDW
 Histogramas
• De Plaquetas.

Zona de Macroplaquetas,
Agregados plaquetarios, microcitos
Todo conteo celular comparte tres pasos básicos :

1. Dilución de la sangre
2. Toma de muestra de una cantidad medida
3. Enumeración de partículas

Ventajas de los métodos electrónicos :

1. Velocidad
2. Precisión
3. Cálculo automatizado del Hematocrito y constantes
4. Impresión de resultados
•

• El MCV es calculado sobre las bases de la sumatoria

de la altura de los pulsos de las células rojas y
dividido por el conteo de G.R.

• El volumen del paquete celular es calculado del MCV

multiplicado por el conteo de células rojas

• El MCH es calculado del valor de la Hemoglobina y

el conteo de G.R.

• El MCHC es calculado del valor de Hemoglobina y el

Hematocrito
1. La turbidez producida por conteos elevados de
células blancas, pueden alterar el valor de la
Hemoglobina, MVC, y Hematocrito.

2. En LLC y otras leucemias las células son

fácilmente dañadas por la apertura, pudiendo
aparecer falsos conteos bajos de leucocitos
( WIC / WOC )

3. Títulos altos de aglutininas frías, que agregan los

GR a temperaturaambiente, son responsables de
macrocitosis y valores altos de MCHM
 Hematocrito :
Se mide en % y representa la proporción total de
GR en la sangre.

• No se mide directamente con los citómetros de

flujo y se calcula a partir del VCM y en número de
GR. Tiene menor presición

• El hematocrito es medido electrónicamente :

“ el pulso que es generado cuando los GR pasan a
través de la abertura es proporcional a su
volumen “. Se determina comparando el volumen
total o acumulado de GR al volumen total de
sangre en los 11.7ul de la dilución 1:500
 El conteo diferencial manual está
sujeto a varios errores
• Errores en la preparación del frotis
• Errores en la tinción del frotis
• Distribución celular
• Interpretación celular
• Número de células contadas
Un buen diferencial automatizado debe ser capaz de :

1. Identificar células normales y anormales

2. Resultados reproducibles en conteos repetitivos
3. El conteo debe exceder largamente ( 8,000 – 32,000 cel. )
al tradicional conteo manual ( 100 – 200 células )
1. El conteo debe llevarse a cabo en un mínimo lapso
de tiempo
1. Se debe tener capacidad de almacenamiento de datos
 ALARMA LRI EN EL HISTOGRAMA
DE PLAQUETAS

PLT: 94K ul LRI

• Esta alarma se activa
Interferencias en la región baja “low region
por una o varias causas interference”(LRI)
– Microplaquetas
– Fragmentos celulares
– Crioglobulinas
– Inclusiones
eritrocitarias
– Hemólisis
– Residuos en el orificio
del transductor
 ALARMA URI EN EL HISTOGRAMA
DE PLAQUETAS

PLT: 296 K/uL URI

• Esta alarma se activa
por una o varias causas Alarma Interferencias en la región alta
– Acumulación de URI “upper region interference”
plaquetas
– Eritrocitos microciticos
– Macroplaquetas
– Eritrocitos
fragmentados
– Eritrocitos microcíticos
– Satelitosis plaquetaria
– Agregados
plaquetarios
 LOCALIZACIÓN DE LAS ALARMAS REGIONALES EN EL
HISTOGRAMA DE LEUCOCITOS

• Los grupos celulares que se encuentran fuera de las

regiones consideradas como normales, disparan una alarma.
Según la categoría de las células anormales, CELL-DYN
utiliza seis alarmas diferentes
– R0,R1,R2,R3,R4 y RM
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL
HISTOGRAMA DE BLANCOS

• Existen diferentes regiones o puntos de control dentro de las tres

poblaciones de células blancas
• Cuando no se cumplen los criterios de normalidad se muestran las alarmas
R (R0,R1,R2,R3,R4 y RM)
• Las muestra cuyos resultados numéricos estén dentro del rango normal,
con histograma normal y que no presenten alarmas ¨R¨, pueden ser
informadas directamente sin supervisión posterior
• Las muestras que presentan un resultado o histograma anormal con
alarma ¨R¨, requieren posterior supervisión
 Histograma
Influencia del EDTA y la temperatura
 HEMATOLOGÍA NORMAL

Diferencial manual
Linfocitos: 39%
Neutrófilos: 56%
Monocitos: 3%
Bandas:1%
Eosinofilos: 1%
LEUCOCITOSIS CON LINFOPENIA Y NEUTROFILIA, LIGERA
TROMBOCITOSIS

Diferencial manual (CD) Diferencial automatizado

Linfocitos: 4.5% Linfocitos: 8.4%
Neutrófilos:81.5% Granulocitos:87.7%
Monocitos: 5% MID: 3.9%
Bandas: 9%
 ERITROCITOSIS MICROCÍTICA

Diferencial manual (CD) Diferencial automatizado

Linfocitos: 55% Linfocitos: 45.9%
Neutrófilos: 36% Granulocitos: 49.5%
Monocitos: 5 MID: 4.6 %
Bandas: 1%
Basófilos: 3% Valores serie roja alterados
Anisocitosis: + Alarma URI
Poiquilocitosis: +
Policromasia: +
GR nucleados: 1/1000GR
 LIGERA MONOCITOSIS Y EOSINOFILIA
CON NEUTROPENIA

Diferencial manual (CD) Diferencial automatizado

Linfocitos: 34% Linfocitos: 32.6%
Basófilos: 2% Granulocitos: R3 51.6%
Monocitos: 16% MID: R3 15.8 %
Neutrófilos: 26% Poiquilositosis:+
Eosinófilos: 13% Policromasia: + Valores serie roja alterados
Bandas:7% Células en diana: +
Mielocitos: 1% GRnucleados:1/100G
Metamielocitos: 1% Reticulocitos:23/1000GR
 DISPLASIA MEDULAR CON FIBRINA.
CÉLULAS AFECTADAS POR QUIMIOTERAPIA CITÓXICA

Diferencial manual (CD) Diferencial automatizado

Linfocitos: RM 54.3 %
Linfocitos: 28% Granulocitos: RM 33.1 %
Bandas: 11% MID: R3 12.6 %
Monocitos: 24% Reticulocitos: 13/1000GR
Eosinofilos: 3% Anisocitosis: ++ Valores serie roja alterados
Alarma URI
Neutrófilos: 34% Poiquilocitosis: ++
SISTEMA MODULAR TOTALMENTE AUTOMATIZADO

MUCHAS GRACIAS !