MEIOS DE CULTURA

Como preparar
• Meios comerciais devem ser hidratados

• Primeiramente devem ser pesados

• Tansferir para um frasco

• Hidratar em pequena quantidade e misturar

• Depois deve-se acrescentar o restante da água

• Levar o meio para fundir  aquecer

• Distribuir o meio antes de autoclavar - os tubos não
precisam estar esterilizados previamente

• Esterelizar em autoclave por 15 minutos e à temperatura

de 121ºC

• Distribuir o meio após a autoclavação - tubos, frascos,

placas, pipetas e vidrarias  estéreis

• Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-

abertas - tampas fechadas não permitem a entrada do
vapor
 Classificação dos meios
• Meios para transporte e conservação
• Meios para cultivo e isolamento
• Meios comerciais para provas de identificação
 Transporte e conservação
• Cary Blair
• Salina Tamponada
• Meio Stuart
• Agar nutriente
 Cary Blair
• Microrganismos intestinais patogênicos e outros
coliformes fecais sobrevivem bem neste meio.

• ƒ
A carência de uma fonte de nitrogênio impede
consideravelmente a multiplicação dos microrganismos
e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles.

• Utilizado para transporte de material fecal e

consequente conservação dos microrganismos.
 Salina Tamponada
• Meio líquido tamponado que mantém a bactéria viável.

• Usado como meio de transporte de amostras biológicas.

• Contém NaCl, fosfato dipotássico anidro, Glicerina

bidestilada e água destilada.
 Meio Stuart
• A carência de uma fonte de nitrogênio impede
consideravelmente a multiplicação de microrganismos e
a composição nutritiva garante a sobrevivência deles.

• Usado para transporte de diversos materiais e

consequente conservação dos microrganismos.

• ƒ
Conservação de microorganismos patogênicos como:
Haemophilus spp., Pneumococcus, Salmonella spp.,
Shigella spp. entre outros.
 Agar Nutriente
• É um meio relativamente simples, de fácil preparação e
barato, muito usado nos procedimentos do laboratório
de Microbiologia.

• Usos:
• ƒ
Análise de água, alimentos e leite
• Meio para cultivo preliminar das amostras submetidas a
exames bacteriológicos
• Isolamento de organismos para culturas puras.
• Observar esporulação de espécies de bacilos Gram
positivos.
• O uso mais frequente - conservação de culturas em
temperatura ambiente, para os laboratórios que não
dispõem de crioconservação (freezer à - 70ºC).
 Cultivo e Isolamento
• Ágar TSA • Caldo BHI
• Ágar Chocolate • Caldo Selenito
• Ágar MacConkey • Caldo Tetrationato
• Ágar Sangue • Löwenstein Jensen
• Ágar CLED • Meio bifásico: Löwenstein e
• Ágar Salmonella-Shigella Middlebrook,
• Ágar Manitol (MSA)
• Ágar EMB
• Ágar Mycosel
• Ágar Sabouraud
• Ágar Verde Brilhante (BGA)
• Caldo Tioglicolato com indicador
• Caldo Tioglicolato sem indicador
 Tryptic Soy Agar (TSA)
• Caldo Triptona de Soja com 0,1% Agar

• Também chamado de CASO Agar (Casein-peptone

soymeal-peptone agar)

• É recomendado para o cultivo de bactérias não

fastidiosas – uso geral.
 Pseudomonas
aeruginosa

Staphylococcus
Escherichia coli
aureus
 Caldo BHI
• Brain Heart Infusion – meio enriquecido
• É um meio derivado de nutrientes de cérebro e coração,
peptona e dextrose.
• Fornece fontes de nitrogênio, carbono, enxofre e
vitaminas.
• Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos,
meningococos, enterobactérias, não fermentadores,
leveduras e fungos.
• Pode ser utilizado na preparação do inóculo para teste
de susceptibilidade aos antimicrobianos
• Realização de teste de coagulase em tubo
• Teste de crescimento bacteriano a 42 e 44°C
• Teste de motilidade em lâmina.
 Agar Sangue
• Meio enriquecido e diferencial
• Compra-se a base comercial, depois de autoclavada e
resfriada, adiciona-se sangue.
• A conservação dos eritrócitos íntegros favorecem a
formação de halos de hemólise nítidos.
• Diferenciação de Streptococcus spp. e Staphylococcus
spp.
 Bacillus
cereus
-hemolítico

Enterococcus
faecalis
Estreptococcus
-hemolítico Não hemolítico ()
 Agar Chocolate
• Meio de cultura enriquecido

• À base do meio, é adicionado sangue de cavalo,

carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com
que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina,
compostos fundamentais para o crescimento dos
microrganismos exigentes.

• Utilizado no cultivo de organismos fastidiosos (Ex.:

Neisseria, Haemophilus)

• Alguns organismos que não crescem em meios comuns

são capazes de crescer neste meio
 Neisseria
gonorrhoeae

Staphylococcus
Escherichia coli
aureus
 Agar Thayer-Martin
• Thayer-Martin Chocolate é um meio rico seletivo

• É superior a outros meios de cultivo destinados para o

isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria
meningitidis

• Contém em sua fórmula antibióticos que inibem o

crescimento de Neisserias saprófitas e outras bactérias,
evitando contaminações.
Neisseria gonorrhoeae
 Agar Salmonella-Shigella (SS)
• Seletivo e diferencial
• Possui componentes (sais de bile, verde brilhante e
citrato de sódio) que inibem microrganismos Gram
positivos.
• O meio possui lactose, que permite diferenciar bactérias
lactose positivas e negativas
– Lactose positivas- produzem ácido que na presença
do indicador vermelho - formação de colônias de cor
rosa
– Lactose negativas- formam colônias transparentes.
• ƒ
Permite a detecção de H2S - formação de colônias de
cor negra no centro.
 Agar MacConkey
• Seletivo e diferencial

• O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos

Gram positivos.

• ƒA concentração de sais de bile é relativamente baixa,

por isso não é tão seletivo para Gram negativos como,
por exemplo, o ágar SS.

• Usado para isolar bacilos Gram negativos

(enterobactérias e não fermentadores) e verificar a
fermentação ou não da lactose.
 Pseudomonas
aeruginosa

Escherichia
coli Salmonella sp.
 Meio Hektoen
• É um meio seletivo e diferencial

• Utilizado para detectar a fermentação de lactose e

produção de H2S

• Possui a capacidade de inibir o crescimento de bactérias

não-entéricas

• Fermentados de lactose - amarelo ou salmão

• Não fermentadores - sem cor
• Produção de H2S - precipitado preto
Salmonella enteridis

Escherichia coli
 Agar Sal Manitol
• Meio seletivo e diferencial

• Utilizado para selecionar Staphylococci, que crescem

em altas concentrações de sal

• Diferencia Staphylococcus aureus de outros

Staphylococci

• Após o crescimento, Staphylococcus aureus é amarelo

(fermenta o manitol), outros Staphylococci são brancos
 Staphylococcus
epidermidis

Staphylococcus
aureus Escherichia coli
 Agar CLED
• Cystine Lactose Eletrolyte Deficient – Seletivo e
diferencial

• A deficiência de eletrólitos inibe o véu de cepas de

Proteus.

• Usado para isolamento e quantificação de

microrganismos presentes em amostras urina.

• Eficiente para isolar e quantificar microrganismos Gram

positivos, Gram negativos e leveduras.

• ƒ
Colônias lactose positivas: cor amarela/ negativas: cor
azul.
 Staphylococcus
aureus

Proteus
mirabilis Escherichia coli
 Agar verde brilhante (BGA)
• É um meio altamente seletivo, usado para o
isolamento de outras salmonelas que não a S. Typhi,
existentes nas fezes e em outros materiais.
• A presença de extrato de levedura e duas peptonas
fornecem os nutrientes
• A lactose e a sacarose, juntamente com o vermelho de
fenol, fornecem um sistema de diferenciação de
fermentadores da lactose e/ou sacarose (ex: E. Coli).
• Salmonelas não produzem ácido a partir destes
açúcares.
• O verde brilhante é o agente seletivo que inibe a flora
de acompanhamento.
Salmonella
sp.

Escherichia
coli
 Agar Eosina Azul de Metileno
• Agar EMB é um meio para diferenciação ligeiramente
seletivo
• Utilizado para o isolamento e diferenciação de bacilos
entéricos gram-negativos (Enterobacteriaceae e outros
bastonetes gram-negativos).
• Corantes Eosina Y e azul-de-metileno inibem as bactérias
gram-positivas num determinado grau - diferenciar os
fermentadores
• Coliformes produzem colónias pretas-azuladas
• Salmonella e Shigella são incolores ou têm uma cor âmbar
transparente, não fermentam lactose
• Escherichia coli poderão apresentar um reflexo verde
metalizado característico, devido à rápida fermentação da
lactose
 Klebsiella
pneumoniae

Escherichia Salmonella
coli enteridis
 Meio Löwenstein Jensen
• A base do meio é constituída por ovos integrais, o que
permite amplo crescimento das micobactérias

• O crescimento é satisfatório para o teste de niacina (que

é positivo para Mycobacterium tuberculosis)

• Utilizado para isolamento primário das micobactérias

• Crescimento bom a excelente (colônias amarelas) -

Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium

• Incubação por 60 dias

Mycobacterium
tuberculosis
 Agar Mycosel
• A Cicloheximida, um dos componentes do meio, serve
para selecionar dermatófitos.
• O cloranfenicol inibe o crescimento de bactérias e
alguns fungos filamentosos.
• Usado para isolamento de fungos patogênicos,
principalmente dermatófitos, a partir de material de
investigação contaminado.
• Crescimento bom a excelente: Trichophyton
verrucosum, Candida albicans
• Crescimento inibido: Aspergillus niger , Candida
tropicalis, Penicillium spp.
Candida albicans
 Agar Sabouraud
• Meio com nutrientes que favorece o crescimento
de diversos fungos leveduriformes e
filamentosos.

• Cultivo e crescimento de espécies de Candidas

e fungos filamentosos, particularmente
associados a infecções superficiais.

• Caracterização macroscópica do fungo

filamentoso (colônia gigante).
 Sporothrix
schenckii

Candida albicans

Microsporum
canis
 Meios para identificação
• Ágar TSI
• CaldoTSB • Ágar Dnase
• Meio SIM • Ágar Esculina
• Ágar Citrato Simmons • CTA – Cystine Tryticase Agar
• Ágar Fenilalanina • Meio base para oxidação e
• Ágar base uréia fermentação - OF
• Caldo Triptona • Base de nitrogênio para
• Caldo Nitrato leveduras
• Caldo Malonato
• Ágar Bílis-Esculina
• Ágar Sangue
• Caldo base de Moeller
Veremos os meios para identificação na
nossa próxima aula!