Sunteți pe pagina 1din 54

INGINERIA TISULARA

A PIELII
PIELEA
I. EPIDERMA
II. DERMA
III. HIPODERMA

I. EPIDERMA

A. STRATURI B. TIPURI DE CELULE


epiderma
1. Stratul cornos
2. Stratul lucid
} neviabilă
(anucleată)
1. Keratinocite
2. Melanocite
3. Stratul granular 3. Celule Langerhans
4. Stratul spinos
5. Stratul bazal
} epiderma
viabilă
(nucleată)
4. Celule Merkel
KERATINOCITE (KC)
Număr
• aprox. 95% din celulele epidermei
Funcţie distinctiva
• sinteza filamentelor intermediare:
(cito)keratine
• suferă un program de diferenţiere
complex şi înalt coordonat, de la
stratul bazal la cel superficial =
DIFERENŢIERE TERMINALĂ
• Markerul pentru diferenţierea
terminală este involucrina
• prezintă pe suprafaţa lor o serie de
receptori din categoria
INTEGRINELOR
Keratinocitele contribuie la vindecarea rănilor cutanate
KC bazale de la marginile rănilor sunt activate și ințiază modificări
de morfologie celulară precum și în capacitatea de a migra. Astfel,
KC din marginea “leading” migrează de-a lungul cheagului de
sânge, în timp ce KC bazale din spate încep să prolifereze și să
diferențieze, restabilind funcția de barieră a epiteliului.
II. DERMA
= reprezentata de un tesut conjunctiv ce contine:
- Celule: fibroblaste, macrofage, mastocite, limfocite,
plasmocite infiltrate ca raspuns la diferiti stimuli
- Structuri nervoase si vasculare
- Matrice extracelulara: fibre de colagen si elastina
Functii: - confera pielii volum, rezistenta si elasticitate
- protejeaza organismul de vatamari mecanice si termice
- intervine in repararea si remodelarea tegumentului
1) Strat papilar
2) Membrana bazala
3) Celule bazale
4) Epiderma
III. HIPODERMA =
Structura pielii
Este situata sub derma profunda
- contine foliculi pilosi activi si glande sudoripare
- reprezintă un rezervor de factori de creștere (adipokine), unele cu
activități anti-inflamatorii
- exercită efecte asupra dermei crescând sinteza de acid
hialuronic de către fibroblaste
FIBROBLASTE

= celule fusiforme cu citoschelet actinic predominant


= incluse in MEC cu care interactioneaza prin integrine
FSP1 (fibroblast-specific protein 1) = specific FB din tes normale
= membru al familiei de proteine de legare a Ca – S100
Activarea fibroblastelor de catre factori de crestere (TGFbeta)
proteine din MEC și
chemochine (MCP-1) si
determina dobandirea unui fenotip miofibroblastic asociat cu:
- expresia actinei musculare (a-smooth-muscle actin)
- activitate proliferativa crescuta
- secretia crescuta de proteine MEC (colagen I, tenascina)
Heterogenitatea
fibroblastelor
dermale (FbD) și
rolurile lor în
remodelarea MEC.

Structura pielii umane ce evidențiază heterogenitatea


dermală. BM = membrana bazala; SF: FbD superficiale;
DF: FbD profunde; HF: foliculi piloși.
FbD superficiale
reglează negativ
fibroza și prezintă
supraexpresia
genelor anti-fibrotice
iar FbD profunde
promovează fibroza
și prezintă
supraexpresia
genelor pro-fibrotice.
SECVENTA DE EVENIMENTE DIN PROCESUL DE VINDECARE
NATURALA A RANILOR

TE a pielii si interventia chirurgicala – nu sunt o necesitate


frecventa in tratamentul leziunilor de la nivelul pielii
In majoritatea cazurilor:
- capacitatea naturala de vindecare a pielii este suficienta
si ar trebui asistata prin interventii ca:
dezinfectia
bandajarea rănii

Vindecarea leziunilor = proces dinamic si complex care are ca


rezultat restabilirea integrității structurale si functiei tesutului vatamat
Principalele raspunsuri la vatamarile tisulare:
1. Repararea normala – restabilirea echilibrului dintre formarea si
remodelarea cicatricei
2. Regenerarea – proces de refacere exacta a structurii
tisulare pierdute
Se produce in mod natural: La salamandre si crab
La om: epiderma, ficatul etc.
3. Raspunsuri de vindecare patologice: a) vindecarea excesiva
(depozitarea excesiva de tesut conjunctiv):
fibroza (keloizi si cicatrice hipertrofice la nivelul pielii)
formarea de aderențe, contracturi
b) vindecarea deficitara: depozitarea insuficienta de tesut conjunctiv
(ulcerele cronice)

Regenerarea Reparare normala


Inlocuirea exacta Restabilire echilibru

Leziuni
tisulare

Vindecare deficitara Vindecare excesiva


Ulcere cronice Fibroza, keloizi,
contracturi, aderențe

Raspunsuri posibile la leziunile tisulare


Raspunsul de vindecare incepe in momentul lezarii tesutului cu
hemostaza:
Plachetele sanguine sunt eliberate din vasele distruse si :
- formeaza cheagul de sange
- secreta factori de crestere:
PDGF, TGF-β, EGF si IGF-1 - implicati in initierea repararii tesutului
Acestea sunt molecule chemotactice si mitogene pentru celulele
inflamatorii si din tesutul conjunctiv
Faza inflamatorie timpurie
Neutrofilele se fixeaza de celulele endoteliale din peretii vaselor
de sange din vecinatatea ranii (marginatie), isi modifica
morfologia pentru a se deplasa prin jonctiunile inter-celulare
(diapedeza) si migreaza catre situsul ranii (chemotaxie)
Produc elastaza si colagenaza ce faciliteaza migrarea
celulara la situsul ranii
Fagociteaza microorganismele de la situsul rănii
Faza inflamatorie tarzie
Monocitele sunt atrase la nivelul ranii de o varietate de
chemoatractanti unde functioneaza ca celule extrem de active:
- fagociteaza microorganismele, debriuri celulare, neutrofile
senescente si fragmente din MEC
- elibereaza citokine si factori de crestere la situsul ranii
(PDGF, TGF-β, VEGF) ce atrag fibroblaste, keratinocite si celule
endoteliale si stimuleaza proliferarea lor
- secreta enzime proteolitice (colagenaze, elastaza etc.) care
pot curata tesutul de debriuri celulare
Faza de proliferare

Este caracterizata prin inlocuirea matricei provizorii de fibrina


cu tesutul de granulatie nou format
Principalele etape ale acestei faze sunt:
Angiogeneza
Este esentiala pentru a furniza o rezerva de sange la situsul leziunii,
care sufera un proces de vindecare activă
Formarea tesutului de granulatie
Tesutul de granulatie este compus din:
- vase de sange noi
- fibroblaste, miofibroblaste
- celule inflamatorii
- MEC (COL, GAG si GP: fibronectina si tenascina)
Epitelizarea
= procesul de migrare a keratinocitelor deasupra situsului ranii pentru
a forma o bariera intre leziune si mediul exterior
Cand au terminat de migrat, keratinocitele secreta proteinele
care constituie membrana bazala
- se divid si diferentiaza restabilirea stratului epitelial
Faza de remodelare
= caracterizata prin:
- contractia ranii (deplasarea centripeta a marginilor ranii), ce
faciliteaza inchiderea ranii si formarea cicatricei
- remodelarea MEC in timpul tranzitiei de la tesutul de
granulatie la cicatrice prin sinteza si degradarea continua a
componentelor sale moleculare (in special cresterea depozitarii
colagenului de tip I)
In plus, se constata scaderea numarului de vase sanguine si
disparitia miofibroblastelor prin apoptoza
INGINERIA TISULARA A PIELII

are drept scop dezvoltarea de substituenti sau echivalenti de piele


(SP) functionali care pot fi folositi pentru acoperirea ranilor sau
inlocuirea pielii vatamate
Situatii patologice in care se apeleaza la
utilizarea SP
Rănile superficiale se pot
Epidermă
vindeca prin capacitatea de Dermă
Arsură
superficială
autoregenerare a pielii, cand Subcutanat (grad 1)
se inregistreaza migrarea Mușchi
centripetă a keratinocitelor
de la marginile ranii
Arsură parțială
Desi epiderma este capabila (grad 2)
de auto-regenerare, exista
situatii (leziuni extinse si/sau
profunde) cand regenerarea
Arsură totală
naturala este insuficienta: (grad 3)
situatie in care se apeleaza
la SP
Ranile totale care au mai mult de 1 cm în diametru necesită
utilizarea grefelor de piele pt. a preveni formarea cicatricelor
extinse, care duc la o mobilitate redusă şi defecte estetice

Tipuri de leziuni ale pielii:

- arsurile (cele mai comune si grave traume ale pielii)

- excizii chirurgicale intinse efectuate in special in tumori


sau infectii necrozante la nivelul pielii

- defecte tegumentare mari generate prin indepartarea


unor cicatrice extinse care influenteaza functiile articulatiilor si
extremitatilor

Derma are o capacitate foarte mica de regenerare


Țesutul cicatriceal care se formeaza in absenta dermei este lipsit de
elasticitate, flexibilitate, forta dermei normale
TE a pielii a fost concentrata in principal pe:
Furnizarea si imitarea caracteristicilor structurale si biologice ale:
- dermei
- epidermei sau
- ambelor tesuturi
dar nu pe structurile mai putin importante:
- foliculii pilosi
- glande sebacee
Reprezinta solutia ideala de acoperire tegumentara in situatiile in
care suprafata cutanata ce trebuie inlocuita este foarte mare sau
rezervele tegumentare ale pacientului nu permit o recoltare de piele
in vederea acoperirii leziunii

Solutii de acoperire a unei rani cu defect tegumentar

1) Grefa de piele autologa (Autogrefa)

- ce este prelevata din zonele de piele intacta de la subiectul


ranit este substituentul ideal pentru o plaga cu defect tegumentar
Avantajele grefei de piele autologa:

- previne pierderile de lichid


- constituie bariera împotriva bacteriilor
- este o solutie “ieftina”
- poate fi aplicata intr-o singura etapa chirurgicala
- nu devine hipertrofica
- este flexibila
- este aplicabila si pe plagi cu suprafata neregulata
- nu necesita crioconservare
- nu prezinta pericolul transmiterii infectiilor virale sau bacteriene
- nu genereaza raspuns imun
- este durabila

2) Homogrefe (alogrefe)
la care se apeleaza cand zonele donatoare de piele ale individului
sunt insuficiente
Pot fi: - recoltate de la cadavre
- provenite din banci de tesuturi
Avantajele alogrefelor:
Teoretic reprezintă substratul dermic ideal datorita structurii
colagenice tridimensionale ce contine si membrana bazala
- manifesta antigenicitate atenuata prin crioconservare
- permit: dezvoltarea fibroblastelor
dezvoltarea neovaselor
epitelizarea
conducand la vindecarea plagilor fara:
- reactie inflamatorie evidenta
Dezavantaje
- potential pericol de transmitere a unor boli contagioase
- reprezintă o rezolvare temporara a problemei (pot fi supuse
respingerii imune şi regiunile lezate trebuie in final sa fie acoperite
cu grefe autologe)

a) Alodermul
Este un substituent dermal acelular obtinut din pielea de
cadavru crioconservata (se indeparteaza stratul epitelial)
- ofera un suport dermal non-antigenic
- pastreaza intacta membrana bazala
Peste el se aplica o grefa epiteliala foarte subtire autologa
- ofera rezultate bune ale cicatrizarii pe termen lung si o buna
integrare in patul ranii permițând popularea cu celule și neovase

b) Membranele amniotice = pansamente biologice

Avantaje:
= Usor de aplicat si ieftine
- sunt transparente
Actioneaza ca bariera biologica:
- pentru stoparea pierderilor proteice si electrolitice
- impotriva asaltului microbian
Sunt mentinute pe plagă 7-10 zile (perioada in care se produce re-
epitelizarea)
Dezavantaje:
Dificil de obtinut, prelucrat si depozitat
Necesita schimbare la fiecare 2 zile
Se dezintegreaza usor
Risc de transmitere a bolilor contagioase
3) Heterogrefele (xenogrefe)

Pielea porcina = constituie un material de acoperire


temporara a: ranilor provocate la situsurile donor de piele
arsurilor de grad II
= usor de procurat si
- relativ accesibila ca pret
Permacol: substituent de piele fibros, transparent, flexibil, steril
constituit din: colagen dermal porcin cross-linkat cu di-
izocianat si din fibre de elastina din dermul porcin

Dezavantaje xenogrefelor porcine:

Nu pot obtine un aport adecvat de


sange si formeaza crusta
Risc de transmitere a bolilor
contagioase
Risc de rejectie tisulara
Xenogrefa porcina
Colagenul dermal porcin
(Permacol) aplicat pe o
rana de grosime
completa intr-un model
de șoareci Wistar albino

Grupul control (a) – tratat


cu pansament imbibat in Aspectul rănilor cutanate la grupul control (a) și cel
solutie salina. Grupul 2 tratat cu Permacol® (b) după 3 zile de tratament
(b) – tratat cu Permacol
fixat cu sutura de
polipropilen.

Grupul tratat cu Permacol


a prezentat rezultate
superioare în termeni de
reacție inflamatoare,
raportul colagen tip
I/colagen tip III și rata de Aspectul rănilor cutanate la grupul control (a) și cel
contracție a rănii. tratat cu Permacol® (b) după 14 zile de tratament
4. Substituentii (echivalentii) de piele (SP)

- realizati datorita nevoii imperioase de a produce un tesut


biocompatibil, care sa inlocuiasca structural si functional pielea
vatamata

SP trebuie sa indeplineasca urmatoarele proprietati:

- de element dermal capabil de:


- sustinerea unei reparari dermale
- furnizarea unui suport pentru epiderma
- de epiderma capabila de a: realiza usor inchiderea ranii
- restabili proprietatea de bariera fiziologica a pielii
- de mediu permisiv pentru componentele sistemului imun,
sistemului nervos si sistemului vascular
- de tesut capabil de a reduce timpul de cicatrizare
de a restabili pigmentarea pielii
de a preveni infectiile
de a evita defectele de vindecare (contracturile)
Clasificarea SP:

1) In functie de structura anatomica:


- Epidermali
- Dermali
- Dermo-epidermali

2) In functie de durata de acoperire:


- Permanenti
- Semi-permanenti
- Temporari

3) In functie de tipul de biomaterial:


- Biologici: SP autolog, alogenic, xenogenic
- Sintetici: biodegradabili, ne-biodegradabili

4) In functie de compozitia SP in ce priveste componenta celulara:


- Celulari
- Acelulari

5) In functie de momentul popularii biomaterialului cu celule:


- Populați cu celule In vitro sau In vivo
SP temporari

Asigura inchiderea fiziologica tranzienta a ranilor si confera un


grad de protectie fata de traume mecanice si agenti bacterieni
Sunt folositi ca:
1) pansamente pe situsuri donor de piele pentru a facilita
atenuarea durerii si epitelizarea
2) pansamente pe rani superficiale
3) pentru a furniza o inchidere fiziologica temporara a ranilor
dermale profunde produse prin excizie

SP permanenti

Caracterizati prin 2 tipuri de abordare:


1) Folosirea unui SP bistratificat cu:
- un strat intern ce este incorporat la situsul ranii ca
derma permanenta
- un strat extern ce este de natura sintetica care:
- de regulă urmeaza a fi inlocuit de autogrefa epidermală
2) Pot fi reprezentati fie de componenta epidermala
fie de componenta dermala
Acesti produsi nu reprezinta dpdv tehnic SP deoarece nu constituie
o structura bistratificata

Substituentii de piele pot fi generati prin:

Cultivarea si cresterea celulelor stem sau a celulelor


epidermale/dermale pe analogi de MEC sau în structuri scaffold
sintetice sau naturale

Factori esentiali pentru producerea de SP:


- Tipul celular

- Natura si forma substratului celular

- Factorii de crestere

- Sisteme de cultura celulara adecvate


Realizarea culturilor de keratinocite

1975: Rheinwald si Green realizeaza culturi si subculturi de


keratinocite, pe un substrat celular reprezentat de fibroblaste de
soarece 3T3, iradiate ce indeplinesc un rol benefic pentru:
- supravietuirea si proliferarea keratinocitelor
Reprezinta momentul de cotitura in dezvoltarea culturilor de
celule epiteliale pentru acoperirea unor suprafete arse intinse, cu
material autolog obtinut prin cultura (solutie vitala in cazul pacientilor
aflati in stare critica, ale caror rezerve tegumentare sunt deficitare)

Aceasta metoda a facut posibila, pentru prima data:


- multiplicarea keratinocitelor în cultură
- utilizarea lor in scop terapeutic obtinerea
epiteliului de cultura (CEA = cultured epithelial autografts) si
utilizarea lui (1979) in acoperirea arsurilor de gradul III
! Dintr-o piesa biopsica cutanata de 2 cm2 rezultă un numar
foarte mare de celule epiteliale obtinerea unei suprafete adecvate
de epiderm in aproximativ 3 saptamani
Prin introducerea fibroblastelor in cultura (strat “feeder” de
fibroblaste murine – linia celulara 3T3 - iradiate, pentru a preveni
propria lor proliferare) s-au creat conditii asemanatoare modelului „in
vivo”, pentru cresterea keratinocitelor (epiteliu de cultura)

Integrarea unui epiteliu de cultura la nivelul patului receptor


= diferita de cea a grefei autologe de piele libera

Epiteliul de cultura nu prezinta tesut conjunctiv subiacent deoarece


chiar daca un anumit numar de fibroblaste din stratul ”feeder” raman
atasate de stratul epitelial, multiplicarea lor este stopata datorita
iradierii. Deci, stratul epitelial va fi in contact direct cu patul receptor
al rănii, iar procesul de revascularizare a grefei va implica
mecanisme diferite fata de cele ale unei grefe obisnuite de piele

Avantaje:
Epiteliul de cultura, asigura bune conditii pentru multiplicarea
melanocitelor, invazia si proliferarea celulelor Langerhans
Neajunsuri ale punerii in practica a trasplantului
de epiteliu de cultura

Lipsa unui substrat dermic care

- sa permita o buna integrare a celulelor epiteliale și


- sa constituie un suport mecanic pentru acestea
este considerata principala cauza incriminata in vindecarile
defectuoase cu epiteliul de cultura

Timpul destul de lung, necesar obtinerii acestor neoepitelii


(14-21zile)

Dificultatea de a manipula epiteliul de cultura (fragil)

Obtinerea unor cicatrice defectuoase

Costurile foarte ridicate ale procesului tehnologic de obținere


Substituenti ai pielii obtinuti prin inginerie tisulara

a) Substituenti epidermali
Descoperirea lor se datoreaza cercetarilor efectuate de
Rheinwald si Green (1975):
- au realizat pentru prima oara culturi de keratinocite in monostrat
O’Connor (1981): - a introdus in clinica, grefarea subiectilor cu arsuri
cu autogrefe epidermale (keratinocite)
1988: s-a realizat primul produs epidermal comercial, pentru uz clinic
(Epicel) = KC autologe atașate de un tifon care se îndepărtează la
aprox. 1 săptămână după grefare

Epicel
(Genzyme Corp.)
Avantajele substituentilor epidermali:
- pot fi obtinute suprafete importante intr-un timp relativ scurt, din
esantioane de dimensiuni reduse (cativa cm2 )
- functioneaza ca modalitate de acoperire permanenta a plagilor
- nu determina reactia de respingere
Dezavantajele substituentilor epidermali
- prezinta instabilitate mecanica (fragilitate) prin structura de
tip monostrat (lipsita de suportul dermic)
- flictenizeaza cu usurinta
- rezultatul estetic este defectuos
- au un cost ridicat

Pe langa producatorii de autogrefe epiteliale exista mai multe


grupuri producătoare de culturi de alogrefe epiteliale

Produsele alogene au avantajul unor costuri de fabricaţie reduse in


comparatie cu produsele autologe
Totusi, o deficienţă a ambelor produse este faptul că acestea au o
rata de fixare scazuta care poate conduce la formarea de pustule pe
piele

Inlocuitori autologi epidermali disponibili în comerţ pentru utilizarea


clinica sunt enumerati în Tabelul 1
Laserskin (dezvoltat de Fidia Advanced Biopolymers)
Este compus din keratinocite autologe cultivate pe o membrană pe bază de
acid hialuronic. Această membrană prezintă micro-interstitii circulare (taiate
cu laserul) de 40 micrometri in diametru ce penetreaza 20 micrometri in
adancimea materialului.
Transplantul se realizeză când keratinocitele au atins subconfluenta. Poate
fi folosit in combinatie cu substituentul dermal Integra

Fotomicrografia creșterii celulare pe Laserskin


Fotografia Laserskin și topografia orificiilor tăiate cu laser
Tabel 1

Jean J, Garcia-Pérez ME, Pouliot R (2011) Bioengineered Skin: The Self-Assembly Approach.
J Tissue Sci Eng S5:001. doi:10.4172/2157-7552.S5-001

b) Substituenti dermali (Tabel 2, slides 35 și 36)

Au fost dezvoltati pentru a rezolva neajunsurile prezentate de substituentii


epidermali
Echivalentii dermali şi epidermali trebuie aplicati secvențial pe rană,
deoarece buna vascularizare a ranii trebuie să fie realizata înainte de
aplicarea stratului epidermal
Tabel 2

Dixit și colab., Journal of Biological Engineering, 11, 49 (2017)


SUBSTITUENȚI AI DERMEI (Continuare)

Dixit și colab., Journal of Biological Engineering, 11, 49 (2017)


1. Integra

- Dezvoltat de Yannas si Burke (1980) - prin studii laborioase in


laboratoarele de la Massachusetts General Hospital si Massachusetts
Institute of Technology
= un produs constituit dintr-o membrana bistratificata:

1- Stratul dermic (intern) - grosime de ~ 2 mm, contine:


colagen bovin
glicozaminoglicani (condroitin 6-sulfat)
cu porozitate si capacitate de biodegradare controlate:
- pori de ~70-200 μm
Serveste ca suport pentru infiltrarea in patul ranii a fibroblastelor si
celulelor endoteliale din tesutul dermic adiacent, precum si a macrofagelor si
limfocitelor
Este degradat pe masura ce vindecarea progreseaza si inlocuit cu o
matrice predominant colagenica nou sintetizata de fibroblaste

2- Stratul epidermic (extern)


= este un substituent temporar constituit dintr-un polimer de
polisiloxan (silicon) – (grosime de 0,23 mm)
- este inlocuit dupa aproximativ 2-3 saptamani (cand s-a
format neoderma vascularizata) cu o autogrefa epidermala fina
Prin proliferare și migrare peste patul dermic, celulele din
autogrefa epidermala formeaza un strat confluent inchizand rana
Dermă Plasă de
Epidermă Formarea vaselor Piele regenerată
intactă Îndepărtare grefă de piele
intactă de sânge
membrană
Membrană silicon
silicon

Refacere
Țesut Piesă piele flux sânge
subiacent sintetică cu 7 zile după aplicare 14+ zile după aplicare 14+ zile după aplicare 35+ zile după aplicare
membrană
silicon

Procesul de vindecare a pielii utilizand SP “Integra”

1996 – FDA a aprobat utilizarea Integra pentru tratarea arsurilor


De atunci peste 20 000 de pacienți au fost tratați cu succes
Avantajele substituentului dermal “Integra”:
- este superior substituentilor tegumentari monostratificati
- rezultatul estetic in timp este mult mai bun
- este disponibil imediat si in orice cantitati
- permite amanarea autogrefei epiteliale pana in momentul in
care se pot obtine autogrefele
- functioneaza ca un suport bioresorbabil, potentand cresterea
neo-dermului (asemanator cu cel normal)
- poate ramane la nivelul plagii pana la aproximativ 2 luni, fara
a forta astfel aplicarea imediata a autogrefelor
- ridicarea stratului siliconic (extern) este atraumatica,
neimplicand excizia chirurgicala
- nu genereaza probleme imunologice (de respingere) ale
produsului
Este un SP acelular indicat in tratamentul plagilor post-
excizionale și al arsurilor de gradul III (vezi slide 40)

2. Biobrane™ este constituit dintr-un film subție extern de silicon


(analog epidermal) și unul intern 3D filamentos din nylon (analog
dermal) pe care sunt legate peptide colagenice
Este folosit ca pansament temporar și îndepărtat când rana se
vindecă sau autogrefa epidermală este disponibilă
Este indicat în tratamentul arsurilor complete excizate
Folosirea Integra la pacienta de 46 ani cu
scleroderma (boala auto-imuna sistemica
caracterizata prin durificarea dermei) ce a
prezentat infectie necrozanta la nivelul
pieptului si bratului.
Plasare Integra la 25 de zile dupa debridarea
zonei necrozate

Ziua 46 – formare de neoderma cand stratul


extern, siliconic al Integra a fost indepartat

Grefa epidermala ce substituie stratul siliconic


al Integra
3. Dermagraft

Este un SP celular constituit dintr-o plasa (mesa) de Vicryl


(Polyglactin 910):
= un copolimer sintetic bioresorbabil de polilactida si
poliglicolida derivate din, respectiv, acizii:
- polilactic
- poliglicolic
impregnata cu fibroblaste neonatale umane care:
- secreta proteine ale MEC (ex., colagen) si factori de
crestere mitogenici și chemotactici
- este non-antigenic si non-pirogenic

Studiile clinice au pus insa in evidenta reactii imunologice


impotriva fibroblastelor
Este depozitat la -70°C si comercializat pe gheata uscata
Dupa decongelare, inainte de implantare, materialul este testat dpdv
al activitatii metabolice a celulelor
= utilizat ca SP in arsuri, ulcere cronice (picior diabetic), plagi taiate
Dermagraft

(A) Obținere Dermagraft; (B) Secțiune transversală Caseta cu Dermagraft


a dermagraftului colorat cu hematoxilina eozina; (C)
Plasarea dermagraftului pe un picior cu ulcer
diabetic.
Evolutia ranilor traumatice tratate cu DERMAGRAFT®

2013 – aprobare FDA pentru tratarea


ulcerelor diabetice
4. TransCyte = SP bistratificat, celular
- Compoziție similară Biobrane
1.Analogul epidermal extern: un film de silicon neporos
2. Analogul dermal intern: meșă de nylon acoperită cu COL dermal
porcin, populată cu FB izolate din prepuț (de la noi născuți) care
produc: COL I, fibronectină, GAG și factori de creștere

Prin crioconservare (- 700C): - FB sunt distruse reducând răspunsul


imun al gazdei
- produsii de sinteza ai FB sunt pastrati si stimuleaza
procesul de vindecare

Produsul se aplica cu analogul dermal pe rana


Mesa de nylon asigura flexibilitate si aderenta excelente
Indicatii:
- inchiderea arsurilor superficiale si dermale medii (la copii)
(produsul are aprobare FDA)
- inchiderea temporara a ranilor taiate inainte de aplicarea
grefei epidermale autologe
Avantaje TransCyte Dezavantaje TransCyte

Analog bi-stratificat Necesită congelarea înainte de folosire


Aderență excelentă Este relativ scump
Reduce durerea
Furnizează componente
dermale bioactive
Menține flexibilitatea țesutului
Funcție de barieră externă
Stratul sintetic
extern

Stratul sintetic
intern

Zona
vătămată

Componente ale TransCyte Structura bi-stratificată cu stratul intern bioactiv


TransCyte pt arsuri partiale la TransCyte pentru arsuri la nivelul
nivelul mainii piciorului (3 zile)

TransCyte pe arsura la nivelul Transcyte pe arsura la nivelul piciorului


piciorului (10 zile) (12 zile) – SP in curs de indepartare
c) Substituenti dermo-epidermali
Contin atat componentele celulare ale epidermei cat si ale dermei (v.
Tabel 3)

Jean J, Garcia-Pérez ME, Pouliot R (2011) Bioengineered Skin: The Self-Assembly Approach.
J Tissue Sci Eng S5:001. doi:10.4172/2157-7552.S5-001

Toleranţa imunologică a gazdei faţă de fibroblastele alogene este


discutata controversat: Se pare că o grefare pe termen lung a
acestor celule (până la două luni) este posibila
Totuși, keratinocitele autologe sunt cele mai potrivite pentru
generarea unui substituent dermo-epidermal permanent
1. Sistemul “TissueTech Autograft” proiectat de Fidia Advanced
Biopolymers este un produs disponibil in comert care permite
inchiderea permanenta a ranilor
- componenta celulară: fibroblaste şi keratinocite autologe,
cultivate pe substrate pe bază de acid hialuronic reprezentate de:
- Hyalograft® ca inlocuitor dermic
- Laserskin ca inlocuitor epidermic
- Deci, combină 2 biomateriale independente nu poate fi
considerat un "adevărat" substituent dermo-epidermal al pielii

2. PermaDerm ™ = grefa de piele 3D

- Este constituit din:


- un analog dermic reprezentat de burete de colagen
însămânţat cu fibroblaste autologe pe care se însămânțează
keratinocite autologe
- Asigura închiderea permanenta a rănilor poate fi descris
ca un adevărat substituent dermo-epidermal
3. Apligraf
Are o structura bistratificata:
1) gel de colagen bovin de tip I
- in care se insamanteaza 2) Fb și KC alogene umane izolate
din pielea de prepuț
Este utilizat la acoperirea plagilor post-excizionale de
dimensiuni relativ mici și in ulcerele venoase
Avantaje: - este primul SP bi-stratificat (contine neoderma si
neoepiderma) disponibil comercial
- reprezintă o solutie de vindecare permanenta a ranilor pielii
- A fost aprobat de FDA (1999)
Dezavantaje: - trebuie mentinut in mediu nutritiv pana la transplant
- este impachetat individual si livrat cat mai repede posibil

4. OrCel™ este similar Apligraf™ deoarece conține atât Fb cât și KC


din prepuțul neonatal dar prezintă un matrix poros de colagen ce
permite migrarea celulelor din țesutul gazdă
S-a dovedit că prezintă viteze de vindecare mai rapide decât
substituentul dermal Biobrane
Keratinocite

Celule
epidermale

Matrice colagenică
cu fibroblaste
FB
Mediu

Sistemul de obținere a substituentului de piele APLIGRAF

Organizarea histologică a SP “APLIGRAF” comparativ cu pielea umană normală

APLIGRAF (Organogenesis): primul substituent de piele (SP) bistratificat aprobat de FDA


PERFORMANTE ALE UTILIZARII SP APLIGRAF

Femeie in varsta de 71 ani cu ulcer venos la membrele inferioare

Momentul
zero Saptamana 1

Saptamana 2 Saptamana 56

Revascularizare Rana complet


si vindecare vindecata
- Utilizarea Apligraf-ului in TE a pielii permite realizarea unei
interventii terapeutice rapide (vindecare completa in ~60 zile) in
comparatie cu alte terapii – bandajele de compresie (~180 zile)
- cicatrizare - de buna calitate
- rezultatele cosmetice - superioare
- nu au fost semnalate fenomene de rejectie a grefei

Dezavantaje
- celulele obtinute prin necropsie necesita un screening
foarte minutios
- nivelul de supravietuire a grefei: pana in 30 zile
- aplicatiile tehnice sunt complicate
- pretul de cost = ridicat produs greu accesibil pe piata
medicala romaneasca

Se poate afirma că Ingineria tisulara poate reprezenta o


solutie pentru vindecarea plagilor complicate, mai ales ale plagilor
prin arsuri intinse, unde zonele donor de piele sunt restranse
Totuși, în ciuda tuturor eforturilor, disponibilitatile comerciale ale SP
de grosime completa sunt limitate

Perspective în domeniul TE a pielii:

1) Incorporarea în SP fabricati prin bioinginerie a substantelor ce


favorizează creşterea nu numai a keratinocitelor şi fibroblastelor ci
și a altor celule de la nivelul pielii în vederea obținerii de constructi
cu funcţii îmbunătăţite şi asemănare mai mare cu pielea naturala

2) Deoarece vascularizația slaba a grefei de piele este încă o


problemă nerezolvată, se impune intensificarea studiilor pentru a
îmbunătăţi angiogeneza in grefele transplantate

Abordari posibile:
- stimularea formarii unei reţele capilare prin includerea in grefe a
unor factori de creştere pro-angiogenici (de ex., VEGF, FGF, etc.)
- utilizarea sistemelor de livrare de factori pro-angiogenici (DDS)
- integrarea de celule endoteliale direct în grefă