Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Escuela de Ciencias Biológicas

BACTERIOLOGÍA
Docente: Mtr. Sonia M. Estrella V.

Práctica No. 4

Tema: PIGMENTOS Y HEMÓLISIS BACTERIANAS

MARCO TEÓRICO

a. Pigmentos
Algunas bacterias tienen la capacidad de producir sustancias coloreadas conocidas como
pigmentos, que pueden ser observadas a simple vista en los cultivos bacterianos. Estos
pigmentos le pueden servir a la bacteria al intervenir en sus procesos metabólicos, o como
defensa a condiciones adversas, inclusive puede tener efectos antibacterianos. La producción
de pigmento es una característica que puede utilizarse como ayuda en la identificación
bacteriana.
Los pigmentos pueden ser Difusibles: que se observan en medios de cultivo sólidos, en este
caso la colonia no toma ningún color, pero el medio alrededor de la colonia toma el color del
pigmento producido y liberado por la bacteria, como es el caso del pigmento verde azulado
característico de Pseudomonas aeruginosa, denominado piocianina difusible, observado en
diferentes medios como el agar cetrimide o agar nutritivo.
No difusibles: Pigmentos que se observan en medios de cultivo sólidos, permanecen dentro de
la célula bacteriana. En este caso la colonia se observa coloreada, mientras que el medio no
cambia de color. Por ejemplo los pigmentos de Serratia marcescens, conocidos como
prodigiosina que se observan en agar nutritivo incubado a 25 °C por 48 horas.
Hidrosolubles: Pigmentos secretados por las bacterias al medio líquido, que se colorea a
medida que la bacteria crece. Por ejemplo: los pigmentos hidrosolubles de P. aeruginosa y S.
marcescens.
No hidrosolubles: Pigmentos que no se liberan en agua o medios líquidos, cuando la bacteria
produce este tipo de pigmentos en el medio no se observa ninguna coloración, por ejemplo,
Staphylococcus spp.

b. Hemólisis

Algunas bacterias producen hemolisinas, que son proteínas capaces de producir daño en la
membrana celular de los glóbulos rojos ocasionando su lisis. Hay dos tipos de hemolisinas de
acuerdo con el tipo de mecanismo que utilizan para producir la apoptosis celular: las primeras
son enzimas fosfolipasas, que remueven una parte de la porción lipídica de los fosfolípidos de
la membrana celular y las segundas son proteínas que se insertan dentro de la membrana
formando poros.
El fenómeno de hemólisis puede observarse al cultivar las bacterias en medios de cultivo que
contengan sangre y se utiliza como identificación de ciertos grupos bacterianos, como es el
caso por ejemplo, de la clasificación del género Streptococcus.
En el medio de cultivo se puede observar tres tipos de hemólisis:
 - Alfa hemólisis: Es un tipo de hemólisis incompleta, en la cual los glóbulos rojos no son
lisados en su totalidad, pero su membrana sufre el daño suficiente como para permitir
liberación de la hemoglobina. Las colonias de bacterias α hemolíticas se observan
rodeadas por un halo que varía en diferentes tonalidades de verde, debido a que la
hemoglobina liberada del eritrocito es oxidada a biliverdina.
- Beta hemólisis: Es un tipo de hemólisis completa que se observa únicamente en
cultivos en agar sangre. Las colonias de bacterias β hemolíticas aparecen rodeadas por
un halo transparente correspondiente a la zona donde se ha producido la lisis de los
eritrocitos.
- Gamma hemólisis: La presentan colonias que no producen ningún tipo de hemólisis o
alteración sobre los glóbulos rojos, actualmente se la conoce como no hemólisis.

OBJETIVOS

- Identificar distintos tipos de pigmentos que servirán para la identificación de algunos

géneros bacterianos.
- Diferenciar los tipos de hemólisis que se produce en agar sangre y agar chocolate para
caracterizar a géneros bacterianos que los producen.

MATERIALES

- Cajas Petri con agar nutritivo.

- Cajas Petri con agar cetrimide.
- Cajas Petri con agar sangre
- Cajas Petri con agar chocolate.
- Cajas Petri con cepas bacterianas.
- Tubos con caldo cetrimide.
- Incubadora a 25 °C.
- Incubadora a 37 °C.
- Guantes de manejo.
- Marcador permanente.
- Asas bacteriológicas.
- Gradillas.
- Fósforos.

PROCEDIMIENTO

1. Pigmentos bacterianos.

a. Rotular correctamente cada uno de los tubos y cajas que se van a utilizar.
b. Sembrar por aislamiento cada una de las cepas bacterianas en una caja con agar
nutritivo.
c. Sembrar P. aeruginosa en el tubo inclinado de agar cetrimide.
d. Llevar los cultivos a incubar a 25 °C por 24 - 48 horas.
e. Al cabo de este tiempo observar el crecimiento bacteriano en los diferentes
medios y su pigmentación.
f. Registrar lo observado.
 2. Hemólisis bacteriana.

a. Rotular correctamente cada uno de los tubos y cajas que se van a utilizar.
b. Sembrar por aislamiento las cepas bacterianas en agar sangre y agar chocolate.
c. Incubar a 37 °C por 24 - 48 horas.
d. Al cabo de este tiempo observar el crecimiento bacteriano en los diferentes medios y
la producción de hemólisis.
e. Registrar lo observado.

RESULTADOS

Registre lo observado en las siguientes tablas:

BACTERIA AGAR NUTRITIVO AGAR CETRIMIDE CALDO CETRIMIDE

Pigmento Pigmento Pigmento
Color Clase Color Clase Color Clase

BACTERIA α Hemólisis β Hemólisis No hemólisis

DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFÍA

Vanegas, M. (2015). Guías para el laboratorio de Bacteriología. Bogotá, Colombia: Ediciones

Uniandes