Sunteți pe pagina 1din 13

CELULE STEM.

APLICAȚII
BIOMEDICALE
Cuprins
INTRODUCERE
1. MECANISMUL DE ACȚIUNE A TERAPILOR
CANCERULUI PENTRU FERTILITATEA LA FEMEI
2. TERAPIE GENICA FOLOSIND CELULE STEM
NEURONALE
3. TRANSPLANTUL CARDIOMIOCITELOR CA A
PARADIGMA PENTRU TRATAREA BOLILOR DE INIMĂ
CONCLUZII
BIBLIOGRAFIE
INTRODUCERE

Pentru mai bine de jumătate de secol, biologii au susținut teoria conform căreia, la
majoritatea speciilor de mamifere, ovocitele se formează înainte sau la scurt timp după
naștere, dar niciodată la maturitate. Această doctrină a fost stabilită, iar celulele stem
germinale nu au fost înregistrate în ovarele juvenile sau adulții, cu excepția câtorva excepții
izolate la anumite specii. De fapt, deși spermatogeneza este menținută pe tot parcursul vieții
adulte, producția de ovocite la femele de mamifere este considerată a înceta înainte de naștere.
Această piatră de temelie a științei reproductive a rămas puternică în ciuda dezvoltării rapide a
noilor tehnologii și a cunoștințelor, rămânând practic neschimbată până la publicarea a două
rapoarte.

Este o dogma din cadrul biologiei reproductive care susține că femelele se nasc cu un
număr finit și neregenerabil de celule germinale, toate rămânând în prima fază a meiozei și
sunt înconjurate de celule somatice în structuri cunoscute ca foliculi. Numărul de foliculi
scade în timpul vieții postnatale prin mecanisme care implică apoptoză. Trei valuri ale acestei
apoptoze au fost descrise. Primul val, și cel mai important, are loc în profaza primei diviziuni
meiotice. Dintr-un maxim de 6-7 milioane în jurul săptămânii 20 de gestație, numărul total de
foliculi scade la aproximativ 1 milion la nou-născut. Cel de-al doilea val se produce chiar
înainte de pubertate și vede scăderea rezervelor ovariene la aproximativ 400 000 de foliculi
primordiali în timpul pubertății. Al treilea val este gradual și ciclic și are loc ca răspuns la
deprivarea lunară a hormonului stimulator al foliculului (FSH), ceea ce duce la epuizarea
totală a celulelor germinative în ovare în ceea ce reprezintă menopauza, care apare în decursul
deceniului cinci de viaţă.

Dezvoltările din ultimii 10 ani au plasat celulele stem într-un loc de primă importanță
datorită potențialului pe care il au pentru cercetare, oferind perspective unice în arii precum
biologia dezvoltării mamiferelor care nu sunt ușor accesibile experimentelor, și deoarece ele
au un rol important în terapia celulară pentru bolile degenerative.
Orice celulă stem este definită prin capacitatea de a-și menține propria populație
prin auto-reînnoire și să se diferențieze în unul sau mai multe tipuri de celule mature deplin
diferențiate.

Celulele stem embrionare au o rată de proliferare ridicată, deoarece trebuie să


construiască rapid un întreg organism nou. Celulele stem adulte sunt în general liniștite sau
proliferează lent, dar ele pot fi mobilizate la cerere și induse să prolifereze activ, așa cum se
întâmplă cu celulele stem hematopoietice (Kondo et al., 2003). Proprietățile celulelor stem
sunt asociate cu capacitatea lor de a suferi diviziuni simetrice sau asimetrice.

Există diferite tipuri de celule stem, inclusiv celule ES, celule EG, celule stem fetale,
celule stem adulte și celule stem de carcinom embrionar. Aceste celule stem sunt clasificate ca
fiind pluripotent sau multipotent, în funcție de capacitatea lor de a se diferenția în linii
celulare diferite. Numai ovocitele fecundate au fost considerate a fi totipotente datorită
capacității sale de a se diferenția nu numai în țesuturile derivate din cele trei straturi
germinative majore (ectoderm, endoderm și mesoderm), ci și în liniile celulare
extraembrionice (țesutul tropoectodermal) și în celulele germinale.

Celulele ES, care sunt derivate din masa internă a celulelor embrionare în stadiu de
blastocist, prin definiție sunt capabile să mențină pluripotența în timpul propagării nedefinite
in vitro, menținând în același timp un cariotip normal. În testele anterioare in-vivo, celulele
ES s-au dovedit a fi capabile să se diferențieze în cele trei straturi germinative majore,
celulele germinale și chiar în stratul trophoectodermal, dar numai atunci când sunt susținute
de capacitatea de dezvoltare a unui embrion destinatar.

In vitro, celulele ES pot fi induse să recapituleze mai multe aspecte ale dezvoltării
embrionare timpurii și pot genera tipuri de celule din toate cele trei straturi de celule
germinale, incluzând liniile neuronale, hematopoietice, vasculare, pancreatice, musculare și
cardiace.

Înțelegerea mecanismelor din spatele suportului celulelor stem adulte pentru funcția
țesuturilor este de o importanță extremă atunci când se analizează metode de generație
următoare pentru a trata organele afectate sau bolnave la om. Au fost luate două metode
generale de translație cu celule stem adulte, pentru a accelera introducerea lor în clinică. În
primul rând, înțelegerea funcției bazale a celulelor stem endogene adulte a dus la strategii
pentru a stimula aceste celule în susținerea și repararea țesuturilor .Protejarea acestor celule de
leziunile cauzate de boală - sau de daunele cauzate de tratamentul bolii - reprezintă un aspect
critic.

În al doilea rând, celulele stem adulte sunt programate să se comporte diferit decât
rolurile lor endogene în organism. Astfel de strategii încearcă să utilizeze celule biopsate
neesențial pentru a produce sau proteja celulele organului sursă sau chiar țesuturile care nu au
legătură.
1. MECANISMUL DE ACȚIUNE A TERAPILOR CANCERULUI PENTRU
FERTILITATEA LA FEMEI

Este binecunoscut faptul că intervenția terapeutică, în special radioterapia și


chimioterapia, compromite adesea fertilitatea prin distrugerea ovocitelor și deteriorarea
ovarului. Multe strategii au fost folosite pentru a proteja funcția gonadală în timpul acestor
tratamente, cu niveluri diferite de succes. Strategiile de recuperare a ovocitelor și / sau a
embrionilor urmate de crioprezervare sau vitrificare intră în fluxul principal pentru
conservarea fertilității la supraviețuitorii de cancer. Cu toate acestea, orice deteriorare
suplimentară a tractului reproducător datorată tratamentului care compromite fertilitatea poate
fi ajutat doar de înțelegerea modului de protejare a acestor situri.

Pentru femei și fete, iradierea totală a corpului (TBI) duce adesea la o insuficiență
ovariană permanentă. Utilizarea protecției fizice radioprotective a ovarelor în timpul TBI sa
dovedit a proteja unii pacienți împotriva insuficienței ovariene induse de terapie. O altă
abordare utilizează administrarea unei molecule antiapoptotice direct în ovar în timpul
radioterapiei și / sau chimioterapiei. La șoareci, aplicarea sfingosin-1-fosfatului (S1P) previne
daunele uriașe ale bazinului ovocitelor cauzate de tratamente. Protecția fizică sau moleculară a
ovarului poate proteja, de asemenea, orice capacitate a ovarului mamifer de a regenera
foliculii.

Schemele de tratament chimoterapeutic au devenit suficient de sofisticate și de


încredere, astfel încât conservarea fertilității să fie o considerație. Cu toate acestea, un agent
chimioterapeutic, în special, este asociat puternic cu insuficiența ovariană permanentă - și,
prin extensie, se poate referi la existența femeilor GSC la șoareci. Busulfanul este cunoscut a
fi citotoxic pentru celulele stem și progenitoare, în special pentru gazdele HSC în timpul
pregătirii transplanturilor de măduvă osoasă și pentru divizarea celulelor stem din germeni de
sex masculin și a spermatogoniei în testicul. S-a emis ipoteza că busulfanul ar acționa la
șoarecii de sex feminin într-o manieră analogă cu cea a masculilor, la nivelul de separare a
tulpinii germinale de celule stem sau a celulelor progenitoare. După națtere 25 de femele de
șoarece au fost injectate cu vehicul sau busulfan(20mg/kg): la 20 de zile după injectare,
tratamentul cu busulfan a avut ca rezultat 95% mai puține foliculi primordiali sănătoși decât la
femelele tratate cu vehicul, cu doar o minimă inducție a morții primordiale de ovocite în
primele 10 zile post-tratament.
Tratamentele chimioterapeutice ale femelelor umane care au inclus busulfan au dus la
o incidență aproape totală a insuficienței ovariene premature (POF), indiferent de alte
medicamente utilizate în terapia asociată. Datele combinate din două studii privind funcția
ovariană în copilărie au arătat că 15 din 15 fete (vârsta medie de 12,6 ani) tratate cu regimuri
chimioterapice care conțin busulfan au prezentat POF, în timp ce tratamente comparabile care
nu aveau busulfan au dus la POF pentru 22 din 37 fete 8,7 ani).

Este important să ne amintim că, în cazul terapiilor care compromit fertilitatea, ovarele
nu sunt singurele ținte potențiale. Efectele dovedite și potențiale dăunătoare asupra restului
tractului reproducător feminin trebuie luate în considerare cu grijă. Găsirea unor tratamente
puțin afectabile sau a unor terapii cu celule stem care sunt capabile să asigure buna
funcționare a uterului sau a tubului (trompelor) uterine este un obiectiv mai mult decât
demn.(Johnson)
2. TERAPIE GENICA FOLOSIND CELULE STEM NEURONALE
Capacitatea celulelor stem neuronale de a furniza produse genetice terapeutice într-o
manieră imediată, directă, susținută și probabil reglată ca componente cito-arhitectonice
normale în întregul sistem nervos central poate depăși unele limitări ale vectorilor virali și
celulari standard (revizuit de Park et al., 2002) . Fezabilitatea acestei strategii a fost
demonstrată mai întâi într-un șoarece mutant caracterizat printr-un singur defect genic în toate
celulele, inclusiv în cele din SNC, care a condus la moartea lor. Șoarecele avea boala
mucopolisacaridoză de tip VII(MPS VII) modelată de depunerile lizozomale cauzată de o
deleție a beta-glucuronidazei(GUSB). Această stare incurabilă moștenită se caracterizează
prin neurodegenerarea la șoareci și prin întârzierea mentală progresivă la om. Deși boala
particulară a fost rară, ea a servit drept model pentru bolile neurologice a căror etiologie a
rezultat dintr-o pierdere de funcție bazată pe genetică. GSEB-secretoare de celule stem
neuronale au fost implantate în ventriculele cerebrale ale șoarecilor nou-născuți MPS VII,
permițând accesul celulelor la zona subventriculară (SVZ), o zonă germinală din care celulele
au fost diseminate în întregul creier. Aceste celule producătoare de enzime, acum reținute ca
constituenți cerebrali normali, nu numai că au metabolizat depozitul lizozomal în mod normal
pentru ei înșiși, ci și celule mutante încrucișate în creierul șoarecilor receptor. Folosind o
strategie similara, celulele stem neuronale translucrate retroviral implantate in creierul
soarecilor fetali si neonatali (in special in regiunile periventriculare) au mediat cu succes
expresia cerebrala a altor enzime - de exemplu, beta-hexosaminidaza, a caror deficienta duce
la acumularea patologica a GM2 gangliozida.

Constatările ca acestea au contribuit la stabilirea paradigmei utilizării celulelor stem


neuronale pentru transferul altor factori de interes terapeutic sau de dezvoltare în cadrul SNC.
Desi CSN-urile exprimă cantitati de bază ale unor enzime particulare și factori
neuroprotectori, CSN-urile pot fi modificate genetic pentru a îmbunătăți producția acestor
molecule sau pentru a produce molecule aditionale care ar putea creste potentialul lor
terapeutic. De exemplu, CNS-urile au fost folosite pentru a elibera NT-3 în măduva spinării
de șobolan hemisecționată, pentru a exprima NGF și BDNF în septul și în ganglionii bazali,
pentru a furniza tirozin hidroxilază la striatum parkinsonian și pentru a exprima proteina de
bază mielinică (MBP).
Aceste CSN-uri par a avea o afinitate puternica pentru siturile patologice si vor migra
distante extinse (chiar si de la emisfera cerebrala opusa) ceea ce le face un important vehicul
de livrare a genei.

Deși această abordare terapeutică - care exploatează comportamentul biologic normal


al NSC pentru terapia genică pe bază de transplant - este extinsă la modele animale de multe
tulburări neurologice, este important să recunoaștem că fiecare proces patofiziologic, fiecare
model animal și fiecare moleculă terapeutică trebuie evaluate și optimizată individual.(Lanza
et al.).
3. TRANSPLANTUL CARDIOMIOCITELOR CA A PARADIGMA PENTRU
TRATAREA BOLILOR DE INIMĂ

Transplantul de celule a apărut ca o intervenție terapeutică potențială pentru a spori


angiogeneza, a asigura sprijin structural și, poate, chiar a restabili masele miocardice pierdute
în afecțiunile cardiace. Mai multe tipuri de celule donatoare au fost transplantate în eforturile
de realizare a acestor obiective, incluzând angioblaste și precursori vasculari, celule stem din
măduvă osoasă și mezenchimală, mioblaste scheletice și cardiomiocite derivate din celulele
fetale sau ES. Au fost inițiate studii clinice care utilizează mioblaste scheletice sau preparate
brute mononucleare de celule stem hematopoietice, fie din măduva osoasă, fie din circulația
periferică. Aceste studii au stabilit în mod colectiv că transplantul de celule în inimile afectate
este relativ sigur, deși prezența aritmiilor la pacienții cărora li se administrează transplanturi
de mioblaste scheletice a necesitat implantarea defibrilatorului.

Studii recente realizate de Rubart și colegii (2003) au demonstrat că cardiomiocitele


transplantate au format un sincițiu funcțional cu miocardul gazdă. În aceste experimente,
cardiomiocitele fetale de la șoareci transgenici care exprimă proteină fluorescentă verde
îmbunătățită (eGFP) au fost transplantate în septul ventricular al animalelor receptoare
netransgenice. O grefă tipică este prezentată în Figura 1A. Pentru a demonstra formarea unui
sincițiu funcțional, inimile transplantate au fost recoltate și perfuzate pe un aparat
Langendorff cu rhod-2 (un colorant indicator de calciu care prezintă fluorescență crescută cu
conținut crescut de calciu intracelular) și citochalazin D (un declicator de contracție a
excitației). Inimile perfuzate au fost apoi supuse unei microscopii de scanare laser cu excitație
moleculară cu două fotoni, în condiții care permit imagistica simultană a stării eGFP (pentru a
distinge cardiomiocitele gazdă și gazdă) și fluorescența rhod-2. Examinarea tranzitorilor
intracelulari de calciu în cardiomiocitele donatoare și gazdă vecine a arătat că acestea au
apărut simultan și nu au putut fi diferențiate (Figura 1B și 1C). Aceste date au indicat că
celulele donatoare au putut să participe direct la un sincițiu funcțional cu inima gazdei.
Transplantul cardiomiocitar nu a fost asociat cu nici o anomalie în manipularea calciului
intracelular în donorul sau în cardiomiocitele gazdă.(Lanza et al)
Figură 1.Cuplarea funcțională a cardiomiocitelor donatoare cu miocardul gazdă
Concluzii
Celulele stem reprezintă o zonă importantă a medicinei actuale datorită potenţialului
lor de regenerare şi reparare a ţesuturilor afectate. Unele terapii actuale, cum este transplantul
de măduvă osoasă, deja utilizează celulele stem şi potenţialul lor penrtu regenerarea ţesutului
distrus.

Alte terapii sunt încă în studiu şi implică transplantul de celule stem către o zonă a
corpului afectată de boală pentru a le direcţiona să se dezvolte şi să se diferenţieze pentru
crearea unui ţesut sănătos.

Toate aceste cercetări asupra celulelor ES, atât la șoarece cât și la om, vor oferi noi
perspective asupra dezvoltării embrionare și indicii noi privind modul de izolare și
caracterizare a celulelor stem noi din diferite țesuturi embrionare sau adulte. Dimpotrivă,
cercetarea modului în care este reglementată dezvoltarea embrionară normală va oferi noi
indicii cu privire la modul de menținere și diferențiere a celulelor stem progenitoare în
cultură. Interacțiunea dintre biologii dezvoltatori și biologi ai celulelor stem va fi cheia unei
înțelegeri fundamentale a dezvoltării celulelor stem și traducerea acesteia în rezultatele
terapeutice.
BIBLIOGRAFIE

Joshua Johnson. STEM CELLS IN HUMAN REPRODUCTION. Basic


Science and Therapeutic Potential. Informa UK Ltd, 2007

Lanza, R., Thomson, J., Thomas, E. D., & West, M. Essentials of Stem
Cell Biology, ELSEVIER UK, 2006