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investigación y apoyen el aprovechamiento de los recursos naturales del entorno mediante procesos científicos
y tecnológicos”.
Laboratorio de Bioquímica II
Compilador: Angélica María García T
Material a traer por parte del estudiante: cinta de enmascarar o marcador para rotular, papel
de aluminio, gotero (2), guantes, tapabocas, jabón, toalla (2, una para uso personal y otra para el
trabajo práctico).
INTRODUCCIÓN
Los monosacáridos o azúcares simples están constituidas por alcoholes polivalentes con una función
aldehído o cetona. Son por tanto polihidroxialdehidos o polihidroxicetonas. Están formados por C, H,
O y corresponderán a la formula (CH2O)n en donde n=3 o un número mayor. Los más frecuentes son
las pentosas (C5H10O5) como la más importante se cuenta la Ribosa y las hexosas (C6H12O6), siendo
la más abundante la Glucosa. Por otra parte, los disacáridos son compuestos derivados de los
monosacáridos al unirse dos de estos por un enlace acetal o glucosídico. Según se establezca este
tipo de enlace, existen disacáridos reductores y no reductores. Dada la importancia de estos
compuestos se han desarrollado varios métodos para su determinación y todos ellos se basan en el
mismo principio:
Todos los azúcares con un grupo aldehído libre o un grupo cetónico se clasifican como
azúcares reductores y se transforman fácilmente en enedioles (reductonas) al calentarlos en
soluciones alcalinas; dichos enedioles son altamente reactivos y se oxidan fácilmente en presencia de
oxígeno u otros agentes oxidantes, por lo tanto, los azúcares en solución alcalina rápidamente
reducen iones oxidantes como Ag+, Hg+, Cu2+ y Fe(CN)63- y los azúcares se oxidan formando mezclas
complejas de ácidos. Esta acción reductora es la que se utiliza tanto en las determinaciones
cualitativas como cuantitativas.
Una de las técnicas analíticas más reconocidas consiste en determinar la cantidad de una
substancia disuelta midiendo la cantidad de radiación absorbida por la misma, así la
espectrofotometría permite relacionar la cantidad de radiación absorbida por una sustancia con la
concentración de esa misma mediante la Ley de Lambert-Beer.
MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales: 18 tubos de ensayo, 1 gradilla, 2 vasos de precipitados de 100 y 400 mL, vaso de 600
mL, pipeta de 1, 5 y 10 mL, pipeteador, pinza para tubos de ensayo, 10 tubos de centrifuga, 2
varillas de agitación, probeta, papel indicador, plancha de calentamiento, estufa a 80°C,
espectrofotómetro.
Reactivos: agua destilada, glucosa/sacarosa 0,05M, monosacárido M1, disacárido M2, jugo M3, fenol
al 80%, H2SO4 concentrado, Test de Nelson, HCl concentrado, NaOH 3M, glucosa 0,05M, reactivo de
Benedict (solución 1: 173 g de citrato de sodio, 100g de Na2CO3 anhidro y completar hasta 850 mL
con agua, agite. Solución 2: 17.4 g de sulfato de cobre pentahidratado en 100 mL de agua. Luego
adicione la solución 2 a la 1, este es el reactivo final).
PROCEDIMIENTO
Tubo 1 2 3 4 5 6 X1 X2 X3
mL
H2O 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0,25 0,25 0,25
glucosa/sacarosa 0,05 M 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
Muestra prob. 1 0,25
Muestra Prob. 2 0,25
Muestra Prob. 3 0,25
Fenol al 80% (tome la fase orgánica) 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
Homogenizar y dejar reposar durante 15 minutos
H2SO4 conc. 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5
Homogenizar y dejar reposar durante 30 minutos
Lea la absorbancia de los tubos a 492 nm (si las muestras están demasiado coloreadas, considere
dilución y tenga en cuenta factor de conversión), tomando el tubo 1 como blanco. Determine la
concentración (mg/mL, glucosa/sacarosa) de cada una de las muestras problema. No olvide el factor
de dilución que deba utilizar, según el caso.
Tubo 1 2 3 4 X1 X2 X3
mL
Glucosa 0,05 M 0,25 0,5 1,0 1,25
Muestra prob. 1 0,5
Muestra Prob. 2 0,5
Muestra Prob. 3 0,5
R. Benedict 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5
RESULTADOS
Analice y discuta los resultados obtenidos incluyendo las correspondientes observaciones cualitativas
así como la o las reacciones químicas correspondientes. Presente sus resultados de la forma más
clara posible apoyándose en el uso de tablas, gráficos, etc.
BIBLIOGRAFÍA
Textos de apoyo:
LEHNINGER, A., NELSON; D.; COX, M. 2004. Lehninger Principles of Biochemistry. Macmillan
Higher Education, 4a ed.
VOET, D., VOET, J. 2002. Biochemistry. Wiley & Sons. 2ª ed. Canada.
BOHINSKI, R.C. 1991. Bioquímica. Addison-Wesley-Longman, 5ª ed. México D.F. México.
Visión del programa: “El programa de química de la UPTC para el año 2019 se proyecta en el ámbito nacional como uno de
los líderes en la gestión y desarrollo de procesos de investigación, apropiación, adaptación e innovación de ciencia y
tecnología en química”.
HOJA DE RESULTADOS
Nombres:___________________________________________________________________
Sección/grupo: ________________
Grupo de muestras_______
1. Determinaciones espectrofotométricas
Muestra 1 2 3 4 X1 X2 X3
Peso final
de la
muestra
(g)
3. Observaciones adicionales: