UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Carrera de Químico Farmacéutico Biológico

Laboratorio de Inmunología Clínica

Práctica No. 1: Obtención y purificación de gamma globulina

Equipo No. 5
Integrantes:
-Cortés Cruz Marian Estefanía
-Elizalde Cuevas Briseida
- García González Laura Teresa
-López Aldana Karen Michelle
-Perez Coria Jennifer Pollet

Grupo 1802
A través de diversos experimentos a lo largo de la historia se ha establecido que no todos los
anticuerpos son gammaglobulinas, por lo que se propone el término de inmunoglobulinas para
designar a todas las sustancias con capacidad de anticuerpo. Hoy se conocen cinco tipos de
inmunoglobulinas: IgM, IgA, IgG, IgD e IgE, cada una de ellas con ciertas características distintas.5

Estudiar sobre las inmunoglobulinas es el principio para podernos adentrar al nuevo conocimiento
de la Inmunología Clínica. Se debe de considerar que los miembros de la familia de proteínas de
anticuerpo tienen características estructurales en común y se conocen como inmunoglobulinas (Ig).
Y a pesar de que son semejantes, los miembros de esta familia realizan un conjunto diverso de
funciones de unión así como varias funciones efectoras bien definidas después de la unión a
antígenos1. Este trabajo tiene como objetivo reafirmar el conocimiento acerca de las
inmunoglobulinas, sus funciones, importancia, características, algunos métodos de separación y el
fundamento de las principales técnicas.

Desde finales del siglo XIX se sabe que los anticuerpos se encuentran en el suero sanguíneo, y
que al centrifugarse puede separarse una fracción que es líquida y otra que es celular (sólida). La
primera parte es el plasma, que comprende todas las moléculas que son pequeñas y
macromoléculas solubles de la sangre, incluidas la fibrina y otras proteínas que son necesarias
para que se forme un coágulos, y la segunda parte contiene glóbulos rojos, leucocitos y plaquetas.
La primera prueba de que los anticuerpos están contenidos en fracciones proteínicas séricas
particulares se obtuvo de un clásico experimento que llevaron a cabo Arne Tiselius y Elvin A. Kabat
en 1939. Por medio de este experimento se identificó que la fracción globulínica γ contenía los
anticuerpos séricos, a los que denominó inmunoglobulinas, con el objeto de diferenciarlos de
cualquier otra proteína que pudiera incluirse en la fracción de la globulina γ 2.

Las gamma globulinas son proteínas que migran electroforéticamente en la fracción gamma. Son
sintetizadas por los linfocitos B y funcionan como anticuerpos que reconocen determinado
antígeno. Sus dos características básicas son la especificidad y la diversidad. Se calcula que el ser
humano posee cerca de cien millones de anticuerpos diferentes en cuanto a especificidad. Sus
funciones principales son la opsonización, la activación del complemento y la inmunorregulación.
Contienen una cadena pesada: α,γ, μ, δ, ε, que le dan el nombre a la inmunoglobulina, y dos
cadenas livianas: k y λ. 3

Las moléculas de anticuerpo tienen una estructura común de cuatro cadenas peptídicas, esta
estructura se integra con dos cadenas ligeras (L) que son idénticas y dos cadenas pesadas (H) con
polipéptidos más grandes que los que se encuentran en la cadena ligera. Cada una de las cadenas
ligeras está unida a una de las cadenas pesadas por enlaces disulfuro y por ciertas interacciones
que no son covalentes para formar un heterodímero (H-L) y por lo tanto, las dos combinaciones
idénticas de cadena pesada y ligera forman la estructura básica de los anticuerpos de cuatro
cadenas (H-L)2 que es un dímero de dímeros.
Los anticuerpos más abundantes son divalentes, es decir, que poseen dos sitios de combinación
con el antígeno por lo que pueden formar un complejo y formar precipitados y por lo tanto si se
reducen los enlaces disulfuro internos, las cadenas polipéptidas que los componen permanecen
unidos por fuertes atracciones no covalentes; sin embargo si se mantiene la molécula reducida en
condiciones de acidez se pierden estas fuerzas de atracción debido a la carga positiva que
adquieren las cadenas es posible separarlas mediante filtración 4.

Las inmunoglobulinas son capaces de reconocer antígenos de manera específica, formando parte
de la respuesta humoral específica. Existen diferentes clases de inmunoglobulinas que se
distinguen por las secuencias de aminoácidos únicas en la región constante de la cadena pesada
que le confieren propiedades estructurales y funcionales específicas de cada clase.

La inmunoglobulina G (IgG) es la clase más abundante en el suero con un 80% del total de
inmunoglobulinas séricas, consta de dos cadenas pesadas y dos ligeras. Es la más abundante en
líquidos corporales internos, sobre todo extravasculares donde combate microorganismos y sus
toxinas, esta atraviesa la placenta y se fija a macrófagos y polimorfonucleares.

La inmunoglobulina M (IgM) representa de un 5 a 10% del total de la inmunoglobulina sérica, las

células plasmáticas la secretan en forma de un pentámero, es producida al inicio de la respuesta
inmune, es decir, es la defensa de primera línea efectiva contra la bacteria.

La inmunoglobulina A (IgA) se encuentra de un 10 a 15% del total de las inmunoglobulinas, se

encuentra en secreciones externas donde defiende las superficies externas del cuerpo.

La inmunoglobulina E (IgE) se encuentra en menor cantidad, a diferencia de las demás

inmunoglobulinas, protege las superficies externas del organismo, se eleva en infecciones
parasitarias y es la responsable de los síntomas que se producen en una alergia, además de que
sensibiliza a los mastocitos y a los basófilos.

Por último, la inmunoglobulina D (IgD) constituye alrededor de 0.2% y está presente sobre todo en
la superficie de los linfocitos, pero aún no se identifica adecuadamente alguna función biológica en
ella.

La separación de las proteínas se puede realizar de manera inespecífica, en donde se pueden

obtener diferentes compuestos y por otro lado, los métodos específicos en donde sólo se obtiene lo
que realmente necesario. Los métodos específicos son por ejemplo, la inmunoprecipitación, la
inmunoaglutinación y la inmunoelectroforesis. Por otra parte, algunos de los métodos inespecíficos
son: la cromatografía por intercambios iónicos y se da una separación de acuerdo a la carga que
presenta la molécula, la electroforesis, la separación por tamiz molecular donde las moléculas son
separadas de acuerdo a su tamaño, la precipitación con sulfato que tiene como fundamento la
precipitación mediante el aumento de la fuerza iónica del medio, también es conocida como salting
out, este fenómeno consiste en la disminución de la solubilidad de la proteína a medida que la
concentración de la sal aumenta y entonces precipita. En la precipitación con sulfato de amonio se
asegura la precipitación de inmunoglobulinas y no de la albúmina pues esta última al ser una
proteína grande requiere de una mayor concentración de sulfato de amonio, ésta técnica presenta
como ventaja la simplicidad, el bajo costo, la rapidez y el alto rendimiento final .

Finalmente se consideraron varios aspectos para la purificación de las gammaglobulinas tanto a

favor como en contra, sobre todo tomando en cuenta que se utilizó en la práctica sulfato de
amonio, ya que al formar una sal para la precipitación ésta se debe de remover por diálisis de 1 a 3
días lo que alenta el proceso así como puede ser un factor para promover la contaminación, siendo
esta una desventaja. A pesar de esto, las ventajas que posee este método con respecto a otros,
son más favorables, como lo es el que el peligro de desnaturalización de las proteínas es bajo y
que en soluciones saturadas su solubilidad se modifica muy poco con la temperatura. Y así lograr
cumplir con los objetivos que se tienen de precipitar y purificar gammaglobulinas humanas.

Bibliografía
1, 2 Kindt JT, Goldsby AR, Osborne AB. Inmunología de Kuby. 6ª Ed. México: Mc Graw Hill; 2007 p
76, 84.
3 Leal Quevedo Francisco Javier. Vacunas en Pediatría. México. Editorial Panamericana; 2008
pp.247
4 Roitt
MI, Delves JP. Inmunología Fundamentos. 10ª Ed. México: Editorial Médica Panamericana;
2003 p 42
5 García-Cozar, F., Aguado, E., & Peña, J. 03 Inmunoglobulinas. Acceso 21 de agosto 2017.
Disponible:
https://www.researchgate.net/profile/Enrique_Aguado/publication/233794658_Inmunoglobulinas/link
s/54dddf9f0cf22a26721d1471.pdf