Misión del programa: “La formación de profesionales químicos que lideren el desarrollo, potencien la investigación y apoyen el

aprovechamiento de los recursos naturales del entorno mediante procesos científicos y tecnológicos”.

UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS, Escuela de Ciencias Químicas

Laboratorio de Bioquímica II
Compilador: Angélica María García T

11 Y 12. ANÁLISIS DE LA ORINA (2 sesiones)

Material a traer por parte del estudiante: frasco pequeño de vidrio con tapa, 5 g de harina vegetal,
cinta de enmascarar o marcador para rotular, gotero (2), 1 porta objetos y cubre objetos, pinzas ó
depilador, 100 mL de orina (la primera del día, después de un ayuno de al menos 12-15 horas) de
hombre, de mujer y de dos mascotas (cada grupo traer sólo una de las muestras), de ser posible traer
muestra de orina de una persona diabética, papel de aluminio, guantes, tapabocas, jabón, toalla (2, una
para uso personal y otra para el trabajo práctico).
INTRODUCCIÓN
La orina normalmente es un liquido claro amarillento cuyo pigmento se llama urozantina, ligeramente
ácido y de olor débil, que se forma en el riñón cuando al pasar la sangre por éste órgano, la filtra en una
proporción del 99% y el resto (el 1%), lo deja pasar como orina hacia la vejiga; esto quiere decir que la
orina es tan sólo un filtrado de los componentes químicos de nuestro propio suero. Los riñones extraen
los desechos solubles de la sangre, así como el exceso de agua, azúcares, y una variedad de otros
compuestos. El líquido restante contiene altas concentraciones de urea y otras sustancias, incluidas las
toxinas. La orina fluye a través de estas estructuras: el riñón, uréter, vejiga, y finalmente la uretra. Por
otra parte, la orina se produce por un proceso de filtración, reabsorción y secreción tubular. Algunas
enfermedades alteran la cantidad y consistencia de la orina (ejm: el azúcar como consecuencia de la
diabetes) y su típico color puede variar de claro a un color ámbar oscuro, dependiendo sobre todo del
nivel de hidratación del cuerpo, entre otros factores. La orina contiene una serie de sustancias que varían
de acuerdo con lo que se introduce en el cuerpo. Aparte del agua, la orina contiene una gran variedad de
sales inorgánicas y compuestos orgánicos, incluyendo las proteínas, hormonas, y una amplia variedad de
metabolitos.
Uno de los componentes de la orina es la urea, que a su vez es el principal producto del
catabolismo de las proteínas y aminoácidos y que constituye el principal compuesto nitrogenado no
proteico del plasma. Debe ser eliminada del organismo para garantizar el mantenimiento del metabolismo
proteico normal de las células. Tiene la ventaja de ser una molécula muy hidrosoluble e inocua, que
permite su eliminación con escasa inversión de energía del organismo al ser concentrada en la orina y
eliminada al exterior.
El hábito humano de consumir alimentos pocas veces al día (3 ó 4) conduce a un proceso
cíclico de nutrición. En condiciones normales los combustibles empleados en los tejidos para obtener
energía son: Glucosa, ácidos grasos, cuerpos cetónicos y aminoácidos. En caso de ayuno hay cambios
que requieren de la adaptación del organismo y esto trae como consecuencia modificaciones en los
patrones metabólicos y por lo tanto en las moléculas utilizadas como combustibles. Durante las
primeras etapas del ayuno se realizan cambios hormonales, se deja de liberar insulina y se aumenta
la liberación de glucagon, lo que ocasiona un aumento en la Glucogenólisis, estimulación de la
Lipólisis, inhibición de la síntesis de triacilglicéridos, aumento de la β-oxidación y producción de
cuerpos cetónicos (cetogénesis), si el ayuno es prolongado se presenta un desequilibrio entre el
metabolismo de carbohidratos y el de lípidos lo que ocasiona que los niveles de cuerpos cetónicos se
eleven en sangre y sean eliminados por orina donde son detectados fácilmente.
CONSULTA PREVIA A LA PRÁCTICA
a. Consulte sobre los diferentes componentes químicos de la orina
b. Consulte sobre enfermedades asociadas a los contenidos de diferentes componentes en la orina
c. En qué consiste el ciclo de la úrea?
d. Explique en general el proceso de cetogénesis.
e. Cuál es la concentración normal de urea y ácido úrico en la orina?
f. Realice un diagrama de flujo de la práctica a realizar.

MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales: 15 tubos de ensayo, gradilla, vidrio de reloj, espátula, caja de petri con tapa, 3 vasos de
precipitados de 100 mL, vaso de precipitados de 400 mL, vaso de precipitados 1L, pipeta de 2 mL, pipeta
de 5 mL, dos pipetas de 10 mL, 10 tubos de centrifuga, 2 Erlenmeyer de 100 ó 250 mL, aro con nuez,
pipeteador, bureta, pinzas para bureta, 2 varillas de agitación, probeta, 2 cápsulas de porcelana, pinzas
para tubos de ensayo, embudo de separación o decantación, papel indicador, microscopio, plancha de
calentamiento, centrífuga, balanza.
Reactivos: agua destilada, NaOH al 20%, NaCl al 1%, HgCL2 al 1%, indicador de Tashiro (0,01g de rojo
de metilo y 0,005g de azul de metileno en 10 mL de etanol del 96%, al final es una concentración de 0,1
de rojo de metilo y 0,05% de azul de metileno), HCl 0,1N, fenolftaleína, HNO3 concentrado, NH4OH 0,1N
y concentrado, ácido pícrico al 10%, reactivo de molish, H2SO4 concentrado, cloroformo, reactivo de
Lieberman-Bukhardt(adicione 5 mL de anhídrido acético y 5 mL de H2SO4 concentrado), ZnCl2 al 30% en
metanol, sulfato de amonio, nitroferricianuro o nitroprusiato de sodio al 5% y recién preparado, ácido
acético glacial, reactivo Biuret, ninhidrina al 0,5%.

PROCEDIMIENTO

1. Propiedades físicas de la orina.

1.1. Analice las propiedades físicas como color, olor, pH (papel indicador, no el pH-metro).
1.2. Qué factores influyen en la coloración y pH de la orina?
2. Composición de la orina.
2.1. Determinación cuantitativa de la urea a partir de ureasa vegetal: la urea puede ser hidrolizada
enzimáticamente por la acción de la ureasa y luego se determina por volumetría del amoniaco.
Para la obtención de la ureasa (la cual se encuentra en varios tejidos vegetales), es necesario su
extracción así:
2.2.1. Tome 1 g de harina vegetal y adicione 10 mL de NaCl al 1%, homogenice y centrifugue a 3500
rpm durante 5 minutos. Mida el volumen del sobrenadante y consérvelo. Al volumen obtenido,
adicione el volumen necesario de NaCl al 1% hasta obtener un volumen final de 20 mL.
Homogenice durante 30 segundos. Esta solución, contiene la ureasa vegetal.
2.2.2. Actividad ureasica. Tome 2,5 mL de orina y adicione 1 mL del extracto de ureasa vegetal.
Homogenice y someta a baño maría en ebullición durante 20 minutos. Posteriormente, adicione 3
gotas de HgCl2 al 1% y divida la solución en dos porciones, a la primera (1 mL), adicione dos
gotas del indicador de Tashiro. Homogenizar nuevamente. Un color azul-verdoso indicara un valor
positivo en la prueba.
2.2.3. Titulación. Para la segunda porción obtenida en 2.2.2 (2 mL), realice su respectiva titulación
empleando como agente titulante HCl 0,1N y fenolftaleína como indicador. Determine el contenido
de urea (mg/mL) en la muestra a partir de la titulación del NH4OH producido por la hidrólisis de la
ureasa. La cantidad de urea hidrolizada se determina por la relación estequiométrica de 2 moles
de NH4OH producidos por cada mol de urea desdoblada.
2.3. Acido úrico: coloque 2,5 mL de orina en un vaso de precipitados y adicione 2 mL de HCl
concentrado, homogenice y conserve hasta el próximo laboratorio. Coloque unos pocos cristales
en un porta objetos y obsérvelos al microscopio. Luego centrifugue la solución anterior y
transfiera el ácido (cristales) a una cápsula de porcelana. Adicione 3 gotas de HNO3 concentrado y
evapore. Enfríe y adicione una gota de NH4OH diluido (0,1N). Observe y analice la coloración de
los cristales. Cuál es la concentración normal de ácido úrico en la orina?
2.4. Creatinina (reacción de Jaffé): coloque 2,5 mL de orina en un tubo de ensayo, adicione 0,5 mL de
solución saturada de ácido pícrico (10%) y alcalinice con NaOH al 10%. Analice y justifique los
resultados obtenidos con la adecuada fundamentación química. Escriba la fórmula de la creatina y
la creatinina. Incluya la reacción ocurrida, función biológica de la creatina y creatinina?
2.5. Glúcidos: tome 2,5 mL de orina en un tubo de ensayo, adicione 3 gotas de reactivo de Molish,
homogenice y adicione 0,5 mL de H2SO4 concentrado por las paredes del tubo. Observe la
coloración producida en la zona de contacto de los dos líquidos. Analice los resultados obtenidos.
Qué glúcidos pueden ser excretados en la orina? (escriba sus fórmulas).
2.6. Esteroides: Coloque en un embudo de separación 25 mL de orina. Adicione 8 mL de cloroformo,
tape y agite vigorosamente, invirtiendo el embudo varias veces y destapándolo después de cada
inversión con el fin de regular la presión. Luego deje el embudo quieto para separar las fases
acuosa y orgánica. Tome en un vaso aparte, la fase orgánica.
2.6.1. Tome en un tubo de ensayo 3 mL de la solución clorofórmica anterior y adicione por la pared del
tubo 1 mL del reactivo de Lieberman-Burkhardt, homogenice cuidadosamente y deje reposar
 hasta la aparición de las dos fases. Analice y discuta con la adecuada fundamentación química los
resultados obtenidos.
2.6.2. Tome en un segundo tubo de ensayo, 3 mL de la solución clorofórmica, adicione ZnCl2 en metanol
(30%) y caliente a baño maría en ebullición durante 10 minutos. Analice y discuta con la
adecuada fundamentación química los resultados obtenidos.
2.6.3. Qué resultados obtuvo en cada prueba? Qué clase de sustancias dan positiva estas pruebas, hubo
diferencias entre los diferentes tipos de orina?, Qué esteroides pueden formar parte de la orina?,
de dónde provienen?, qué papel biológico desempeñan los esteroides?
2.6.4. Cuerpos cetónicos (R. Imbert): adicione en un tubo de ensayo 0,5 cm de cristales de sulfato de
amonio y adicione orina hasta cubrir el sulfato. Agite y luego adicione 5 gotas de nitroferricianuro
o nitroprusiato (5%) de sodio recién preparado, homogenice y adicione 0,5 mL de NH4OH
concentrado. Homogenice muy cuidadosamente y deje reposar, La rapidez con que aparezca la
coloración indica la concentración de cuerpos cetónicos.
2.6.5. Repita la experiencia anterior, suprimiendo el uso de cristales de amonio. Analice y compare los
resultados obtenidos en 2.6.4 y 2.6.5. inculyendo la(s) respectiva (s) ecuaciones y
fundamentación química.
2.6.6. Adicionalmente: Qué moléculas se consideran cuerpos cetónicos? (escriba sus fórmulas), qué
nombre recibe la presencia de cuerpos cetónicos en sangre y orina cuando se encuentran en
cantidades más altas que las normales?, bajo qué condiciones metabólicas se acumulan cuerpos
cetónicos?
2.7. Acetona: coloque 1 mL de orina en un tubo de ensayo y adicione 3 gotas de nitroprusiato de
sodio al 5%. Homogenice y alcalinice con NaOH al 10%. Debe aparecer una coloración roja si hay
acetona. Luego acidifique con ácido acético glacial. Si el color no corresponde a acetona, vira a
amarillo, pero si hay acetona el color rojo se intensifica. Analice y discuta los resultados
obtenidos. De dónde proviene la acetona presente en la orina?
2.8. Proteínas y aminoácidos: tome dos tubos de ensayo y a cada uno de ellos adicione 1 mL de orina.
Adicione en uno de ellos 1 mL del reactivo de Biuret, homogenice y espere durante 25 minutos.
Compare el resultado en coloración obtenido con un respectivo blanco, utilizando agua en vez de
la muestra de orina. Analice los resultados con la respectiva fundamentación química.
2.9. Al segundo tubo de ensayo realizado en 2.8, adicione 0,5 mL de solución de ninhidrina al 0,5%,
homogenice y caliente en baño maría en ebullición durante 5 minutos. Deje enfriar. Analice los
resultados obtenidos con la respectiva fundamentación química.
2.10. A qué sustancias se deben las coloraciones obtenidas en cada caso?, si no hubo coloración con
biuret pero sí con ninhidrina, a qué se debe?, escriba las reacciones sucedidas en ambos casos.

RESULTADOS
Analice y discuta los resultados obtenidos incluyendo las correspondientes observaciones cualitativas,
preguntas y las reacciones químicas correspondientes según sea el caso. No olvide los cuestionamientos
de las secciones 2.3-2.5, 2.6.3, 2.6.6, 2.10. Presente sus resultados de la forma más clara posible
apoyándose en el uso de tablas, gráficos, etc. NO OLVIDE ENTREGAR COPIA DE LA HOJA DE
RESULTADOS AL PROFESOR.

BIBLIOGRAFÍA
La presente práctica fue diseñada tomando como pauta base:
GRANADOS, J. 2008. Guías de Laboratorio de Bioquímica-Metabólica. Universidad Nacional Abierta y a
Distancia-UNAD, ECAPMA. Bogotá D.C. Colombia.
HIDALGO, M.B., et al. 2002. Laboratorio de Bioquímica II. Benemérita Universidad Autónoma de
Puebla, Facultad de Ciencias Químicas, Programa de Química Farmacobiólogo. Puebla, México.
MIGUEZ, J.B.1997. Prácticas de bioquímica. Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia,
Facultad de Ciencias, escuela de Química. Tunja, Colombia.
Textos de apoyo:
LEHNINGER, A., NELSON; D.; COX, M. 2004. Lehninger Principles of Biochemistry. Macmillan Higher
Education, 4a ed.
VOET, D., VOET, J. 2002. Biochemistry. Wiley & Sons. 2ª ed. Canada.
BOHINSKI, R.C. 1991. Bioquímica. Addison-Wesley-Longman, 5ª ed. México D.F. México.

Visión del programa: “El programa de química de la UPTC para el año 2019 se proyecta en el ámbito nacional como uno de los
líderes en la gestión y desarrollo de procesos de investigación, apropiación, adaptación e innovación de ciencia y tecnología en
química”.
UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA
PROGRAMA DE QUÍMICA
LABORATORIO BIOQUÍMICA II
HOJA DE RESULTADOS

11 Y 12. ANÁLISIS DE LA ORINA

Nombres:___________________________________________________________________

Tipo de orina: (sexo y edad)

A:__________; B:__________; C:__________; D:__________; E:_____________; F:_________

1. Propiedades físicas de la orina

Muestra Padecimiento de alguna Hora última ingesta Color Olor pH Otro
enfermedad (cuál?) alimentos (cuál?)

2. Composición de la orina
2.1. Urea
Muestra Urea hidrolizada + HgCl2 + I. Tashiro Urea hidrolizada (Volumen titulación)

2.2. Otros componentes

Muestra Característica cualitativa
Componente
Creatinina
Glúcidos
Esteroides (R.
Lieberman-
Bukhardt)
Esteroides (R.
ZnCl2)
Cuerpos cetónicos
con sulfato de
amonio
Cuerpos cetónicos
sin sulfato de
amonio
Acetona
Proteínas y
aminoácidos (R.
Biuret)
Proteínas y
aminoácidos (R.
Ninhidrina)
Observaciones adicionales:

Cristales ácido úrico:

No olvide resolver las preguntas planteadas a lo largo de la práctica en el respectivo informe.