APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD

La cromatografía por afinidad es muy específica y su mayor campo de aplicación se encuentra

en la purificación o aislamiento de sustancias de naturaleza biológica, como proteínas o ácidos
nucleicos.

Se utiliza principalmente con fines preparativos en análisis cuantitativos, pues permite aislar
con rapidez biomoléculas en estudios bioquímicos.

Hay muchas variedades de aplicaciones para las técnicas de la purificación de la cromatografía

de afinidad. Se están utilizando cada vez más para separar muestras farmacéuticas y biológicas
hoy en día. Aquí están varias maneras que la técnica está utilizada.

A. BORONATE Y CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD FENILO DEL BORATO

En estos métodos, el boronate o el borato fenilo se puede utilizar como ligands de la afinidad
conjuntamente con agarosa o la alto-ejecución de los métodos de la cromatografía (HPAC) de
afinidad para la fase estacionaria. El boronate o el lazo fenilo a las moléculas que contienen
grupos del cis-diol, de que del borato puede estar presente en muchos hidratos de carbono.

La cromatografía de afinidad de Boronate se puede utilizar en el análisis de la hemoglobina A1c

(HbA1c) que es un componente de la hemoglobina glycated. Puede también capturar las
glicoproteínas, tales como lactoferrina, usando una estructura capilar del monolito de la
afinidad del boronate.

Semejantemente, el borato fenilo del cellufine es un ligand de la afinidad que se puede utilizar
para la purificación de la glicoproteína, de la glycated-proteína, y de las pastas del diol. Los
bordes pila de discos en una estructura esférica de la celulosa y un nivel del pH entre 3 y 12 se
utiliza.

B. CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD DEL LECTIN

Este formulario de la cromatografía está creciendo funcionando. Lectins es proteínas no-

inmunes del sistema tales como glicoproteínas. Originan de animales, de plantas, y de
microorganismos y tienen una afinidad para los residuos del hidrato de carbono. Por ejemplo,
pueden separar los polisacáridos, los glicopéptidos, y los oligosacáridos y las células que
contienen las estructuras determinadas del hidrato de carbono.

Lectins se puede utilizar con un soporte de la agarosa. El método de la purificación se puede

también combinar con otros tipos de equipo del análisis tales como alta-erformance
cromatografía líquida (CLAR) y espectrometría de masa. También, varias olumnas del lectin se
pueden combinar para la purificación de glicoproteínas y de glycoconjugates en una
aproximación llamada cromatografía de afinidad serial del lectin.

C. CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD INMOVILIZADA DEL IÓN DEL METAL

La cromatografía de afinidad Inmovilizada del ión del metal (IMAC) implica el atar con las
moléculas de la meta tales como proteínas, ácidos nucléicos, aminoácidos y péptidos e iones
del metal, por ejemplo Zn2+, Ni2+, Cu2+, y Fe3+ que se han inmovilizado en una olumna. Los
iones se han introducido a la olumna con la ayuda de agentes quelantes tales como ácido
nitriloacetic y ácido iminodiacetic. Las Soluciones que se analizarán pueden incluir las proteínas
phosphorylated, las proteínas de la membrana, y las proteínas histidina-marcadas con etiqueta.
 D. CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD DEL TINTE-LIGAND

Esto es un método usado para purificar las proteínas de sangre, los agentes farmacéuticos de la
proteína, algunas enzimas, y la albúmina. Los tintes, por ejemplo, atan en el sitio reactivo de las
proteínas. Las olumnas contienen los tintes sintetizados de la triazina que ayudan a quitar las
moléculas tales como partículas de la hepatitis B y proteínas virales del prión.

E. CROMATOGRAFÍA DEL ANÁLISIS FRONTAL

Una fase movible que contiene una concentración sabida de una meta se vacia a través de una
olumna de afinidad con un agente astringente inmovilizado que se sature. Las Lecturas durante
el proceso ayudarán a crear una curva que tenga una posición media que pueda contribuir a la
producción de la curva. Esta curva proporcionará a una guía que ayude a científicos a derivar la
clase de acciones recíprocas que pudieron suceso con otros agentes astringentes. Esto se
puede utilizar para ayudar a determinar el atascamiento de drogas.

F. CROMATOGRAFÍA DE IMMUNOAFFINITY

En este proceso, las moléculas tales como péptidos, los virus, las hormonas, y las enzimas se
pueden purificar en una olumna que contiene los anticuerpos u otros agentes similares. La
Agarosa o HPAC se puede utilizar como el soporte. Se cambia el pH o un agente chaotropic o un
modificante orgánico se agrega para accionar el escenario de la elución.

G. CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD ANALÍTICA

Este método se utiliza para estudiar las reacciones entre las biomoléculas con los lectins, los
anticuerpos, y los aptamers o droga que atan con los agentes tales como enzimas, proteínas de
suero, y receptores.

La elución Zonal se emplea a menudo en este método donde una pequeña cantidad de una
droga se introduce a la olumna de afinidad. El factor de la retención se analiza bajo diversas
condiciones.

El proceso se puede también realizar conjuntamente con HPAC para el alto análisis de la
producción de interacciones medicamentosas. De nuevo, las condiciones tales como la
temperatura, el pH, y la polaridad solvente se pueden cambiar para considerar el efecto sobre
la retención.

H. CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD DE IONES METÁLICOS INMOVILIZADOS

La cromatografía de afinidad de iones metálicos inmovilizados (IMAC) implica la unión con

moléculas diana tales como proteínas, ácidos nucleicos, aminoácidos y péptidos e iones
metálicos, por ejemplo Zn2 +, Ni2 +, Cu2 + y Fe3 + que se han inmovilizado en una columna.
Los iones se han introducido en la columna con ayuda de agentes quelantes tales como el ácido
nitriloacético y el ácido iminodiacético. Las soluciones a analizar pueden incluir proteínas
fosforiladas, proteínas de membrana y proteínas marcadas con histidina.
 Affinity Class Potential Application

Activated /
Functional spacer; support matrix; eliminates handling of toxic reagents
Functionalized

Amino Acid Serum proteins; proteins; peptides; enzymes; rRNA; dsDNA

Purification of biotin/avidin & derivatives; biotinylated substances. Biotin derivatives

Avidin Biotin
dissociate under nondenaturing conditions.

Carbohydrate
Solube glycoproteins ; other carbohydrate-containing substances
Binding

Glycoproteins; lectins; other carbohydrate metabolite proteins. Proper selection can

Carbohydrate
ensure one-step purification.

Nonspecific interaction. Mimic biological substrates (substrates, cofactors, effetors);

Dye Ligand
proteins. Optimize purification protocol with different dyes

Glutathione Purification of glutathione enzymes and GST tagged recombinant proteins

General affinity ligand, useful for plasma coagulation proteins, nucleic acid enzymes,
Heparin
lipases, etc.

Hydrophobic
Couple ligands containing free carboxyl groups; proteins
Interactions

Immobilized Metal Affinity Chromatography. Uses interactions between protein and

IMAC
chelated metal to separate.

Immunoaffinity Quantitative determinination of antigens, high specificity

Nucleotide /
Dehydrogenases; kinases; transaminases. Reliable adsorbents.
Coenzyme

Nucleic Acid mRNA; DNA; rRNA; other nucleic acids and oligonucleotides

Protein A / Protein G Purification of immunoglobulins

Purification of specific classes or types of proteins, coenzymes, or physiological

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BIBLIOGRAFIA
 https://www.news-medical.net/life-sciences/Affinity-Chromatography-
Applications-(Spanish).aspx
 https://medicapage.com/index.php?newsid=653
 https://www.sigmaaldrich.com/life-science/proteomics/protein-
chromatography/affinity-chromatography.html#applications
 https://lidiaconlaquimica.wordpress.com/2015/08/16/cromatografia-por-
afinidad/