Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Correspondencia: salopez@unicolmayor.edu.co
Resumen
En Colombia el cultivo de papa es el cuarto en importancia en la economía del país, y su produc-
ción alcanza las 300 millones de toneladas aproximadamente. Erwinia carotovora es una bacteria
Gram negativa, anaeróbica facultativa causante de la pudrición blanda de la papa, puede llegar a
generar hasta el 100% de daño en la cosecha, lo cual ocasiona grandes pérdidas económicas. Se ha
establecido que la bacteria Bacillus thuringiensis es capaz de suprimir la virulencia de E. caratovora
debido a que produce N-acil-homoserina-lactonasa, una potente enzima que degrada de N-acil-
homoserinolactonas, que son indispensables en el mecanismo de quorum-sensing de E. caratovora.
Esta circunstancia, puede ser una alternativa importante para el control de la enfermedad de la
pudrición blanda de la papa. Considerando lo anterior, en este artículo se describe el proceso que
emplea la bacteria Bacillus thuringiensis para inhibir la actividad de E. caratovora.
Bacillus thuringiensis for the control of the potato soft rot Erwinia carotovora
Abstract
In Colombia the potato crop is the fourth in importance in the economy of the country, its produc-
tion reached 300 million tons. Erwinia carotovora is a Gram-negative bacterium, facultative anae-
robic which causes the soft rotting of the potato; it can potentially generate up to 100% damage in
the crop, which causes large economic losses. It has been established that the bacterium Bacillus thu-
ringiensis is able to suppress the virulence of E. caratovora because it produces N-acyl-homoserine-
lactonasa, a powerful enzyme that degrades of N-acyl-homoserinolactonas, which are indispensable
in the quorum-sensing mechanism of E. caratovora. This can be an important alternative for the
control of the disease of the soft rotting of the potato. Considering the above, this article describes
the process used by the bacterium B. thuringiensis to inhibit the activity of E. caratovora.
Key words: Bacillus thuringiensis, Erwinia carotovora, Quorum-sensing, potato soft rot.
39
NOVA - Publicación Científica en Ciencias Biomédicas - Issn: 1794-2470 - Vol. 11 No. 20 julio - Diciembre de 2013
Introducción
La papa es uno de los alimentos básicos de la ca- presenta la viabilidad de utilizar Bt para el control
nasta familiar colombiana, es de gran importan- del agente de la pudrición blanda de la papa Erwi-
cia para el sector agrícola del país ya que se culti- nia carotovora.
va en más de 250 municipios, Cerca de 170.000
hectáreas, con una producción de 1.9 millones de Erwinia caratovora
toneladas por año. Aproximadamente 110.000 fa- Es un bacilo Gram negativo perteneciente a la fa-
milias, equivalente a 500.000 personas, dependen milia Enterobacteriaceae, anaerobia facultativa, con
directamente de este producto con una generación presencia de flagelo, no formadora de esporas, su
de 20 millones de jornales al año. Sin embargo, tamaño oscila entre 0,5 a 1,0 micrómetros de an-
la estabilidad de su producción se ve afectada por cho por 1,0 a 3,0 micrómetros de largo. Su carac-
el ataque de plagas y enfermedades que pueden terística principal que lo diferencia del resto de los
llegar a generar grandes pérdidas económicas, por miembros de su familia, es la capacidad de producir
ello se hace indispensable controlar esta amena- grandes cantidades de enzimas pépticas responsa-
za empleando técnicas eficaces que no afectan bles de la maceración del tejido parenquimatoso de
el equilibrio ecológico y el medioambiente (1-5). algunas plantas (PCWDE, del inglés plant cell wall
Actualmente se emplean métodos de control bio- degrading enzymes), por medio de un sistema de
lógico empleando microorganismos que son ene- señalización química autoinductora extracelular de-
migos naturales de estas plagas, tal es el caso de nominado quorum sensing, dependiente de la con-
Bacillus thuringiensis (Bt) una bacteria entomopa- centración de la población bacteriana (10, 11).
tógena que posee actividad sobre insectos-plaga de
los órdenes Lepidóptera, Coleóptera y Díptera. Bt Esta bacteria puede sobrevivir en el suelo depen-
se destaca por su inclusión paraesporal de consti- diendo de las condiciones edafoclimáticas, y de
tución proteica, encargada de concederle su capa- las especies o subespecies involucradas. Dentro de
cidad insecticida, compuesta de proteínas Cry y este grupo de bacterias fitopatógenas se encuen-
Cyt (6). tran especies relacionadas capaces de dañar cual-
quier tejido de la planta que invaden y tienen una
Bioquímicamente es catalasa positiva, degrada el distribución mundial, por lo general se encuentran
almidón, glucógeno y N-acetil colina; es capaz de en climas donde se cultivan plantas sobre las que
fermentar la glucosa, fructuosa, trealosa, maltosa ejercen su colonización: E. caratovora ssp. caratovo-
y ribosa. Es miembro del reino Eubacteria, familia ra (fitopatógeno de cultivos de clima frío y templa-
Bacillaceae y género Bacillus (7-9). Es considerada do), E. caratovora ssp. atroseptica (presente en zonas
una bacteria cosmopolita pues se encuentra am- templadas), y E. chrysanthemi (zonas templadas y
pliamente distribuida en el medio ambiente (6, subtropicales) (11). E. caratovora afecta cultivos de
9), siendo su hábitat natural el suelo. Es de am- zanahoria, apio, pepino, pimiento, nabo y papa
plio conocimiento la gran variabilidad genética y (11). La maceración del tejido parenquimatoso por
la capacidad adaptativa de este microorganismo a parte de E. caratovora depende en gran medida de
los diversos ambientes en los que reside. Múltiples las condiciones ambientales, pues se ha demostra-
investigaciones han demostrado que Bt es una po- do que las temperaturas cercanas a los 30ºC fa-
tente herramienta que presenta un sinnúmero de vorecen el incremento en la velocidad de la enfer-
actividades gracias a varios tipos proteínas nove- medad, además determina la especie que genera la
dosas, codificadas por genes diferentes a los deno- infección y por otro lado la humedad debido a la
minados cry de acción insecticida, creando nuevas saturación del suelo por el exceso de las lluvias o el
posibilidades de aplicación sobre varias clases de riego que produce condiciones anaeróbicas favore-
agentes infecciosos (10). En este documento se ce el crecimiento de la bacteria (11, 12).
40
Bacillus thuringiensis: manejo del agente de la pudrición blanda de la papa Erwinia carotovora
(AiiA) (Figura 1), que degrada las AHLs hidro- resistentes a la infección por E. carotovora (21).
lizando el anillo de lactona de estas señales, a lo Esta podría ser una opción prometedora para los
que se le llama extinción del quórum-sensing (en cultivos de papa en Colombia, ya que variedades
inglés quórum-quenching), siendo capaz de des- transgénicas que expresen el gen aiia serían resis-
articular la densidad de la población microbiana, tentes a la pudrición blanda causada por E. caro-
inhibiendo la producción de factores de virulencia tovora (Figura 2).
y por consiguiente la infección (16-18).
Se ha demostrado, por diferentes estrategias, que
Esta enzima es una metaloproteasa con dos sitios de cepas de Bt poseen homólogos del gen aiia (89-
unión para el zinc (posee el motivo H104-XH106- 95%) con versiones de otras especies de Bacillus,
XDH109~H169) con evidencia de su necesidad para por ejemplo la cepa israelensis 4Q7 se manipu-
su actividad catalítica. El zinc 1 está asociado a his- ló con el fin de determinar su actividad sobre
tidina (H) 104, H106, H109 y H169, mientras que E. carotovora. Este gen aiia fue mutado y eva-
el zinc 2 se relaciona con los residuos H109, H235 luado en pruebas de toxicidad en discos de papa
y Asp108 (D108 y D191). Este tipo de enzimas no inoculados con E. carotovora encontrándose que
poseen actividad sobre no-acil-lactonas y esteres no al emplear la cepa silvestre con expresión normal
cíclicos, pero tienen fuerte actividad hacia AHLs, del gen aiia se presentó una alta protección del
incluso si hay variación en la naturaleza de la sustitu- tubérculo, lo cual fue contratado con la actividad
ción en el carbono 3 de la cadena acilo. Los grupos de cepas mutantes para este gen cuya actividad
amida y keto serían importantes en la interacción en- fue menor (18, 20).
zima-sustrato. La interacción molecular AiiA-AHL
iniciaría con un “ataque” hacia un hidrogeno expues- Por lo anotado anteriormente, y a manera de con-
to por los dos iones zinc, con la subsiguiente reacción clusión, el estudio de genes de Bt ha generado
con el anillo de lactona, con polarización aumentada nuevas alternativas para aumentar el rango de
del enlace carbonilo, el aminoácido tirosina 194 ac- acción de esta bacteria frente a agentes fitopató-
tuaría como un ácido donador de protones. El ata- genos, que mejoren la calidad de la producción
que al núcleo de la molécula AHL se daría mediante de sectores agrícolas. Gracias a estos estudios se
un mecanismo de adición-eliminación sobre un hi- ha logrado identificar la propiedad de esta bacte-
dróxido derivado del solvente, en los grupos carboni- ria para actuar sobre el mecanismo de quórum-
lo, con la eliminación de alcohol (19). Las bondades sensing de la bacteria E. caratovora, inhibiendo
del gen aiia están demostradas en la generación de la producción de sus factores de virulencia que
un cultivo transgénico de Amorphophallus konjac llevan a la pudrición blanda de la papa, median-
(o simplemente konjac), una planta asiática usada te el gen aiia de Bt, por lo cual se presume que
para biomateriales, cultivo que es aquejado por la esta secuencia de ADN puede ser utilizada en
enfermedad de la pudrición blanda. Los autores estrategias de manejo de esta enfermedad y así
consiguieron seis líneas que expresaron el gen disminuir las pérdidas económicas que causa este
en el análisis por Western blot, las cuales fueron microorganismo.
42
Bacillus thuringiensis: manejo del agente de la pudrición blanda de la papa Erwinia carotovora
43
NOVA - Publicación Científica en Ciencias Biomédicas - Issn: 1794-2470 - Vol. 11 No. 20 julio - Diciembre de 2013
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a Rojo J. por su coo-
peración en la elaboración de este escrito.
Referencias
1. Departamento de Agricultura y Protección al Consumidor- 13. García R. Especies y sub especies de Erwinia, causantes de la
Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y pudrición blanda y pierna negra en la papa cultivada en el estado
la alimentación FAO. 2007. tesoro enterrado: la papa. Agri- de Merida-Venezuela. Rev. Forest. Venez. 2000. 44: 107-114.
cultura 21. Recurso en línea: http://www.fao.org/AG/esp/ 14. Andresen L, Sala E, Kõiv V, Mäe A. A role for the Rcs phos-
revista/0611sp1.htm. Revisado 15 de abril 2012. phorelay in regulating expression of plant cell wall degrading
2. 1. FEDEPAPA - Federación Colombiana de Productores de enzymes in Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum.
Papa. 2010. Acuerdo de competitividad de la cadena agroali- Microbiology. 2010. 156: 1323-1334.
mentaria de la papa en Colombia. P. 72. 15. Toth I.K., Birch P.R.J. Rotting softly and stealthily. Current
3. Alonso F. El cultivo de la papa, Editorial Mundi-Prensa, Ma- Opinion in Plant Biology. 2005. 8: 424-429.
drid. 1996. pp. 13-29. 16. Dong Y.-H., Zhang X.-F., Xu J.-L., Zhang L.-H. Insecticidal
4. Moreno D. Problemática del cultivo de la papa en Colombia. Bacillus thuringiensis Silences Erwinia carotovora Virulence by
Papas Colombianas. Bogotá: Comunicaciones y asociados. a New Form of Microbial Antagonism, Signal Interference.
1996; pp 93-102. Appl. Environ. Microbiol. 2004. 70: 954-960.
5. Espinal C., Martínez H., Pinzón N., Barrios C. 2005. La cade- 17. Zhang L. Fusion of the genes for AHL-lactonase and S-layer
na de la papa en Colombia una mirada global de su estructura protein in Bacillus thuringiensis increases its ability to inhibit
y dinámica 1991-2005. Ministerio de Agricultura y Desarrollo soft rot caused by Erwinia carotovora. 2007.
Rural. Observatorio de Agrocadenas, Bogotá D.C. Colombia. 18. Park S-J., Park S-Y., Ryu C-M., Park S-H., Lee J-K. The Role
6. 1. Pardo-López L., Soberón M., Bravo A. 2013. Bacillus thu- of AiiA, a Quorum-Quenching Enzyme from Bacillus thurin-
ringiensis insecticidal three-domain Cry toxins: mode of ac- giensis, on the Rhizosphere Competence. J. Microbiol. Biote-
tion, insect resistance and consequences for crop protection. chnol. 2008. 18: 1518-1521.
FEMS Microbiol. Rev. 37: 3-22. 19. Liu D., Momb J., Thomas P.W., Moulin A., Petsko G.A., Fast
7. Porcar M., Juárez-Pérez V. Aislamiento y establecimiento de una W., Ringe D. 2008. Mechanism of the quorum-quenching
colección de Bacillus thuringiensis. En Bacillus thuringiensis en el lactonase (AiiA) from Bacillus thuringiensis. 1. Product-bound
control biológico. Bravo, A. y Cerón, J. eds. Universidad Nacio- structures. Biochemistry. 47: 7706-7714.
nal de Colombia. Bogotá, Colombia. 2004. pp. 69-100. 20. Momb J., Wang C., Liu D., Thomas P.W., Petsko G.A., Guo
8. Bravo A, Cerón J. Ecología y distribución de Bacillus thurin- H., Ringe D., Fast W. 2008. Mechanism of the quorum-quen-
giensis. En Bacillus thuringiensis en el Control Biologico..eds. ching lactonase (AiiA) from Bacillus thuringiensis. 2. Substrate
Universidad Nacional de Colombia. Bogota, Colombia, 2004. modeling and active site mutations. Biochemistry. 47: 7715-
pp 49 – 68. 7725.
9. Ruiz de Escudero I., Ibañez I., Padilla M., Carnero A., Caba- 21. Ban H., Chai X., Lin Y., Zhou Y., Peng D., Zhou Y., Zou
llero P. Aislamiento y caracterización de nuevas cepas de Baci- Y., Yu Z., Sun M. 2009. Transgenic Amorphophallus konjac
llus thuringiensis procedentes de tierras canarias. Bol. San. Veg. expressing synthesized acyl-homoserine lactonase (aiiA) gene
Plagas. 2004. 30: 703-712. exhibit enhanced resistance to soft rot disease. Plant Cell Rep.
10. Zhou Y., Choi Y.L., Sun M., Yu Z. Novel roles of Bacillus 28:1847-1855.
thuringiensis to control plant diseases. Appl. Microbiol. Biote- 22. Barbey C., Crépin A., Bergeau D., Ouchiha A., Mijouin
chnol. 2008. 80: 563-572. L., Taupin L., Orange N., Feuilloley M., Dufour A., Burini
11. Toth I.K., Bell K.S., Holeva M.C., Birch P.R. Soft rot erwiniae: J.F., Latour X. 2013. In Planta Biocontrol of Pectobacterium
from genes to genomes. Mol. Plant Pathol. 2003. 4: 17-30. atrosepticum by Rhodococcus erythropolis Involves Silencing of
Pathogen Communication by the Rhodococcal Gamma-Lac-
12. Rahman M.M., Ali M.E., Khan A.A., Akanda A.M., Uddin tone Catabolic Pathway. PLoS One. 8: e66642.
M.K., Hashim U., Abd Hamid S.B. Isolation, characteriza-
tion, and identification of biological control agent for potato 23. Lee S. J., Park S.-Y., Lee J.-J., Yum D.-Y., Koo B.-T., Lee J.-K.
soft rot in bangladesh. Scientific World Journal. 2012: 723- 2002. Genes Encoding the N-Acyl Homoserine Lactone-De-
293. grading Enzyme Are Widespread in Many Subspecies of Baci-
llus thuringiensis. Appl. Environ. Microbiol. 68: 3919–3924.