UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

PRÁCTICA 7: OBSERVACIÓN DE PIGMENTOS

FOTOSINTÉTICOS POR CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

OBJETIVO:

Extraer pigmentos de un extracto de tejido vegetal para identificarlos.

FUNDAMENTO

La fotosíntesis se define como las reacciones que se presentan en las células

vegetales a través de las cuales se producen carbohidratos a partir de agua y

dióxido de carbono en presencia de la energía luminosa del sol.

La ecuación de la fotosíntesis se escribe de la siguiente manera:

6 CO2 + 6H2O C6H12O + 6 O2

En este proceso el CO2 que la célula vegetal fija para elaborar la glucosa se reduce

al tomar átomos de hidrógeno de la molécula de agua, a diferencia de las bacterias

sulfurosas purpureas que emplean el sulfuro de hidrógeno: 2H2S como agente

reductor, en el primer caso como subproducto hay desprendimiento de oxígeno y

en el segundo azufre, que procede de los agentes reductores, dadores de

hidrógenos. Por lo tanto en la fotosíntesis de los vegetales, los hidrógenos que

reducen el CO2 a carbohidratos vienen de la molécula del agua.

La fotosíntesis se lleva a cabo en los cloroplastos y comprende dos fases o procesos:

una rápida, reacción en la luz o fase luminosa y otra más lenta, reacción a la

oscuridad o fase oscura (ciclo de Calvin).

La fase luminosa posee un sistema pigmentario II el cual tiene una molécula de

clorofila, la P680, en ella se lleva a cabo la fotolisis, la cual genera un reductor H y

OH de donde se obtiene oxígeno. El reductor H (2e) pasa a través de una cadena

de citocromos para generar ATP.

Los H llegan finalmente al sistema pigmentario I que tiene una molécula de

clorofila, la P700 en este sistema los protones H generan moléculas reductoras

NADPH+H las cuales la utilizan en la fase oscura.

La fase luminosa son reacciones que se llevan a cabo con presencia de luz y se

dividen en dos grupos: cíclica y acíclica.

La fase oscura o ciclo de Calvin, durante el, las plantas y algunas bacterias

convierten el CO2 absorbido en la atmósfera en materia orgánica generalmente en

azucares.

La fase oscura, la energía acumulada en él ATP se utiliza para la síntesis de

moléculas de glucosa.

MATERIALES Y REACTIVOS

 5 Vasos de precipitación de 600 mL

 5 matraces
 10 tubos de ensayo
 4 placas petri
 4 embudos de vidrio
  1 mortero de porcelana con mortero
 1 papel filtro
 1 tubo capilar
 5 pipetas
 5 gradillas
 1 tijera
 Reglas
 Clips

REACTIVOS

 Agua destilada
 Acetona

MATERIAL BIOLÓGICO

 Hojas de espinaca

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA.

Experimento 1

1. Preparar 50 ml de una mezcla de acetona al 80% con agua destilada.

2. Cortar las hojas de espinaca en trozos pequeños y a continuación pesar en

la balanza de precisión hasta conseguir un total de 100 miligramos de

muestra.

3. Triturar en un mortero de porcelana hojas de espinaca , una vez obtenida

una pasta verde, añadir 4 ml de acetona, esto es con el propósito de disolver

los pigmentos contenidos en las hojas de espinaca .

4. La disolución obtenida se filtra y se recoge en un matraz . Se vuelve a

adicionar acetona a las hojas en el mortero. Continuar la trituración, filtrar

de nuevo y recoger el líquido en el mismo vaso de precipitación. Esta

operación se repite tres o cuatro veces hasta observar que las hojas han
 perdido por completo su color verde, quedando amarillas o pardas. Se

enrasar la disolución del vaso de precipitación hasta 25 ml con la disolución

de acetona al 80%

5. Filtrar con un embudo y papel filtro y recoger el filtrado en una placa de

petri.

6. Cortar una tira de papel filtro de 1 X 10 cm, marcar con un lápiz una línea a

un centímetro de distancia de cada borde. En uno de los extremos,

enganchar un clip para poder sostener el papel en un tubo de ensayo,

previamente adicionar el filtrado en el tubo de ensayo.

7. Coloque el tubo sobre la gradilla, espere a que corra el cronograma (los

pigmentos se separen) en un tiempo de 30 minutos y retirar el papel filtro

cuando los pigmentos estén a 0.5 cm de la línea marcada del extremo que

tiene el clip.

INVESTIGACIÓN ADICIONAL

1. ¿Qué importancia tiene la cromatografía en análisis biológicos .

2. ¿Cuál es el rol de los pigmentos accesorios en la fotosíntesis?

3. Calcule el valor de Rf para cada pigmento, según la fórmula:

Rf = distancia de corrida de pigmento/distancia de corrida del solvente

4. Compare los valores de Rf para cada pigmento y explique los datos.

Experimento 2: observar la ciclosis en los cloroplastos de elodea y/o flor de
hiedra.

Procedimiento

1. Seleccionar una hoja joven de la planta de elodea, colocar en un portaobjetos

con el envés hacia arriba, agregar una gota de agua de la llave, y colocar el
cubreobjetos. Si se emplea flor de hiedra emplear pelos estaminales.
2. Observar con el objetivo de 10x ¿observas movimiento?
3. Indicar cuántos cloroplastos observaste en cada célula, observar con el
objetivo de 10x.
4. Después cambiar al objetivo de 40x, ubicar un cloroplasto al centro del
campo de observación. Describir.
5. ¿A qué se debe la ciclosis en las plantas?.Investigar