INTRODUCCION

El cultivo de tejidos vegetales o cultivo in vitro de tejidos vegetales, es una técnica de

Reproducción en condiciones totalmente asépticas, en la que a partir de un pequeño segmento
Inicial de tejido es posible regenerar en poco tiempo miles o millones de plantas genéticamente
Iguales a la planta madre, cuando a este tejido le es aplicado un estímulo por medio de variables
Físicas y químicas controladas en un medio de cultivo.

El objetivo de cultivar in vitro puede ser, por ejemplo, propagar masivamente plantas en vías de
extinción, o plantas difíciles de propagar por otros métodos, o para clonar (copiar) individuos que
tienen características agronómicas deseables (mejores frutos, resistentes a las sequías, etc.), para
obtener plantas libres de virus, para conservar la diversidad genética de una población, entre otras
aplicaciones.

En la práctica pudimos darnos una idea de cómo se realizan cultivos in vitro, en este caso lo
hicimos con hongos, también conocimos los pasos de higiene que se deben tener para que esta
práctica salga correctamente, esto con la finalidad de analizar y observar en un tiempo después si
el cultivo se hizo correctamente.

II. MATERIALES Y MÉTODOS

Mecheros bunsen
Pinzas
Bisturí
Cajas de petri esterilizadas
Frascos de vidrio esterilizados
Frascos con medio de cultivo MS 1 Sin hormonas y 3 con 3 mg/l de BAP
Cinta plástica (vinilpel)
Etanol al 70%
Tapabocas
Guantes
Gorro
Antibiótico
HONGO

Medidas de asepsia para el establecimiento del material vegetal.

Limpiamos muy bien las mesas de trabajo con hipoclorito de sodio y luego con alcohol al
70 %, igualmente tener tapabocas gorro y guantes
desinfectados con alcohol.
También desinfectamos lo que vamos a usar como el bisturí
y las pinzas.

1. En un Beaker agregamos 100 ml de agua destilada

En un Beaker agregamos 100ml de Etanol
En un Beaker agregamos 100ml de hipoclorito de
sodio
En un Beaker agregamos Antibiótico
 2. Procedemos a cortar el hongo con el bisturí desinfectado, cortamos 20 pequeños
trozos del hongo.

3. Luego estos trozos en una rejilla los introducimos 5 minutos en hipoclorito de

sodio, retiramos y lo introducimos tres veces en agua destilada.

Repetimos en proceso sumergiendo los trozos por 5 minutos en etanol, y luego tres
veces en agua.

Hacemos en proceso de nuevo sumergiendo el hongo en el antibiótico.

4.

CUESTIONARIO
1: ¿Por qué es tan importante evitar la contaminación en el cultivo ¨ in Vitro ¨?

La contaminación en el cultivo de tejidos puede originarse de dos fuentes fundamentales:

una llevada a cabo por microorganismos en la superficie o en los tejidos de los explantes, o
por deficiencias en la manipulación de los operadores en los laboratorios. Durante el
crecimiento y desarrollo de las plantas, la superficie y la biosfera están habitadas por
microorganismos que pueden entrar al tejido a través de aberturas naturales, heridas,
oportunistamente, y llegan a colonizar los tejidos vegetales.

También es muy importante la esterilización por calor, esta se emplea comúnmente para
eliminar los microorganismos de los medios de cultivo, de la calidad de este paso depende
en gran medida la continuidad del proceso.

Es importante evitar la contaminación en el cultivo in vitro ya que si se contamina nuestro

cultivo el efecto de los microorganismos contaminantes sobre las vitroplantas puede ser
considerable si se tiene en cuenta que compiten con ellas por los nutrientes del medio y les
provocan daños directos e indirectos por la colonización de sus tejidos por la expulsión al
medio de metabolismos tóxicos. De esta forma pueden llegar a reducir los coeficientes de
multiplicación, inhibir el enraizamiento y ocasionar la muerte de la planta (hongo) después
de varios subcultivos.

Las bacterias son consideradas como los contaminantes más comunes y las que ocasionan
los problemas más serios, porque pueden ser sistémicas, y su detección es más difícil.

2. Explique los diferentes efectos que tienen las hormonas vegetales en el material
vegetal ¨ in Vitro.

Las hormonas vegetales son muy importantes para el crecimiento y desarrollo de las plantas,
tanto como la luz, los nutrientes, el agua y CO2, ya que estas hormonas regulan las etapas de
desarrollo de las plantas. Las hormonas vegetales son sustancias orgánicas que se encuentran
a muy baja concentración, se sintetizan en un lugar de la planta y se traslocan a otro, que es
donde ejercen sus efectos.

3. ¿Qué métodos de micropropagación existen y cuáles son sus aplicaciones?

Micropropagación.
Es el conjunto de técnicas y métodos de cultivo de tejidos utilizados para multiplicar
plantas asexualmente en forma rápida, eficiente y en grandes cantidades.

Se utiliza para multiplicar o propagar plantas nuevas, tales como aquellas creadas por la
Ingeniería Genética, Mutagénesis o mejoramiento genético. Se utiliza también la
micropropagacion para obtener plantas libres de enfermedades (tales como virosis) u
obtener grandes cantidades de plantas que no se propagan eficientemente. En la
micropropagación, a partir de un fragmento (explanto) de una planta seleccionada (llamada
planta madre), se obtiene una descendencia uniforme, con plantas genéticamente idénticas,
denominadas clones.

Dentro del proceso de micropropagación se pueden diferenciar varias fases o etapas:

1: Desinfección de las yemas de la planta y/o desinfección de semillas

2: Introducción del material seleccionado in vitro
3: Multiplicación de brotes
4: Enraizamiento
5: Aclimatación
Esta secuencia de etapas abarca el ciclo completo de la multiplicación de plantas in vitro y
puede ser aplicada a diferentes especies vegetales.

APLICACIONES

La micropropagación ha sido la que mayor interés científico y económico ha despertado en

el campo forestal. De hecho, es la técnica más difundida por sus aplicaciones prácticas. Los
primeros estudios fueron realizados en la década de los 50´s. Entre 1970 y 1980 fueron
establecidos algunos laboratorios de cultivo de tejidos.
Estas técnicas de propagación in vitro han abierto nuevas posibilidades para el manejo de la
genética básica y obtener nuevos cultivares. Dentro de las alternativas se presentan la
facilidad de la creación y mantenimiento de nuevo material genético para la clonación in
vitro, la obtención de material haploide a partir de anteras o cultivo de óvulos e incrementar
la variabilidad genética por métodos de hibridación, selección y obtención de mutantes. A
nivel práctico se han obtenido cultivares mejorados, producción de semillas de variedades
comerciales y una rápida propagación (clonación) de cientos de especies.

En los últimos años se estima que se cultivan unas 800 millones de hectáreas con plantas
micropropagadas, sin incluir a las plantas transgénicas, producidas por más de 50
laboratorios en Latinoamérica y más de 1,000 alrededor del mundo, donde se propagan
miles de millones de plantas por año. Las plantas propagadas por esta técnica que
mayormente se comercializan son fresa y otras frutillas, papa, plátano, caña de azúcar,
eucalipto, bambú, orquídeas y algunas cactáceas. En Amércia Latina, los países con mayor
producción son México, Argentina, Brasil, Cuba, Costa Rica, Colombia, Perú y Chile,
donde se micropropagan y comercializan plantas como fresa, café, vid, arándano, cereza,
agave, aguacate, tulipanes y orquídeas.

Referencias

http://www.argenbio.org/adc/uploads/pdf/Cultivos%20celulares%20II%20Euge.pdf.

www.ecured.cu/Contaminación_microbiana_in_vitro_(Tejidos_vegetales).

http://www.argenbio.org/adc/uploads/Libro_INTA_II/Parte_IV.pdf.

www.sabermas.umich.mx/archivo/articulos/75-numero-10/153-la-propagacion-de-
plantas-in-vitro-un-exito-biotecnologico.html.