QUÍMICA DE

RECURSOS
HIDROBIOLÓGICOS
Grupo 5
INFORME N°9
“EXTRACCION Y PURIFICACION DE
LIPIDOS TOLALES”

FAPE
11/11/2014
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Universidad Nacional Agraria la Molina

Facultad de pesquería
Departamento de Acuicultura e Industrias Pesquera

Curso: Química de recursos hidrobiológicos

Título: “Extracción y purificación de grasas totales”

Integrantes: Aquice Ccasani Miguel Ángel

Isla Torres Edgar Daniel

Segundo Cárdenas Patricia Stephany

Soto López Wilfredo Arnol

Día de práctica: 04/11/2014

Día de entrega del informe: 11/0920/14

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1) Introducción:

Los lípidos se incluyen entre los componentes principales de los organismos marinos.
Aunque están presentes en todo el tejido, se concentrar mayormente en la capa
subcutánea de los mamíferos marinos y peces grasos, en el hígado de los peces
magros, en el tejido muscular y en las gónadas maduras. Los lípidos marinos están
compuestos por fosfolípidos, esteroles, triglicéridos, esteres céreos y pequeñas
cantidades de productos metabólicos de éstos, así como por reducidas tasas de lípidos
no habituales, como ésteres de la glicerina, glucolípidos, sulfolípidos e hidrocarburos.

Fosfolípidos y esteroles están presentes en los tejidos en pequeñas pero constantes

cuantías del 0,2 al 0,3% del peso húmedo. Los lípidos restantes son esencialmente
depósitos de energía, resultando importante para la flotación. Una fracción media de
fosfolípidos de pescado contiene alrededor de 60% de fosfatidil-colina, 20% de
fosfatidil-etanolamina, y algunos tantos por ciento de fosfatidil-serina y
esfingomielina, mientras que el resto está constituido por otros fosfolípidos.

La composición que exhiben los lípidos marinos en ácidos grasos es mucho más
compleja que la de los lípidos en los animales y plantas terrestres. Los ácidos grasos
marinos están en particular muy insaturados. Incluso los ácidos de C 14 y C16 cuentan
con enlaces insaturados, mientras que os ácidos C20 y C22 contienen cuatro, cinco y
seis dobles enlaces. La mayoría de los ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) de los
lípidos del pescado son del tipo 3n. Los ácidos 6n son escasos.

La distribución de los ácidos grasos en los lípidos dista mucho de ser uniforme. Los
ácidos poliénicos se encuentran principalmente en fosfolípidos, mientras que los
ácidos monoinsaturados están presentes en los triacil-gliceroles.
Los ácidos poliénicos están considerados como importantes componentes de la
dieta. Los ácidos 3n y 6n son esenciales, ya que los dobles enlaces ubicados en los
enlaces tercero y sexto a partir del grupo metilo no pueden sintetizarse en el cuerpo
animal y deben ser aportados por los alimentos. Los ácidos 6n son esenciales para el
hombre, puesto que nos sirven para generar eicosanoides, rectores de importantes
funciones metabólicas. E ácido araquidónico está presente en los lípidos de
membrana de todas las células humanas.

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2) Objetivos:

 Extraer los lípidos intersticiales del musculo de pescado utilizando un método

en frio y rápido.

3) Materiales y Métodos:

 Muestra de pescado
 Papel de filtro Whatman Nº2
 Mortero
 Matraz kitazato
 Balones Soxhlet
 Embudo Buchner de cuello corto.
 Bomba de vacío.
 Embudo de separación de 125 ml
 Balanza analítica
 Probetas de 100ml, baguetas, bickers, placas Petri, embudos de cuello corto.
 Paños, detergente jabón desinfectante, bolsas plásticas.
Reactivos:
-Metanol
-Cloroformo
-Sulfato de sodio anhidro

Figura 1: materiales usados en laboratorio

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Método de Bligh y Dyer

Este método nos permite la extracción y purificación de lípidos totales de una sola
operación, el cual es un procedimiento rápido que minimiza la descomposición
oxidativa y la formación de nuevos compuestos a partir de ella
Método de Bligh y Byer

Pescado Análisis sensorial

y Madures sexual

10gr de la muestra
Muestra homogénea
10ml de cloroformo
20 ml metanol

10
Extracción lípidos I 10ml de cloroformo
10ml de agua

Extracción lípidos II Embudo de buchner

Matraz kitazato

Filtración vacío Pera de decantación

Separación de fases  Fase inferior

Cloroformo + lípido
 Fase superior
Metanol +agua

Recuperación Sulfato de sodio anhidro

Filtrado

Evaporación Solvente
Estufa a 30ºC por 2 horas

Pesado

Calculo
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4.1) Cálculos:

En la práctica realizada usamos el método de Bligh y Dyer para la cuantificación y

calificación de lípidos, obteniendo los siguientes resultados.

Para calcular el porcentaje de lípidos en la muestra se utiliza la siguiente ecuación:

(𝐏𝐞𝐬𝐨 𝐛𝐚𝐥ó𝐧 𝐲 𝐥í𝐩𝐢𝐝𝐨𝐬(𝐠)−𝐏𝐞𝐬𝐨 𝐛𝐚𝐥ó𝐧 𝐯𝐚𝐜𝐢𝐨(𝐠))

%𝐋í𝐩𝐢𝐝𝐨𝐬 = 𝐱𝟏𝟎𝟎%
𝐏𝐞𝐬𝐨 𝐌𝐮𝐞𝐬𝐭𝐫𝐚(𝐠)

Entonces aplicando en cada especie tendríamos:

 Grupo 1: Pámpano

(99.2587g − 98.6049g)
%Lípidos = x100% = 6.538%
10g

 Grupo 2: Bonito

(103.3031g − 103.0970g)
%Lípidos = x100% = 2.061%
10g

 Grupo 3: Bonito

(99.2587g − 98.6049g)
%Lípidos = x100% = 0.808%
10g

 Grupo 4: Pámpano

(98.8560g − 98.6366g)
%Lípidos = x100% = 2.194%
10g
 Grupo 5 :Bonito

(108.1602g − 108.3566g)
%Lípidos = x100% = 1.964%
10g

Aclaraciones: El método empleado se realizó con la muestra que contenía un 80% de

humedad, se pueden hacer modificaciones en los volúmenes y porcentajes pero
siempre se debe respetar la proporción 1:2:0.8 antes de la dilución y luego 2:2:1,8, de
cloroformo, metanol y agua respectivamente.

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4.2) Resultados:

Cuadro 1. Resultados de la prueba.

Peso
Análisis Madurez Peso balón Peso balón y Lípidos
Mesa Especie muestra Lípidos
sensorial sexual vacío (g) lípidos (g) (g)
(g)
Pámpan
1 10 M-IV 10 98.6049 99.2587 0.6538 6.538%
o
2 Bonito 11 H-VII 10 103.0970 103.3031 0.2061 2.061%

3 Bonito 12 H-VIII 10 98.2461 98.3269 0.0808 0.808%

Pámpan
4 9 H-VI 10 98.6366 98.8560 0.2194 2.194%
o
Bonito
5 11 H-VI 10 108.1602 108.3566 0.1964 1.964%
(cabeza)

5) Discusión:

En los peces el porcentaje de lípidos o grasas puede tener grandes rangos de

diferencia ya sea por la especie, madures sexual, época del año, alimentación, parte
del cuerpo, calidad del individuo, tipo de musculo, parte del cuerpo, sexo, etc.

Cuadro 2 .Principales constituyentes (porcentaje) del músculo de pescado

Constituyente Pescado (filete)

Mínimo Variación normal Máximo
Proteínas 6 16-21 28
Lípidos 0,1 0,2 - 25 67
Carbohidratos < 0,5
Cenizas 0,4 1,2-1,5 1,5
Agua 28 66-81 96

Fuentes: Stansby, 1962; Love, 1970

Asi también los peces pueden ser clasificadas en magras o grasas eso depende del
almacenamiento de las grasas.

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Cuadro 3. Variación de la composición química según la especie

Categoría % Agua % Proteína %Lípidos % Ceniza

pez graso 68.6 20 10 1.4
Pez 77.2 19 2.5 1.5
semigraso
Pez magro 81.2 16.4 0.5 1.3
Crustáceo 76 17.8 2.1 2.1
Molusco 81 13 1.5 1.6

Fuente: Mgs. Porturas

La concentración de células grasas parece ser más elevada cerca de las miocomatas y
en las regiones entre el músculo blanco y el oscuro (Kiessling et al., 1991).

Cuadro 4. Composición química del musculo oscuro y ordinario de pescado

Tipo de % Humedad % Proteína % Grasa % Ceniza

musculo
Musculo 77.4 20.4 2.1 1.1
ordinario
Musculo 69.9 17.5 12.5 1.2
oscuro

Fuente: Mgs. Porturas

Cuadro 5. Variación de la composición química según la región del cuerpo

Porción % Humedad % Proteína % Grasa % Ceniza

muscular
Caudal 75.9 19.8 4.8 1.1
Central 76.2 18.8 3.5 1.2
Cabeza 77.2 18.9 2.6 1.2

Fuente: Mgs. Porturas

El porcentaje total de ácidos grasos poliinsaturados con cuatro, cinco o seis dobles
enlaces es levemente menor en los lípidos de peces de agua dulce (aproximadamente
70 por ciento) que en los lípidos de peces de agua de mar (aproximadamente 88 por

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ciento) (Stansby y Hall, 1967). Sin embargo, la composición de lípidos no es

completamente fija sino que puede variar un poco con la alimentación del animal y
la estación del año.

Otras razones por la cual también puede variar el porcentaje de grasa pueden ser las
siguientes:

1. Hidrólisis del TG (Rancidez hidrolítica)

2. Oxidación de los ácidos grasos insaturados constituyentes del TG.
3. Alteración térmica. Deterioro por altas temperaturas.
4. Deterioro por contaminación microbiológica, metales pesados, compuestos
tóxicos orgánicos, etc.

Grafica 1. Relación entre madurez sexual y % de lípidos.

Madurez sexual - % Lipidos

9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
1 2 3 4 5
Madurez sexual 4 7 8 6 6
% Lipidos 6.54 2.06 0.81 2.19 1.96

En el grafico podemos observar la variación en el porcentaje de grasa, en este caso las

5 especies utilizadas son grasas es decir poseen un alto nivel de grasa.

En la mesa 1 tenemos un 6.54 % y se encuentra en el estadio IV, el nivel de grasa es

aceptable debido a que en la etapa de madures el % de grasa aumenta y el nivel de
humedad disminuye; en la mesa 2 y 3 las dos especies se encontraban en post-desove
y en este intervalo el % de grasa disminuye así que los niveles de grasa también son
aceptables.

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En las mesas 4 y 5 el % de grasa es de 2.19 y 1,96 respectivamente y ambos individuos

se encuentran en el estadio VI, siendo muy bajo la cantidad de grasa con respecto a
los valores establecidos, una de las explicaciones para la especie de la mesa 4
(pampanito) es debido a la alimentación, su habito alimenticio es omnívoro y en la
costa peruana suele comer desechos y no satisface todas sus requerimientos
alimenticios; en la mesa 5 la zona estudiada fue la cabeza y el % promedio de grasa es
de 2.6 y en los resultados sale un valor promedio de 2 estando en el rango del % de
grasa.

6) Conclusiones:

 Mediante el método de Bligh y Dyer se obtuvo satisfactoriamente el

porcentaje de lípidos en las muestras.

6) Cuestionario:

1.- ¿Cuáles son las ventajas de la extracción por solventes en relación al método
Soxhelt? Justifique su respuesta.
Para conocer las ventajas y desventajas en general que presentan estos métodos
citaremos la siguiente tabla (Lilia Masson, 1997):

Cuadro 5. Diferencias entre Soxhelt y Bligh.

Método Limitaciones Ventajas y aplicaciones

Extracción con un solvente

Extracción incompleta,
usa alta temperatura, no
Soxhelt puede usarse para Algunos tipos de
Éter etílico, éter de estudio de ácidos grasos. derivados cárneos, frutas
petróleo, alcoholes No se puede aplicar a y verduras, algunos
alimentos sometidos a productos azucarados.
algún tratamiento
térmico ni a leche y
derivados lácteos.
Extracción con mezcla de solventes
Costo en solventes. Re- Extracción en frio,
extracción para aplicable casi a todo
Método de Folch, Bligh purificación, debe alimento. El extracto se
y Dyer Cloroformo- conocerse el % de puede usar para
Metanol humedad del alimento determinación de ácidos
para ajustarla al 80%. grasos, esteroles, etc.
Son métodos rápidos.

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Estas son las principales diferencias entre los métodos, y concluimos que la principal
diferencia entre el Método Soxhelt y el Método Bligh y Dyer es que en el método
Bligh y Dyer podemos cuantificar y calificar los lípidos obtenidos.

2.- ¿Por qué los lípidos se encuentran contenidos en la capa de cloroformo y nos no
lípidos en la capa de metanol y agua? Fundamente su respuesta.

Cuando el metanol, cloroformo y agua son añadidos a la muestra, los lípidos se

disuelven instantáneamente y el metabolismo de los lípidos se detiene.
Una vez obtenido dos fases, el lípido se dirige hacia la capa del cloroformo debido a
que es una molécula orgánica soluble en gran proporción en disolventes no polares
como en este caso es el cloroformo. El cloroformo se utilizó para extraer lípidos de
sus vecinos más polares: sales, proteínas, carbohidratos, y ácidos nucleicos.

7) Bibliografía:

 Bligh, E.G. and Dyer, W.J. 1959. A rapid method of total lipid extraction and
purification. (Can. J. Biochem. and Physiol. 37: 917- 917).

 Folch, J.; Lees, M. and Stanley, G.H.S. 1957. A simple method for the
isolation and purification of total lipids from animal tissues. (J. Biol. Chem.
226: 497-509).
 González, A., Viatcheslav Kafarov, and A. Monsalve. "Desarrollo de métodos
de extracción de aceite en la cadena de producción de biodiesel a partir de
microalgas." (2009): 53-60.
 Kiessling, A., T. Aasgaard, T. Storebakken, L. Johansson and K.H. Kiessling
(1991). Changes in the structure and function of the epaxial muscle of
rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in relation to ration and age. III.
Chemical composition. Aquaculture. 93, 373-387.
 Lilia, Masson; Héctor, Araya; Gary R. Beecher; et al, (Fao, 1997)
 Quimica orgánica: conceptos y aplicaciones. Philip S. Bailey, Christina A.
Bailey – 1998. Pag. 476.
 Stansby, M.E. (1962). Proximate composition of fish. In: E. Heen and R.
Kreuzer (ed.) Fish in nutrition, Fishing News Books Ltd., London, 55-60.
 Stansby, M.E. and A.S. Hall (1967). Chemical composition of commercially
important fish of the USA. Fish Ind Res., 3, 29-34.
 TECNOLOGIAS DE LOS PRODUCTOS DEL MAR: recursos, composición
nutritiva y conservación. Zdsislaw E. Sikorski, 1990. Editorial Acribia, S.A.
Zaragoza (España). Cap. 55-57

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