UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

¨EXTRACCIÓN Y EVALUACIÓN BIOLÓGICA DEL COLÁGENO DE

CHRYSAORA PLOCAMIA (LESSON, 1830) PARA SU APLICACIÓN EN
BIOMEDICINA¨

Proyecto de Tesis para optar el Título Profesional de Biólogo con mención en

Hidrobiología y Pesquería

AUTOR

Srta. Yasmine Celina Granda Valera

ASESOR

Lima – Perú

2018

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ÍNDICE GENERAL

PAG.

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 1

2. JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN 2
3. OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN 3
3.1. Objetivo General
3.2. Objetivos Específicos.
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4. HIPÓTESIS Y VARIABLES DE LA INVESTIGACIÓN
4.1. Hipótesis nula
4.2. Hipótesis alternativa
4.3. Variable dependiente
4.4. Variable independiente
5. ANTECEDENTES 4
5.1. A nivel Internacional
5.2. A nivel Nacional
6. MATERIAL Y MÉTODOS 5
6.1. Material Biológico
6.2. Material de Laboratorio
6.3. Metodología
7. CRONOGRAMA DE TRABAJO 7
8. PRESUPUESTO GLOBAL 8
9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 9

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1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

La ocurrencia de enfermedades degenerativas en las articulaciones móviles del

cuerpo se ha incrementado por el estilo de vida sedentario y la ausencia de una
alimentación balanceada que impera actualmente en países industrializados y en
proceso de industrialización afectando gran cantidad de la población en los grupos
de edad desde los treinta años (Ballina Garcia, 1993) con tendencia a aumentar en
los próximos años. Ante este panorama, el tratamiento de dichas enfermedades
cobra mayor importancia con el fin de asegurar una mejor calidad de vida en la
población afectada.

Actualmente el tratamiento de enfermedades degenerativas del cartílago se basa en

aminorar el dolor y la inflamación articular, más no en su curación. Uno de los más
utilizados es el consumo de colágeno hidrolizado, el cual presenta buenos
resultados pues previene el adelgazamiento de los cartílagos. (Figueres Juher &
Basés Pérez, 2015)
El colágeno hidrolizado que se usa para estos tratamientos es extraído de tejidos
bovino y porcino con mayor porcentaje de esta proteína (Benito, 2002). Sin
embargo se conoce que los invertebrados marinos poseen mayor porcentaje de
colágeno por peso y una mayor población que los animales de granja.

Dentro de los invertebrados marinos se encuentran las medusas, caracterizadas por

su mesoglea que posee el 90% de su peso en colágeno (Mianzan,2014) cuya
población ha experimentado un crecimiento exponencial desde hace 30 años
(Quiñones, 2008) por cambios climáticos y causas antropogénicas, afectando la
economía de puertos con un impacto en la pesquería y el turismo principalmente.
Es entonces que se plantea aprovechar el recurso durante su afloración con el fin
de innovar en nuevos tratamientos biomédicos a beneficio de la comunidad.

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2. JUSTIFICACION DE LA INVESTIGACION

El colágeno es una proteína altamente conservada (Exposito Jean‐Yves, Cluzel

Caroline, Garrone Robert, & Lethias Claire, 2002) y con mayor presencia en los
invertebrados marinos. Por ello se plantea la extracción del colágeno para el
tratamiento en biomedicina a partir de esta fuente marina, evitando así el uso de
tejidos desechados (huesos, cartílago y piel) de la industria ganadera de bovinos y
porcinos (Benito, 2002) y con ello producir un producto de mejor calidad y
rentabilidad.

Dentro de los invertebrados marinos, son las medusas las que han experimentado
un enorme crecimiento en su población desde hace 30 años (Quiñones, 2008) por
diferentes motivos, siendo la principal la acción del hombre sobre el ecosistema.
Afectando estas poblaciones en la economía local de los puertos pues perjudican
la pescadería artesanal y el turismo.

Como especie a evaluar se eligió a la medusa Chrysaora plocamia por ser de

amplia distribución en la costa peruana, además de presentar su forma planctónica,
de la cual se puede aprovechar el colágeno, durante la mayor parte del año (verano,
primavera y otoño) y cuyo gran tamaño permitiría una mayor extracción del
colágeno.

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3. FORMULACION DE OBJETIVOS GENERALES Y ESPECIFICOS

3.1 OBJETIVO GENERAL

 Evaluar la inocuidad del colágeno de Chrysaora Plocamia y su capacidad de

adhesión celular en células epiteliales, osteoblastos y fibroblastos humanos.

3.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Determinar método de extracción y purificación del colágeno de Chrysaora

plocamia
 Comparar propiedades del colágeno de Chrysaora plocamia y de colágeno
de mamífero.
 Evaluar citotoxicidad del colágeno de Chrysaora plocamia en cultivo de
células epiteliales, osteoblastos y fibroblastos humanos.
 Evaluar adhesión celular de Chrysaora plocamia en cultivo de células
epiteliales, osteoblastos y fibroblastos humanos.
4. HIPOTESIS Y VARIABLES DE INVESTIGACION

4.1 HIPÓTESIS NULA

 Ho: El colágeno de Chrysaora plocamia no presenta las
propiedades biológicas necesarias para su aplicación en
biomedicina.

4.2 HIPÓTESIS ALTERNATIVA

 Hi: El colágeno de Chysaora plocamia posee las propiedades
biológicas necesarias para su aplicación en biomedicina.

4.3 VARIABLE DEPENDIENTE

 Citotoxicidad
 Adherencia membrana celular humana
4.4 VARIABLE INDEPENDIENTE
 Proporción cultivo celular humano vivo y muerto
 Presencia de proteínas de reconocimiento de membrana
para colágeno marino y colágeno porcino.

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5. ANTECEDENTES

5.1 ANTECEDENTES INTERNACIONALES

En China se evaluaron loa efectos del colágeno obtenido de la medusa

Rhopilema esculentum e hidrolizado posteriormente para la curación de tejidos
epiteliales inducidos en ratones por radiación UV. Concluyendo que el
colágeno hidrolizado pudo ser asimilado por los ratones (Zhuang Yongliang,
2009)

En América del Norte se planteó la búsqueda de nuevas fuentes del colágeno

utilizado para elaborar suplementos alimenticios para el tratamiento en
enfermedades reumáticas, ya que la crianza de porcinos para aprovechar sus
huesos y cartílagos exige mayores costos de terreno para crianza, mayor
alimentación, constante chequeo médico y con el fin de reducir emisiones de
CO2.

Se evaluaron la citotoxicidad y capacidad de adherencia a las células del

colágeno extraído de Rhizostoma pulpo y se determinó la potencialidad del
colágeno marino como herramienta para la biomedicina.

5.2 ANTECEDENTES NACIONALES

No existen antecedentes nacionales.

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6. MATERIAL Y METODOS
 Determinar método de extracción y purificación del colágeno de Chrysaora
plocamia

Las muestras serán colectadas, luego congeladas hasta su análisis en

labortaorio, comenzando con extreaer la mesoglea, lavarla con agua
destilada y extraida con 0,1M NaOH. La porción insoluble sera liofilizada.

La porción liofilizada será suspendida en ácido acético 0.5M y las proteínas

que se extraigan con el mismo. La porción insoluble será liofilizada. La
mesoglea insoluble será suspendida en ácido acético 0.5M y digerida con
pepsina al 10% por 48 horas a 4°C. El colágeno solubilizado por la pepsina
fue centrifugado 20 000g por 1 hora y el sobrenadante dializado con
Na2HPO4 por tres días.

El principal precipitado será disuelto en ácido acético 0.5 M y luego se le

añadió NaCl 1M. El precipitado logrado será obtenido luego de centrifuga
al 200 000g por 1 hora y luego disuelto en ácido acético 0.5M paa al final
liofilizarlo

 Comparar propiedades del colágeno de Chrysaora plocamia y de colágeno

de mamífero.

200 microgramos de la muestra obtenida de colágeno deben ser disueltas en

buffer M sodio fosfato 0.1M con 0.5% SDS. La muestra entonces debe ser
calentada a 100°C durante 5 minutos. La digetion será realizada con lysyl
endopeptidasa por Achromobactes lyticus 5 microgramos a 37°C por 30
minutos.

A la concentración final se le añade SDS 2%, para detener la proteólisis se

debe hervir por 5 minutos. Utilizar luego SDS-PAGE.

Realizar ambos procedimientos para colágeno de Crhysaora plocamia.y

para el colágeno de origen porcino.

 Evaluar citotoxicidad del colágeno de Chrysaora plocamia en cultivo de

células epiteliales, osteoblastos y fibroblastos humanos.
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 El cultivo de las células humanas debe realizarse entre 2 a 8 dias en el
colágeno a evaluar, debe evaluarse un grupo de cultivo con colágeno de
Chrysaora plocamia y compáralo con el grupo de cultivo en colágeno de
origen porcino.

 Evaluar adhesión celular de Chrysaora plocamia en cultivo de células

epiteliales, osteoblastos y fibroblastos humanos

El cultivo de las células humanas debe realizarse entre 2 a 8 dias en el

colágeno a evaluar, debe evaluarse un grupo de cultivo con colágeno de
Chrysaora plocamia y compáralo con el grupo de cultivo en colágeno de
origen porcino.
.

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7. CRONOGRAMA DE TRABAJO

La captura de las medusas se realizaría en la primera semana de Febrero, pues es

en ese momento en que la temperatura llega a sus picos más altos y favorece la
afloración de esta especie.

La extracción y purificación del colágeno marino y del colágeno de mamífero se

realizaría entre la primera y la segunda semana de Febrero.

Durante la tercera y cuarta semana de Febrero se harían las comparaciones los

colágenos de orígenes distintos y a la vez se realizaría el cultivo de células humanas.
En la primera semana de Marzo se realizaran los ensayos de citotoxicidad y
adhesión celular del colágeno marino en los cultivos de células humanas. En la
segunda semana de Marzo se hará un seguimiento continuo para los ensayos en
células humanas.

En la tercera semana de Marzo se analizaran los resultados obtenidos para ser

presentados luego en la cuarta semana de Marzo.

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8. PRESUPUESTO GLOBAL ESTIMADO GENERAL DE COSTOS DE
BIENES Y SERVICIOS

Alquiler de lancha S/. 30

Baldes para colectar especímenes S/. 420
Hielo para conservar las muestras S/. 50
Transporte hacia laboratorio S/.40
Insumos para análisis S/. 80
Realización de SDS-PAGE S/. 150
Huesos y cartílago de origen porcino S/. 40
Células humanas para cultivo S/. 30
TOTAL S/.840

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9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Addad, S., Exposito, J.-Y., Faye, C., Ricard-Blum, S., & Lethias, C. (2011).
Isolation, Characterization and Biological Evaluation of Jellyfish Collagen for Use
in Biomedical Applications. Marine Drugs, 9(6), 967–983.
https://doi.org/10.3390/md9060967

Ballina Garcia. (1993, March 11). Epidemiología de las enfermedades reumáticas

en el Principado de Asturias, 11(5).

Benito, J. M. P. (2002). Efecto de los hidrolizados de colágeno sobre cultivos de

condrocitos humanos. Barcelona: Institut Municipal d’Investigació Mèdica de
Barcelona.

Exposito Jean‐Yves, Cluzel Caroline, Garrone Robert, & Lethias Claire. (2002).

Evolution of collagens. The Anatomical Record, 268(3), 302–316.

https://doi.org/10.1002/ar.10162

Figueres Juher, T., & Basés Pérez, E. (2015). Revisión de los efectos beneficiosos
de la ingesta de colágeno hidrolizado sobre la salud osteoarticular y el
envejecimiento dérmico. Nutrición Hospitalaria, 32 (1), 62-66.

Quiñones, J.A. 2008. Chrysaora plocamia Lesson, 1830 (Cnidaria, Scyphozoa),

frente a Pisco, Perú. Informe Instituto del Mar del Perú, 35, 221-230.

Mianzan, H., Quiñones, J., Palma, S., Schiariti, A., Acha, E.M., Robinson, K.L. &
W.M. Graham. 2014. Chrysaora plocamia: a poorly understood jellyfish from
South American waters. En Jellyfish Blooms. Springer Netherlands, 219-236.

Nagai, T., Worawattanamateekul, W., Suzuki, N., Nakamura, T., Ito, T., Fujiki, K.,
… Yano, T. (2000). Isolation and characterization of collagen from rhizostomous

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jellyfish (Rhopilema asamushi). Food Chemistry, 70(2), 205–208.
https://doi.org/10.1016/S0308-8146(00)00081-9.

Zhuang Yongliang, Hou Hu, Zhao Xue, Zhang Zhaohui, & Li Bafang. (2009).
Effects of Collagen and Collagen Hydrolysate from Jellyfish (Rhopilema
esculentum) on Mice Skin Photoaging Induced by UV Irradiation. Journal of
Food Science, 74(6), H183–H188. https://doi.org/10.1111/j.1750-
3841.2009.01236.x

Zhuang, Y. , Hou, H. , Zhao, X. , Zhang, Z. and Li, B. (2009), Effects of Collagen

and Collagen Hydrolysate from Jellyfish (Rhopilema esculentum) on Mice Skin
Photoaging Induced by UV Irradiation. Journal of Food Science, 74: H183-H188.
doi:10.1111/j.1750-3841.2009.01236.x

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