Camila Alejandra Bejarano M.

Victor David Calderon Hernandez

Práctica 3
INTERACCIONES MICROBIANAS

● Resumen:

Las poblaciones de una comunidad microbiana interactúan entre ellas de manera integrada,
y los hacen en un espacio físico o hábitat. Estas interacciones permiten establecer entre
ellas relaciones positivas o negativas. Estas últimas son aprovechadas por nosotros para
ejercer control biológico sobre especies patógenas para otros seres vivos como las plantas,
a parte de ello se realizaron 3 técnicas las cuales fueron muy fundamentales para observar
los principales antagonistas frente a cada enfrentamiento realizado presentando un
crecimiento exponencial de la técnica de igarashi con respecto a las dos especies que se
cultivaron aunque por otra parte estas dos especies nuevamente en la técnica de
enfrentamiento dual presentaron cambios ya que hubo un biocontrolador, esta práctica de
laboratorio nos permitió observar cada especie de bacterias y hongos los cuales en algunos
casos fueron controlados o estos se pudieron mover dentro del disco.

● Palabras clave: poblaciones, comunidad microbiana, especies, bacterias y hongos,

relaciones positivas o negativas, control biológico, especies patógenas.
● Abstract:

The populations of a microbial community interact with each other in an integrated manner,
and make them in a physical space or habitat. These interactions allow establishing positive
or negative relationships between them. The latter are used by us to exert biological control
over pathogenic species for other living beings such as plants, besides 3 techniques were
performed which were very fundamental to observe the main antagonists in front of each
confrontation, presenting an exponential growth of the technique of igarashi with respect to
the two species that were cultivated although on the other hand these two species again in
the technique of dual confrontation presented changes since there was a biocontroller, this
laboratory practice allowed us to observe each species of bacteria and fungi which in some
cases were controlled or they could be moved inside the disk.

● Keywords:populations, microbial community, species, bacteria and fungi, positive or

negative relationships, biological control, pathogenic species.

● Introducción:

Dentro géneros de los microorganismos considerados antagonistas de patógenos de las

plantas, se encuentran Pseudomonas, Burkholderia, Bacillus, Serratia, Actinomycetes,
Trichoderma, Penicillium, Gliocladium, Sporidesmium, y especies no patogénicas de
Fusarium spp. , los mecanismos a través de los cuales inhiben a los patógenos se han
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dividido en: competencia por nutrientes, amensalismo, antagonismo microbiano,
parasitismo, depredación (Garbeva y Elsas, 2004)

Para evaluar posibles biocontroladores, in vitro, se utilizan técnicas en las que se ponen en
contacto los microorganismos a evaluar con un patógeno, dentro de estas técnicas se
encuentran: Técnica de Igarashi, se enfrenta el patógeno frente al biocontrolador, para
evaluar el amensalismo; técnica de enfrentamiento dual, en la cual se evalúa la
competencia por espacio y nutrientes; El microcultivo evaluando el micoparasitismo.

Los Actinomycetes son microorganismos filamentosos Gram positivos, unicelulares, en

forma de bacilos que desarrollan un micelio filamentoso, dentro de ellos se destacan como
microorganismos antagónicos el género Streptomyces spp, controlador biológico de amplio
espectro, en su mayoría son saprofitos persistentes en el suelo asociados a las raíces de
las plantas, son resistentes a la desecación y a altas temperaturas como esporas; entres
sus mecanismos de antagonismo se encuentra la producción de antibióticos y enzimas
hidrolíticas extracelulares, producen terpenoides, pigmentos y enzimas extracelulares con
las que degradan materia orgánica de origen vegetal y animal, , varios antifúngicos activos
contra patógenos fúngicos se han aislado y Microbiología Ambiental 2019-1 caracterizado,
lo cual apoya las perspectivas prometedoras del uso de géneros de Streptomyces en el
biocontrol de hongos patógenos de plantas (Ezziyyani et al, 2004). Especies de
Trichoderma son considerados controladores de otros hongos patógenos (biofungicida),
entre sus modos de acción se encuentran: micoparasitismo, consiste en la producción de
enzimas extracelulares que degradan la pared celular , las cuales pueden facilitar la
reducción de la infección inicial (Abdullah y Suleman, 2008), entre las enzimas excretadas
se encuentran: proteolíticas, glucanoliticas, quitinasas, durante el micoparasitismo
Trichoderma desarrolla estructuras similares a un apresorio que le permiten a la hifa de
Trichoderma una mayor adherencia a la superficie del hongo parasitando, la penetración se
facilita por la secreción de enzimas líticas (como exoquitinsas, las cuales se difunden en el
medio y disuelven fragmentos celulares y sustancias fungicidas que lograr la degradación
de la pared celular (Schubert et al, 2008). Antibiosis: secreción de compuestos
antimicrobianos o antibióticos por el hongo antagonista que suprimen o matan el hongo
patógeno en el área de crecimiento, algunos de estos metabolitos pueden causar disrupción
en las membranas lipídicas o pueden inducir la resistencia de la planta. Competencia: por
nutrientes comunes, por iones de hierro, (Verma et al, 2007)) El micoparasitismo consiste
en: reconocimiento del huésped, adhesión, penetración y muerte del huésped, durante este
procesos Trichoderma secreta celulasas, quitinasas, glucanasas que hidrolizan la pared del
hongo huésped. La competencia por nitrógeno, carbono y otros factores de crecimiento,
junto con la competencia por espacio, (Vanale et al, 2008). Se emplea Trichoderma
harzianum como un controlador efectivo sobre Fitopatógenos como Fusarium, el cual causa
la muerte de la planta adulta (Rojo et al, 2007).

● Materiales y métodos:
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Para la realización de este laboratorio fue necesario seguir unos métodos, pasos, con el fin
de poder realizar de una buena manera la práctica y no solo eso sino también de
conocimiento de los materiales y demás cosas para la implementación de esta práctica:

A. Técnica de enfrentamiento dual

Preparación del agar

Para este método fue necesario tener listo el agar PDA el cual fue muy necesario ya
que con él se trabajaría bastante, principalmente se utilizó dos cultivos los cuales
eran Trichoderma harzianum y Fusarium oxysporum, antes de poder haber hecho
esta técnica medimos 3 cm ambos cultivos para observar los respectivos resultados.

Seguimiento del agar

Luego de ello lo segundo que se hizo fue extraer un poco de ambos cultivos con
ayuda de la tecnica de puncion el cual fue necesario a la hora retirar las dos
muestras pequeñas , y en ello lo que se hizo fue evaluar por medio de otro disco de
Agar.

Finalización del agar

Al haber finalizado esta técnica se pudo observar que hubo un crecimiento libre de
alguna de esas dos especies, no antes de incubar a una temperatura de 22℃
durante 7 días para después observar detalladamente los resultados que se
esperaban.

B. Técnica de Gauze

Preparación del agar

Lo principal que se hizo en esta técnica fue en un disco con agar avena realizar una
siembra de la especie Streptomyces, se tomaron 3 especies diferentes (Bacillus, E
Coli y Areus) dentro de este disco.

Seguimiento del agar

Lo segundo que se hizo fue extraer las 3 especies ya antes mencionadas dentro del
disco con ayuda de la técnica de punción para después ubicar cerca del centro para
después cerrar el disco antes de ello debemos de sembrar el Streptomyces.

Finalización del agar

Luego de haber realizado los anteriores pasos debemos de incubar a 22℃ durante 7
días,también y lo que se hizo en el laboratorio fue ver cómo un crecimiento masivo
en solo una de las bacterias sembradas y lo que se hizo fue analizar y evaluar los
halos de inhibición.
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C. Técnica de Igarashi

Preparación del agar

Para esta técnica fue muy necesario de dos discos uno con Agar PDA y avena,
luego de esto se realizó un cuadro de 3cm x 3cm para poder sembrar una especie
de hongo llamado Fusarium oxysporum y con ayuda de la Trichoderma harzianum
la cual será fundamental en esta técnica.

Seguimiento del agar

En este paso se realizó la punción de un poco del hongo Fusarium oxysporum en el
cuadro previamente marcado en el centro de los discos pero antes de esto lo que
hicimos una siembra masiva de la Trichoderma harzianum cerca del cuadro mas no
dentro ya que si hicimos eso no veremos un resultado óptimo.

Finalización del agar

Para finalizar la técnica se hizo una incubación 22℃ durante 7 días con el fin de ver
resultados ya que para esta técnica se debió de evaluar la inhibición de la
Trichoderma harzianum frente al hongo Fusarium oxysporum y realizar una
comparación de las anteriores técnicas y observar en cual se observó cuál fue la
especie controla a la otra, es decir cual de cada técnica es el antagonista frente a las
demás siembras.

● Resultados:
los resultados que nos dieron fueron los siguientes en cada técnica:
1. técnica de enfrentamiento dual:
Al realizar la técnica de dual pudimos ver que trichoderma tuvo un 66 mm de expansión en
el aislamiento mientras que el fusarium fue inhibido de nutrientes con un 30 mm por lo tanto
al mirar el porcentaje de inhibición nos dio 33% por lo tanto fue eficaz; siendo que el
controlador logró controlar el patógeno. Con un color verde el trichoderma y de color rojo el
fusarium.

Microorganismo Crecimiento libre (mm) Crecimiento influenciado

(mm)

Fusarium oxysporum no aplica 30

Trichoderma harzianum 60 no aplica

tabla 1. técnica dual
45 𝑚𝑚 − 3 𝑚𝑚
PIN= × 100 = 33%
45 𝑐𝑚
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2. técnica se gauze:
Lo que pudimos observar con la técnica de gauze en la (tabla 2) es que al al echar en el
agar avena, poner el controlador trichoderma y los tres patógenos e. coli, basillus y s.
aureus. Pudimos ver que el que el único de los patógenos que inhibió al controlador fue
bacillius con un 30mm en su disco los demás no se inhibieron; sino que los controlo
trichoderma.

Microorganismo Halos de inhibición Halos de inhibición Halos de inhibición

en cm de E. coli en cm de Bacillus en cm de S. aureus
sp.

Streptomyces sp 30 mm no hubo inhibición no hubo inhibición

tabla 2. técnica de gauze
3. Técnica de Gauze modificada:

Microorganismo Promedio de halos de inhibición

generados por Streptomyces sp.

Bacillus sp. 33%

S. aureus 0%

E. coli 0%
tabla 3.1. técnica gauze

4. técnica de igarashi:
Se encontró que al hacer en agar de PDA pudimos obtener al realizar la técnica de
igarashi (tabla 3) el crecimiento excesivo de fusarium en un 79 mm por todo la placa;
al contrario de trichoderma que no tuvo crecimiento en el agar; esto nos quiere decir
que el fusarium con el método de igarashi nos es recomendable ya que no lo
controla, sino que el patógeno sigue creciendo y expandiéndose por el ambiente si
es favorable. a igualmente pasó con la técnica de iguarashi es que por medio de un
agar avena en el que se hizo el aislamiento por cuadro en el cual estaba el fusarium
y por fuera el biocontrolador streptomyces pudimos ver que hubo un error de porque
hub

Microorganismo mm en crecimiento radial mm en crecimiento radial

agar avena agar PDA
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Fusarium oxysporum 63 79
tabla 4. técnica de igarashi

● Discusiones:

fusarium oxysporum

Se caracteriza por producir colonias de rápido crecimiento, con una tasa diaria
cercana a un centímetro en medio papa- dextrosa agar (PDA) a 25°C. es un
patógeno que afecta a los cultivos de plantas. y dañar una plantación completa
dependiendo en el medio que esté el patógeno.(De Granada, E. G.2001.pag 2)

Trichoderma spp

En la acción biocontroladora de Trichoderma se han descrito diferentes mecanismos

de acción que regulan el desarrollo de los hongos fitopatógenos dianas. Entre estos,
los principales son la competencia por espacio y nutrientes, el micoparasitismo y la
antibiosis, los que tienen una acción directa frente al hongo fitopatógeno, Leal (2000)
citado por Lorenzo (12).

Figura 1. técnica Dual

Segun la tecnica dual en el agar PDA pudimos obtener que al hacer el

enfrentamiento entre fusarium oxysporum y trichoderma spp se pudo observar al
esperar 8 días pudimos ver que trichoderma harzianum se expandió en todo la caja
petri controlando a fusarium oxysporum por 6 cm el porcentaje de inhibición que se
tuvo en el experimento fue del 33%; se puede ver la competencia de nutriente PDA
el cual es tomado todos los nutrientes del cultivo el trichoderma harzianum y
dejando con pocos nutrientes al fusarium oxysporum.
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Figura 2. Técnica de Gauze

en la técnica gauze en un agar de Avena se puso 3 patógenos como:Escherichia

coli, bacillus, Staphylococcus aureus y masivamente el biocontrolador Streptomyces
sp. en el cual podemos ver que el único de los patógenos que lo pudo inhibir fue el
bacillus con 3 cm de inhibición.por lo tanto los otros patógenos se pudieron controlar
completamente. pero el bacillus es el único que inhibió el biocontrolador
streptomyces, que ha Escherichia coli y a Staphylococcus aureus los controlo por
medio de la competencia alimentaria de la bacteria.

Figura 3. Técnica Igarashi en Avena

en la técnica de iguarashi es que por medio de un agar avena en el que se hizo el

aislamiento por cuadro en el cual estaba el fusarium y por fuera el biocontrolador
streptomyces pudimos ver que hubo un error en la técnica de el cual se llama
antracnosis es debido a la inadecuada práctica al usar el inadecuado del
biocontrolador fúngico el cual según lo teórico en los aislamientos que sean hecho el
controlador contiene al patógeno. lo que sucedió fue que el patógeno no fue
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controlado sino que se expandió en todo la caja petri; y en la otra caja sucedió lo
mismo pero con streptomyces el cual no pudo controlar a fusarium.

Figura 4. Técnica de Igarashi en PDA

Se encontró que al hacer en agar de PDA pudimos obtener al realizar la técnica de

igarashi el crecimiento excesivo de fusarium por todo la placa; al contrario de
trichoderma que no tuvo crecimiento en el agar; esto nos quiere decir que el
fusarium con el método de igarashi nos es recomendable ya que no lo controla, sino
que el patógeno sigue creciendo y expandiéndose por el ambiente si es favorable.

al hacer la comparación de la técnica dual y igarashi podemos ver en la técnica dual

que el trichoderma controlar al patógeno fusarium por lo tanto, al tomar la técnica de
igarashi lo que pasó es que fusarium se paso el limite de del cuadrito y se expandió
por toda la caja petri ganando en competencia a trichoderma dejándolo sin
nutrientes en el caja nutritiva de avena siendo que el trichoderma se dificulta crecer
en avena mientras que en fusarium le es más fácil crecer exponencialmente.

como lo podemos ver en otras investigaciones Al realizar el análisis de varianza se

evidenciaron diferencias significativas (p ≤ 0,01) tanto para crecimiento micelial
como para el halo de inhibición , y un efecto diferencial de los tratamientos sobre la
cepa de F. oxysporum , obtenida en el municipio de Potosí, seleccionada por su
agresivo y rápido crecimiento micelial.(Eraso Insuasty, C. 2014. pág 241) por eso es
importante en las técnicas de hacer un buen manejo de los instrumentos y tener
cuidado hora de cultivar el patógeno y el biocontrolador

Pudimos ver que en algunos de las técnicas dependiendo de donde se cultiva puede
favorecer a alguno de los individuo por ejemplo: cuando se cultiva fusarium y
trichoderma podemos ver en el agar de PDA que al ver su competencia podemos
ver que en este si funciona el biocontrolador que se expande y controla casi por
completo a fusarium al contrario; la técnica de igarashi que se descontrole y se vio
en cultivo de PDA se tiene más crecimiento excesivo de fusarium esto quiere decir
que fusarium no dejó que hubiera crecimiento de fusarium.
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● Conclusiones:
podemos concluir que al realizar la técnica de igarashi pudimos encontrar que hubo
un crecimiento exponencial de fusarium y no lo que se esperaba que fuera
controlado por trichoderma; por esto se ve que en en el agar PDA se ve que les
favorece a los patógeno fusarium.

podemos ver que en la técnica dual que el enfrentamiento entre trichoderma y

fusarium se encontró que en este método el biocontrolador hubo competición con el
patógeno y lo pudo controlar casi por completo; por esto podemos ver que en
algunos métodos como el igarashi es difícil controlar el resultado final.

● Bibliografía
● Eraso Insuasty, C., Acosta Rodríguez, J., Salazar González, C., & Betancourth
García, C. (2014). Evaluation of Trichoderma spp. strains for control yellowing pea
caused by Fusarium oxysporum. Corpoica Ciencia y Tecnología Agropecuaria, 15(2),
237-249.
● De Granada, E. G., De Amezquita, M. C. O., Mendoza, G. R. B., & Zapata, H. A. V.
(2001). Fusarium oxysporum el hongo que nos falta conocer. Acta biológica
colombiana, 6(1), 7-25.
● Rubio Araujo, F. N. (2015). Métodos de control postcosecha de antracnosis en
frutas.