TECNICATURA EN ANÁLISIS CLÍNICOS

AMINOACIDOS
Y
PROTEINAS

2014
AMINOACIDOS

2014
 Es cualquier molecular orgánica que posee
por lo menos un grupo carboxilo (un acido
orgánico) y un grupo amino (una base
orgánica).

 Forman a las proteínas.

 Existen 20 aminoácidos estándar que

forman las proteínas de la mayoría de los
organismos.
 Fórmula general

 Carbono α, es un carbono quiral por lo tanto hay

enantiomeros (isomeros ópticos).
Configuración:
 Hay dos tipos:
 d: dextrarotatorio
 L:levorotatorio

 Rotan la luz L-Alanina D-Alanina

polarizada a la
derecha y a la COO- COO-
izquierda +
H 3N C H H C NH3+
respectivamente.
CH3 CH3

La mayoria de los aminoacidos con actividad biológica

son los del tipo “L” (forman parte de las proteínas).
Configuración:

-Para un aminoácido con más de un carbono

asimétrico el cambio de configuración del carbono α
de L a D da lugar a un diastereoisómero.

CO2 CO2

H3N H H  NH3


L-Isoleucina H3C H H3C H D-Isoleucina

CH2CH3 CH2CH3
Clasificación:
Según la estructura
ALIFÁTICOS

NO POLARES

AROMÁTICOS

POLARES SIN CARGA

aa CON GRUPOS ÁCIDOS

POLARES CON CARGA

CON N BÁSICO
No
polares

Polares

Ácidos Básico
 Aminoácidos alifáticos
 Su característica fundamental es la hidrofobicidad
de la cadena lateral (con excepción de la glicina (G)
 Suelen ocupar el interior de las proteínas
globulares, donde contribuyen a la estructura
global de la proteína debido al efecto hidrofóbico
(“micela proteica”)
 Reactividad química muy escasa
-
COO-
COO- COO- COO
H 3N + C H
H 3N +
C H H 3N + H 3N + C H
C H CH2
H CH
CH3 CH
H 3C CH3 H 3C CH3
Glicina Alanina Valina
Gly, G Ala, A Leucina
Val, V
COO-
Leu, L
H 3N + C H Isoleucina
CH Ile, I
H 3C CH2
CH3
 Aminoácidos aromáticos
COO-
H 3N + C H
Función: Interviene en la producción del
Colágeno, fundamentalmente en la
Fenilalanina
CH2 Phe, F
estructura de la piel y el tejido conectivo
y algunos neurotansmisores..

COO-
H 3N + C H Función: Es un neurotransmisor directo y
CH2 Tirosina puede ser muy eficaz en el tratamiento de
Tyr, Y la depresión, en combinación con otros
aminoácidos necesarios.
OH

COO- Función: Está inplicado en el crecimiento y en

la producción hormonal, especialmente en la
+
H 3N C H
Triptófano
función de las glándulas de secreción adrenal.
CH2
Trp, W
También interviene en la síntesis de la
NH
serotonina, neurohormona involucrada en la
relajación y el sueño.
 Hidroxiaminoácidos

Función: Junto con algunos aminoácidos

mencionados, interviene en la
-
COO Serina
desintoxicación del organismo, crecimiento
+
H3N C H Ser, S
CH2OH muscular, y metabolismo de grasas y
ácidos grasos.

COO- Función: Junto con la con la L-Metionina

Treonina y el ácido L- Aspártico ayuda al hígado en
+
H3N C H
Thr, T
H C OH sus funciones generales de
CH3 desintoxicación.
 Tioaminoácidos

COO- Función: está implicada en la

Cisteína desintoxicación de los radicales libres.
+
H 3N C H
Cys, C
CH2 También contribuye a mantener la salud
SH de los cabellos por su elevado contenido
de azufre.

COO-
+
Función: Colabora en la síntesis de
Metionina proteínas y constituye el principal
H 3N C H

Met, M limitante en las proteínas de la dieta. El

CH2
CH2 aminoácido limitante determina el
S porcentaje de alimento que va a utilizarse
CH3 a nivel celular.
 Aminas secundarias (“Iminoácidos”)

Función: Está involucrada

COO-
también en la producción de
NH2+ colágeno y tiene gran
importancia en la reparación y
Prolina mantenimiento del músculo y
Pro, P huesos.
 Aminoácidos dicarboxílicos y amidas

COO-
Función: Es muy importante para la
H 3N + C H
Ác.Aspártico desintoxicación del hígado y su correcto
Asp, P funcionamiento. Se combina con otros
CH2
-
aminoácidos formando moléculas
COO capaces de absorber toxinas del
torrente sanguíneo.

COO-
H3N+ C H Asparragina Función: Interviene específicamente
Asn, N
CH2 en los procesos metabólicos del
CONH2 Sistema Nervioso Central (SNC).
 Aminoácidos dicarboxílicos y amidas

COO-
+
Función: Tiene gran importancia en el
H 3N C H Ác.Glutámico funcionamiento del Sistema Nervioso
CH2 Glu, E Central y actúa como estimulante del
CH2 sistema inmunologico.
-
COO

COO-
H3N+ C H Glutamina Función: Nutriente cerebral e
CH2 Gln, Q interviene específicamente en la
CH2 utilización de la glucosa por el cerebro.
CONH2
 Aminoácidos dibásicos
COO-
H 3N + C H Función: Es uno de los más importantes aminoácidos
CH2 porque, en asociación con varios aminoácidos más,
Lisina
CH2 interviene en diversas funciones, incluyendo el
Lys, K
CH2
crecimiento, reparación de tejidos, anticuerpos del
CH2
sistema inmunológico y síntesis de hormonas.
NH3+

COO- Función: tiene una gran importancia en la producción

H3N+ C H de la Hormona del Crecimiento, directamente
Arginina involucrada en el crecimiento de los tejidos y
CH2
Arg, R
CH2 músculos y en el mantenimiento y reparación del
CH2 sistema inmunologico.
NH
+
H2N C
NH2

COO- Función: En combinación con la hormona de

H3N+ C H
Histidina
crecimiento y algunos aminoácidos asociados,
CH2 His, H contribuyen al crecimiento y reparación de los
tejidos con un papel específicamente
NH+ relacionado con el sistema cardio-vascular.
HN
 Clasificación:
 Los aminoácidos se clasifican como esenciales y no
esenciales en la dieta humana; son aminoácidos
esenciales aquellos que se requieren en la dieta ya que
no se pueden biosintetizar. Los ocho aminoácidos
esenciales son:
Aminoácidos esenciales Aminoácidos no esenciales

Histidina Alanina

Leucina Arginina

Isoleucina Asparagina

Lisina Acido Aspartico

Metionina Cisteína

Fenilalanina Glutamina

Treonina Acido glutámico

Triptofano Glicina

Valina Prolina

Serina

Tirosina
Aminoácidos esenciales
 Aminoácidos que el organismo no puede sintetizar y
lo tenemos que ingerir en la dieta. Esto quiere decir
que nuestro organismo puede sintetizar varios
aminoácidos a partir de lo que ingerimos.

isoleucina leucina

lisina metionina

fenilalanina treonina

triptófano valina

Histidina sólo en niños

 fenilcetonuria
La fenilalanina no puede metabolizarse para convertirse en
tirosina.
Se acumula fenilalanina y sus productos metabólicos en sangre y
ciertos tejidos del cuerpo.
Produce: irritabilidad, vómitos, se incrementa el tono muscular.
En casos severos puede ocasionar desordenes cerebrales
(retardo mental).
Puede ser corregido mediante una dieta controlada.

Prueba de tamiz neonatal

PROTEINAS

2014
En péptidos, polipéptidos y proteínas los aminoácidos se
unen unos a otros mediante enlaces amida. El enlace
amida entre un grupo amino de una aminoácido y el
carboxilo de otro se denomina enlace peptídico.
NOMENCLATURA

 Se nombran desde el extremo N-terminal al C-

terminal, usando la terminación il, excepto para el
último aa.
 Ej: ser-asp-tyr-lis-ala-cys

seril-aspartil-tirosil-lisil-alanil-cysteína

22
 Aspartame

 Es un endulcolorante formado por la unión de dos

aminoácidos (Acido aspartico y fenilalanina) unidos por
enlace peptídico. Es 200 veces mas dulce que el azúcar de
caña (sacarosa). Los dos aminoácidos que forman el
aspartame se encuentran de manera natural en muchos
alimentos como las frutas y verduras.
• Este tipo de edulcolorantes se usa en una gran variedad
de productos dietéticas (refrescos, polvos para preparar
bebidas, yogurts, chicles, etc). No se ha demostrado
algún efecto nocivo sobe la salud.
DEFINICIÓN

Biopolímeros de aminoácidos de mas de 6000 daltons,

indispensables para la procesos vitales de los seres
vivos.
Están formadas por C, H, O, N y S
FUNCIONES
CLASIFICACION
SIMPLES
Por su naturaleza
CONJUGADAS
química

FIBROSA
CLASIFICACIÓN DE Por la forma que
GLOBULAR
LAS PROTEINAS adopta

ENZIMAS

PROTEÍNAS DE
TRANSPORTE
CONTRÁCTILES Y
Por su función MÓTILES
Biológica DE DEFENSA

REGULADORAS

NUTRIENTES

HORMONAS
Las proteínas tienen 4 niveles de organización:
 PRIMARIA
 SECUNDARIA
 TERCIARIA
 CUATERNARIA
 ESTRUCTURA PRIMARIA

•Hace referencia a:
•La identidad de aminoácidos.
•La secuencia de aminoácidos.
•La cantidad de aminoácidos.
•La variación en un solo aa hace que cambie su función
biológica.
•Los aa se unen por UNIONES PEPTÍDICAS.
 ESTRUCTURA SECUNDARIA

 Interacciones entre aa que se encuentran próximos en la

cadena.
 La cadena no es lineal, adopta formas en el espacio.
 Los aa interaccionan por puentes H.
 Tipos de estructuras secundarias:
 HÉLICE ALFA
 HOJA PLEGADA BETA
 AL AZAR.
ESTRUCTURA SECUNDARIA
ESTRUCTURA SECUNDARIA
HELICE ALFA

 Los grupos R de los aa se

orientan hacia el exterior.

 Se forman puentes de H
entre el C=O de un aa y el
NH- de otro que se
encuentra a 4 lugares.

 Hay 3.6 aa por vuelta.

 Ej: queratina.
 HOJA PLEGADA BETA

 Los grupos R se
orientan hacia arriba y
abajo alternativamente.

 Se establecen puentes
H entre C=O y NH- de
aa que se encuentran en
segmentos diferentes
de la cadena.

 Ej. Fibroína (seda)

 ESTRUCTURA TERCIARIA
 Una cadena con estructura secundaria adquiere una
determinada disposición en el espacio por interacciones entre
aa que se encuentran en sitios alejados de la cadena.
 Proteínas globulares: se pliegan como un ovillo.
 Proteínas fibrosas: tiene aspecto alargado.
 Ej: mioglobina
ESTRUCTURA TERCIARIA
ESTRUCTURA TERCIARIA
ESTRUCTURA CUATERNARIA

 Surge de la asociación de
varias cadenas con
estructuras terciarias.

 Intervienen las mismas

interacciones que en la
estructura terciaria.
 Tipos de proteínas según su estructura 3ª
GLOBULARES.- Poseen un alto grado de plegamiento y dan
lugar a formas esferoides.

FIBROSAS.- El plegamiento de la cadena polipeptídica es

menor, por lo que presentan formas alargadas.
 PROPIEDADES DE LAS PROTEÍNAS

 Solubilidad: generalmente las globulares son solubles en agua y

las fibrosas no.

 Desnaturalización: pérdida de su estructura tridimensional, y por

tanto de su función biológica, debido a: presión, temperatura y
pH. Desnaturalización reversible e irreversible.

 Especifidad: algunas proteínas son exclusivas de ciertas

especies, incluso hay pequeñas variaciones entre individuos de la
misma especie (una proteína puede tener la misma estructura
tridimensional, la misma función y tener una secuencia peptídica
ligeramente diferente). Además las enzimas reconocen
variaciones tan pequeñas entre dos moléculas distintas como su
estereoisomería.
 Desnaturalización-Hidrólisis
 Desnaturalización de una proteína:
pérdida de la conformación nativa y de
sus propiedades originales (ej.
coagulación por calor de las proteínas
de la clara del huevo).

 Hidrólisis de una proteína: escisión en

aminoácidos (ruptura de un enlace
covalente por adición de agua).

Desnaturalización de la
ribonucleasa: enzima con
puentes disulfuros reducidos y
sin actividad enzimática
ANEMIA FALSIFORME
 Proteínas plasmáticas
Concentración media: 7.2 g/100 ml
Funciones Principales:

•Mantenimiento de la Volemia: factor regulador del intercambio de

líquido entre la sangre circulante y el espacio intersticial.

•Capacidad de amortiguar el pH: acción buffer debido a los restos

de histidina que pueden ceder o aceptar protones.

•Transporte
- de sustancias endógenas (hormonas, ácidos grasos,iones).
- de sustancias exógenas (antibióticos, drogas, toxinas).

•Participación en eventos de coagulación y fibrinólisis

* Participación en eventos de inmunidad (inmunoglobulinas y el

sistema del complemento).

Balance proteico
Síntesis:
• La síntesis de la mayor parte de las
proteínas plasmáticas tiene lugar en el
hígado
• Los linfocitos B son los responsables de
la síntesis de las inmunoglobulinas
Degradación/Pérdidas:
• El catabolismo tiene lugar en muchas
células (endoteliales, fagocitos
mononucleares, fibroblastos cutáneos)
• Pérdidas por filtración glomerular
• Pérdidas a través de la pared intestinal
 MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS
TOTALES

 FÍSICOS  QUÍMICOS

 Absorbancia del enlace peptídico a  Reacción de Kjeldahl

190 nm.  Método de Lowry
 Absorbancia de los aminoácidos  Reactivo de Biuret
aromáticos a 280 nm  Método de Bradford

Qué relación existe entre Absorbancia y Concentración ?

 b

Haz incidente (I0) Haz emergente (Is)

Pérdida por
reflexión Sustancia
absorbente

Ley de Lambert-Beer
“la reducción de la energía radiante (ABSORBANCIA) de un haz de
radiación monocromática es proporcional a la intensidad del haz y a la
cantidad de sustancia (CONCENTRACIÓN) absorbente situada en su
trayectoria”

Absorbancia
A = log Io/Is = ε.b.C
Absorbancia

ε : Absortividad molar (coeficiente de extinción

molar) constante para cada sustancia
Concentración

b : longitud de la trayectoria (en cm)

C : concentración (en M)
 MÉTODO DE BRADFORD
Fundamento
- Coomasie Brillant Blue G-250
- Se une a proteínas por interacciones hidrofóbicas e iónicas
- Esta unión estabiliza la forma Aniónica del colorante, produciendo cambio
de color

Reactivo + Muestra de Proteínas Reactivo

Forma catiónica Forma aniónica
Marrón claro Azul
(465 nm) (595 nm)

Para que la concentración de una sustancia pueda ser determinada en base a su

propiedad de absorber energía radiante, debe existir una correspondencia lineal entre
su concentración y la magnitud de su absorción. La sustancia debe cumplir la ley de
Lambert-Beer.
 ELECTROFORESIS
 La velocidad de las moléculas depende de dos factores:
- Fuerza ejercida por el campo eléctrico sobre la molécula (importa la
carga)
- Resistencia al movimiento o fuerza de fricción (depende de tamaño y
forma de la molécula)
 Soporte:

- Electroforesis en papel

- Electroforesis en gel

Proteínas

Poliacrilamida - Polímero inerte

- Forma una red porosa y actúa como tamiz

Polimerización de acrilamida y bis-acrilamida.

El porcentaje de acrilamida/bis-acrilamida determina el tamaño de los
poros formados y, por lo tanto el rango de separación del gel
 Menor porcentaje poro más grande separo proteínas de gran
tamaño
 Electroforesis en gel de poliacrilamida
PAGE (polyacrilamide gel electrophoresis)

Electroforesis Desnaturalizante Electroforesis Nativa

(SDS-PAGE) (no desnaturalizante)

Proteínas se desnaturalizan y se Proteínas migran en su

les otorga carga (-), por lo que conformación nativa, en función
migran en función de su tamaño de su carga, tamaño y forma

Muestras se desnaturalizan por:

•Calor
•Agente reductor (Beta-
mercaptoetanol o DTT): destruye
puentes disulfuro
•Sodiododecilsulfato (SDS):
detergente que desnaturaliza y se une
a las proteínas, otorgándoles carga (-)
- una molécula de SDS se
une cada 2 aa
- se bloquea la carga
propia de la proteína
Desnaturalizantes - queda con carga (-)
Nativa proporcional a su masa
 Electroforesis en gel de poliacrilamida
PAGE (polyacrilamide gel electrophoresis)

SDS-PAGE
Aplicación de muestra
Buffer superior
Cátodo

Calles o
pocillos
Proteínas migran en
función de su tamaño

Buffer inferior

Ánodo

Al finalizar, se realiza la tinción de bandas

definidas con colorante para proteínas (coomasie
blue)
 Electroforesis en gel de poliacrilamida
PAGE (polyacrilamide gel electrophoresis)

30 kDa
15 kDa
 Western Blot - Transferencia a filtros
Inmovilización de proteínas sobre membranas sintéticas, seguido de la detección
especial de las mismas con anticuerpos.

Trabajar con las proteínas fijadas sobre una membrana tiene diversas ventajas:

1) Son más rápidas de teñir y desteñir;

2) se detectan cantidades menores de proteínas, pues se concentran en la

superficie y no se diluyen en todo el espesor del gel;

3) las membranas son mucho más fáciles de manipular que el propio gel.

A. Electroforesis en gel de poliacrilamida

B. Transferencia a membrana (blotting)

 Western Blot - Transferencia a filtros
gel membrana

B. Transferencia a membrana (blotting)

(- (+
) )
1. Inmovilización de proteínas sobre membrana por
electrotransferencia
-Tinción de proteínas en la membrana
(rojo Ponceau)

2. Bloqueo de los lugares de unión a proteínas de la

membrana (con BSA o leche) para evitar la unión no
específica de anticuerpos.

3. Incubación con anticuerpo primario contra la

proteína de interés
- Lavados

4. Incubación con anticuerpo secundario contra el

anticuerpo primario, unido a marcadores:
- Enzimas: peroxidasa, fosfatasa alcalina
- Átomo radiactivo

- Lavados
5. Revelado de las bandas de proteínas marcadas con
el complejo de anticuerpos
5.1 -Enzimas acopladas a los anticuerpos secundarios:

5.2 –Radioquímicos acoplados a los anticuerpos secundarios: