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Índice
1. OBJETIVO
2. DEFINICIONES
3. ALCANCE Y RESPONSABILIDADES
4. CONDICIONES GENERALES
4.1. Parámetros a validar
4.2. Equipos, materiales y reactivos
5. DESARROLLO
5.1. Condiciones de trabajo
5.2. Preparación de muestras
5.3. Especificidad y selectividad
6. REQUISITOS
7. INFORME DE LA VALIDACIÒN
8. BIBLIOGRAFÌA
1. OBJETIVO
2. DEFINICIONES
En este protocolo se utilizan los siguientes términos según las definiciones que se muestran:
2.2. Radiofármaco: Fármaco al cual se le ha unido un isotopo radioactivo (marcación del fármaco) con
fines de diagnóstico, tratamiento y seguimiento de diferentes patologías tales como cáncer, patologías
cardiovasculares, óseas, entre muchas otras.
2.4. Validación: La validación de un método analítico es el proceso por el cual se establece, mediante
estudios de laboratorio, que las características de desempeño del método cumplen con los requisitos
para las aplicaciones analíticas previstas.
2.6. Tetrabutilamonio (TBA): Es una sal de amonio cuaternario que se utiliza principalmente como base
fuerte y catalizador de transferencia de fase.
2.8. Buffer: Es una o varias sustancias químicas que afectan a la concentración de los iones de hidrógeno
(o hidronios) en el agua. Siendo que pH no significa otra cosa que potencial de hidrogeniones (o peso
de hidrógeno), un buffer (o "amortiguador") lo que hace es regular el pH.
2.9. TLC: Es una técnica cromatográfica que utiliza una placa inmersa verticalmente. La fase estacionaria es
una capa relativamente delgada y uniforme de material seco y reducido a polvo fino que se aplica sobre
una lámina o placa de vidrio, plástico o metal. Las separaciones logradas pueden basarse en la
adsorción, la partición o una combinación de ambos efectos, según el tipo específico de la fase
estacionaria.
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3. ALCANCE Y RESPONSABILIDADES.
Este protocolo se debe aplicar para obtener una comprobación documentada de la validez del método analítico
para la identificación de TBA.
Coordinador de calidad:
Desarrolla la metodología de análisis para la técnica a validar.
Elabora el Protocolo de Validación de la metodología.
Presenta al Director Técnico la metodología para programar su ejecución.
Director Técnico:
Revisa el protocolo de validación de la metodología.
Programa ejecución de la metodología
Asesora en la realización de los análisis y requerimientos del protocolo.
4. CONDICIONES GENERALES
Especificidad y selectividad
Balanza Analítica 1
Estandar de TBA 1
Hidroxido de Sodio 1N 1
Buffer pH 4 csp
Metanol csp
Camara de yodo 1
Balón aforado 1
Microjeringa 1
Pipeta eppendorf 1
Secador 1
5. DESARROLLO
Según la farmacopea europea el límite de impureza de TBA en 18F- radio farmacéutico, está dado por la
siguiente formula:
2.6𝑚𝑔
𝐿𝑖𝑚𝑖𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑇𝐵𝐴 =
𝑉
Dónde:
V: la dosis máxima recomendada en mililitros.
Para el caso de 18F – PSMA – 1007, sintetizado por el modulo de sintesis ALLINONE de Trasis el
volumen es de 19 mL, porque tenemos que el limte maximo de TBA es:
2.6𝑚𝑔
𝐿𝑖𝑚𝑖𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑇𝐵𝐴 = = 0.137 𝑚𝑔⁄𝑚𝐿
19𝑚𝐿
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Solución madre TBA: pesar 1.0mg de estándar TBA y llevar a 10.0 mL con agua grado HPLC, ajustar a
PH 4 con la solución buffer.
Soluciones estándar: A partir de una solución madre de 100 mg / L de hidróxido de tetrabutilamonio 30-
hidrato preparar soluciones estándar con concentraciones de 20, 40, 60, 80, 100, 120 y 140 mg / L de
TBA.
Soluciones para la validación de la dependencia del pH: A partir de una solución madre de 100 mg / L
de hidróxido de tetrabutilamonio 30-hidrato preparar soluciones de pH: 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0
agregando NaOH 1 N o HCl 1N según corresponda.
Fase móvil MeOH y NH4OH90:10 (v / v): preparar la cantidad necesaria para llevar a cabo las pruebas
en una proporción de 90 %MeOH y 10% NH4OH (25% en agua).
18F – PSMA – 1007: se solicitara a producción una muestra de PSMA – 1007 Del lote correspondiente al
día de la realización del ensayo.
Preparación de placas: Cortar la placa de silica gel en tiras de 20 x 100 mm. Con un lápiz, dibujar
ligeramente líneas a 10 mm y 90 mm.
Aplicar muestras de 1µL de solución correspondiente, en placas de silica gel con una micropipeta
eppendor en la línea de 10 mm a 5 mm de los bordes de la placa. Solo colocar dos puntos por cada
Secar las manchas con una corriente de aire fresco y posteriormente colocar 10 µL de solución de fase
movil en cada punto y volver a secar con una corriente de aire fresco.
Preparar diferentes de concentraciones de TBA de 20, 40, 60, 80, 100, 120 y 140 mg /L. Una vez
preparada las soluciones proceder según el ítem 5.3.
Comparar las machas de las diferentes soluciones de TBA. Encontrar diferencia entre las diferentes
concentraciones de TBA, determinar la concentración más baja en la que la macha se diferencia
claramente, la cual determinara el límite de detección.
5.5. Especificidad
Proceder según ítem 5.3. Examinar las machas obtenidas y determinar las intensidades de las mismas.
5.6. Precisión
Proceder según ítem 5.3. Examinar las machas obtenidas y determinar las intensidades de las mismas.
Colocar sobre una placa de silica gel, sobre línea de 10 mm del borde inferior a aproximadamente
a 5 mm del borde de la tira muestras de:
TBA concentración de límite de detección (lado derecho) y 18F – PSMA – 1007 muestras pura
(lado izquierdo)
TBA concentración de límite de detección (lado derecho) y 18F – PSMA – 1007 muestras con
TBA estándar (límite de detección) (lado derecho)
Secar la placa con una corriente aire fresco y poner la placa en cámara de corrida.
Retirar la tira cuando el disolvente alcance la línea de 90 mm y secar con una corriente de aire
fresco
6. REQUISITOS
6.1. Las soluciones usadas deben estrictamente estar dentro de la fecha de vigencia.
6.2. Los equipos, instrumentos y demás usados deben estar rigurosamente detallados en cuanto a
especificaciones, procedencia, fechas de vencimiento, y todo lo que relacione el procedimiento.
6.4. Adjuntar los procedimientos operativos estandarizados aprobados y vigentes de los métodos analíticos a
validar.
7. INFORME DE VALIDACION
8. BIBLIOGRAFIA
USP41 / NF36 “Farmacopea de los Estados Unidos de América”. [621] Cromatografía, [466]
Impurezas Comunes, Pags 6796, 6644-6445.