PRÁCTICA Nº 03

ACCION DE LOS INHIBIDORES COMPETITIVOS Y NO

COMPETITIVOS SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Introducción:

Una propiedad característica de las enzimas es su sensibilidad a muy diversos reactivos

químicos que reaccionan con grupos en la superficie de la proteína de lo que resulta
inhibición de la actividad catalítica.

Los inhibidores enzimáticos se clasifican en dos grandes grupos: Reversibles e

Irreversibles, que se pueden distinguir en base a un criterio experimental. Si después de
hacer actuar el inhibidor sobre la enzima, eliminamos por algún método como podría ser
la diálisis, el exceso de inhibidor, la enzima recupera su actividad original, se dice que el
inhibidor es reversible. A la inversa si la enzima continúa inhibida después de la reacción
del exceso, de inhibidor, se dice que el inhibidor es irreversible.

En el primer caso el inhibidor interactúa en forma reversible con algún grupo esencial de
la enzima-inhibidor. Se establece entonces un equilibrio entre ese complejo y la enzima
y el inhibidor libres. En el caso de inhibidores irreversibles ello no es posible ya que
actúan modificando algunos de los grupos esenciales de la actividad enzimática.

Respecto a los inhibidores

reversibles es importante destacar
que la interacción entre inhibidores y
la enzima se traduce en varios tipos
de inhibición perfectamente
diferenciables experimentalmente.
Los dos tipos más comunes son: Las
inhibiciones reversibles no
competitivas, a los que se pueden
agregar las inhibiciones reversibles
acompetitivas.

Un ejemplo clásico de la inhibición competitiva reversible es la enzima succinato

deshidrogenasa que tiene como sustrato el ácido succinico y puede ser inhibida por
sustancias estructuralmente parecidas a dicho ácido como son los ácidos malónico,
oxálico y glutámico; en el caso de la inhibición no competitiva es causada por los
inhibidores como N-etilamida, cloruro de mercurio, EDTA.

Objetivos:

1. Armando el siguiente sistema enzimático, según las siguientes

especificaciones del instructivo, los participantes serán capaces de
demostrar los efectos inhibitorios del malonato y del cloruro de mercurio,
valorando el viraje del color del indicador 2,6-diclorofenolindofenol.
2. Demostrar el efecto reversible del cloruro de mercurio, por adición de
mayor concentración de sustrato y valoración final del viraje del color del
indicador 2,6-diclorofenolindofenol.
Reactivos a Utilizar:

- Buffer Fosfato 0,1 M pH 7,2.

- Succinato de sodio 0,1 M.
- Succinato de sodio 0,5 M.
- 2,6-Diclorofenolindofenol.
- Malonato de sodio 0,1 M.
- Cloruro de mercurio 0,1 M.
- Homogenizado hepático 10%.

Procedimiento Experimental:

Armar el siguiente sistema.

SISTEMA
COMPONENTES I II III IV V

Buffer Fosfato 0,1 M pH 7,2. 2,0mL 1,0mL 1,3mL 1,3mL 1,0mL

Succinato de sodio 0,1 M. 0,2mL 0,2mL 0,2mL 0,2 mL

Cianuro de sodio 0,1 M 0,5mL

Cloruro de mercurio 0,1 M. 0,3mL

Malonato de sodio 0,1 M. 0,5mL

2,6-Diclorofenolindofenol 1,0mL 1,0mL 1,0mL 1,0mL 1,0mL

Homogenizado hepático 10%. 1,0mL 1,0mL 1,0mL 1,0mL 1,0mL

Dejar en reposo por 30minutos a la temperatura ambiente.

Observar los resultados en cada uno de los tubos (Cambio de color).

Anotar y luego a los tubos II, III y IV, agregar lo siguiente:

SISTEMA
COMPONENTES II III IV
Succinato de sodio 0,5 M 0,5mL 0,5mL
Buffer fosfato 0,1 M pH 7,2 0,5mL

Dejar en reposo 15 minutos a la temperatura ambiente y luego observar los resultados

y anotar.
Cuestionario:

1. ¿Cuáles son los efectos del mercurio, plomo, arsénico y cadmio en el organismo?
2. ¿Cuáles son los efectos del cianuro en el organismo?
3. ¿Qué inhibidores pueden actuar intoxicando el organismo, fundamente cada uno
de ellos?

Evaluación de Resultados: