Determinación de Proteína. Método Kjeldahl- (NMX-AA- 026-SCFI-2010).

Resumen

Analíticamente el nitrógeno orgánico y el amoniacal pueden ser determinados

por el método Kjeldahl, el cual se aplica para la determinación del contenido de
nitrógeno en sustancias orgánicas e inorgánicas; aunque la técnica y los equipos
han sufrido numerosos cambios desde que fue publicado por primera vez, los
principios básicos introducidos por Johan Kjeldahl perduran hasta hoy (NMX-AA-
026-SCFI-2010).

El método se basa en la destrucción de la materia orgánica con ácido sulfúrico

concentrado, formándose sulfato de amonio que en exceso de hidróxido de
sodio libera amoníaco, el que se destila recibiéndolo en ácido bórico. El borato
de amonio formado se valora con ácido clorhídrico.

Introduccion

El contenido total de proteínas en los alimentos se compone de una mezcla

compleja de proteínas. Estos existen en combinación con carbohidratos o
lípidos, que pueden ser físicos o químicos. Actualmente, todos los métodos para
determinar el contenido total de proteínas de los alimentos son de naturaleza
empírica. Un método absoluto es el aislamiento y el pesaje directo de la
proteína, pero este método solo se usa ocasionalmente en la investigación
bioquímica, ya que es difícil y poco práctico. En 1883, el investigador danés
Johann Kjeldahl desarrolló el método actualmente más utilizado para el análisis
de proteínas (método Kjeldahl) mediante la determinación de nitrógeno orgánico.
En esta técnica, las proteínas y otros componentes orgánicos de los alimentos
se digieren en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores. El
nitrógeno orgánico total se convierte por digestión en sulfato de amonio. La
mezcla digerida se neutraliza con una base y se destila posteriormente. El
destilado se recoge en una solución de ácido bórico. Los aniones de borato
formados de esta manera se titulan con HCl estandarizado (o H2SO4) para
determinar el contenido de nitrógeno en la muestra. El resultado del análisis es
una buena aproximación del contenido de proteína cruda del alimento, ya que el
nitrógeno también proviene de componentes no proteicos. El método Kjeldahl
ha sufrido varias modificaciones. Originalmente, se usaba permanganato de
potasio para llevar a cabo el proceso de oxidación (digestión); sin embargo, los
resultados no fueron satisfactorios, por lo que se descartó el reactivo. En 1885,
Wilforth descubrió que la digestión podría acelerarse usando ácido sulfúrico y
agregando un catalizador. Gunning en 1889 propuso la adición de sulfato de
potasio, que eleva el punto de ebullición del ácido sulfúrico usado en la
digestión, para reducir el tiempo de reacción. Hoy en día, el sulfato de cobre
penthidratado CuSO4.5H2O se utiliza principalmente como catalizador.

Objetivo

Determinar la concentración de nitrógeno presente en la muestra para luego ser

transformado a través de un factor en proteína.

Materiales y reactivos.

MATERIALES REACTIVOS
Matraces Kjeldahl de 500 mL
 Oxido de mercurio


Matraces Erlenmeyer de 250 mL
 Sulfato de potasio o sulfato de

sodio anhidro

Perlas de ebullición
 Ácido sulfúrico (98%)


Vaso de precipitado de 100 mL
 Parafina


Probeta de 100 y 50 mL
 Solución de sosa-tiosulfato


Pipeta de 5 mL
 Solución indicadora


Bureta de 25 mL
 Solución de ácido bórico saturado

(5%)


Soporte para bureta con pinzas
 Solución estándar de ácido

clorhídrico 0.1N

Guantes de asbestos Proteina (0.1 g); Myo-Vector, whey.

Papel arroz libre de nitrógeno


Espátula

Aparatos e Instrumentos.

 Unidad de digestión y destilación de Kjeldahl

 Balanza analítica con ± 0,1 mg de sensibilidad

Procedimiento.

1. Verificar que la unidad de digestión y destilación de Kjeldahl este en

optimo estado para su uso pertinente.
2. Pesar de 15 a 100 mg de muestra en papel arroz libre de nitrógeno.

3. Colocar la muestra en el fondo de un matraz micro-kjeldahl y adicionar 1.9
gramos de sulfato de potasio, 40 mg de óxido de mercurio rojo y 2 mL de
ácido sulfúrico Q.P.

4. Colocar en digestión durante 1.5 a 2 horas hasta que la muestra presente
un tono verde aceituna o incolora.

 5. Dejar enfriar el matraz de micro-kjeldahl y montar el sistema de
destilación por arrastre de vapor (Adicionar unos 100 mL de agua).
Colocar unas perlas de ebullición.

6. Colocar en el sistema de alimentación 10 mL de solución de hidróxido de
sodio- Tiosulfato de sodio.

7. Recuperar el destilado en una matraz Erlenmeyer de 250 mL.
Conteniendo 5 mL de solución saturada de ácido bórico (al 5 %), hasta
colectar aproximadamente 50 mL de destilado.

8. Adicionar al destilado 2 a 4 gotas de indicador rojo de metilo-azul de
metileno y titular éste con HCl 0.01 N hasta el vire a color violeta del
indicador.
9. Reportar el gasto de HCl 0.01 N
10. Ralizar los caluculos pertinentes para la determinacion.

Resultados.

Porcentaje de Nitrógeno:

Donde;

VHCl = Volumen gastado de ácido clorhídrico gastado en la muestra menos el

blanco.

NHCl = Normalidad del ácido clorhídrico.

VHCL=14.5 ml
NHCL=0.01
Miliequivalente= 0.014
Muestra= 0.102 g
% Nitrogeno= 1.99019 %

Porcentaje de proteína.

% Proteína % Nitrógeno * Factor de Kjeldahl

% Proteina = 1.99019*6.25
% Proteina = 12.43 %