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GEN�TICA FORENSE

La Gen�tica forense es una especialidad de la Gen�tica que incluye un conjunto de


conocimientos de Gen�tica necesarios para resolver ciertos problemas jur�dicos. Los
tipos de pericia m�s solicitados al laboratorio de Gen�tica forense por los
tribunales
son casos de investigaci�n biol�gica de la paternidad, pericias de criminal�stica
biol�gica (estudio de vestigios biol�gicos de inter�s criminal como manchas de
sangre, esperma, pelos, etc.) y, finalmente problemas de identificaci�n.
La Gen�tica forense comenz� con el descubrimiento en el a�o 1900 por Karl
Landsteiner del grupo ABO1
y con la demostraci�n de su herencia de este grupo en
1910. Poco despu�s (1912) fue utilizado ya en casos de investigaci�n biol�gica de
la
paternidad y pronto en el an�lisis de vestigios biol�gicos de inter�s criminal como
manchas de sangre.

e gen�tica forense se define el uso de ciertas t�cnicas empleadas en gen�tica para


la identificaci�n de los individuos en base al an�lisis del ADN. El hecho de
utilizar el an�lisis de ADN para identificar a una persona sigue un razonamiento
sencillo. Cada ser humano es diferente; dos personas pueden ser m�s o menos
parecidas, sobre todo entre familiares cercanos, pero nunca son id�nticos, ni
siquiera en el caso de los gemelos univitelinos. Esta diferenciaci�n entre las
personas se debe a que existen millones de combinaciones posibles de ADN entre un
�vulo y un espermatozoide, debido a la recombinaci�n gen�tica que se produce en la
meiosis. Pero a pesar de ello, los genes de todos los seres humanos son poco
variables y constituyen un gran porcentaje de la informaci�n contenida en la
mol�cula de ADN; la informaci�n restante, incluye sectores que pueden exhibir un
cierto grado de variabilidad entre los individuos, en consecuencia: �todos los
seres humanos tenemos sectores del ADN en com�n y otros que no lo son�. El llamado
An�lisis de ADN es un conjunto de t�cnicas utilizadas para detectar sectores en la
cadena de ADN que son variables en la poblaci�n. Estas regiones son denominadas
regiones polim�rficas o polimorfismos. El t�rmino polimorfismo expresa la
variabilidad que existe dentro de un fragmento de ADN, es decir, el n�mero de
alelos que hay en un locus. Como regla general cuantos m�s alelos haya, mayor
polimorfismo, y por tanto mayor poder de identificaci�n. Al analizar un determinado
n�mero de regiones polim�rficas la probabilidad de que dos individuos sean
gen�ticamente iguales es pr�cticamente nula, excepto en los gemelos univitelinos.

�ndice
1 Origen
2 Marcadores gen�ticos que se usan en gen�tica forense
3 Tipos de ADN en los que se estudian los marcadores gen�ticos
3.1 ADN nuclear
3.2 ADN mitocondrial
3.3 Polimorfismos del cromosoma Y
4 T�cnicas para analizar los polimorfismos del ADN extra�do
5 Individualizaci�n de las muestras biol�gicas
6 Criminal�stica
6.1 Muestras dubitadas e indubitadas
7 An�lisis de muestras biol�gicas
8 Exclusi�n e inclusi�n
9 Investigaci�n de la paternidad
10 La probabilidad de paternidad
11 �ndice de paternidad
12 Identificaci�n de restos cadav�ricos
13 Cat�strofes masivas
14 Bases de datos
15 Bibliograf�a
Origen
La gen�tica forense no surge como tal, sino que evoluciona a partir de otra rama
conocida como hemogen�tica forense; nace a principios del siglo XX, cuando Karl
Landsteiner describe el sistema ABO de los hemat�es y Von Durgen y Hirschfeld
descubren su transmisi�n hereditaria. El objetivo de esta ciencia era la
identificaci�n gen�tica en cr�menes y casos de paternidad. Inicialmente, las
investigaciones se centraban en el estudio de ant�genos eritrocitarios (sistema
ABO, Rh, MN), prote�nas s�ricas y enzimas eritrocitarias. Con el estudio de dichos
marcadores pod�a incluirse o excluirse una persona como posible sospechoso por
poseer una combinaci�n gen�tica igual o diferente a la del vestigio biol�gico
hallado en el lugar de los hechos.

Pero fue a mediados de siglo cuando gracias al descubrimiento del ADN y de su


estructura y al posterior avance en las t�cnicas de an�lisis de dicha mol�cula la
Hemogen�tica Forense evolucion� considerablemente hasta el punto de que hoy en d�a
la Gen�tica Forense es una disciplina aut�noma y en constante crecimiento. Aunque
la ciencia pose�a las herramientas necesarias para el estudio del ADN, su
aplicaci�n en la resoluci�n de casos judiciales no se produjo hasta 1985.

Esta subespecialidad se centra b�sicamente en tres �reas:

Investigaci�n de la paternidad: Impugnaci�n por parte del supuesto padre o


reclamaci�n por parte de la madre y/o del hijo.
Criminal�stica: Asesinato y delitos sexuales (violaci�n sexual). Se analizan restos
org�nicos humanos (sangre, pelo, saliva, esperma, piel).
Identificaci�n: Restos cadav�ricos (por ejemplo, los restos del zar Nicol�s II de
Rusia y su familia) o personas desaparecidas (como sucedi� en Argentina con los
ni�os desaparecidos durante la dictadura militar).
Marcadores gen�ticos que se usan en gen�tica forense
Los marcadores gen�ticos que se utilizan actualmente est�n constituidos por
regiones de ADN repetitivo que presentan una gran variabilidad de tama�o entre los
distintos individuos de una poblaci�n. Estas regiones como ya hemos dicho, se
conocen con el nombre de regiones polim�rficas. El principio b�sico de estos
polimorfismos gen�ticos de estas regiones reside en la variaci�n del n�mero de
veces que se repite en t�ndem una secuencia determinada (una repetici�n en t�ndem
es una secuencia corta de ADN que se repite consecutivamente, en un locus
espec�fico). Seg�n esto se clasifican en:

VNTR (acr�nimo ingl�s: Variable Number of Tandem Repeats: n�mero variable de


repeticiones en t�ndem). Son locus cuyos alelos difieren por tener un n�mero
variable de repeticiones en t�ndem. Un ejemplo de VNTR en humanos es una secuencia
de ADN de 17 pb que se repite entre 70 y 450 veces en el genoma. El n�mero total de
pares de bases en ese locus puede as� variar entre 1190 y 7650. Ventajas de estos
polimorfismos:
Son muy variables en la poblaci�n: los perfiles de ADN var�an de una persona a
otra, por tanto podemos afirmar que no existen dos personas con el mismo n�mero de
repeticiones en t�ndem. Cuando se comparan los perfiles de un solo locus VNTR para
individuos no relacionados entre s�, habitualmente son diferentes. No obstante, es
posible que dos personas tengan el mismo perfil en uno o dos loci por casualidad.
Sin embargo, la probabilidad de que dos personas tengan el mismo perfil de ADN en
4, 5 o 6 loci VNTR diferentes es extremadamente baja. Cuando se usan los perfiles
de ADN con fines medico-legales, se analizan de 4 a 6 loci VNTR diferentes.
El n�mero de repeticiones es heredable. Dado que recibimos un cromosoma de cada
tipo del padre y otro de la madre, tendremos un n�mero de repeticiones proveniente
de �ste y otro de �sta. En forma de esquema, consideremos los individuos A y B.
Supongamos que existen dos hipot�ticos VNTR, uno de ellos en una cierta regi�n del
cromosoma 6 y otro en el 15.
Existen dos tipos de polimorfismos de repetici�n de uso en diagn�stico gen�tico,
los VNTR-minisat�lites y los VNTR-microsat�lites.

Los VNTR-minisat�lites o MVR (minisatellite variant repeats) son loci que


corresponden a secuencias de ADN de unas pocas decenas de nucle�tidos (sobre 30
pares de bases) repetidas en t�ndem. El n�mero de dichas repeticiones var�a de
cromosoma a cromosoma. La singularidad m�s especial de este tipo de polimorfismos
est� en que cada loci puede presentar muchos alelos distintos (tantos como
repeticiones), sin embargo presentan el inconveniente que no est�n distribuidos por
todo el genoma y por lo tanto solo pueden ser utilizados en el diagn�stico de un
n�mero muy reducido de casos. Los VNTR-minisat�lites han encontrado su m�xima
aplicaci�n en la determinaci�n de la paternidad y en los protocolos de
identificaci�n gen�tica en el �mbito judicial. Cuando se habla de huellas
dactilares del ADN se est� hablando de este tipo de polimorfismo.
Los VNTR-microsat�lites o STR (short tandem repeats) Corresponden a la repetici�n
en t�ndem de secuencias de entre 2 y 5 nucle�tidos. Los microsat�lites presentan
dos caracter�sticas que los hacen ideales para su uso. En primer lugar, est�n
distribuidos de forma casi homog�nea por todo el genoma y en segundo lugar,
presentan un n�mero elevado de alelos con frecuencias similares entre s�, de forma
que la probabilidad de que un individuo sea heterocigoto es muy elevada (presentan
una alta heterocigosidad).
Estas regiones hipervariables pertenecen al denominado �ADN no codificante� son
regiones no conservadas y por tanto no sujetas a una presi�n selectiva intensa,
originando un gran n�mero de variantes, que son los que denominamos alelos. Estas
zonas llamadas polim�rficas son las que nos interesan en gen�tica forense para
poder diferenciar unas muestras de otras. Por tanto, no es interesante analizar la
mol�cula de ADN completa, principalmente por dos razones:

Se tardar�a mucho tiempo.


La mayor parte de la mol�cula es com�n en todos los humanos y no se podr�an
distinguir.
Tipos de ADN en los que se estudian los marcadores gen�ticos
ADN nuclear
Siempre que sea posible se realizar� el an�lisis de polimorfismos de este ADN, pues
son los que m�s informaci�n nos dar�n en cuanto a la identidad de la muestra. Se
encuentra en el n�cleo, y se hereda mitad de la madre y mitad del padre, con
excepci�n del ADN presente en el cromosoma Y masculino, que s�lo se hereda por
l�nea paterna.

Las caracter�sticas m�s importantes del ADN nuclear para identificaci�n humana son:

Es �nico para cada persona, excepto en el caso de los gemelos univitelinos.


Permite establecer relaciones entre hermanos, primos, abuelos nietos, y otro grados
de parentesco, porque como veremos, otros tipos de ADN s�lo nos permitir�n
establecer relaciones de paternidad (cromosoma Y) y de maternidad (ADN
mitocondrial).
Sirve para determinar el sexo de la persona de la que proviene una muestra porque
se puede establecer la presencia de XX o XY en el par 23.
Posee un enorme potencial de estudio, por la gran cantidad de ADN no codificante y
las regiones tipo STR y SNP.
Uno de los fragmentos de ADN nuclear m�s estudiados es la amelogenina. Se trata de
un marcador muy �til porque nos informa sobre el sexo del individuo al que
pertenece la muestra.

La amelogenina es un locus localizado en una regi�n hom�loga de los cromosomas


sexuales. Existe una diferencia de 6 pares de bases entre el tama�o del alelo
presente en el cromosoma X y el Y, que se debe a una peque�a deleci�n en el
cromosoma X. El resultado de la amplificaci�n por PCR de este locus en un ADN
femenino (XX) ser� de una �nica banda, mientras que si el ADN es masculino (XY), el
resultado ser�n dos bandas de distinto tama�o.

No obstante, hay que tener en cuenta que, aunque ocurre con muy baja frecuencia, se
ha detectado la existencia de deleciones en esta regi�n del cromosoma Y, de tal
forma que una muestra masculina podr�a asignarse err�neamente como femenina. En
este caso, el an�lisis de marcadores espec�ficos del cromosoma Y permitir�an una
correcta asignaci�n del sexo. El inconveniente que presenta el estudio de
marcadores concretos del cromosoma Y, es que se heredan sin cambios significativos
en una misma familia de padre a hijo, de modo que nos permiten identificar a un
var�n de la familia pero tendremos que estudiar otros marcadores para distinguir
entre abuelo, padre, hijo, etc.

Despu�s de una extracci�n de ADN en muestras que se encuentran en muy mal estado de
conservaci�n, se obtienen fragmentos de s�lo 100-200 nucle�tidos debido a su estado
de degradaci�n (rotura), con el agravante de que muchas veces estas muestras van
acompa�adas de ADN bacteriano. Por el contrario las muestras de tejido fresco
proporcionan fragmentos de ADN de m�s de 10.000 nucle�tidos.

Pero existen situaciones en las que es recomendable el an�lisis de otros tipos de


polimorfismos como son los polimorfismos de ADN mitocondrial y polimorfismos
ligados al cromosoma Y.

ADN mitocondrial
Existen numerosas mitocondrias en cada c�lula (entre 250 y 1000 seg�n el tipo
celular, las necesidades metab�licas y el tipo funcional) y varias copias de ADN
mitocondrial en cada mitocondria, es decir, existen mayor cantidad de copias de
ADNmt que de ADN nuclear por c�lula, de forma que hay una sola copia de ADN nuclear
en una c�lula mientras que puede haber miles de copias de ADNmt. Este hecho hace
que en muestras forenses muy cr�ticas (con escasa cantidad de ADN o con ADN en mal
estado) tenga m�s �xito el an�lisis de ANDmt que el de ADN nuclear. Sin embargo, el
ADNmt presenta una peculiaridad, se hereda �nica e �ntegramente de la madre, sin
que exista ninguna combinaci�n con el material del padre. Por este motivo se dice
que es un genoma haploide.

La causa de que no exista mezcla con el material del padre es la siguiente: las
mitocondrias del espermatozoide se localizan en el cuello (entre la cabeza y la
cola), con el fin de aportar la energ�a que esta c�lula necesita para mover la cola
y desplazarse en busca del �vulo. Al producirse la fecundaci�n solo penetra en la
c�lula femenina la cabeza del espermatozoide (con el ADN nuclear) quedando fuera la
cola y el cuello, y con �l todas las mitocondrias. Esto hace que el padre no aporte
dicho material a su descendencia.

Las caracter�sticas b�sicas que lo hacen �til en investigaci�n forense y


antropol�gica son:

El elevado n�mero de copias por c�lula que hace alguna de ellas resista las
condiciones adversas sin ser degradada.
Su peque�o tama�o. Esto facilita la conservaci�n en el tiempo a pesar de que las
condiciones no sean apropiadas: al ser m�s peque�o que el ADN nuclear la
probabilidad de verse afectado es menor.
Estas 2 caracter�sticas garantizan las estabilidad postmortal y una mayor
resistencia que el nuclear.

Pero tambi�n tiene desventajas o puntos d�biles como:

No es espec�fico de cada persona, sino que se asocia a todas las personas que
proceden de la misma madre, abuela materna, etc.
S�lo es �til cuando se trata de hacer estudios por v�a materna, de modo que permite
identificar a cualquier persona (hombre o mujer) frente a su madre, no frente a su
padre.
Presenta gran dificultad t�cnica por lo que restringe su uso a laboratorios
especializados.
Este tipo de ADN se utiliza sobre todo en los casos siguientes:

Cuando existe una gran degradaci�n de las muestras por las malas condiciones de
conservaci�n en que permanecieron hasta que fueron encontradas en lugar del crimen
o por la antig�edad que tienen. En este caso el ADN mitocondrial se encontrar� en
mejor estado que el nuclear debido a su mayor n�mero de copias por c�lula. Tal es
el caso de restos �seos y dientes antiguos o sometidos a condiciones extremas.
Cuando la cantidad de muestra de que se dispone es m�nima (pelos sin bulbo por
ejemplo). Un pelo con bulbo caduco o un fragmento de pelo contendr� una cantidad de
ADN nuclear tan escasa que en principio los an�lisis de estas muestras mediante ADN
nuclear resultar� negativo.
En la identificaci�n de restos biol�gicos y el establecimiento de una relaci�n
familiar cuando no se dispone de los progenitores y no queda m�s remedio que
realizar una comparaci�n con familiares m�s lejanos. Si se trata de familiares v�a
materna tendr�n exactamente el mismo ADN mitocondrial aunque se trate de familiares
lejanos. Un estudio de ADN nuclear en estos casos ser�a poco informativo ya que
cuanto m�s alejada sea su relaci�n familiar, menos alelos compartir�n.
Cuando existe un sospechoso en un hecho delictivo pero se dispone de muestra de la
cual no se conoce su procedencia, se puede recurrir al estudio del ADN mitocondrial
de un familiar relacionado matrilinialmente para excluirlo.
Polimorfismos del cromosoma Y
El cromosoma Y s�lo existe en varones y todos los individuos varones emparentados
por l�nea paterna comparten el cromosoma Y (casi en su totalidad) pues se hereda
directamente de padres a hijos sin mezclarse con ning�n material procedente de la
madre. Por tanto, s�lo es posible identificar linajes paternos mediante el estudio
de su cromosoma Y, mientras que no es posible identificar individuos. Respecto a
los polimorfismos del cromosoma Y se analizan microsat�lites (STRs).

Los principales problemas derivan de las caracter�sticas hereditarias del cromosoma


Y:

No es �nico de cada persona, sino que es com�n para todos los pertenecientes a un
linaje paterno com�n.
S�lo se puede aplicar a los hombres de modo que en un estudio de paternidad, no
sirve para determinar si un hombre es padre de una mujer.
Existen varios casos especiales en los cuales el an�lisis de los polimorfismos del
cromosoma Y son de gran utilidad:

Casos de paternidad:
Casos de paternidad en los que no se dispone de material biol�gico de la madre. Nos
bastar� con disponer de la muestra del padre y compararla con la del presunto hijo
para comprobar si ambas presentan id�nticos polimorfismos Y.
En casos complejos en los que falta el padre, pero tenemos por ejemplo al abuelo.
Casos de mezclas en agresiones sexuales:
Agresiones en las que el semen del sospechoso var�n se encuentra mezclado con
c�lulas de una v�ctima mujer: los polimorfismos del cromosoma Y son detectados de
forma m�s sensible en el ADN de un individuo a pesar de que �ste se encuentre
inmerso en una gran cantidad de ADN femenino. Con marcadores nucleares esto no
ocurre pues se detecta antes el material femenino sobre todo si la cantidad de
c�lulas epiteliales femeninas es muy superior al n�mero de espermatozoides. Adem�s,
el uso de polimorfismos de ADN del cromosoma Y nos permite incluir o excluir a un
sospechoso c�modamente.
Delitos en los que el agresor es un individuo azoosp�rmico: los individuos
azoosp�rmicos tienen ausencia de espermatozoides en el eyaculado. Los
espermatozoides son la mayor fuente de ADN en las muestras de semen, por lo que un
individuo azoosp�rmico tiene mucho menos ADN seminal para el an�lisis. La cantidad
de ADN por mililitro (mL) en el semen de un individuo esp�rmico es aproximadamente
de 450 microgramos (�g) en los espermatozoides, y de 30 �g en los leucocitos y
c�lulas epiteliales.
Por ello, en un individuo azoosp�rmico, el contenido de ADN es aproximadamente de
s�lo el 6.3% del contenido en un individuo esp�rmico. Por las mismas razones que en
el caso anterior, es posible la detecci�n de ADN de las c�lulas epiteliales y los
leucocitos en eyaculados de individuos vasectomizados aunque se encuentre mezclado
con ADN de la v�ctima.

Agresiones sexuales m�ltiples: el uso de los microsat�lites del cromosoma Y en


estos casos permite determinar el n�mero m�nimo de agresores.
Otros tipos de mezclas: en mezclas de sangre-sangre, o de sangre-saliva, o de
sangre-pelos, el cromosoma Y es una herramienta de trabajo que puede aportar
valiosa informaci�n.
Como herramienta de �screening�:
En casos de agresi�n sexual: los polimorfismos Y pueden servir para relacionar
r�pidamente estos casos (bases de datos) y excluir sospechosos de manera r�pida
antes de profundizar en marcadores autos�micos.
En grandes cat�strofes: Cuando en una cat�strofe aparece un gran n�mero de
cad�veres puede ser interesante clasificarlos seg�n sus polimorfismos Y para poder
discriminar qu� cad�veres tendremos que cotejar con cada familia antes de realizar
los estudios de ADN nuclear autos�mico. Esto resulta muy �til cuando, por ejemplo,
los familiares vivos que se usan como muestras de referencia son los hermanos de
las v�ctimas.
Tanto el ADNmt, como los polimorfismos del cromosoma Y, tienen mucho menos poder de
discriminaci�n que el ADN nuclear autos�mico utilizado habitualmente. Ninguno de
estos tipos de ADN identifica individuos, sino l�neas familiares maternas y
paternas.

T�cnicas para analizar los polimorfismos del ADN extra�do


En un principio la manera de estudiar dichos marcadores se hizo por medio de la
t�cnica llamada hibridaci�n con sondas o Southern blot.

El tipo de sondas que se utilizan en esta t�cnica pueden ser de dos tipos:

Sondas Uni-locus (SLP): La t�cnica permite detectar loci minisat�lites �nicos. Son
espec�ficas para una regi�n de un determinado cromosoma. Se unen a secuencias
largas de nucle�tidos y presentan mayor variabilidad que las sondas multi-locus.
Como resultado se observan una o dos bandas por individuo, seg�n sea homocigoto o
heterocigoto. El patr�n de bandas obtenido con estas sondas se denomina perfil
unilocus de ADN o �DNA profiling�. Se utiliza principalmente en investigaciones de
paternidad porque identifica loci minisat�lites muy informativos.
Sondas Multi-locus (MLP): permiten identificar simult�neamente muchas regiones
hipervariables. Son sondas de 10 a 15 nucle�tidos que se repiten m�ltiples veces y
tras el revelado se observan de 10 a 20 bandas por persona. Este patr�n de
m�ltiples bandas es caracter�stico de cada individuo, constituye algo as� como su
�huella dactilar de ADN� y se conoce como huella gen�tica multilocus o �DNA
fingerprint�.
Las sondas multi y uni-locus presentan una serie de ventajas e inconvenientes
seg�n:

Informaci�n aportada: las sondas multi-locus tienen una mayor capacidad


discriminativa al aparecer m�ltiples bandas. No obstante, las uni-locus son m�s
espec�ficas ya que el fragmento de ADN con el que hibridan es de mayor tama�o. Por
consiguiente, para analizar 7 u 8 loci, se deber�an utilizar 7 u 8 sondas uni-
locus, mientras que con una sola sonda multi-locus podr�a hibridar de un solo paso
esas 7 u 8 regiones hipervariables.
Cantidad y calidad del ADN: cuando se usan sondas multi-locus se requiere
aproximadamente un microgramo de ADN sin degradar mientras que en el caso de las
uni-locus se necesita menos de 100 ng y este ADN no necesariamente debe estar en
perfecto estado, siempre y cuando el fragmento complementario a la sonda est�
intacto.
Especificidad entre especies: las sondas multi-locus permiten su uso sobre el ADN
humano y de cientos de animales superiores, mientras que las uni-locus son
exclusivas de ADN humano.
Aunque las SLP han sido y son bastante �tiles en estudios de paternidad no puede
decirse lo mismo de su aplicaci�n a la Criminal�stica ya que presenta una serie de
inconvenientes como son:

La cantidad de ADN que se necesita est� entre 20 y 100 ng, cantidad dif�cil de
conseguir en casos de criminal�stica en los que los indicios biol�gicos encontrados
son m�nimos.
En cuanto a la calidad del ADN, es muy dif�cil encontrar en buen estado toda la
cantidad de ADN que se necesita para un an�lisis con sondas mono-locus.
El tiempo requerido para este tipo de an�lisis es de dos o tres d�as, debido a la
necesidad de tener que utilizar m�s de una SLP.
El hecho de que se requieran cantidades elevadas de ADN hace que normalmente, con
el primer an�lisis se consume la totalidad de la muestra, con lo que se dificulta
un contraste de pruebas o una posterior revisi�n del caso.

Todas estas limitaciones se superaron tras la aparici�n de una t�cnica muy �til, la
reacci�n en cadena de la polimerasa (PCR: Polymerase Chain Reaction).

Individualizaci�n de las muestras biol�gicas


En una primera fase se deber� aislar la mol�cula completa, posteriormente s�lo
estudiaremos ciertas regiones de ella, concretamente las zonas m�s polim�rficas.

La anal�tica de ADN se realiza en cuatro fases:

Extracci�n de ADN: consiste en separar la mol�cula de ADN del resto de componentes


celulares. La duraci�n de este proceso depende del tipo de resto biol�gico que se
analice, por ejemplo en las muestras de sangre o de saliva el proceso de extracci�n
es m�s r�pido que a partir de un resto �seo o dentario donde el ADN es menos
accesible.
Cuantificaci�n de ADN: se realiza para saber qu� cantidad de ADN se ha logrado
aislar y en qu� estado se encuentra (completo o roto).
Amplificaci�n de ADN: consiste en copiar muchas veces el fragmento concreto de ADN
que queremos estudiar para obtener una cantidad adecuada que nos permita su
detecci�n, esto se lleva a cabo por PCR.
Detecci�n del producto amplificado o tipaje: esta es la fase final del an�lisis y
nos permite caracterizar y clasificar los fragmentos de ADN estudiados en cada
muestra para diferenciar unas de otras.
Criminal�stica
Desde siempre el delito ha venido acompa�ado de la necesidad de investigarlo, de
aclararlo, de buscar y de castigar al culpable. Se puede definir criminal�stica
como la ciencia aplicada que estudia cient�ficamente los indicios y las evidencias
con el objeto de convertirlos en pruebas para permitir la identificaci�n de las
v�ctimas y de los delincuentes y esclarecer las circunstancias de un presunto
delito.

Muestras dubitadas e indubitadas


Las muestras con las que se trabaja en criminal�stica se pueden clasificar en dos
tipos:

Muestras dubitadas o evidencias: son restos biol�gicos de procedencia desconocida,


es decir, no se sabe a qui�n pertenecen (por ejemplo las muestras recogidas en la
escena del delito o de un cad�ver sin identificar).
Los tipos de muestras dubitadas m�s frecuentemente analizadas por t�cnicas gen�tico
moleculares son: sangre (habitualmente en forma de mancha), semen (lavados
vaginales o manchas sobre prendas de la v�ctima), saliva (colillas de cigarrillo,
chicles, sobres y sellos), pelos, u�as, tejidos blandos, restos �seos y dentarios
(estos �ltimos relacionados fundamentalmente con la identificaci�n de cad�veres).

Muestras indubitadas o de referencia: son restos biol�gicos de procedencia


conocida, es decir, se sabe a qui�n pertenecen (por ejemplo la sangre tomada de un
cad�ver identificado, o las muestras tomadas a familiares de un desaparecido). El
tipo de muestras indubitadas m�s habituales son sangre y saliva (frotis bucal).
Para la gen�tica forense, son de inter�s los denominados indicios biol�gicos que
son los que contiene ADN, y por ello se definen como �toda sustancia l�quida o
s�lida que provenga directamente del cuerpo humano o que haya estado en contacto
con el mismo, y en cuya superficie o interior pueda haber restos de c�lulas�.

Algunos ejemplos de indicios biol�gicos obtenidos en la escena del crimen son:


sangre, semen, pelos, saliva, tejidos blandos, huesos y dientes, orinas, heces,
sudor, etc. En cuanto a los indicios no biol�gicos, algunos ejemplos son: fibras y
tejidos, restos de p�lvora y material de disparos, restos de tierra, semillas,
plantas y hierbas, tinta pintura, madera, material de engrase, etc.

An�lisis de muestras biol�gicas


Sangre: se puede encontrar bien en estado l�quido o en forma de mancha. La sangre
l�quida bien conservada no ofrece ning�n tipo de problema, pero es frecuente que al
laboratorio llegue sangre putrefacta bien porque se ha estropeado durante el
transporte o bien porque pertenece a un cad�ver en el cual se ha iniciado la
descomposici�n. Para evitar el primer problema es conveniente realizar una mancha
sobre una gasa antes de proceder al transporte de la muestra y para el segundo hay
que tratar de buscar otra muestra para el an�lisis, bien sea un tejido blando,
u�as, o un resto �seo, dependiendo del estado de conservaci�n del cuerpo. Por el
contrario, la sangre en forma de mancha se conserva m�s f�cilmente y puede
analizarse tras varios a�os si las condiciones de secado fueron adecuadas. Quiz�s
las manchas sobre cueros, maderas tratadas, restos vegetales y tierras sean de las
m�s cr�ticas pues estos materiales tienen diferentes grados de absorci�n y en ellos
se encuentran presentes gran cantidad de inhibidores de la PCR como los taninos,
que impiden que la reacci�n funcione. Para detectar muestras de sangre en la escena
de una agresi�n, se utilizan una serie de m�todos como: colorimetr�a (detecci�n
mediante oxidasas), cristalograf�a, quimioluminiscencia (mediante luminol),
inmunocromatograf�a, etc.
Saliva: estas muestras no suelen presentar problemas en la anal�tica de ADN. Suelen
llegar al laboratorio en forma de mancha, sobre filtros de cigarrillo, sellos,
chicles o prendas o bien en otros soportes como vasos, botellas o huesos de fruta.
Se detectan mediante alfa-amilasa.
Esperma: se recoge en los casos de agresiones sexuales. El principal problema es
que adem�s de los espermatozoides del agresor se suele encontrar las c�lulas del
epitelio vaginal de la v�ctima. Por ello, a la hora de analizar estas muestras
aparece una mezcla de perfiles gen�ticos, pero como el perfil gen�tico de la
v�ctima s� lo conocemos podemos determinar cu�l es el del agresor.
Pelos: estas muestras requieren un an�lisis microsc�pico previo a la anal�tica
molecular con el fin de determinar el tipo de an�lisis que es posible en ellos
(estudios de ADN nuclear o de ADN mitocondrial) adem�s de otras caracter�sticas
importantes. Con el an�lisis microsc�pico se determinan, entre otros, los
siguientes puntos:
- Si se trata de pelos de origen animal o humano.

- Si se trata de pelos completos (con bulbo) o de fragmentos de pelos (sin bulbo).


En el caso de fragmentos de pelos los estudios a realizar son los de ADN
mitocondrial como veremos en el siguiente apartado. En el caso de los pelos con
bulbo se puede determinar en qu� fase vital se encuentra �ste. En los pelos con
bulbo telog�nico (en fase de ca�da) se suele realizar an�lisis de ADN mitocondrial
y en los pelos con ra�z anag�nica (en fase de crecimiento) se puede realizar un
an�lisis de ADN nuclear.

Tejidos: las muestras suelen estar relacionadas sobre todo con la identificaci�n de
cad�veres en los que han comenzado los procesos de putrefacci�n. Los mejores
resultados se obtienen con m�sculo esquel�tico tomado de las zonas que se est�n m�s
preservadas de la putrefacci�n.
Huesos y dientes: estas muestras se obtienen de los cad�veres ya esqueletizados y
son las m�s problem�ticas en cuanto a identificaci�n gen�tica. Los huesos largos
(f�mur o h�mero) y los molares (muelas) son las muestras que ofrecen mejores
resultados. La extracci�n de ADN a partir de este tipo de restos es m�s larga y
costosa que en los casos anteriores.