Proyecto Actualizado Becchio 2015.

Universidad Nacional del Nordeste Para ser llenado por la Sec, Gral.
de Ciencia y Técnica
Secretaría General de Ciencia y Técnica Nº de Presentación:
Fecha de Presentación:
CARATULA DE PROYECTO
Denominación del Proyecto (En lo posible no superar 120 caracteres)
Aislamiento y Caracterizacion de Celulas Madres Mesenquimales de la Pulpa Dental de Terceros Molares
Superiores Incluidos.
TIPO DE PROYECTO: ---
Demandantes o Adoptantes (Solo para PDTS, adjuntar las solicitudes impresas de cada uno)

Denominación del Grupo de Investigación y Desarrollo (GID):

Terapia del complejo Dento Maxilo Facial.Celulas Madres.
GID Consolidado GID Emergente o en Desarrollo
Integrantes del Proyecto (Nómina del GID del Proyecto)

Los abajo firmantes declaran conocer los términos de la Res. Nº 641/98 C.S. sobre Propiedad Intelectual.-
Documento Apellido y Nombre Función Firma
16065922 Rosende Roque Oscar Director
10843536 González María Mercedes Codirector
22640445 Becchio Jorge Gabriel Ricardo Docente-Investigador
27983510
Krupp Sebastián Docente-Investigador
14610062 Said Rucker Patricia Beatriz Teresita Docente-Investigador

21928739 Britos Maria Rosenda Docente-Investigador
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Período del Proyecto: Inicio 01/01/2014 - Fin: 31/12/2017
LUGAR DE EJECUCIÓN
Unidad Ejecutora
Universidad Nacional del Nordeste
Área, Depto. o Laboratorio: Departamento de Clínica Estomatológica y Quirúrgic
Facultad o Instituto: Facultad de Odontología
Conformidad del Decano, Director o Responsable de la Facultad o Instituto:
Apellido y Nombres: Rosende, Roque Oscar
Cargo en la Institución: Decano
Toma conocimiento del presente proyecto y presta su conformidad para que el mismo se desarrolle en
el ámbito de su dependencia.
Firma y Sello:
Secretaría General de Ciencia y Técnica
FORMULARIO DE P R E S E N TA C I Ó N DE PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO
Palabras Claves (Incluir 5 palabras que no figuren en la denominación)

Células madre mesenquimales; Pulpa dental; Diferenciación multilinaje; Potencial de proliferación.
Temática del Proyecto:

Disciplina Científica: MEDICINA, ODONTOLOGÍA Y CIENCIAS DE LA SALUD
Tema Estratégico Prioritario (Res. Nº 263/13 C.S.): Corresponde No Corresponde
Área Temática*: Salud
Sub-Área o Tema**: Terapéuticas innovadoras

*Solo completar cuando se aborde un Tema Estratégico Prioritario.
**Elegir la correspondiente Sub-área o tema según Área Temática indicada.
Director del Proyecto

Apellido y Nombres: Rosende Roque Oscar
CUIL: 20-16065922-0
Fecha de Nacimiento: 02/09/1962
Domicilio (Calle-Nro.-Piso-
Depto.):
Bolivar 467
C.P. - Localidad – Provincia: Corrientes - Capital
Teléfono/s (Código-Nro.): 03794-427602
Correo Electrónico: oscarrosende@hotmail.com Correo Alternativo:
Especialista en Cirugia
Título Profesional: Odontologo Título de Posgrado:
Bucomaxilofacial.
Cargo Docente en la UNNE: Profesor Titular Dedicación: Dedicacion Simple
Cargo en CONICET o Instituto de Doble Dependencia:
Lugar de Trabajo: Facultad de Odontologia.
Dedicación al Proyecto(en horas semanales): 10
Categoría en el Programa de Incentivos: III (TRES)
Codirector del Proyecto

Apellido y Nombres: González María Mercedes
CUIL: 23-10843536-4
Fecha de Nacimiento: 09/09/1953
Domicilio (Calle-Nro.-Piso-
Depto.):
Paraguay N° 881
C.P. - Localidad – Provincia: Corrientes - Capital
Teléfono/s (Código-Nro.): 3794-463894
Correo Electrónico: mmgonzalez53@gmail.com Correo Alternativo:
Título Profesional: Odontóloga Título de Posgrado: Dra en Odontologia.
Cargo Docente en la UNNE: Profesora Titular Dedicación: Exclusiva.
Cargo en CONICET o Instituto de Doble Dependencia:
Lugar de Trabajo: Facultad de Odontologia.
Dedicación al Proyecto(en horas semanales): 20
Categoría en el Programa de Incentivos: III (TRES)
Subdirector del Proyecto

Apellido y Nombres:
CUIL:
Fecha de Nacimiento:
Domicilio (Calle-Nro.-Piso-Depto.):
C.P. - Localidad – Provincia:
Teléfono/s (Código-Nro.):
Correo Electrónico: Correo Alternativo:
Título Profesional: Título de Posgrado:
Cargo Docente en la UNNE: Dedicación:
Facultad o Instituto: ---
Lugar de Trabajo:
Dedicación al Proyecto(en horas semanales):
Categoría en el Programa de Incentivos: ---
Justificación del Director para la inclusión de un Codirector de Proyecto

El Director del Proyecto deberá justificar la inclusión de un Codirector, expresando claramente los motivos que hacen
necesaria tal inclusión.
Se justifica la inclusión del co director dado que los conocimientos clínicos de la Dra. María Mercedes
González en el campo de la Histologia y la biologia celular es muy importante para el desarrollo de las
actividades en el campo de la regeneracion del tejido tisular, como asi y tambien el asesoramiento tecnico y
cientifico, debido a su capacidad y experiencia en el tema de investigacion.
Por supuesto que su curriculum la avalan ampliamente y su desenvolvimiento porfesional nos garantiza un
estandar de conocimientos màs que apropiado.
Justificación del Director para la inclusión de un Subdirector de Proyecto

El Director del Proyecto deberá justificar la inclusión de un Subdirector, expresando claramente los motivos que hacen
necesaria tal inclusión.

CONTENIDO DEL PROYECTO
Objetivo(s) del Proyecto

Describir en forma clara y concisa el/los objetivo/s general/es del Proyecto. Si se trata de objetivos múltiples,
presentarlos en forma desagregada.
Objetivo General:
- Aislar y carcterizar celulas madre mesenquimales de la pulpa dental de terceros molares

superiores incluidos.
- Optimizar el método de obtención y de cultivo de estas células.
.
Objetivos Específicos:
- Caracterizar su inmunofenotipo y su potencial de diferenciación a linaje osteogénico
- Inducir su diferenciación a linaje Osteogénico.
Hipótesis:
"Las células madre mesenquimales de la pulpa dental de terceros molares superiores incluidos jovenes
tendra su diferenciacion a linaje osteogenico."
Resumen del Proyecto

Incluir un resumen de no más de 250 palabras.
Las células madre generalmente se definen como células clonogénicas capaces de autorrenovación; es
decir son células no especializadas que se renuevan durante largos periodos de tiempo por división celular;
y son capaces de diferenciación celular específica;esto hace referencia a que pueden ser inducidas por un
estímulo adecuado a diferenciarse a células con funciones especiales como miocitos,

osteoblastos,condrocitos etc.
Los reportes actuales sobre células madre dan cuenta que se han aislado a partir de varios tejidos adultos,
incluyendo médula ósea, tejido neural, músculo, piel,retina y folículos pilosos. Con referencia al área dental
existen reportes incipientes donde las células madre aisladas son a partir de extractos de ligamento
periodontal y de pulpas de órganos dentarios exfoliados(SHED).
Los estudios con células madre enfocadas al área dental han reportado que estas células pueden formar
estructuras que parecen complejos pulpa-dentina y ligamento periodontal y cemento radicular
respectivamente al ser trasplantadas subcutáneamente en ratones inmunocomprometidos,o pueden
participar en procesos de reparación periodontal en defectos creados en roedores. Asimismo, las células
madre SHED son capaces de estimular la nueva formación de hueso,por lo que tienen posible aplicación en
regeneración ósea craneofacial.
Estos y otros datos experimentales,resaltan el potencial de las células madre para lograr la regeneración de
tejidos dentarios humanos in vivo, sin embargo, no se conocen las señales necesarias para la diferenciación
a un fenotipo celular específico,por lo que la investigación actual está encaminada a desentrañar cuáles son
los mecanismosmoleculares involucrados en el tránsito de una población celular progenitora con
característica de célula madre a una población comprometida hacia un linaje dental o célula diferenciada.
Por ello, el estudio de las células madre abre un panorama considerable desde su descubrimiento en el área
biomédica y dental, aunado a su facilidad de obtención con la factibilidad de expandir el cultivo invitro para
su utilización terapéutica; convirtiendo a las células madre en candidatas ideales para la investigaciónen el
área de regeneración tisular e ingenieríade tejidos.
Con la finalidad de contribuir al conocimiento de las células madre, el propósito de esta investigación se
basa en llevar a cabo el aislamiento, caracterización y diferenciación celular de células madre derivadas de
extractos de pulpa dental de terceros molares retenidos superiores jóvenes que fueron extraídos por
cuestiones de tratamientos quirurgicos o indicaciones ortodoncicas.
Descripción del Proyecto

Referir las características generales del Proyecto teniendo en cuenta: fundamentación (antecedentes y preocupaciones
que dieron origen al problema y al objetivo de la investigación), metodología a emplear, procedimientos instrumentales,
y toda otra cuestión que haga perfectamente comprensible la naturaleza y el sentido de la propuesta. Utilizar las páginas
que se consideren necesarias.
Fundamentación del Proyecto
En la práctica odontológica, uno de los más grandes retos es la reposición de tejidos que se han perdido por
lesiones o patologías. En este sentido, una ciencia que se ha desarrollado en las últimas décadas, la
“Ingeniería Tisular”, propone nuevas terapias que implican la regeneración o reemplazo de tejidos u órganos
a través de constructos tridimensionales tisulares,y la devoluciòn de forma y función, a partir de las propias
células del paciente en conjunto con biomateriales y biomoléculas. En lo que se refiere a la regeneración de
tejidos como la pulpa, hueso y mucosa oral, se han realizado avances importantes que, en algunos casos,
ya se han llevado a la práctica clínica.
La utilización de células madres en medicina y odontología ha avanzado a pasos agigantados se lograron
restituir tejidos de diversos orígenes, por lo que creemos que desde el punto de vista de la cirugía dentó
maxilar la aplicación de estas células sería un gran aporte a las terapias ya existentes en cuanto a la
aceleración y regeneración de tejidos.
Materiales y métodos:
Este proyecto de investigación es de tipo Clínico,Experimental.

Se reclutarán una muestra de 10 pacientes de ambos sexos,con indicación de exodoncia de terceros
molares superiores retenidos ,18-28 , en un rango de 18 a 26 años, que concurran a la Cátedra de Cirugía
III: Cirugía y Traumatología Bucomaxilofacial y al Servicio de Cirugía y Traumatología Bucomaxilofacial de la
Facultad de Odontología de la Universidad Nacional del Nordeste, de la Ciudad de Corrientes, Argentina,
lugar en el que se llevarán a cabo los actos quirurgicos.
Serán excluidos de esta investigación pacientes con antecedentes hereditarios de patologías sistémicas
crónicas.
Se procederá a confeccionar la historia clínica para el trabajo de investigación.
Cada paciente será informado del procedimiento quirúrgico que devengarà el proyecto de investigación del
que serà partìcipe
La higiene oral deberá ser la adecuada con ausencia de cálculos supra o infra-gingivales, esto es valorable
clínicamente.
La extracción o la avulsion de los terceros molares superiores retenidos, se realizara utilizando anestesia de
Clorhidrato de Carticaina 4%- L -Adrenalina 1:100.000, la puncion se aplicara a nivel del Nervio alveolar
superior anterior por vestibular, y por palatino el nervio palatino anterior, seguida de una incision con bisturi
nº15c, desde distal del 2do molar, inclinado algo hacia palatino,sobre la cresta osea, hasta el pliegue muco
terigomaxilar, con una pequeña descarga por mesial o distal del 7( segundo molar superior ).
El levantamiento del colgajo es mucoperiostico con movimiento de adelante hacia atrás,la osteotomia se
realizara cuando tenga el hueso muy delgado o fino, con una pinza gubia o periostotomo,en el caso que el
hueso retentivo sea mas grueso se realizaria este paso con fresas quirurgicas cilindrica o redondas nº6 ,con
un elevador recto o elevadores clev dent se luxa la pieza dentaria , manipulando con fórceps Nª67.
El órgano dentario extraído se colocara inmediatamente en medio Dulbelcosmodified eagle medium (DMEM)
frío, para garantizar el estado y conservaciòn celular del tejido pulpar.
Obtención de la muestra pulpar:
Se realizara la extracción de la pulpa dental en el area de biologia molecular en la cabina de flujo laminar,
cortando el diente a nivel de la línea amelocementaria con una turbina y una fresa diamantada a 200.000
revoluciones por minuto.
A continuación se despegara la pulpa de la cámara pulpar y de los conductos radiculares con una sonda.
Una vez despegada, se extraera la pulpa con unas pinzas.
Entre la exodoncia y la extracción de la pulpa dental habra un rango de tiempo de entre una hora y cuatro
días. Durante este tiempo el diente se guardara en un tubo con medio de cultivo y antibióticos a 4ºC. otras
alternativas para la optencion de las muestras de pulpas dentales, seria que a las piezas dentarias se les
confeccionara una cavidad por la cara oclusal ,de tal forma de acceder a la camara pulpar y con un
estractor o tira nervio obtener las muestras,tambien se pueden conseguir utilizando un martillo y un escoplo
de punta diamantada,cada tejido sera cuidadosamente extraido del diente mediante la utilización de hoja
bisturí N°15c,se colocaran luego en medio DMEM frío estéril.
Aislamiento de células madre:
Una vez extraída la pulpa dental, se almacenara en tubos de 15 mL estériles con medio de cultivo Dulbecco
´s modified Eagle® con suplemento bajo de glucosa (1mg/mL) y antibióticos (Penicilina 100U/ml y
Estreptomicina 100 μg/ml). La pulpa se transportara a temperatura ambiente en un tubo desde el sevicio de
Cirugia Traumatologia Bucomaxilofacial de la facultad de Odontológia de la Universidad Nacional Nordeste
hasta el Area de Biologia Molecular. Entre la extracción de la pulpa y su cultivo hubo un rango de tiempo de
entre una y veinticuatro horas. Durante este tiempo se guardó a 4ºC.
Carecterizacion de Celulas Madres:
La expresión de marcadores de superficie específicos comprende que más de un 95% de la población

celular exprese fenotipo positivo para CD73, CD90 y CD105 y menos de un 3% de la población exprese
fenotipo negativo para CD34, CD45, CD14 y CD11, entre otros.
Para detectar los marcadores específicos en las células madre aisladas de los extractos pulpares, se
pondran en cajas de cultivo durante 3 días. Pasado el tiempo las células se fijaran con paraformaldehído al
4% por 10 minutos, se lavaran con buffer de fosfatos (PBS) por 2 minutos repitiendo tres veces. Para
detectar los marcadores específicos las células se permeabilizaran con metanol frío durante 10 minutos y se
incubaran con los anticuerpos específicos que reconocen a los marcadores a una concentración de 1:100
incubados a 4°C durante 24 horas.
Pasado el tiempo de reacción se lavaran 3 veces por 10 minutos con PBS-Tritón 100x para eliminar la señal
inespecífica del anticuerpo.
La señal se obtendrá por incubacion con un segundo anticuerpo acoplado a isotiocianato de fluoresceína
(FITC) a una concentración de 1:1000.
Ensayo de diferenciación celular Osteogenicas:
La determinación de la diferenciación celular se realizará utilizando,un medio inductor de la

biomineralización que contiene medio DMEM suplementado con 10% SFB, 50 μg/mL de ácido ascórbico, 10
mM de β-glicerofosfato,10-7 M de dexametasona y una solución de antibióticos compuesta de penicilina
(100 U/mL) y estreptomicina (100 μg/mL). El medio se cambiará cada 2 días. El control de los ensayos de
diferenciación serán las células madre cultivadas en ausencia del medio inductor de la mineralización. Para
analizar la diferenciación celular de las células madre derivadas de la pulpa dental, se realizará la tinción
con solución de Rojo de Alizarina 40 nM.
Estado del Conocimiento

Describir el estado del conocimiento del tema del Proyecto en nuestro país y en el contexto internacional. Señalar los
últimos avances alcanzados en el tema indicando la relación del Proyecto y sus objetivos con dichos avances. Justificar
el papel y el aporte del Proyecto en cuanto al desarrollo del tema en la región del nordeste y/o el país. Hacer referencia
a la bibliografía relevante sobre el tema.
Cabe destacar que la medicina regenerativa se orienta a la reparación o el reemplazo de células, tejidos u
órganos con la finalidad de restaurar funciones alteradas por cualquier causa. Debido a que las células
madre sustentan muchos de los enfoques terapéuticos de la medicina regenerativa están adquieriendo cada
vez más relevancia (Pitossi, 2015).
En general se define una célula madre, también denominada célula troncal, como la que tiene capacidad de
autorreplicarse indefinidamente por división celular (autorrenovación) y que, cuando se encuentra bajo
condiciones microambientales adecuadas, puede diferenciarse a otros tipos de células especializadas, no
solo morfológica sino también funcionalmente; es así como una población pequeña de células madre puede
en unos meses proliferar hasta dar origen a millones de ejemplares con las mismas características de sus
predecesoras (Smith, 2004).
Hay dos maneras de clasificar las células madre:
1. De acuerdo con su potencial de diferenciación en células totipotenciales, pluripotenciales y

multipotenciales.
2. Según el tejido de origen, en células madre embrionarias y del adulto.
Son totipotenciales las células capaces de generar un embrión completo, es decir, de dar origen a tejidos
embrionarios y extraembrionarios; tal es el caso de la fecundación, proceso por el cual se genera una célula,
el zigoto, paradigma de célula totipotencial, que dará lugar a todas las células del embrión y posteriormente
a las del adulto; por lo tanto, este tipo de células solo se puede obtener durante las primeras fases de
formación del embrión, pues a medida que, este evoluciona dichas células se especializan y transforman en
otras. Las pluripotenciales son capaces de generar cualquier linaje celular, pero no un embrión completo.
Esta diferenciación resulta de cambios en la expresión génica; por ello las células extraídas y cultivadas
entre los 7 y 14 días posfecundación, cuando el embrión se encuentra en la fase de blastocito, nunca darán
lugar a un embrión completo sino a estirpes celulares específicas determinadas por los genes que se
expresen en el momento (Jesper, 2004; Rodriguez, 2007). La células madre multipotenciales son aquellas
que se encuentran comprometidas en una linea celular específica y dan origen a células de un tejido
particular (Munevar, 2008).
De acuerdo con el origen, las células madre pueden proceder de tejido embrionario o de un organismo
adulto; de ahí que se las denomine Células madre embrionarias (CME) (Embryonic stem cells, ESC) y
Células madre adultas (CMA), respectivamente. Las primeras corresponden a precursores totipotenciales
con capacidad de proliferar indefinidamente in vitro, por lo que gran parte de las investigaciones se han
centrado en la producción de distintos tipos de tejidos e incluso de órganos simples, así como en la
incorporación de genes foráneos, lo que convierte a este tipo de células en un vehículo idóneo para la
terapia génica paliativa y en una firme promesa para la medicina futura (Giraldo, 2003). Las células madre
adultas (CMA), por su parte, corresponden a progenitores multipotenciales, que pueden renovarse
constantemente y dar lugar a células especializadas capaces de reparar lesiones tisulares y de renovar
células seniles; así mismo presentan una gran versatilidad biológica, fundamentada en su capacidad de
alterar drásticamente el fenotipo en respuesta a los cambios del microambiente en donde se desarrollan
(Giraldo, 2003).
La médula ósea ha demostrado ser una de las mejores fuentes de células madre del organismo adulto,
entre las más estudiadas se destacan las células madre hematopoyéticas que se caracterizan por su
capacidad de proliferación y diferenciación en progenitores hematopoyéticos comprometidos (Sánchez,
2006; Rodríguez, 2006; Macías-Abraham, 2010). En la actualidad se obtienen importantes avances en el
estudio y aplicación de las células madre adultas, ya que ellas muestran notables ventajas sobre las
embrionarias (Rodríguez, 2006).
Las células madre son células que poseen un potencial de multidiferenciación y por tanto pertenecen al
grupo de células madre adultas con la capacidad para formar células con carácter osteogénico, adipogénico
y condrogénico. (Macías-Abraham, 2010)
El potencial de aplicación clínica de las células madres se refiere a la regeneración de distintos tipos de
tejidos como el tejido óseo y de cartílago, con múltiples localizaciones corporales, entre ellas huesos y
cartílgos del tórax, extremidades, abdomen y complejo craneofacial. Diversas investigaciones han
demostrado la efectividad de las células madre en la reparación ósea en modelos animales. De este modo
se podrán reparar defectos producidos por enfermedades degenerativas, o lesiones de origen traumático,
planteando una alterntiva para el tratamiento de trastornos osteoarticulares como aquellos de cadera, rodilla,
de la articulación temporomandibular, y deficiencias de los mencionados tejidos, que pueden tener
consecuencias en la postura, la marcha o la ventilación, entre otros funciones importantes del cuerpo
humano (Macías-Abraham, 2010; Herández, 2009).
En la cavidad bucal se han identificado cuatro grupos células madre, las de pulpa de dientes temporales
(SHED Cells), las de pulpa de dientes permanentes (DPSCs), aquellas que se hallan presentes en espacios
periodontales (PDLSCs), y las células madre de la mucosa bucal. Las células madre que aparecen en pulpa
de dientes temporales pueden ser manipuladas enzimáticamente y sometidas a factores tisulares de
crecimiento, y son capaces de diferenciarse en células nerviosas, adipocitos y osteocitos (Gonzalez, 2011).
La principal fuente de células madre adultas de dientes permanentes son los terceros molares y se
caracterizan por su capacidad de regenerar el complejo pulpodentinal (Sánchez, 2013; Rendón, 2011).
El hueso está en continua remodelación y necesita la formación de muchos nuevos osteoblastos. La
activación de las células madre y la proliferación de los progenitores celulares para formar nuevos
osteoblastos se aceleran como resultado de un trauma, fractura, inflamación, necrosis o tumor. La
movilización y la diferenciación de las células madre mesenquimáticas estarían influidas por la quimiotaxis y
las interacciones con la matriz extracelular a través de las proteínas transmembrana como las integrinas.
Las MSC parecen diferenciarse en las células de la población local bajo la influencia del microambiente
(López Pinto, 2009; Prósper, 2006).
La osteonecrosis (ON) de la cabeza femoral, una de las patologías que generan más dolor en la cadera,
suele asociarse con el tratamiento prolongado con corticosteroides y alcoholismo, y frecuentemente termina
en el colapso de la cabeza del fémur con el subsecuente reemplazo total de la cadera. Hermigou fue el
primero que sugirió que la ON podría también ser una enfermedad de las células del hueso o MSC. Estos
descubrimientos permitieron el acercamiento a la fisiopatología y el tratamiento de la ON, como la
implantación en la lesión necrótica de células madre de tejidos mesenquimáticos, obtenidos después de la
concentración de médula ósea autóloga (Hermingou, 1999).
El retraso de consolidación y la seudoartrosis son dos patologías frecuentes en los pacientes que sufrieron
un politraumatismo con fracturas expuestas o en los que tienen una estabilización deficitaria. El tratamiento
habitual es el cambio de la osteosíntesis más el aporte biológico a través de injerto óseo autólogo, tomado
casi siempre de la cresta ilíaca. Es una posibilidad la utilización de MSC en los defectos pequeños a través
de aporte percutáneo teniendo una osteosíntesis estable (Hermingou, 2005). Existen varios estudios clínicos
en los últimos treinta años en los cuales se usó el trasplante autólogo de células madre mesenquimáticas en
el tratamiento del retraso de consolidación o seudoartrosis de los huesos largos. Aunque todavía no se
demostró una ventaja sobre los tratamientos anteriores, se probó que la aplicación de estas células no
produce efectos adversos (Enhert, 2009). En cambio, hay varios informes que muestran éxito en la
combinación de MSC con matriz de sostén (scaffolds), para la fusión de los huesos largos y la desaparición
de los defectos cavitarios (Tseng, 2008).
Estudios recientes realizados en la Universidad de Columbia muestran, en defectos óseos particularmente,
la posibilidad de fabricar piezas funcionales de hueso humano in vitro usando MSC y un sistema de scaffold-
biorreactor. Esta práctica tiene un gran potencial para la reconstrucción ósea después de defectos
congénitos, cáncer, resecciones y traumas (Grayson, 2010). Se han obtenido buenos resultados en relación
a lesiones invalidantes de rodilla como la osteoartrosis mediante la inyección intraarticular de CMM
autólogas obtebidas de médula ósea del paciente (Orozco, 2013).
Sin duda la frontera del conocimiento en esta materia está en plena expansión con CMM caracterizadas
adecuadamente (Dominici, 2006). Las mismas se obtienen de distintas fuentes más allá de la médula ósea
tales como cordón umbilical, pulpa dentaria, proyectando nuevas aplicaciones (Mathieu, 2012; Ito, 2011). Se
ha propuesto criopreservar las CMM de pulpa dentaria con un procesamiento mínimo para posibles usos
futuros (Perry, 2008).
A partir del presente proyecto se comenzará a desarrollar el cultivo de las CMM y su posible diferenciación a
los linajes óseo y cartilaginoso en un nivel de investigación. Cuando se hayan alcanzado los resultados
esperados, se espera poder pasar a la etapa de cultivo y diferenciación de las CMM con grado clínico,
asegurando que la calidad de las mismas sea la adecuada para comenzar a realizar ensayos pre-clínicos.
Todo esto requiere una progresiva complejización de las tareas a realizar en el laboratorio y la formación de
recursos humanos que permita llevar a delante estos desafíos. De este modo se establecerá un vínculo
entre el laboratorio de Biología Molecular de la Facultad de Odontología de la UNNE con el hospital público,
estableciendo las bases para la generación de un servicio de Medicina Regenerativa. La perspectiva a
futuro es la implementación de un servicio de criopreservación de CMM con dos sedes regionales en las
ciudades de Resistencia y Corrientes. El desarrollo que comienza con el presente proyecto, tiende a
contribuir a mejorar la salud de la población mediante su proyeccción a futuro.
Trabajos Previos
Indicar la relación del tema y los objetivos del Proyecto con trabajos previos o contemporáneos ejecutados por el GID o
sus integrantes.

Resultados esperados
Describir el tipo de resultados que se esperan según se trate de un PI o un PDTS (publicaciones, presentaciones a
congresos, tesis terminadas, desarrollos tecnológicos a transferir, productos, procesos, prospectivas o propuestas).
Los resultados obtenidos serán publicados en la Revista de la Facultad de Odontología de la Universidad

Nacional del Nordeste, en las Reuniones de Comunicaciones Científicas de Secretaría de Ciencia y Técnica
de la Universidad Nacional del Nordeste, Comunicaciones Científicas de la Facultad de Odontología,
Ateneos de la Facultad de Odontología, Congreso Internacional de la Asociación de Ciencias Morfológicas
de Corrientes y Congresos Internacionales.
Será de suma importancia que estos datos lleguen al Ministerio de Salud Pública de la Provincia de
Corrientes para hacer hincapié en los Programas de Prevención que se realiza en la provincia.
Alcanzar un nivel de certeza experimental lo suficientemente sustentado, en conclusiones firmes en relacion
a la posibilidad de utilizacion de CMM de la pulpa de dental en regeneracion habiendo determinado
puntualmente el fenotipo celular utilizado.
Bibliografía
Detallar la bibliografía citada en el ítem “Estado del Conocimiento” de acuerdo con las normas internacionales
establecidas.
Las células madre que aparecen en pulpa de dientes temporales pueden ser manipuladas enzimáticamente
y sometidas a factores tisulares de crecimiento, y son capaces de diferenciarse en células nerviosas,
adipocitos y osteocitos (Gonzalez, 2011). La principal fuente de células madre adultas de dientes
permanentes son los terceros molares y se caracterizan por su capacidad de regenerar el complejo
pulpodentinal (Sánchez, 2013; Rendón, 2011).
El hueso está en continua remodelación y necesita la formación de muchos nuevos osteoblastos. La
activación de las células madre y la proliferación de los progenitores celulares para formar nuevos
osteoblastos se aceleran como resultado de un trauma, fractura, inflamación, necrosis o tumor. La
movilización y la diferenciación de las células madre mesenquimáticas estarían influidas por la quimiotaxis y
las interacciones con la matriz extracelular a través de las proteínas transmembrana como las integrinas.
Las MSC parecen diferenciarse en las células de la población local bajo la influencia del microambiente
(López Pinto, 2009; Prósper, 2006).
La osteonecrosis (ON) de la cabeza femoral, una de las patologías que generan más dolor en la cadera,
suele asociarse con el tratamiento prolongado con corticosteroides y alcoholismo, y frecuentemente termina
en el colapso de la cabeza del fémur con el subsecuente reemplazo total de la cadera. Hermigou fue el
primero que sugirió que la ON podría también ser una enfermedad de las células del hueso o MSC. Estos
descubrimientos permitieron el acercamiento a la fisiopatología y el tratamiento de la ON, como la
implantación en la lesión necrótica de células madre de tejidos mesenquimáticos, obtenidos después de la
concentración de médula ósea autóloga (Hermingou, 1999).
El retraso de consolidación y la seudoartrosis son dos patologías frecuentes en los pacientes que sufrieron
un politraumatismo con fracturas expuestas o en los que tienen una estabilización deficitaria. El tratamiento
habitual es el cambio de la osteosíntesis más el aporte biológico a través de injerto óseo autólogo, tomado
casi siempre de la cresta ilíaca. Es una posibilidad la utilización de MSC en los defectos pequeños a través
de aporte percutáneo teniendo una osteosíntesis estable (Hermingou, 2005). Existen varios estudios clínicos
en los últimos treinta años en los cuales se usó el trasplante autólogo de células madre mesenquimáticas en
el tratamiento del retraso de consolidación o seudoartrosis de los huesos largos. Aunque todavía no se
demostró una ventaja sobre los tratamientos anteriores, se probó que la aplicación de estas células no
produce efectos adversos (Enhert, 2009). En cambio, hay varios informes que muestran éxito en la
combinación de MSC con matriz de sostén (scaffolds), para la fusión de los huesos largos y la desaparición
de los defectos cavitarios (Tseng, 2008).
Estudios recientes realizados en la Universidad de Columbia muestran, en defectos óseos particularmente,
la posibilidad de fabricar piezas funcionales de hueso humano in vitro usando MSC y un sistema de scaffold-
biorreactor. Esta práctica tiene un gran potencial para la reconstrucción ósea después de defectos
congénitos, cáncer, resecciones y traumas (Grayson, 2010). Se han obtenido buenos resultados en relación
a lesiones invalidantes de rodilla como la osteoartrosis mediante la inyección intraarticular de CMM
autólogas obtebidas de médula ósea del paciente (Orozco, 2013).
Sin duda la frontera del conocimiento en esta materia está en plena expansión con CMM caracterizadas
adecuadamente (Dominici, 2006). Las mismas se obtienen de distintas fuentes más allá de la médula ósea
tales como cordón umbilical, pulpa dentaria, proyectando nuevas aplicaciones (Mathieu, 2012; Ito, 2011). Se
ha propuesto criopreservar las CMM de pulpa dentaria con un procesamiento mínimo para posibles usos
futuros (Perry, 2008).
A partir del presente proyecto se comenzará a desarrollar el cultivo de las CMM y su posible diferenciación a
los linajes óseo y cartilaginoso en un nivel de investigación. Cuando se hayan alcanzado los resultados
esperados, se espera poder pasar a la etapa de cultivo y diferenciación de las CMM con grado clínico,
asegurando que la calidad de las mismas sea la adecuada para comenzar a realizar ensayos pre-clínicos.
Todo esto requiere una progresiva complejización de las tareas a realizar en el laboratorio y la formación de
recursos humanos que permita llevar a delante estos desafíos. De este modo se establecerá un vínculo
entre el laboratorio de Biología Molecular de la Facultad de Odontología de la UNNE con el hospital público,
estableciendo las bases para la generación de un servicio de Medicina Regenerativa. La perspectiva a

futuro es la implementación de un servicio de criopreservación de CMM con dos sedes regionales en las
ciudades de Resistencia y Corrientes. El desarrollo que comienza con el presente proyecto, tiende a
contribuir a mejorar la salud de la población mediante su proyeccción a futuro.
IMPACTO DEL PROYECTO
Efectos sobre el sistema científico

Indicar sectores del ámbito científico que se beneficiarán con los resultados del Proyecto y las disciplinas que utilizarán
como insumos los conocimientos obtenidos.
Los conocimientos obtenidos de los resultados del trabajo de investigación serán beneficiosos para:
• Introducción a la Odontología
• Clínica Preventiva I
• Práctica Preventiva II
• Práctica Social y Comunitaria
• Clínica Estomatológica
• Periodoncia
• Cirugía Bucal I Técnica quirúrgica y anestésicas
• Cirugía II Dentomaxilar.
• Cirugía Bucal III Traumatología Bucomaxilofacial.
• Clínica Operatoria Dental
• Clínica de Prótesis
• Odontología Integral Adultos.
• Odontopediatría
• Materiales Dentales
• Microbiología
Efectos sobre la actividad universitaria

Indicar los beneficios que aportará el Proyecto a la Universidad Nacional del Nordeste.
Los beneficios que dejaría este Proyecto a la Universidad Nacional del Nordeste serían los siguientes:
• Ampliar las líneas de investigación con respecto a la incorporación de las células maduras
Mesenquimales de la pulpa dental a la odontología preventiva.
• Los datos obtenidos servirán de base para poder realizar actividades de promoción y prevención de
la salud buco-dental a un bajo costo.
• Se podrá elaborar una planificación de tratamientos aprovechando las cualidades de las CMM de la
pulpa dental de dientes jovenes incluidos.
Aplicación de los resultados del Proyecto

Indicar si el Proyecto está orientado a satisfacer necesidades o solucionar problemas en distintos niveles de la sociedad
dentro del orden social, económico, sanitario, educativo, etc. Describir tales necesidades o problemas, actuales o
potenciales, aportando información cuantitativa, si es factible. Indicar los usuarios, como por ejemplo, organismos
públicos, instituciones privadas, empresas, etc., a los que podrían transferirse resultados, aplicaciones o conocimientos
derivados del Proyecto.
Este proyecto está orientado a satisfacer las necesidades y soluciones de problemas en todos los estratos
sociales, económicos, sanitarios, públicos, educativos y etáreos.
Constituyendo un material con propiedades altamente curativas por las propiedades benéficas que presenta
su materia prima.
Se podrá obtener un material de bajo costo, ya que su fabricación y obtención es regional, y constituirá otra
alternativa de tratamientos.
PROGRAMACION
4.2 - Metas parciales

Indicar la secuencia de metas parciales o hitos que pueden identificarse como nodos de control.
Revisión bibliográfica actualizada en cada año lectivo.
A Realizacion de los informes de avances en cada semestre
Actualizacion sobre el tema en cuestion al proyecto de investigacion.
Selección de los pacientes, realización de la historia clínicas. Información del tratamiento y
B
autorización para la realización del mismo. Comité de bioética.
C Realización de radiografías periapicales pre tratamiento .
Realización del plan de tratamiento .De acuerdo a lo establecido en el cronograma de actividades y
D respetando el protocolo del aislamiento y caracterizacion de Celulas Madres Maduras Mesenquimales
de terceros molares superiores incluidos .
E 1° Control postoperatorio 7 dias.
F 2º Control posoperatorio 15 dias.
G 3º Control posoperatorio 30 dias.
H 4º Control posoperatorio 60 dias.
4.1 - Plan de Tareas

Indicar la secuencia de actividades para el logro de cada una de las metas del Proyecto.
A 1 Selección de los pacientes. Confección de las historias Clínicas.
B 2 Realización del plan de tratamiento
C 3 Realización del 1° Control
D 4 Análisis de los resultados parciales
E 5 Presentación de los resultados parciales.
F 6 Confección del Informe de Avance
G 7 Publicación del Informe Parcial.
H 8 Realización del 2° Control
I 9 Análisis de los resultados
J 10 Elaboración del informe final
K 11 Presentación de los resultados finales
L 12 Preparacion de la publicacion
M 13 Publicación del proyecto.
N 14 Confección del análisis estadístico
O 15 Evaluación de los resultados finales
P 16 Confección del informe final.

Cronograma
Ubicar el tiempo que demandará el logro de las Metas indicadas.
El 1er. Semestre del Año Primero corresponde al primer semestre de funcionamiento del Proyecto.
Año Primero Año Segundo Año Tercero Año Cuarto
Meta 1er. 2do. 1er. 2do. 1er. 2do. 1er. 2do.
Semestre Semestre Semestre Semestre Semestre Semestre Semestre Semestre
A X
B X X X
C
D X X
E . . X
F X
G X X

H X X
Señalar la ubicación temporal de las metas parciales.
Por ejemplo: la meta A en el 2do Semestre del Año Primero.-
RECURSOS HUMANOS
Docentes-Investigadores intervinientes en el Proyecto

Declarar en concordancia directa con lo declarado en la carátula del Proyecto.-
Cargo y Dedicación Dedicación
DNI: Apellido y Nombres: Facultad o Instituto: al Proyecto:
Docente:
Rosende Roque Oscar Facultad de Odontología
16065922 Titular 20
10843536 González María Mercedes Facultad de Odontología Titular 20

22640445 Becchio Jorge Gabriel R. Facultad de Odontología Docente A 40
27983510 Krupp Sebastián Facultad de Odontología Docente A 40
Said Rucker Patricia Beatriz Facultad de Odontología
14610062 Docente A 40
Teresita
21928739 Britoz Maria Rosenda Facultad de Odontología Docente A 40
---
---
---
---
Personal Técnico-Profesional interviniente en el Proyecto

Dedicación
DNI: Apellido y Nombres: Facultad o Instituto: al Proyecto:
16065922 Rosende Roque Oscar Facultad de Odontología 20h
10843536 González María Mercedes Facultad de Odontología 20h
---
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Becarios intervinientes en el Proyecto

Dedicación al
DNI: Apellido y Nombres: Tipo de Beca: Periodo (año-año): Proyecto:
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---
Tesistas de Posgrado intervinientes en el Proyecto

Dedicación al
DNI: Apellido y Nombres: Carrera: Año de Inicio: Proyecto:

Alumnos de Carrera de Grado intervinientes en el Proyecto

Porcentaje de Dedicación al
DNI: Apellido y Nombres: Carrera: Proyecto:
Materias Aprobadas:

Investigadores de otras Instituciones intervinientes en el Proyecto

Universidad / Facultad o Cargo y Dedicación Dedicación al
DNI: Apellido y Nombres: Proyecto:
Instituto: Docente:

RECURSOS MATERIALES
Año Primero:
Necesidades Presupuestarias
Rubro: Descripción Justificación Monto:
Viajes de Campaña:

Equipamiento Menor: Instrumental de diagnóstico Para evaluación de pacientes 1.100,00
Insumos: Kits de decartables Para uso en cada muestra 500,00
Publicaciones:
Presentaciones a Congresos:
Bibliografía: Revistas - Papers Reforzar marco teórico 400,00
Año Segundo:
Viajes de Campaña:
Equipamiento Menor: Instrumental de diagnóstico Evaluación y selección de pac. 1.500,00
Descartables
Insumos: (Baberos,gasas,etc )
Para uso en cada paciente 600,00
Publicaciones:

Libros. Suscripción a
Bibliografía: publicaciones
Actualización 800,00
Año Tercero:
Viajes de Campaña:
Para tarea específica de
Equipamiento Menor: Instrumental`para muestras
laboratorio
1.800,00
Descartables
Para uso en cada paciente 80.000,00
Publicaciones:

Libros. Suscripción a
Bibliografía: publicaciones
Actualización 1.000,00
Año Cuarto:
Viajes de Campaña:
Para tarea específica de
Equipamiento Menor: Instrumental`para muestras
laboratorio
1.800,00
Descartables
Para uso en cada paciente 1.100,00
Publicaciones:

Bibliografía:
CURRICULUM VITAE del Director, Codirector, Subdirector y personal interviniente del Proyecto.
Se debe adjuntar en soporte digital Curriculum Vitae (CV) del Director, Codirector, Subdirector (si
correspondiere) y de cada uno de los integrantes del GID.
Los mismos deben incluir los títulos obtenidos y la actividad referida únicamente a los últimos 5 años, siendo
confeccionados individualmente en el formulario que se provee a tal fin, y renombrándolo con el apellido (y
nombres de ser necesario) del integrante.
Los archivos de CV, junto al archivo correspondiente al presente Formulario de Presentación de

Proyectos, todos en su formato original (MS-Word®), deben ser grabados en un Disco Compacto
(CD) y ser presentado a la Secretaría General de Ciencia y Técnica junto a una impresión del
formulario de Proyecto debidamente cumplimentada y firmada por todos los Integrantes del GID.-

Proyecto Actualizado Becchio 2015.

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Proyecto Actualizado Becchio 2015.

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Universidad Nacional del Nordeste Para ser llenado por la Sec, Gral.

TIPO DE PROYECTO: ---

Denominación del Grupo de Investigación y Desarrollo (GID):

Integrantes del Proyecto (Nómina del GID del Proyecto)

14610062 Said Rucker Patricia Beatriz Teresita Docente-Investigador

Período del Proyecto: Inicio 01/01/2014 - Fin: 31/12/2017

Palabras Claves (Incluir 5 palabras que no figuren en la denominación)

Temática del Proyecto:

Sub-Área o Tema**: Terapéuticas innovadoras

Director del Proyecto

Codirector del Proyecto

Subdirector del Proyecto

Justificación del Director para la inclusión de un Codirector de Proyecto

Justificación del Director para la inclusión de un Subdirector de Proyecto

CONTENIDO DEL PROYECTO

Objetivo(s) del Proyecto

- Aislar y carcterizar celulas madre mesenquimales de la pulpa dental de terceros molares

- Caracterizar su inmunofenotipo y su potencial de diferenciación a linaje osteogénico

- Inducir su diferenciación a linaje Osteogénico.

Resumen del Proyecto

estímulo adecuado a diferenciarse a células con funciones especiales como miocitos,

Descripción del Proyecto

Este proyecto de investigación es de tipo Clínico,Experimental.

Obtención de la muestra pulpar:

Aislamiento de células madre:

Carecterizacion de Celulas Madres:

La expresión de marcadores de superficie específicos comprende que más de un 95% de la población

Ensayo de diferenciación celular Osteogenicas:

La determinación de la diferenciación celular se realizará utilizando,un medio inductor de la

Estado del Conocimiento

Hay dos maneras de clasificar las células madre:

1. De acuerdo con su potencial de diferenciación en células totipotenciales, pluripotenciales y

Los resultados obtenidos serán publicados en la Revista de la Facultad de Odontología de la Universidad

estableciendo las bases para la generación de un servicio de Medicina Regenerativa. La perspectiva a

IMPACTO DEL PROYECTO

Efectos sobre el sistema científico

Efectos sobre la actividad universitaria

Aplicación de los resultados del Proyecto

4.2 - Metas parciales

4.1 - Plan de Tareas

G X X

Docentes-Investigadores intervinientes en el Proyecto

10843536 González María Mercedes Facultad de Odontología Titular 20

Personal Técnico-Profesional interviniente en el Proyecto

Becarios intervinientes en el Proyecto

---

Tesistas de Posgrado intervinientes en el Proyecto

Alumnos de Carrera de Grado intervinientes en el Proyecto

Investigadores de otras Instituciones intervinientes en el Proyecto

Viajes de Campaña:

Publicaciones:

Publicaciones:

Publicaciones:

Los archivos de CV, junto al archivo correspondiente al presente Formulario de Presentación de

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