UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIIRIQUÍ

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS

ESCUELA DE QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA (QM 380)
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA DE LA DESHIDROGENADA SUCCÍNICA DEL HÍGADO
Mónica Méndez 4-801-998 & Eibar Acosta 4-796-2066

Resumen:
El presente ensayo se hizo con la finalidad de analizar la importancia de los inhibidores
enzimáticos sobre la deshidrogenasa succínica. En primera instancia se prepararon 6 tubos
de ensayos en donde cada uno lleva una cantidad de reactivo diferente (amortigudor,
sustrato, aguadestilada, azul de metileno, mlonato de sodio, azida de sodio, cianuro de
sodio y el homogenizado) con el fin de observar el proceso de inhibición de acuerdo al
reactivo.se obtuvieron resultados en donde el tubo 1 tubo fue el control y el tubo 2 obtuvo
un tiempo de reacción de 27.50 min y 26.14 min, 24.33 min, 23.54 min, 22.54 min
respectivamente para cada tubo en ese mismo orden. Culminando con el experimento se
pudo evidenciar que el mecanismo de inhibición enzimática sobre la deshidrogenasa
succínica es que los inhibidores pueden actuar evitando la formación del complejo ES o
bloqueando la reacción química que lleva a la formación del producto. Por regla general,
los inhibidores son moléculas pequeñas que se unen en forma reversible con la enzima que
inhiben.
La enzima succinato deshidrogenasa
Objetivos: (SDH) es un complejo proteico ligado a la
membrana interna mitocondrial que
1. Analizar la importancia de los
interviene en el ciclo de Krebs y en
inhibidores enzimáticos.
la cadena de transporte de electrones, y
2. Resaltar el mecanismo de
que contiene FAD (flavín-adenín-
inhibición enzimática sobre la
dinucleótido) unido covalentemente.
deshidrogenasa succínica. Cataliza la reacción:
3. Explicar el mecanismo de acción
de los inhibidores empleados. Succinato + ubiquinona → fumarato +
ubiquinol
Introducción:
Esta proteína puede degradarse a la
Los inhibidores enzimáticos son
enzima número EC 1.3.99.1 que ya no
moléculas que se unen a enzimas y
reacciona con la ubiquinona necesitando
disminuyen su actividad. Puesto que el otros aceptores de electrones.
bloqueo de una enzima puede matar a
un agente patógeno o corregir un Succinato + aceptor → fumarato +
desequilibrio metabólico, muchos aceptor reducido
medicamentos actúan como inhibidores
La enzima está compuesta de cuatro
enzimáticos. También son usados
subunidades, dos hidrofílicas y
como herbicidas y pesticidas. Sin
dos hidrofóbicas:
embargo, no todas las moléculas que se
unen a las enzimas son inhibidores; • Succinato deshidrogenasa subunidad
los activadores enzimáticos se unen a las A (SDHA). Es una flavoproteína (Fp)
enzimas e incrementan su actividad. hidrofílica que tiene unida
covalentemente como cofactor una
(Horton, 2008)
 molécula de FAD. También contiene mL de cianuro
- - - - - 0.5
el sitio de unión del succinato. de sodio
mL de
• Succinato deshidrogenasa subunidad homogenizado
1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
B (SDHB). También hidrofílica,
contiene tres clústers de hierro-
azufre: 2Fe-2S, 4Fe-4S y 3Fe-4S. Su 3. Se debe dejar la adición del
acrónimo es Ip. homogenizado de ultimo. El
• Succinato deshidrogenasa subunidad homogenizado que se adiciona en el
C (SDHC). Hidrofóbica. Une el tubo #3 se deberá calentar
complejo proteico a la membrana de previamente a la temperatura de
la mitocondria. 52°C, por 15 min.
• Succinato deshidrogenasa subunidad 4. Se agitan todos los tubos y se
D (SDHD). Hidrofóbica. Une el adicionan 5 gotas de aceite mineral a
complejo proteico a la membrana de cada uno a fin de evitar la
la mitocondria. (Horton, 2008) interferencia que ocasiona el oxígeno
del aire.
Materiales y reactivos:
Resultados:
Materiales: tubos de ensayos, vasos Resultado de las reacciones con el
químicos de 100 mL y 250 mL, homogenizado
micropipetas de 1000 µL, matraces
volumétricos de 100 mL, gradilla, Tubo 1 2 3 4 5 6
licuadora. Reactivos: solución Tiempo Control 27,50 26,14 24,33 23,54 22,54
(min)
amortiguadora de fosfato monobásico
0.1M de ph 7.4, hidróxido de sodio 0.1M,
cloruro de trifeniltetrazoilo al 0.1%, Figura No.1 de las reacciones con el
malonato de sodio 0.1M, succinato de homogenizado
sodio 0.2M, azida de sodio 0.1M, cianuro
de sodio 0.1M, hígado fresco.

Metodología:

1. Corte una porción apropiada de

hígado fresco en trozos pequeños y
se homogeniza en la licuadora.
2. A continuación, se dispone 6 tubos se
les adiciona los reactivos en la forma Discusión:
como si indica a continuación:
Tubo #1 #2 #3 #4 #5 #6 La enzima en estudio que fue la
mL de
deshidrogenasa succínica, es una enzima
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 que se encuentra asociado a la
amortiguador
mL de sustrato 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 membrana interna de la mitocondria; en
mL de agua este laboratorio la fuente de mitocondrias
1.0 0.5 0.5 0.0 0.0 0.0 fue el hígado de pollo. Muchos tipos
destilada
mL de azul de
1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
diferentes de moléculas inhiben las
metileno enzimas, y actúan de diversas formas.
mL de malonato
de sodio
- - - 0.5 - - Debe establecerse una distinción
mL de azida de importante entre la inhibición reversible y
- - - - 0.5 -
sodio la inhibición irreversible. La primera
comporta una unión no covalente del
inhibidor que siempre puede revertirse, al
menos en principio, mediante la
eliminación del inhibidor. En algunos
casos, la unión no covalente puede ser
tan fuerte que parezca irreversible en
condiciones fisiológicas. Inicialmente se
procedió a triturar el hígado que este caso
era la muestra homogenizada. En cambio,
en la inhibición irreversible, una molécula
se une de forma covalente a la enzima y la
incapacita realmente. (Mathews, C.; Van
Holde, 2002).
Al tubo 1, el cual era de control no se le
agrego el sustrato y al agregar el
homogenizado no presento ningún
cambio y quedo de color azul.
Al tubo 2, si se le agrego al homogenizado
el sustrato, pero no contenía ninguno de
los inhibidores. El tiempo que registro esta
reacción fue de 27,50 min. La succinato
deshidrogenasa actúa separando dos
átomos de hidrógeno que entre sí se
hallan en posición trans de los átomos de
carbono metilénicos del succinato. La
molécula de FAD del enzima es el aceptor
de electrones de la reacción. En general
la función bioquímica del FAD es oxidar
los alcanos a alquenos. Esto es debido a
que la oxidación de un alcano (como
el succinato) a un alqueno (como
el fumarato) es
suficientemente exergónica. (Wikipedia,
2018). Se utilizo el azul de metileno para
evidenciar esta reacción ya que el azul de
metileno tiene la función de ser el aceptor
de electrones del complejo succinato.
Al tubo 3, tiene las mismas cantidades de
reactivos que el tubo 2 pero la única
diferencia es que el homogenizado se
calentó por 15 minutos 52°C. por lo que el
homogenizado baja su actividad
enzimática por la desnaturalización y se
evidencia una colocación azul, como
vemos en la figura No.1.
Seguidamente al tubo 4, el cual contenía
malonato de sodio dio una coloración azul
y el tiempo en reaccionar fue de 24,33
min. Esta molécula se une al lugar activo,
pero no puede sufrir el paso catalítico,
simplemente hace perder el tiempo a la
enzima. Una molécula de este tipo se
denomina inhibidor competitivo. Durante
la fracción de tiempo en que la molécula
de inhibidor competitivo está ocupando el
lugar activo, la enzima no está disponible
para la catálisis. El efecto global es como
si la enzima no pudiera unirse al sustrato
tan bien cuando está presente el inhibidor
Mathews, C.; Van Holde, 2002).
Luego al tubo 5, el cual al homogenizado
se le agrego azida de sodio. El azida de
sodio es un inhibidor no competitivo el
cual modifica la velocidad máxima de la
enzima. Los azidas afectan a la cadena
respiratoria de una forma muy similar al
cianuro, inhibiendo a los grupos Hem de
los citocromos en la Citocromo Oxidasa
(Complejo IV). También Azida sádico, Es
un desacoplador de membrana de efectos
reversibles que se emplea para disminuir
el contenido de K~ intracelular y también
es un inhibidor de la ATPasa mitocondrial
(Iturralde, L. 2008).
Por último, al tubo 6, se le agrego cianuro
de sodio el cual actúa como
desacoplador, igual como el azida de
sodio. La inhibición de la cadena
respiratoria si desempeña un rol primario.
La intoxicación por cianuro es frecuente
en pacientes que inhalan humo de fuegos
industriales o residenciales. El cianuro
afecta a prácticamente todas las
metaloenzimas, pero sus principales
efectos tóxicos derivan de su unión al
Fe+++ en los grupos Hem del citocromo
oxidasa, inhibiendo el funcionamiento de
la Cadena de Transporte de Electrones
(Iturralde, L. 2008).
Conclusiones:
Se logro analizar la importancia de los
inhibidores enzimáticos los cuales sirven
como mecanismos de control
fundamental en los sistemas biológicos.
El mecanismo de inhibición enzimática
sobre la deshidrogenasa succínica es que
los inhibidores pueden actuar evitando la
formación del complejo ES o bloqueando
la reacción química que lleva a la
formación del producto. Por regla general,
los inhibidores son moléculas pequeñas
que se unen en forma reversible con la
enzima que inhiben.
Se logro explicar el mecanismo de los
inhibidores empleados, como el malonato
de sodio que es un inhibidor competitivo.
Referencia bibliográfica:

• Horton, H. (2008). Principios de

bioquímica. 4th ed. México:
Pearson Educación.
• Mathews, C.; Van Holde, K. &
Ahern, K. (2002). Bioquímica.
Madrid, España: Pearson
Educación. 1368.
• Wikipedia. (2018). Succinato
deshidrogenasa. (En línea).
Consultado el 5 de mayo de 2019.
Disponible en:
https://es.wikipedia.org/wiki/Succi
nato_deshidrogenasa
• Iturralde, L. (2088). Inhibidores de
la Cadena de Transporte de
Electrones. (En línea). Consultado
el 6 de may. De 2019. Disponible
en:
https://temasdebioquimica.wordpr
ess.com/2008/11/23/inhibidores-
de-la-cadena-de-transporte-de-
electrones/