LA COMUNIDAD MICROBIANA DE AGUAS PROFUNDAS DE LA CUENCA

AMAZÓNICA ASOCIADA CON LA DEGRADACIÓN DEL PETRÓLEO.

RESUMEN
Una consecuencia de la producción de petróleo es la posibilidad de derrames
accidentales de petróleo no planificados; por lo tanto, es importante evaluar el
potencial de los microorganismos indígenas (procariotas y eucariotas) de diferentes
cuencas oceánicas para degradar el petróleo. El objetivo de este estudio fue
caracterizar la respuesta microbiana durante el proceso de biodegradación del
petróleo crudo brasileño, con y sin la adición del dispersante Corexit 9500, utilizando
muestras de agua de aguas profundas de las cuencas del margen ecuatorial del
Amazonas, Foz do Amazonas y Barreirinhas. , en la oscuridad ya bajas
temperaturas (4 ° C). Recolectamos muestras de aguas profundas en el campo
(aproximadamente 2570 m bajo la superficie del mar), transportó las muestras al
laboratorio bajo condiciones ambientales controladas (5 ° C en la oscuridad) y
posteriormente realizó dos experimentos de biodegradación de laboratorio que
utilizaron metagenómica con el apoyo de métodos microbiológicos clásicos y
análisis químico para dilucidar la diversidad microbiana funcional y
taxonómica. También analizamos varios parámetros físico-químicos y biológicos
relacionados con la biodegradación del petróleo. El agotamiento concomitante de
los niveles de oxígeno disuelto, la densidad de la gota de aceite característica de la
biodegradación del aceite y la concentración de BTEX con un aumento en los
recuentos microbianos revelaron que el aceite puede ser degradado por las
comunidades microbianas autóctonas de aguas profundas. Bacterias indígenas (por
ejemplo, También analizamos varios parámetros físico-químicos y biológicos
relacionados con la biodegradación del petróleo. El agotamiento concomitante de
los niveles de oxígeno disuelto, la densidad de la gota de aceite característica de la
biodegradación del aceite y la concentración de BTEX con un aumento en los
recuentos microbianos revelaron que el aceite puede ser degradado por las
comunidades microbianas autóctonas de aguas profundas. Bacterias indígenas (por
ejemplo, También analizamos varios parámetros físico-químicos y biológicos
relacionados con la biodegradación del petróleo. El agotamiento concomitante de
los niveles de oxígeno disuelto, la densidad de la gota de aceite característica de la
biodegradación del aceite y la concentración de BTEX con un aumento en los
recuentos microbianos revelaron que el aceite puede ser degradado por las
comunidades microbianas autóctonas de aguas profundas. Bacterias indígenas (por
ejemplo, Alteromonadaceae, Colwelliaceae y Alcanivoracaceae), archaea (p.
Ej., Halobacteriaceae, Desulfurococcaceae y Methanobacteriaceae) y microbios
eucarióticos (p. Ej., Microsporidia, Ascomycota y Basidiomycota). Menos de 48 días
en ambos tratamientos, con y sin dispersante, posiblemente transformando el aceite
en biomasa microbiana que puede alimentar la red alimentaria marina.
PALABRAS CLAVE:
Amazonas; arquea bacterias biodegradación; mar profundo; hongos hidrocarburo
INTRODUCCIÓN
La producción de petróleo en aguas profundas y en alta mar puede provocar la
exposición directa del petróleo al medio marino por derrames no planificados
(derrames de petróleo) y planificada (como petróleo dispersado con descarga
operacional del agua producida). Por lo tanto, es importante evaluar el potencial de
los microorganismos indígenas (procariotas y eucariotas) de diferentes cuencas
oceánicas para degradar el petróleo ( Hazen et al., 2016 ). Los microbios de los tres
dominios de la vida pueden explotar ciertos compuestos de ∼600 1000 toneladas
de petróleo que se liberan anualmente a nivel mundial desde (a) filtraciones
naturales en el fondo marino, (b) escorrentías deslocalizadas de actividades
humanas, y (c) derrames de petróleo ( Comité sobre petróleo en el mar del Consejo
Nacional de Investigación (EE. UU.): Insumos, destinos y efectos, 2003).
En 2011, una fuga de un pozo de petróleo en la Cuenca de Campos, a 120 km de
la costa de Río de Janeiro, provocó la liberación de 3.700 barriles de petróleo en el
océano ( ANP, 2012 ). Estudios recientes han demostrado la presencia común de
bacterias que degradan el petróleo en varias cuencas hidrográficas de aguas
profundas diferentes ( Prince, 2005 ; Jurelevicius et al., 2013 ; Hazen et al.,
2016). Sin embargo, la mayoría de los estudios se han centrado en evaluar la
estructura de la comunidad bacteriana en el Atlántico Norte, el Golfo de México y el
Mar Mediterráneo. Debido a que cada cuenca oceánica tiene sus propias
características fisicoquímicas y biológicas, la ubicación geográfica puede interferir
de diferentes maneras con las tasas de biodegradación del petróleo. Además, solo
unos pocos estudios han abordado el papel de los eucariotas de aguas profundas
(p. Ej., Hongos) y las arqueas en la biodegradación, ya que las bacterias se
consideran el principal actor en la biodegradación del petróleo en el océano ( Hazen
et al., 2016 ).
La mayoría de los estudios que abordan el papel de los hongos, protozoos y arqueas
se han centrado en el reino terrestre ( McGenity et al., 2012 ).
A pesar de la capacidad de las halobacterias para degradar compuestos oleosos,
incluidos los alcanos y los hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAP), algunos
grupos arqueales parecen tener un crecimiento y diversidad reducidos en la
presencia de petróleo ( Röling et al., 2004 ). Por ejemplo, Nitrosopumilus
maritimus fue sensible al petróleo en experimentos realizados con agua de mar
afectada por el derrame de petróleo de Deep Water Horizon (DWH) en el Golfo de
México en 2010 ( Urakawa et al., 2012 ). Sin embargo, Redmond y Valentine
(2012) no encontraron un efecto claro del petróleo en el crecimiento y la diversidad
de las arqueas ( Redmond y Valentine, 2012 ), lo que sugiere que se necesitan más
estudios para comprender mejor el papel de las arqueas en la degradación del
petróleo ( Al-Mailem et al. al., 2010; Tapilatu et al., 2010 ; Bonfá et al., 2011 ; Wang
et al., 2011 ; Erdoǧmuş et al., 2013; Jurelevicius et al., 2014 ).
Los hongos son conocidos por su capacidad para metabolizar compuestos oleosos,
como los alcanos ( Van Hamme et al., 2003 ), BTEX ( Yadav y Reddy, 1993 ) y PAH
( Cerniglia y Sutherland, 2001 , 2006 , 2010 ). Los principales filos conocidos por
metabolizar compuestos de aceite son Microsporidia, Ascomycota y Basidiomycota
( Harms et al., 2011 ). Los hongos filamentosos hacen que la utilización del aceite
bacteriano sea más eficiente a través de la producción de hifas que actúan como
vías continuas para las bacterias móviles, uniendo agregados de aceite ( Kohlmeier
et al., 2005 ; Wick et al., 2007 ; Banitz et al., 2011).
Los hongos lignolíticos y no lignolíticos podrían metabolizar la HAP, pero algunos
pueden crecer con estos compuestos como única fuente de carbono y energía
( Cerniglia y Sutherland, 2010 ). El conjunto de hongos y bacterias parece facilitar
la biodegradación de la HAP ( Boonchan et al., 2000 ; Wang et al., 2012 ). Sin
embargo, la mayoría de los estudios sobre hongos que metabolizan compuestos de
aceite se realizaron en suelos y sedimentos. El principal phylum conocido por ser
un metabolizador de compuestos de aceite, Basidiomycota, habita en ambientes
terrestres y es raro en sistemas marinos ( Shearer et al., 2007 ).
Poco se sabe sobre los hongos que pueden biodegradarse en aguas de aguas
profundas y las posibles relaciones ecológicas entre los hongos y las comunidades
bacterianas (Leahy y Colwell, 1990 ; Harms et al., 2011 ; Passarini et al., 2011 ).
Se requieren enfoques ambientales diseñados para acelerar la biodegradación del
petróleo para mitigar los daños causados por los derrames de petróleo. Los
dispersantes son importantes herramientas de respuesta a derrames de petróleo
para mejorar la biodegradación que se requiere para mitigar el impacto en el
ecosistema causado por los derrames de petróleo. Aceleran el proceso natural de
degradación del aceite microbiano al dispersar el aceite en gotas del tamaño de una
micra que se vuelven flotantes y se diluyen lo suficiente en la columna de agua para
que los niveles naturales de nitrógeno, fósforo y oxígeno biológicamente disponibles
sean suficientes para iniciar y sostener el crecimiento microbiano. La aplicación de
dispersante reduce la tensión superficial del aceite y crea gotitas más pequeñas que
las formadas por dispersiones naturales o liberaciones de filtraciones naturales, lo
que permite una biodegradación más rápida.
El pequeño tamaño de las gotitas de aceite formadas también aumenta la superficie
disponible para la colonización microbiana y mejora significativamente la
biodegradación; Este fue uno de los procesos más importantes para la eliminación
del petróleo liberado del derrame de DWH (Atlas y Hazen, 2011 ; Vilcáez et al.,
2013 ; Meckenstock et al., 2014 ).
El Tribunal de Distrito de los Estados Unidos para el Distrito Este de Louisiana
(2010) encontró que 3.19 millones de barriles de petróleo fueron liberados del pozo
Macondo en el Golfo de México en 2010 ( El Tribunal de Distrito de los Estados
Unidos para el Distrito Este de Louisiana, 2015 ).

Aproximadamente 1,8 millones de galones de dispersantes químicos,

principalmente Corexit 9500, también se inyectaron en la cabeza del pozo o se
aplicaron a la superficie del agua. Después de un período de prueba, el dispersante
se inyectó en la cabeza del pozo entre el 15 de mayo y el 15 de julio en un esfuerzo
por evitar la formación de grandes manchas superficiales hasta que el pozo pudiera
ser tapado ( Operational Science Advisory Team, 2010).
Poco después de dos períodos de prueba, el dispersante se inyectó continuamente
en la cabeza del pozo MC252 después del 15 de mayo, hasta que el pozo se tapó
61 días después, el 15 de julio, para retener el aceite en la columna de agua y evitar
la formación de grandes manchas superficiales ( Kujawinski et al. ,
2011 ). Recientes estudios de laboratorio han demostrado que durante un período
de aproximadamente 60 días, los microorganismos indígenas en el Golfo de México
pudieron degradar completamente el aceite en presencia de Corexit 9500 en
condiciones de laboratorio controladas ( Wang et al., 2016 ). El Corexit 9500 parece
acelerar el proceso de biodegradación, aumentar el número de microorganismos
que degradan el petróleo, como Oceanospirillales y Cycloclasticus, lo que lleva a la
rápida degradación de los hidrocarburos ( Brakstad et al., 2015b). Sin embargo,
otros estudios recientes indicaron que el dispersante puede afectar negativamente
a las bacterias que degradan el aceite a una concentración de ∼19 μg / L de Corexit
9500 ( Kleindienst et al., 2015 ). Por lo tanto, de estudios anteriores no está claro si
Corexit9500 interferiría en la diversidad de la comunidad microbiana y aceleraría la
biodegradación del petróleo en el margen ecuatorial.
El potencial de biodegradación del petróleo por microorganismos indígenas
(procariotas y eucariotas) se ha evaluado en diferentes cuencas oceánicas pero no
en el Océano Atlántico ecuatorial ( Hazen et al., 2016 ). La mayoría de la producción
de petróleo en Brasil (> 2 millones de barriles por día) se produce en campos de
aguas profundas, como la Cuenca del Campus ( ANP, 2012 ). Las compañías
petroleras están buscando nuevas fronteras para la exploración y producción de
petróleo en aguas brasileñas. Entre estas regiones, el margen ecuatorial brasileño,
que se extiende desde Rio Grande do Norte hasta los estados de Amapa, se está
investigando a través de grandes estudios ambientales que respaldan las nuevas
actividades de exploración de petróleo ( Lourenço et al., 2016).

La exploración petrolera en la plataforma continental amazónica comenzó a

principios de la década de 1960, pero la producción de petróleo se ha centrado en
el continente. Un ejemplo es la Cuenca de Urucu, que se sabe que produce petróleo
de alta calidad, principalmente para la producción de diesel y nafta en Brasil. El gas
también es un producto importante de la región amazónica ( ANP, 2009). En los
últimos años, las empresas petroleras iniciaron importantes operaciones de
exploración en la plataforma continental de la Amazonia y en las cuencas. En apoyo
de las evaluaciones de riesgo ambiental (destino del petróleo) es importante evaluar
el potencial de estas aguas de aguas profundas para biodegradar el petróleo. El
objetivo de este estudio fue caracterizar la respuesta microbiana (crecimiento,
composición, diversidad) relacionada con el proceso de degradación del petróleo
(con y sin el dispersante Corexit9500), utilizando agua de aguas profundas del
margen ecuatorial del Amazonas. Realizamos dos experimentos de 48 días y
utilizamos metagenómica para descubrir la diversidad microbiana (taxonómica y
funcional). También vinculamos estos datos e información de microbiología
molecular a los análisis convencionales de diversos parámetros físico-químicos y
biológicos relacionados con la biodegradación del petróleo.
MATERIALES Y MÉTODOS

Ubicación de muestreo
Para los experimentos de biodegradación, se recolectaron muestras de agua de mar
que contenían ensamblajes microbianos marinos autóctonos de Brasil en
condiciones semi-estériles de dos ubicaciones geográficas (Foz do Amazonas: E
587.672 y N 600.161; Barreirinhas: E 216.294 y N 9.800.847) según metodologías
descrito anteriormente ( Wang et al., 2016 ). De cada ubicación, se recogieron dos
muestras de agua usando una roseta de la siguiente manera: (i) una muestra de
agua profunda debajo de la quimiclina, cerca del lecho marino, a aproximadamente
2570 m por debajo de la superficie y (ii) una muestra recolectada a
aproximadamente 10 m debajo de la superficie. El agua de aproximadamente 10 m
por debajo de la superficie y un mar profundo se transfirió inmediatamente a
contenedores estériles y se transportó al laboratorio en la oscuridad a 4 ° C.

Diseño experimental
Se realizaron dos experimentos idénticos utilizando el agua de aguas profundas de
Foz do Amazonas y Barreirinhas. Los experimentos se realizaron a 4 ° C en la
oscuridad, duraron 48 días y se controlaron periódicamente en cuatro puntos de
tiempo (T0 = llegada al laboratorio; T1 = Día 0, el comienzo del experimento; T2 =
Día 8; T3 = Día 24, y T4 = Día 48). Cada experimento consistió en tres tratamientos
[(I) fracción acomodada en agua (WAF), (II) fracción acomodada en agua mejorada
químicamente (CEWAF) y (III) Control] preparados como se describió anteriormente
( Brakstad y Faksness, 2000). En resumen, el tratamiento con WAF consistió en
agua de aguas profundas suplementada con aceite de Itaipu (a una velocidad de
carga de 0.1 mL / L). Se eligió la tasa de aceite relativamente baja para evitar el
agotamiento total de la concentración de oxígeno en las unidades experimentales. A
pesar de las numerosas publicaciones sobre la degradación anaeróbica del aceite
(por ejemplo, Zengler et al., 1999 , pp 266–269; Kniemeyer et al., 2007 , pp 898–
901; Musat et al., 2009, pp 209-219), buscamos reproducir una concentración de
oxígeno similar que normalmente se observa en el océano. Las preparaciones de
WAF de 10 l se colocaron en una cámara refrigerada mantenida a 4ºC en la
oscuridad y se mezclaron suavemente (sin vórtice) durante 96 h. Después de
asentarse sin mezclar durante 4 h, las muestras de WAF se tomaron sin alterar la
mancha de aceite en la parte superior y se transfirieron a matraces tapados de 500
ml.
El tratamiento con CEWAF se preparó de manera similar, pero el aceite de Itaipu se
mezcló previamente con el dispersante Corexit9500 antes de agregarlo al recipiente
de agua salada (1 ml de dispersante a 25 ml de aceite; DOR 1:25). El tratamiento
con CEWAF también se mantuvo en la cámara refrigerada a 4 ° C en la oscuridad
y se mezcló con una barra de agitación magnética durante 18 h, seguido de 4 h de
sedimentación (sin agitación) antes de tomar las muestras. Los controles consistían
en agua de mar sin la adición de aceite (dispersado). Después de la sedimentación,
todas las muestras (WAF, CEWAF y Controles) se distribuyeron en matraces
tapados de 500 ml y se incubaron en la oscuridad a 4–5 ° C durante un período de
hasta 48 días. Además, se recogieron muestras de 1 L para la evaluación de la
comunidad microbiana. No se agregaron nutrientes adicionales a las muestras de
agua de mar. Alícuotas de WAF, CEWAF y Control se colocaron en placas en el BD
Difco.Medio mineral TM Bushnell-Haas suplementado con 1% de aceite de
Itaipu. Las placas inoculadas se incubaron a 4–5 ° C durante 7 días (Figura 5
complementaria). Los análisis físico-químicos y biológicos se realizaron en cuatro
puntos de tiempo durante el experimento, utilizando botellas de sacrificio para cada
análisis.

Recuentos de gotas microbianas y de aceite

Los recuentos de citometría procariótica se realizaron por triplicado como se
describió anteriormente usando la tinción de ácido nucleico fluorescente 4 ', 6-
diamidino-2-fenilindol (DAPI) ( Gregoracci et al., 2012 ). Las células eucariotas y las
gotitas de aceite se contaron utilizando una Flowcam. Las muestras (18 ml) se
fijaron con 2 ml de fijador (formaldehído tamponado al 20%).

Nutrientes inorgánicos, oxígeno disuelto y concentración de hidrocarburos

(BTEX, alcanos y PAH)
El nitrato y el fosfato se midieron como se describió anteriormente ( Gregoracci et
al., 2012 ). El oxígeno disuelto se midió utilizando un electrodo electroquímico. El
análisis de hidrocarburos aromáticos volátiles [benceno, tolueno, etilbencenos y
xileno (BTEX)], alcanos y HAP se realizó mediante la extracción líquido-líquido de
las muestras de agua utilizando cloruro de metileno, luego de una determinación
cuantitativa por cromatografía de gases y espectrometría de masas (GC –MS) como
se describió anteriormente ( Wang et al., 2016 ).

Análisis metagenómico
La fracción acomodada en agua mejorada químicamente, WAF y las muestras de
control (1-L) se filtraron a través de un Sterivex de 0,2 μm y se extrajeron utilizando
el protocolo del kit Nucleospin. Se realizó una secuenciación final pareada de
Illumina para todas las muestras. Los datos generados se procesaron previamente
con fastq-mcf y los extremos pareados se fusionaron con PEAR ( Zhang et al.,
2014 ). El análisis taxonómico se llevó a cabo utilizando Focus ( Silva et al.,
2014 ). Los datos se enviaron a Mgrast ( Meyer et al., 2008 ) para anotar las
secuencias y un análisis funcional (Tablas complementarias 1, 2).
RESULTADOS

Análisis físico-químicos y biológicos ambientales

Los perfiles de temperatura, salinidad y oxígeno de ambas ubicaciones (Foz do
Amazonas y Barreirinhas) tuvieron patrones típicos con disminución de la
temperatura y aumento de la concentración de oxígeno a medida que aumentaba la
profundidad (Figura 1 ). Las muestras de agua utilizadas en este estudio
corresponden a la masa de agua llamada Aguas Antárticas Profundas ( Wust,
1933 ) y tenían una homogeneidad relativa con respecto a la temperatura, la
salinidad y el oxígeno disuelto. La comunidad microbiana en la muestra de la
superficie del mar y la muestra de aguas profundas en ambos lugares estaba
compuesta por diferentes taxones relacionados con la degradación del petróleo,
incluidas Alteromonadaceae, Alcanivoracaceae y Colwelliaceae (Figura 1
complementaria).

FIGURA 1. Características de las masas de agua. Medidas de CTD de temperatura,

salinidad y oxígeno disuelto a lo largo de la profundidad. Perfiles de columnas de
agua en Foz do Amazonas (E 587.672 y N 600.161) durante la colección de abril de
2015 (A) y en Barreirinhas (E 216.294 y N 9.800.847) durante la colección de mayo
de 2015 (B)
EXPERIMENTOS DE BIODEGRADACIÓN
Se realizaron dos experimentos (Foz do Amazonas y Barreirinhas) para evaluar el
potencial de los microbios de aguas profundas para degradar el petróleo crudo
durante una incubación de 48 días. La dinámica de los parámetros fisicoquímicos y
biológicos se monitorizó analizando cuatro puntos de tiempo (T0 = llegada; T1 = Día
0; T2 = Día 8; T3 = Día 24, y T4 = Día 48).
ANÁLISIS FISICOQUÍMICO
La concentración de oxígeno varió de ∼8 mg / l en T0 del experimento a ∼6.2 y ∼6.6
mg / l al final de los experimentos de Foz y Barreirinhas, respectivamente. En el
experimento de Foz do Amazonas, el nitrato aumentó hasta el día 8 (12.5 a 22.7
μM) y disminuyó a 12.9 μM después de 48 días de tratamiento con WAF
(Figura 2A ). En el tratamiento CEWAF, el nitrato se redujo de 15.3 μM al comienzo
del experimento a 7.9 μM al final. El ortofosfato varió de ∼1 μM (día 0) a ∼0.6 μM
(día 48) y de 3.1 μM (día 8) a 5 μM (día 48) en los tratamientos WAF y CEWAF,
respectivamente. En el experimento de Barreirinhas, el nitrato disminuyó de 16.7 a
4.2 μM y de 24.5 a 3.6 μM en los tratamientos WAF y CEWAF, respectivamente,
hacia el final del experimento (Figura 2B). El ortofosfato tuvo una tendencia similar,
disminuyendo de 0.8 a ∼0.1 μM y de 1.1 a 0.2 μM en el final del experimento, en los
tratamientos WAF y CEWAF, respectivamente. La concentración de hidrocarburos
(BTEX, alcanos y PAH) se redujo significativamente en ambos tratamientos,
mientras que la vida media de BTEX fue de 9 días para el tratamiento con CEWAF
y de 18 días para el tratamiento con WAF (Tabla complementaria 3).
FIGURA 2. Crecimiento microbiano, gotas de aceite, nutrientes y crecimiento de los géneros
principales en Foz do Amazonas (A) y en Barreirinhas (B) . Recuentos de células procariotas (I),
recuentos de células eucariotas (II), recuentos de plántulas de aceite (III), concentraciones de nitrato
(IV), concentraciones de ortofosfato (V), perfiles metagenómicos de los principales géneros en el
tratamiento WAF (VI), perfiles metagenómicos de los principales géneros en tratamiento CEWAF
(VII).

CONDES PROCARIÓTICOS
La abundancia de células procarióticas en el experimento de Foz do Amazonas
varió de 3.85 × 10 5 a 3.41 × 10 6 células / mL y de 9.72 × 10 5 a 5.01 × 10 6 células
/ mL en WAF y CEWAF, respectivamente, con valores más altos. Hacia el final del
experimento (Figura 2A ). En el experimento de Barreirinhas, los recuentos de
procariotas variaron de 5.31 × 10 5 a 2.28 × 10 6 células / mL y de 1.67 × 10 5 a 3.36
× 10 6 células / mL en los tratamientos WAF y CEWAF, respectivamente, con el
recuento máximo en el día. 24. El recuento de microbios fue mayor en el CEWAF
que en el tratamiento con WAF en ambos experimentos.

CONDES EUCARIOTAS
En el experimento de Foz do Amazonas, el número total de eucariotas aumentó de
72 células / ml y 17 células / ml (día 1) a 324 células / ml (día 48) y 642 células / ml
(día 24) en el WAF y el CEWAF. Tratamientos, respectivamente (Figura 2A ). En los
experimentos de Barreirinhas, el número total de eucariotas disminuyó de 1754
células / ml y 310 células / ml (día 1) a 369 células / ml y 80 células / ml (día 24), en
el WAF y el CEWAF, respectivamente. Se observó un aumento en el número de
eucariotas en el tratamiento con CEWAF (1466 células / ml) en el día 48.

GOTAS DE ACEITE
El número de gotas de aceite disminuyó a lo largo de ambos experimentos,
alcanzando valores más bajos en los tratamientos CEWAF (Figuras 2A, B ). En el
experimento de Barreirinhas, las gotas de aceite cayeron de 91 a 28 y de 39 a 0
gotas en los tratamientos WAF y CEWAF, respectivamente.

ASIGNACIÓN TAXONÓMICA DE SECUENCIAS METAGENÓMICAS

En general, las secuencias metagenómicas relacionadas con bacterias que
degradan el aceite, según se informó anteriormente en la literatura, correspondieron
a más del 60% del total en los tratamientos WAF / CEWAF de ambos experimentos
(Figuras 3A, B ). Los grupos principales
fueron Alteromonadaceae ( Alteromonas e Marinobacter ), Colwelliaceae ( Colwelli
a ), Alcanivoracaceae ( Alcanivorax ), Piscirickettsiaceae ( Cycloclasticus )
y Oceanospirillaceae ( Thalassolituus ) en WAF y
CEWAF. Alcanivoracaceae disminuyó de 14.51% (T1) a 8.93% (T4)
yColwelliaceae de 20.40% (T1) a 0% (T4) en el tratamiento WAF del experimento
Foz do Amazonas. Por otro lado, Pseudomonadaceae aumentó de 5.03% (T1) a
20.12% (T4). Alteromonadaceae alcanzó su punto máximo en T1 (35,50%) y T3
(39,08%). Otros taxones menos abundantes, como Piscirickettsiaceae (2.92 a
0%), Shewanellaceae(2.12 a 0.50%) y Joneasiaceae (1.86 a 0%) alcanzaron los
valores más bajos al final del experimento, mientras
que Ectothiorhodospiraceae (1.13 a 5.17%) y Vibrionaceae (2.48 a 3.72%)
tendieron a aumentar. Alteromonadaceae disminuye de 80.98 a 39.3% en el
tratamiento con WAF de Barreirinhas, mientras que Hyphomonadaceae(0,64 a
4,84%), Oceanospirillaceae (0,68 a 2,88%) y Piscirickettsiaceae (14,23 a 22,74%)
aumentaron a lo largo del
tiempo. Alcanivoracaceae y Acetobacteraceae alcanzaron su punto máximo en T3
(5,41 y 2,22%, respectivamente); Pseudomonadaceae alcanzó su punto máximo en
T2 (5,57%) y en T4 (4,87%). El tratamiento de control (T0 y T4) en ambos
experimentos tuvo una proporción menor
de Alteromonadaceae y Alcanivoracaceae que en los tratamientos WAF / CEWAF.

FIGURA 3. Composición de la comunidad bacteriana a nivel familiar para el agua tratada con aceite (WAF) y
con aceite dispersado (CEWAF) en los días 8, 12, 24 y 48 determinados por análisis metagenómicos. La
comunidad bacteriana para las muestras de control de aguas profundas (sin aceite) se muestra en los días 0 y
48. Perfiles bacterianos en Foz do Amazonas (A) y en Barreirinhas (B) .

En el experimento de Foz do Amazonas, el tratamiento con CEWAF tuvo una mayor

proporción de Marinobacter que el tratamiento con WAF ( valor
de p <0,01). Marinobacter aumentó del 38,89 % (T1) al 47,17% (T4) en el
tratamiento con CEWAF; alcanzó su punto máximo en T3 (39.08%) en el tratamiento
WAF. La colwellia varió de 10.32 a 1.42% en el tratamiento con CEWAF y de 20.40
a 0% en T4 en el tratamiento con WAF. Las pseudomonas aumentaron del 4,65%
(T1) al 18,24% (T4) en WAF y del 4,26% (T1) al 7,83% (T4) en
CEWAF. Alcanivorax fue más abundante en el tratamiento WAF del experimento
Foz do Amazonas ( valor de p <0,01).
El tratamiento con CEWAF en el experimento de Barreirinhas mostró
que Alcanivoracaceae (11.69 a 3.79%) y Pseudomonadaceae (8.47 a 0.68%)
disminuyeron con el tiempo mientras que Piscirickettsiaceae aumentó de 0.007%
(T1) a 11.07% (T4). Colwelliaceae aumentó en T2 (46,20%) y T4
(26,92%), Alteromonadaceae aumentó en T1 (40,96%) y T3
(27,46%), Rhodobacteraceae y Shewanellaceae aumentó en T2 (5,97 y 2,46%,
respectivamente), y Flavobacteriaceae, Hyphomonadaceaee,
Joneasiaceae y Oceanospirillaceae aumentaron en T3 (9.93, 6.85, 1.42 y 8.80%,
respectivamente). En el WAF, el grupo más abundante
fueAlteromonadaceae (∼80% en T1 y ∼45% en T4) y Piscirickettsiaceae (∼18% en
T3 y ∼25% en T4).
Teniendo en cuenta los géneros, en el experimento CEWAF de
Barreirinhas, Colwellia varió de 6.52% (T1) a 46.20% (T2). Thalassolituus alcanzó
su punto máximo en T4 (7.02%). Cycloclasticus alcanzó su punto máximo en T4
(10,88%) en el CEWAF y en T3 (21,17%) en el tratamiento con
WAF. Alcanivorax disminuyó del 11,61% (T1) al 3,79% (T4) en el tratamiento con
CEWAF, mientras que en el WAF alcanzó su punto máximo en el día 24 (5,41%) y
cayó al 4,33% en el día 48. El tratamiento de control (T4) tenía una comunidad
microbiana diferente perfil en ambos experimentos, con menor secuencia
de Alteromonadaceae y Alcanivoracaceae .

GRUPOS ARQUEALES
En el experimento de Foz do Amazonas, los grupos principales
fueron Thermoproteaceae, Desulfococcus,
Halobacteriaceae y Methanobacteriaceae en ambos tratamientos, WAF y CEWAF
(Figura 4A ). La proporción de Desulfococcus disminuyó del 47,66% (T1) al 19,69%
(T4) y la proporción de Halobacteriaceae aumentó del 35,04% (T1) al 52,0% (T4) a
lo largo del tiempo en el tratamiento con WAF del experimento de
Foz. Thermoproteaceae (17.29%), Nitrosopumilaceae (21.35%), Methanobacteriac
eae (10.09%) y Methanosarcinaceae (27.40%) alcanzaron su punto máximo en T1,
T2, T3 y T4, respectivamente, en el tratamiento WAF. En el tratamiento
CEWAF, Thermoproteaceae(de 30.34 a 21.79%),Acidilobaceae (de 12.49 a 0%)
y Methanobacteriaceae (de 8.62 a 0%) disminuyó, alcanzando los valores más
bajos en T4 mientras que Halobacteriaceae aumentó de 26.76% (T1) a 60.50% (T4)
con el tiempo. En el tratamiento de control, los grupos principales en T0
fueron Nitrosopumilaceae (35.21%), Halobacteriaceae (16.27%)
y Methanobacteriaceae (16.75%), que corresponden a aproximadamente el 68% de
las secuencias archaeales totales, mientras que el tratamiento de control en T4 fue
predominantemente Methanoregulaceae .
FIGURA 4. Composición de la comunidad de Archaeal a nivel familiar para el agua tratada con aceite
(WAF) y con aceite dispersado (CEWAF) en los días 8, 12, 24 y 48 determinados por análisis
metagenómicos. La comunidad de Archaeal para muestras de control de aguas profundas (sin
aceite) se muestra en los días 0 y 48. Perfiles de Archaeal en Foz do Amazonas (A) y en
Barreirinhas (B).
En el experimento de Barreirinhas, los grupos principales fueron Desulfococcus,
Thermoproteaceae,Halobacteriaceaey Nitrosopumilaceae . Desulforucoccaceae a
umentó tanto en WAF, de 16.94% (T1) a 45.28% (T4) como en CEWAF, de 23.30%
(T1) a 64.25% (T2) (Figura 4B ). Sulfolobaceae (4.51%)
y Nitrosopumilaceae (13.72%) aparecieron solo en T1 en WAF. Thermoproteaceae
aumentó de 5.95% (T1) a 25.30% (T3) mientras que Halobacteriaceae y
Methanobacteriaceae disminuyó de 28.91% (T1) a 0% (T4) y de 20.21% (T1) a 0%
(T3), respectivamente. En el tratamiento con CEWAF, Nitrosopumilaceae alcanzó
su punto máximo en T1 (13.72%) y T2 (18.15%), mientras
que Methanobacteriaceaedisminuyó a lo largo del tiempo de 26.72% (T1) a 0%
(T4). Halobacteriaceae (19.36%), Thermoproteaceae (11.98%)
y Methanocellaceae (14.55%) alcanzaron su punto máximo en T3. En el tratamiento
de control, Nitrosopumilaceae disminuyó de 27.93% (T0) a 4.17% (T4),
Halobacteriaceae de 20.23% (T0) a 15.44% (T4) mientras
que Methanosarcinaceae (58.22%), Desulfococcus (8.78%), Thermoproteaceae (1
2.22%) ) y alcanzó su punto máximo en T4.
EUCARIOTAS
Apicomplexa, Ascomycota, Bacillariophyta, Basidiomycota, Chlorophyta y
Microsporidia fueron los principales grupos encontrados (Figuras 5A, B). Hubo un
claro aumento en Ascomycota (de 22 a 31% en el tratamiento de WAF y de 22 a
25% en el tratamiento de CEWAF en agua de mar de Foz y de 7 a 34% en el
tratamiento de WAF y de 7 a 17% en el tratamiento de CEWAF en agua de mar de
Barreirinhas) y Microsporidia (de 1 a 10% en el tratamiento de WAF y de 1 a 15%
en el tratamiento de CEWAF en agua de mar de Foz y de 0,1 a 12% en el tratamiento
de WAF y de 0,1 a 1% en el tratamiento de CEWAF en agua de mar de Barreirinhas)
en T1 tanto del tratamiento WAF como del tratamiento CEWAF en los dos
experimentos comparados con el T0. Lo mismo se observó para Basidiomycota (de
4 a 13% en T4 de CEWAF en el experimento Foz do Amazonas) y Apicomplexa (de
3 a 9% y de 3 a 16% en T4 en los experimentos WAF Foz y Barreirinhas,
respectivamente).
FIGURA 5. Composición de la comunidad eucariótica a nivel familiar para el agua tratada con aceite
(WAF) y con aceite dispersado (CEWAF) en los días 8, 12, 24 y 48 determinados por análisis
metagenómicos. La comunidad eucariótica para las muestras de control de aguas profundas (sin
aceite) se muestra en los días 0 y 48. Perfiles eucariotas en Foz do Amazonas (A) y en
Barreirinhas (B) .

IDENTIFICACIÓN FUNCIONAL DE SECUENCIAS METAGENÓMICAS

El perfil funcional de ambos tratamientos, WAF y CEWAF, fue muy similar (Figuras
complementarias 2A, B). Los principales grupos funcionales fueron carbohidratos,
aminoácidos, proteínas, cofactores y enzimas, que representan más del 60% de las
secuencias metagenómicas con función conocida en ambos experimentos. El
número de secuencias asociadas con el transporte de membrana, el metabolismo
de los aromáticos, la motilidad y la quimiotaxis, la virulencia y la enfermedad
aumentaron con el tiempo en ambos experimentos, mientras que el número de
secuencias asociadas con los carbohidratos y el metabolismo de la fotosíntesis
disminuyó (Figura 6 ).

FIGURA 6. Principales diferencias entre los perfiles de subsistemas determinados

por análisis metagenómicos en Foz do Amazonas (A) y en Barreirinhas (B) . T0
corresponde a muestras de agua profunda de control (sin aceite) y T1, T2, T3 y T4
corresponden a los días 8, 12, 24 y 48, respectivamente.
El análisis relacionado con los genes para la biodegradación del aceite mostró que
la abundancia de secuencias relacionadas con la degradación de BTEX aumenta a
lo largo del tiempo en ambos experimentos, con más porcentaje de secuencias en
el tratamiento con WAF que en CEWAF y con una mayor diferencia entre WAF y
CEWAF en Barreirinhas. experimentar. La proporción de alcanos es constante a lo
largo del tiempo en ambos tratamientos en Foz y tiene un pico en T2 y en T3,
respectivamente, en WAF y CEWAF para Barreirinhas. El porcentaje de secuencias
de HAP a su vez es mayor para Barreirinhas, especialmente para WAF (Figuras
complementarias 3A, B, 4A, B).
DISCUSIÓN
Los parámetros fisicoquímicos del agua de aguas profundas de ambos lugares
examinados fueron similares a las masas de agua de las aguas antárticas ( Silva et
al., 2005 ). Se ha informado sobre la biodegradación del petróleo en diferentes
cuencas oceánicas (por ejemplo, el mar Mediterráneo, el golfo de México), en
concentraciones altas de oxígeno y bajas temperaturas ( Hazen et al.,
2010 ; Bargiela et al., 2015 ; Brakstad et al., 2015a , b ), como se observó en este
estudio, que indica que las condiciones oceánicas de estas aguas de aguas
profundas de Brasil permiten la degradación del petróleo. Las comunidades
microbianas descritas en las aguas submarinas y de aguas profundas de ambas
ubicaciones analizadas aquí incluyen varios taxones que degradan el petróleo
( Yakimov et al., 2007).), sugiriendo que los microorganismos indígenas tienen el
potencial de biodegradación del petróleo. A pesar de las ligeras diferencias en los
patrones taxonómicos entre las ubicaciones de Foz y Barreirinhas, se encontraron
bacterias importantes que degradan el petróleo en todas las muestras (por
ejemplo, Alcanivoracaceae, Alteromonadaceae, Colwelliaceae,
Pseudomonadaceae, Oceanospirillaceae y Piscirickettisiaceae ).

LOS TRATAMIENTOS WAF Y CEWAF INDUCEN EL CRECIMIENTO DE

MICROBIOS DEGRADANTES DEL PETRÓLEO
La comparación del control con los tratamientos WAF / CEWAF demostró el
aumento de microbios implicados con la degradación del aceite a lo largo de los
experimentos de 48 días. Por ejemplo, durante el tratamiento CEWAF de las aguas
marinas de Barreirinhas, Colwellia tuvo un auge en el día 8 (T2)
y Flavobacteriaceae en el día 24 (T3), mientras
que Alcanivoracaceae y Alteromonadaceae tuvieron un auge en T1. Algunos
grupos alcanzaron su punto máximo solo después de 24 días, por
ejemplo, Piscirickettsiaceae / Cycloclasticus , y Oceanospirillaceae
/ Thalassolituus. Durante un experimento de biodegradación de 64 días con agua
de aguas profundas recolectadas en las proximidades del pozo MC252 en el Golfo
de México, que luego se modificó con gotitas de aceite de 10 μm (2 ppm) creadas
con aceite Macondo en presencia del dispersante Corexit 9500. Wang et
al. (2016) informaron un aumento en Alteromonadaceae(incluidas las especies
de Marinobacter ) y Alcanivoracaceae durante los primeros 9
días. Además, Colwellia, Cycloclasticus y otras Gammaproteobacteria aumentaron
entre los días 27 y 36, y Flavobacteria en el día 64 ( Wang et al., 2016 ). Hazen et
al. (2010)descubrió que Oceanospirillales dominaba las muestras de penacho de
petróleo del derrame de petróleo de DWH en GM y representaba solo una pequeña
fracción en la muestra de control fuera de la pluma de petróleo ( Hazen et al.,
2010 ). En nuestros experimentos, Oceanospirillales no fue dominante. Las
diferencias entre los estudios pueden estar relacionadas con las comunidades
microbianas indígenas de cada ubicación, las diferencias en la configuración
experimental y la naturaleza y composición del aceite utilizado. Sin embargo, en
todos los estudios se observó una clara respuesta positiva del aceite en los
biodegradadores microbianos.
En este estudio, la disminución significativa en la concentración de oxígeno (de ∼8
mg / L en T0 a ∼6.2–6.6 mg / L en T4), posiblemente debido a la respiración y
degradación microbiana, con un aumento concomitante en los recuentos de
procariotas y eucariotas, indican El consumo de aceite disperso. Se sabe que
las cepas de Colwellia degradan los compuestos de BTEX y alcano ( Methe et al.,
2005 ), mientras que Alcanivorax y Marinobacter son degradadores de alcanos bien
conocidos ( Gauthier et al., 1992 ; Yakimov et al., 1998 ). Durante nuestros
experimentos, la abundancia de Marinobacter pareció aumentar
cuando Colwelliacaído y viceversa; ambos géneros son capaces de degradar los
hidrocarburos alifáticos y podrían competir por recursos similares. Las proporciones
de secuencias relacionadas con la biodegradación de los alcanos a lo largo del
tiempo parecen mostrar una tendencia similar al crecimiento de Marinobacter . Los
alcanos y BTEX están entre los primeros compuestos de aceite degradados ( Hazen
et al., 2010 ; Brakstad et al., 2015a ; Wang et al., 2016 ); mientras que los HAP son
el compuesto de aceite menos fácilmente degradado en comparación con los
alcanos y BTEX ( Mason et al., 2014b ). Cycloclasticus ( Piscirickettsiaceae ), una
importante bacteria que degrada la HAP ( Dyksterhouse et al., 1995).), se observó
principalmente hacia el final de nuestros experimentos. A su vez, las proporciones
de secuencias relacionadas con la biodegradación de PAH a lo largo del tiempo son
similares al patrón de crecimiento de Cycloclasticus. También es probable que la
capacidad de las comunidades microbianas para metabolizar los hidrocarburos
se combine con la disponibilidad de nitrógeno ( Mason et al., 2014b ). Una
disminución en la concentración de nitrato en los experimentos de Foz y
Barreirinhas sugiere un proceso intenso de desnitrificación, posiblemente mediado
por Colwellia ( Methe et al., 2005 ; Mason et al., 2014a ) y Marinobacter ( Gauthier
et al., 1992 ). Además, un componente principal del dispersante Corexit es el
sulfosuccinato sódico de dioctilo (DOSS) ( Place et al., 2010)., 2014 ; Kujawinski et
al., 2011 ). DOSS es un sustrato que podría ser metabolizado
por Colwellia ( Kleindienst et al., 2015 ).
ARCHAEA DEGRADANTE DE ACEITE
Halobacteriaceae fue uno de los grupos más importantes en nuestro experimento
en línea con estudios previos ( Tapilatu et al., 2010 ; Bonfá et al., 2011 ; Wang et
al., 2011 ; Al-Mailem et al., 2012 ; Erdoǧmuş et al. , 2013 ; Jurelevicius et al.,
2014 ). Sin embargo, esta familia no fue la más abundante entre los grupos más
importantes en ambos experimentos. Algunas arqueas quimiolitotróficas que
pueden oxidar compuestos orgánicos de azufre,
como Desulfurococcaceae y Thermoproteaceae ( Burggraf et al., 1997 ; Zillig et al.,
1982), fueron abundantes, así como las arqueas metanogénicas, incluyendo
Methanobacteriaceae, Methanocellaceae, Methanoregulaceae,
Methanosaetaceae, Methanosarcinaceae y Methanotermaceae ( Garcia et al.,
2000 ; Sakai et al., 2008 , 2012 ). Se observó que las arqueas metanogénicas
coexisten con las halobacterias , conocidas como arqueas degradantes del
petróleo, lo que concuerda con los informes anteriores de que la metanogénesis se
acopla a la biodegradación del petróleo en comunidades sintróficas ( Zengler y
otros, 1999 ; Chang y otros, 2006 ; Mayumi et al., 2016 ). Sin
embargo, Halobacteriaceae, sin arqueas metanogénicas solo ocurre con arqueas
quimiolitotróficas con azufre en el tratamiento CEWAF (con dispersante). La
presencia de arqueas metanogénicas podría implicar que los experimentos
alcanzaron condiciones anaeróbicas. Sin embargo, varias especies arqueanas
metanogénicas (por ejemplo, Halobacteriaceae) son aeróbicas y anaeróbicas
facultativas. Los niveles de oxígeno se redujeron a casi 6 ml / L a lo largo de ambos
experimentos (Tabla complementaria 3). Aunque los niveles de oxígeno eran
relativamente altos, es posible que se genere un microambiente subóxico alrededor
de las partículas donde crecen estos grupos arqueales. Este microentorno
anaeróbico sería el resultado de la respiración intensa de los grupos concurrentes
observados con estas arqueas (arqueas que degradan el aceite o arqueas
quimiolitotróficas con azufre).Nitrososphaera , una arquea quimiolitotrófica oxidante
de amoníaco ( Könneke et al., 2005 ). La relación entre la quimiolitotrofia y la
degradación del aceite no está clara.
EUCARIOTAS DEGRADANTES
Nuestros experimentos demostraron que en ambos tratamientos, WAF y CEWAF,
se indujo el crecimiento de hongos (Microsporidia, Ascomycota y
Basidiomycota). Microsporidia, un metabolizador de PAH, aumentó en T3, excepto
en el tratamiento WAF para Barreirinhas, donde las bacterias degradantes de
PAH, Cycloclasticus , alcanzaron su punto máximo. Ascomycota es
extremadamente versátil y metaboliza alcanos, BTEX y HAP ( Harms et al.,
2011).). La abundancia de este grupo fue alta y estable a lo largo del experimento,
lo que sugiere que Ascomycota utilizó varios compuestos de aceite diferentes. La
abundancia de Basidiomycota fue menor que la de Microsporidia y la abundancia
de Ascomycota la mayor parte del tiempo en ambos experimentos. Sin embargo, la
abundancia de Basidiomycota tendió a aumentar hacia el final del experimento,
teniendo una mayor proporción que el Control. Aunque Basidiomycota puede
metabolizar PAH ( Cerniglia y Sutherland, 2001 , 2006 , 2010 ; Sutherland,
2004 ; Verdin et al., 2004 ), estos hongos generalmente no pueden usar los PAH
como única fuente de carbono y energía ( Cerniglia y Sutherland, 2001). La
ausencia de una fuente de nutrientes adicional en nuestros experimentos puede
haber influido en la utilización de PAH por Basidiomycota. Los hongos producen
enzimas multifuncionales involucradas en la degradación de una gran variedad de
moléculas orgánicas, incluyendo hidrocarburos aromáticos, compuestos orgánicos
clorados, bifenilos policlorados, compuestos aromáticos que contienen nitrógeno y
muchos otros pesticidas, colorantes y xenobióticos ( Harms et al., 2011 ). Mientras
tanto, los hongos y las bacterias pueden establecer asociaciones para degradar el
petróleo de manera más eficiente. Algunas correlaciones positivas entre la
abundancia de bacterias (por ejemplo, Alcanivoracaceae y Alteromonadaceae ) y
hongos (por ejemplo, Ascomycota y Basidiomycota) Se observaron secuencias
metagenómicas en nuestro estudio (Figuras complementarias 6 y 7).
LOS TRATAMIENTOS WAF Y CEWAF INFLUYEN EN LOS PERFILES
METABÓLICOS MICROBIANOS
La disponibilidad de aceite dispersado como la única fuente de carbono agregada
para el crecimiento microbiano de la colonización de las gotitas de aceite flotante
durante los experimentos dio lugar a cambios en los perfiles funcionales de ambos
tratamientos WAF / CEWAF. La reducción observada en el metabolismo de los
carbohidratos y el aumento concomitante en el metabolismo de los compuestos
aromáticos, el transporte de la membrana, los ácidos grasos, los lípidos y los
isoprenoides, la motilidad y la quimiotaxis, el metabolismo del nitrógeno en WAF /
CEWAF sugieren importantes cambios en las comunidades microbianas que fueron
impulsadas por la presencia. de los componentes de aceite (disuelto) y aceite
disuelto en nuestros experimentos de incubación. Uno de los primeros pasos en la
degradación del aceite es la colonización de partículas y la secreción de proteínas
en la superficie de la partícula mediada por proteínas trans-membrana; además, La
motilidad y la quimiotaxis permiten a los procariotas reconocer y colonizar las gotitas
de aceite. Observamos una caída drástica en las gotas de aceite a lo largo de los
experimentos. Esta disminución es probablemente mediada por la colonización
(Wang et al., 2016 ). El aumento en el metabolismo de compuestos aromáticos
resalta la biodegradación de diferentes tipos de moléculas de hidrocarburos,
incluidos los componentes del aceite BTEX y PAH, mientras que el aumento en el
metabolismo de lípidos e isoprenoides indica un mayor potencial para la
biodegradación de los alcanos. Las bacterias hidrocarbonoclásticas sintetizan
ácidos grasos, lípidos e isoprenoides en presencia de n -alcanos ( Kalscheuer et al.,
2007 ). Estos lípidos se acumulan en el interior de las células y se utilizan como
fuente de carbono para el crecimiento, particularmente en presencia de una fuente
de nitrógeno ( Manilla-Pérez et al., 2010 , 2011).). Sin embargo, aún no tenemos
pruebas de que la descomposición de los alcanos esté relacionada con un aumento
en la biosíntesis de lípidos e isoprenoides.
El uso de dispersantes en accidentes de derrames de petróleo ha sido muy
controvertido ( Kleindienst et al., 2015 ). En el presente estudio, los resultados de
GC-MS mostraron que la vida media de BTEX se redujo de 18.5 a 9.4 días en el
tratamiento de aceite dispersante (CEWAF) en el experimento de Barreirinhas, lo
que sugiere un aumento significativo en la degradación de estos compuestos
aromáticos en La presencia de Corexit9500. Sin embargo, los resultados de la
diversidad de la comunidad bacteriana no son concluyentes; mientras que WAF T1,
CEWAF T1 y Control T0 tienen perfiles muy similares en Foz do Amazonas en
comparación con Barreirinhas (Figuras 3A, B). CEWAF tuvo una diversidad más
baja en comparación con WAF en ambos experimentos, lo que sugiere que el
dispersante puede reducir la diversidad de la comunidad microbiana y, por lo tanto,
tener un efecto negativo en la calidad del agua. El dispersante parece inducir el
crecimiento de ciertos tipos de microbios (por ejemplo, Colwelliaceae,
Flavobacteriaceae y Oceanospirillaceae), que aumentaron en CEWAF en el
experimento de Barreirinhas comparado con WAF. Además, los recuentos de genes
de BTEX, alcanos y HAP fueron mayores en los tratamientos con WAF que en los
tratamientos con CEWAF, particularmente en los experimentos con Barreirinhas
(Figuras complementarias 3, 4), lo que sugiere que el dispersante puede inhibir el
crecimiento de ciertos microbios importantes que degradan el petróleo.
Esta inhibición produce un recuento de genes más bajo en los tratamientos de
CEWAF.
Este estudio sugiere posibles roles para las bacterias, arqueas, hongos y otros
eucariotas microscópicos en la biodegradación del agua de aguas profundas de
Amazonas / Barreirinhas en el petróleo. Observamos que la quimiolitotrofia, la
metanogénesis, el metabolismo del nitrógeno y la utilización de compuestos de
azufre se acoplan a la biodegradación del aceite (con y sin adición de
dispersantes). Los vínculos entre estos procesos deben aclararse aún más, aunque
algunas pistas indican su importancia y acoplamiento durante la degradación del
aceite. También es posible que las observaciones sobre las arqueas, bacterias y
eucariotas que degradan el petróleo indiquen una red aún mayor de una comunidad
de biodegradación de petróleo que también usan metabolitos entre sí. Teniendo en
cuenta especialmente las enzimas multifuncionales de los hongos que degradan
parcialmente los compuestos de aceite, esfuerzos adicionales para saber cómo se
necesita la estructura de la comunidad microbiana. Este estudio demuestra que el
agua de aguas profundas del margen amazónico contiene microbios procarióticos y
eucariotas indígenas que pueden degradar el petróleo crudo brasileño en menos de
48 días en condiciones experimentales controladas. El agotamiento concomitante
de las gotitas de aceite y la concentración de BTEX con un aumento en los conteos
microbianos sugiere que el aceite se puede transformar en biomasa microbiana y
luego ingresar a la cadena alimentaria marina. Este estudio no evaluó
explícitamente la toxicidad del dispersante Corexit 9500 en las comunidades
microbianas; sin embargo, a partir de nuestros datos, es posible concluir que
algunos microbios de aguas profundas del margen amazónico pueden utilizar al
menos parte del dispersante como recurso alimenticio. Este estudio demuestra que
el agua de aguas profundas del margen amazónico contiene microbios procarióticos
y eucariotas indígenas que pueden degradar el petróleo crudo brasileño en menos
de 48 días en condiciones experimentales controladas. El agotamiento
concomitante de las gotitas de aceite y la concentración de BTEX con un aumento
en los conteos microbianos sugiere que el aceite se puede transformar en biomasa
microbiana y luego ingresar a la cadena alimentaria marina. Este estudio no evaluó
explícitamente la toxicidad del dispersante Corexit 9500 en las comunidades
microbianas; sin embargo, a partir de nuestros datos, es posible concluir que
algunos microbios de aguas profundas del margen amazónico pueden utilizar al
menos parte del dispersante como recurso alimenticio. Este estudio demuestra que
el agua de aguas profundas del margen amazónico contiene microbios procarióticos
y eucariotas indígenas que pueden degradar el petróleo crudo brasileño en menos
de 48 días en condiciones experimentales controladas. El agotamiento
concomitante de las gotitas de aceite y la concentración de BTEX con un aumento
en los conteos microbianos sugiere que el aceite se puede transformar en biomasa
microbiana y luego ingresar a la cadena alimentaria marina. Este estudio no evaluó
explícitamente la toxicidad del dispersante Corexit 9500 en las comunidades
microbianas; sin embargo, a partir de nuestros datos, es posible concluir que
algunos microbios de aguas profundas del margen amazónico pueden utilizar al
menos parte del dispersante como recurso alimenticio.