Referencia

INFORME DE LABORATORIO

Aminoácidos

Asignatura: BIO-003

Nombre de autores: Cerpa, Cristofer; Henriquez, Angie; Parra, Francisca; Soto,

Valentina.

Nombre del docente: Garrido, Stephanie

Fecha de realización: 3 de abril de 2019

Introducción.
Los aminoácidos son compuestos orgánicos los cuales constituyen la unidad
monómerica de las proteínas, estos están formados por un esqueleto carbonado el
cual está unido a una cadena lateral (-R) la cual debe ser específica, un Hidrógeno
(H), un grupo carboxilo (COOH) y un grupo amino (NH₂). Los aminoácidos están
unidos por enlaces peptídicos, es decir un enlace covalente entre un grupo amino y
un grupo carboxilo para luego formar polímeros, las proteínas. Existe más de 300
aminoácidos diferentes en la naturaleza, pero solo un subconjunto de 20
aminoácidos son los que constituyen a las proteínas, y estos se pueden agrupar en
aminoácidos no polares (alifáticos o aromáticos), en polares sin carga y polares con
carga (grupo ácidos o grupo básico).
Para los organismos existen los aminoácidos esenciales y no esenciales, los
esenciales son aquellos que se requieren ingerir de la dieta y los no esenciales son
aquellos que el propio organismo puede sintetizar. [1]

Objetivos
 Observar reacciones colorimétricas de los aminoácidos con diversos
reactivos.
 Analizar variaciones en el pH de la glicina de acuerdo a distintas
concentraciones de NaOH.
 Reflexionar como la temperatura influye en el pH de los aminoácidos.

Procedimiento experimental.
Actividad1: Titulación de un aminoácido
Se transfirió 100 mL de la solución del aminoácido Glicina de pH ácido (entre 2-
2.5) a un vaso precipitado de 250 mL. se midió el pH inicial de la solución con un
pH-metro calibrado.
Se adicionó con una bureta alícuotas de 0,5 mL de NaOH 1,0 M (base fuerte)
hasta completar un total adicionado de 5 ml. Después de cada adición, midió el pH
de la solución. Se homogenizó la solución (con bagueta) antes de cada medición
de pH.
Se registró los resultados obtenidos en la una tabla. Se calculó los moles de
NaOH adicionados, considerando la concentración 1,0 M como la concentración
inicial de la solución stock. Luego se graficó su curva de titulación para este
aminoácido en papel milimetrado indicando pH v/s moles de NaOH adicionados.

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Actividad 2: Reacción de Ninhidrina
Se preparó una batería con 5 tubos de ensayo, donde a cada uno se le agrego un
aminoácido distinto (glicina, tirosina, histidina, triptófano, fenilalanina 1g/L) en una
cantidad de 1 ml. Además se utilizó un sexto tubo con 1 ml de agua.
Luego a los 6 tubos se les añadió 5 gotas de la solución de Ninhidrina para luego
ser expuestos a un baño termoregulado a 100°C por 2 minutos. Pasado este
tiempo se retiraron los tubos con las muestras y se observaron los resultados
obtenidos.

Actividad 3: prueba de Millon

Se preparó una batería con 5 tubos de ensayo en los que se agregó 1 ml de cada
aminoácido (glicina, tirosina, histidina, triptófano y fenilalanina 1g/L) y en un sexto
tubo se agregó1 ml de fenol (1g/L), posteriormente se depositó con un gotario
plástico 5 gotas del Reactivo de Millon(solución de sulfato mercúrico 150 g/L en
ácido sulfúrico 15% v/v) en cada uno de los 6 tubos y se calentó en un baño
termorregulado a 100°C por 10 minutos. Luego se enfrió a temperatura ambiente,
posteriormente se agregó 5 gotas de nitrito de sodio. Finalmente se observó.

Actividad 4: Prueba de Pauly

Inicialmente se preparó una batería con 5 tubos de ensayo en los cuales se depositó
para cada uno de ellos 2 ml de los siguientes aminoácidos; glicina, tirosina, histidina,
triptófano y fenilalanina 1 g/L. Luego se agregó 1 ml de ácido sulfúrico (10 g/L en
solución de ácido clorhídrico 1 mol/L), se procedió a agitar cada tubo para luego
colocarlos cuidadosamente en un recipiente con hielo durante 5 minutos, en seguida
se adicionó 1 ml de la solución de NaNO₂ (50 g/L) y se agitó para luego volver a
incubar en el recipiente con hielo durante 3 minutos, al retirarlos se le adicionó 2 ml
de la solución Na₂CO₃ (10 g/L), posteriormente se agito y se observó los resultados
obtenidos.

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 Resultados.
Actividad 1: Titulación de un aminoácido
Tabla 1: Volumen de NaOH adicionado versus pH del aminoácido ácido
glicina
Volumen de 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0
NaOH (mL)
Moles de 0 5x10-4 1x10- 1.5x10- 2x10- 2.5x10- 3x10- 3.5x10- 4x10-3 4.5x10-3 5x10-3
NaOH 3 3 3 3 3 3
adicionados
pH 2- 3.32 8.5 9.96 11.2 11.7 12.22 12.4 12.7 12.78 12.82
aminoácido 2.5

De acuerdo el análisis de la tabla 1, en el caso de los cambios de pH aminoácido,

se destaca un cambio notable de pH al añadir los primeros 1.5 mL de NaOH, luego
de eso, las variaciones de pH, el cambio fue relativamente menor
Molaridad: moles de soluto → moles: molaridad x litros de solución
Litros de solución
Para la obtener los moles añadidos en cada caso se transformó los ml de NaOH a
litros y posteriormente se multiplico por la molaridad de NaOH (1.0 M)

- Moles de NaOH a los 0.5 mL.

𝑛
1.0 = n=1.0 x 0.0005=5x10^(-4) moles de NaOH
0.01(𝐿)

a- Investigue el procedimiento experimental a seguir para la elaboración de la

curva de titulación de un aminoácido cualquiera y realice un análisis teórico
de la curva de titulación extraída de bibliografía para el aminoácido glicina y
compare con la curva obtenida experimentalmente ¿Qué puede discutir
sobre esta comparación?
Al realizar una comparación entre la curva de titulación de un aminoácido
cualquiera con la curva obtenida del experimente se observó que se obtuvieron
similares resultados puesto que el efecto es el mismo

b- Esquematice según equilibrio acido-base las estructuras del aminoácido

glicina considerando valor pka1 pI y valor pka2

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Actividad 2: Reacción de Ninhidrina
- El tubo 1 el cual contenía la glicina adquirió un color morado claro.
- El tubo 2 el cual contenía la tirosina no presento cambio alguno.
- El tubo 3 el cual contenía la histidina se tornó de un morado oscuro.
- El tubo 4 el cual contenía el triptófano adquirió un tono rosa pálido.
- El tubo 5 el cual contenía la fenilalanina no presento cambios.

Actividad 3: Reacción de Millon

Se observó que en los tubos contenidos
- Tubo 5: fenilalanina y 5 gotas de reactivo de Millon
- Tubo 2: tirosina y 5 gotas de reactivo de Millon
- Tubo 4: triptófano y 5 gotas de reactivo de Millon
- Tubo 6: fenol y 5 gotas de reactivo de Millon

Luego de haber calentado en un baño de agua hirviendo por 10 minutos, al

enfriarse, se añadió 5 gotas de nitrito de sodio, finalmente arrojaron un color rojo
ladrillo demostrando así que reaccionó positivamente la solución. Mientras que los
tubos que contenían glicina he histidina no se observó un cambio en comparación
a la solución inicial

Actividad 4 :Prueba de Pauly

 Tubo N°1(Glicina): Sin color y con burbujas ascendiendo constantemente.
 Tubo N°2 (Tirosina): Color amarillo pálido y posee burbujas en la base del
tubo.
 Tubo N°3 (Histidina): Sin color y posee pocas burbujas en su interior.
 Tubo N°4 (Triptófano): Color amarillo claro y con muchas burbujas pegadas
a las paredes del tubo.
 Tubo N°5 (Fenilalanina): Color blanco y alto número de burbujas.

Actividad adicional

 ¿Qué indica el punto isoeléctrico de un aminoácido?. Explique.

Es el punto en donde el aminoácido no presenta carga neta, es decir es el pH en

donde la concentración de especies protonadas y desprotonadas se igualan.

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 ¿Por qué en la reacción de ninhidrina se ocupó agua en vez de aminoácido?.
Fundamente.

Se utilizó el agua para dejar en evidencia la acción de la Ninhidrina ya que esta

solo reacciona con -aminoácidos y por obviedad el agua no cumple esta
condición por lo que la reacción no se lleva a cabo.

 ¿Por qué en la reacción de Millon se ocupó fenol en vez de aminoácido?.

Fundamente.

Porque los aminoácidos aromáticos y sus derivados darán una reacción positiva,
por lo tanto en este experimento se ocupó el fenol a modo de comparación ya que
es un alcohol aromático por lo tanto dará un color rojo ladrillo.

 Traer esquema de estructura de los 20 aminoácidos presentes en proteínas.

Revise la estructura de los aminoácidos considerados en el práctico. Hecho a
mano

Discusión.
Actividad 1: titulación de un aminoácido
El aminoácido posee propiedades acidobasicas notorias. Los α-aminoácidos tienen
dos grupos acidosbasicos y los que poseen grupos laterales ionizables,tres. La
glicina es el aminoácido más simple, a valores bajos de ph los dos grupos
acidobasicos de la glicina están muy protonados de manera que esta asume la
forma catiónica +𝐻3 𝑁𝐶𝐻2 𝐶𝑂𝑂𝐻.En el transcurso de la titulación con una base fuerte
como el NaOH, la glicina pierde dos protones paso a paso, el modo característico
de un ácido poliprotico. Es por eso que el ph cambia debido a la perdida de protones
el ph aumenta.
Actividad 2: Reacción de Ninhidrina:
La Ninhidrina se caracteriza por descarboxilar y desaminar a los -aminoácidos
que se encuentran en un pH entre 4 y 8 tornando a la solución de un color
morado el cual se denomina purpura de Ruhemann (variación de color entre azul
claro a morado oscuro) debido a que la reacción forma un átomo de Ninhidrina
reducido el cual vuelve a reaccionar con otro átomo de Ninhdrina no reducido y
con el amoniaco derivado de la desaminación del aminoácido.
En el caso de la glicina, tirosina y el triptófano fueron los únicos que luego del baño
termoregulado siguieron estando en el rango de acción de la Ninhidrina por lo que
esto explica su cambio de color. [2]

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Actividad 3: Reacción de Millon
Un aminoácido con el reactivo de millón forma un coagulo blanco y que al ser
calentada da una sal de coloración rojo ladrillo, ya que cualquier
radicalhidroxibenceno presente en la estructura de los aminoácidos dará positivo.
En el experimento reaccionaron la fenilalanina, tirosina y el triptófano, los cuales
son aminoácidos aromáticos, es decir, tienen compuestos fenólicos presentes en
su composición por lo tanto dan como resultado este color rojo. El fenol también
reacciono con el reactivo de Millon pero este no es un aminoácido, sino un alcohol
aromático en su estructura tiene un grupo hidroxilo (-OH) unido a un anillo de
benceno este se utilizó a modo de comparación y así fuera más evidente que la
técnica utilizada reconocíaa este componente especifico que está en
determinados monómeros de algunas proteínas. [3]

Actividad 4: Prueba de Pauly

Las pruebas de Pauly es aquella que junto a una temperatura baja (frio), reacciona
identificando los aminoácidos no polares aromáticos, es decir aquellos que tienen
benceno en su estructura química, de acuerdo a esto, los aminoácidos utilizados
en la reacción de Pauly que poseían benceno en su estructura son la tirosina, el
triptófano y la fenilalanina, justamente los que cambiaron su coloración al
realizarse tal experimento. [4]

Conclusión.
Al realizarse los procesos experimentales en él laboratorio se analizó qué hay
distintos factores que pueden alterar el pH de las variedades de aminoácidos como
por ejemplo la temperatura, la adición de un ácido o base y estas reacciones son
identificadas de acuerdo a distintas pruebas de laboratorio y así como también se
comprobó que algunos reactivos tendrán reacción con determinados aminoácidos
dando distintas coloraciones.

Referencias.
[1] T. W. Graham Solomons. Fundamentos de la química orgánica. Volumen 1. Segunda
Edición. México. Editorial Limusa S.A. 2004.
[2] Donald Voet, Judith G. Voet Bioquímica, Ed. Médica Panamericana, 2006
página 76
[3] Peter J, Victor W. Aminoacidos y péptidos. En: Manuel Bernal. Harper
bioquímica ilustrada. 30va edición. México: Mc Graw Hill, 2016. p. 15-25

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[4] Walter W. Linstromberg. Curso breve de la química orgánica. Edición número
86.Editorial reverté,S.A.1979
[5] Robert K. Murray, Peter A. Mayes, Dary K. Granner, Victor W. Rodwell, Bioquimica de
Harper, Volumen 1. Edición número 14.Mexico. Editorial “El manual moderno S.A”. 1997
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de los objetivos las actividades
ejemplificados en la guía. propuestas.
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Describe forma Describe el procedimiento
incompleta el experimental realizado
procedimiento completo, considerando
experimental materiales, métodos y
considerando materiales, técnicas utilizadas en el
métodos y técnicas laboratorio. (0,5 ptos)
utilizadas. (0,3 ptos)
Describe de manera Describe de manera
ordenada gran parte de la ordenada y completa toda
información obtenida, y la información obtenida,
hace referencia a las haciendo referencia a las
figuras , tablas o ejemplos figuras tablas o ejemplos
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