UNIVERSIDAD NACIONAL DANIEL

ALCIDES CARRION
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
EFP INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

TEMA:
COLORACIÓN DE BACTERIAS ESPORULADAS

INTEGRANTE:
ROJAS BERMUDO, Enrique
CATEDRA:
Microbiologia General
CATEDRATICO:
Biologo Julio Ibañez

La Merced – Chanchamayo
11/05/2019
 I. INTRODUCCION
Los microorganismos no sólo son muy pequeñas, sino que también son transparentes. Las
manchas y colorantes se utilizan para dar color a las células bacterianas y aumentar su
contraste para que puedan ser vistos más fácilmente con un microscopio. Los colorantes
son compuestos orgánicos compuestos por un grupo cromóforo, que da el tinte de su
color, y un auxochrome, que se une a la bacteria. muchos tintes bacterianos están cargados
positivamente (catiónicos) y se combinación componentes celulares cargados
negativamente, tales como ácidos nucleicos ADN y ARN y polisacáridos ácidos. El azul
de metileno, cristal violeta, y safranina son colorantes catiónicos. Otros colorantes,
bacteria nos están cargados negativamente (aniónicos) y se combinan con componentes
celulares cargados positivamente, tales como proteínas. osina y fucsina ácida son los
colorantes aniónicos. La mayoría de los procedimientos de tinción se llevan a cabo en
células fijadas. La fijación o el calentamiento de las células secas en la diapositiva, mata
las bacterias y hace que se adhieren a la diapositiva.
Y en cuanto al tema de Tinción de bacterias, definiremos el uso decolorantes, del método
de tinción simple, y utilizando las muestras con los medios de cultivo, hallaremos los
tipos de bacteria y que bacterias son específicamente.
1.1. Objetivo general
Reconocer, morfológicamente los géneros Clostridium sp. y Bacillus sp. A partir
de muestras biológicas, a través de tinciones especiales de esporas, con ayuda de
un microscopio óptico y objetivo de inmersión.

1.2. Objetivos específicos

Teñir las bacterias para una mejor observación.
Identificar las principales estructuras microbianas mediante coloraciones
especiales.

II. MATERIALES Y METODOS

2.1. Materiales
 Algodón.
 Lechuga.
 Cubeta de tinción.
 Mechero de ronde quemar.
 4 laminillas
 2 hisopos.
 Encendedor.
 1 trípode.
Reactivo
 Safranina
 Aceite de inmersión
 Verde de malaquita 5%
 Agua destilada
  Alcohol

2.2. Métodos
1. Lavar perfectamente los portaobjetos, secarlos y etiquetarlos.
2. Sacar la muestra de lechuga con hisopó, colocar la muestra por duplicado sobre las
laminillas.
3. Realizar el proceso de tinción simple.
4. Fijar la muestra con color que se realiza con el mechero de ron de quemar.
5. Colorear las muestras con verde de malaquita hasta cubrir toda la muestra.
6. Calentamiento de muestra con el mechero de forma directa, para inspeccionar el
colorante sobre las laminillas.
7. Lavar suavemente con agua destilada hasta quitar el exceso de verde de malaquita al
5%.
8. Colorear las muestras con safranina por 1 minuto.
9. Limpiar la mesa tratando de tener la mejor asepsia y contaminación posible.
10. Lavar delicadamente las muestras con agua destilada.
11. Limpiar las laminillas con algodón y alcohol, la cara donde no esta la muestra para
evitar desperfectos en la observación con microscopio.
12. Prender el microscopio para observar la muestra y observar las esporas llenando
sobre la laminilla el aceite de inmersión pegándolo con el objeto x100.

III. RESULTADOS Y DISCUSION

3.1. Resultados
En los laboratorios de la UNDAC (Universidad Nacional Daniel Alcides Carrión), Se
observo las bacterias estreptococos de la muestra del sarro dental de un colaborador
estudiante con deficiencia ya que no se pudo observar demasiadas bacterias las cuales
dificulto al observarlo por medio de un microscopio x100.
3.2. Discusión
Stearn (1923), Los microorganismos Gram positivos pueden hacerse Gram negativos al
aumentar la acidez
 Los microorganismos gran Negativos pueden hacerse Gram Positivos al
aumentar la alcalinidad.
 Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes ácidos pueden
hacerse gramnegativos por aumentar la alcalinidad.
 Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes básicos pueden
hacerse gramnegativos por aumentar la acidez.
  En la zona isoeléctrica característica, de cada especie es muy escasa la tendencia
a retener cualquier colorante. Si bien es cierto que al modificar la acidez o
alcalinidad hay una variación de las bacterias ya que se obliga a la bacteria a
actuar en otros medios donde no puede sobre vivir y muta a Gram negativo o
Gram positivo ya sea si se aumenta su alcalinidad o acidez del medio.

IV. CONCLUSIONES
Concluimos que en la práctica de laboratorio de la UNDAC (Universidad Nacional Daniel
Alcides Carrión), pudimos identificar que la morfología de las bacterias (escherichia
coli), saccharomyces, bacillus, estafilococos) y el tipo de tinción que presenta. Las gran
positivas poseen una gruesa capa de peptidoglucano la cual impide que se escape el
complejo de cristal violeta – Lugol. Es por ello tiñen un color azul (escherichia coli,
Saccharomyces), mientras que la capa peptidoglucano de las bacterias gran negativas es
delgada y se encuentra a una membrana externa lipídica susceptible a la decoloración con
alcohol acetona; estas bacterias teñirán de color rosa debido a la safranina.

V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS (Según Normas APA)

Coloración Gram. recuperado de:
https://www.academia.edu/15685252/3._INFORME_COLORACION_GRAN_

TINCION GRAM, recuperado de:

https://es.slideshare.net/noheding/tincion-gram-42074172

VI. ANEXOS (Figuras y Cuadros)

Fig. 1 Fig. 2
Bacterias Muestra microbiana

CUESTIONARIO
1. ¿Qué bacterias, de las que se han teñido, son Gram+ y Gram-? ¿Fundamente y dé
cinco ejemplos de cada uno?
GRAMPOSITIVAS
•Staphylococcus aureus. Responsable de abscesos, dermatitis, infecciones localizadas y
posibles gastroenteritis.
•Streptococcus pyrogenes. Causante de infecciones supurativas en el trayecto
respiratorio, así como de fiebre reumática.
•Streptococcus aglactiae. Frecuente en casos de meningitis neonatal, endometritis y
neumonía.
•Streptococcus faecalis. Usual en infecciones en vías biliares y urinarias, habita en el
colon humano.
•Streptococcus pneumoniae. Responsable de neumonías e infecciones en las vías
respiratorias, así como otitis, meningitis y peritonitis.
•Streptococcus sanguis. Causante de endocarditis, cuando ingresa al torrente sanguíneo a
través de lesiones en su hábitat, la boca y la mucosa dental.
•Clostridium tetani. Bacterias responsables de los tétanos, entran al cuerpo desde el suelo
por traumatismos en las extremidades.
•Bacillus antracis. Se trata de la conocida bacteria del ántrax, tanto en su versión cutánea
como en la pulmonar.
•Clostridium botullinum. Causante del botulismo clásico y el infantil, habita en el suelo
y en los alimentos mal conservados.
•Clostridium perfringes. Esta bacteria segrega toxinas que destruyen la pared celular, y
es responsable de las gangrenas gaseosas, la enteritis necrosante y la endometritis.
GRAMNEGATIVO
•Neisseria meningitidis. Peligrosa bacteria causante de meningitis y meningocococemias,
coloniza las vías respiratorias humanas y asciende a las meninges por vía sanguínea.
•Neisseria gonorrhoeae. Conocidísima por ser la causante de la gonorrea, común
enfermedad de transmisión sexual.
•Escherichia coli. Habitante usual del colon humano, está involucrada en las llamadas
“diarreas del viajero”, así como en meningitis neonatal, sepsis e infecciones urinarias.
•Salmonella typhi. Bacteria responsable de la enfermedad conocida como fiebre tifoidea,
suele transmitirse por vía fecal-oral: contaminación de aguas, mala disposición de
excretas o higiene defectuosa.
•Salmonella enteritidis. Suele ocasionar enterocoitis y septicemia con abscesos si llega a
pasar del intestino a la sangre.
•Haemophilus influenzae. Bacilo usualmente aerobio, es responsable de numerosas
meningitis, otitis, sinusitis, bronconeumonías, celulitis y artritis séptica.
•Bordetella pertussis. Causante de la enfermedad conocida como Tos ferina, de alta
mortalidad infantil.
•Brucella abortus. Ocasiona la brucelosis, una enfermedad del ganado que se transmite al
hombre por contacto con los animales o por ingesta de lácteos sin pasteurizar.
•Francisella tularensis. Responsable de la llamada “fiebre del conejo” o tularemia, se
transmite al hombre mediante vectores (ácaros u otro tipo de exoparásitos) de los conejos,
ciervos y animales semejantes.
•Pasteurella multocida. Bacilo anaeróbico, transmitido por la mordedura de animales
domésticos infectados, tales como perros y gatos. Se disemina a través de la piel e infecta
el sistema respiratorio, causando también celulitis.
Recuperado de: https://www.ejemplos.co/20-ejemplos-de-bacterias-gram-positivas-y-gram-
negativas/

2. ¿Existe alguna relación entre el tipo de morfología y la tinción de Gram? .

Fundamente.
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en
bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su
nombre al bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en
18841. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para
poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose
bacterias grampositivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias
gramnegativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.
Recuperado de: https://es.scribd.com/doc/2078734/Tincion-Gram-y-Morfologia-Bacteriana-
LESP-PQCMAOG

3.¿Qué diferencias estructurales hay entre bacterias Gram+ y Gram-?.

Fundamente.
Los fundamentos de la diferenciación entre ambos grupos se basan exclusivamente en las
características diferentes de las paredes celulares entre ambos grupos de bacterias. La
clave es el peptidoglucano -más conocido como mureina-, uno de los principales
constituyentes de la pared celular, formando una gruesa capa en los Gram+, mientras que
tienen una delgada capa en los Gram-. Son muchas las especies de bacterias Gram- que
causan enfermedades, teniendo la membrana externa una gran parte de esa
responsabilidad patogénica del microorganismo. La membrana exterior está compuesta
por un complejo lipopolisacárido que actúan como endotoxinas, y si éstas entran en el
sistema circulatorio provocan una reacción tóxica en el animal infectado. Las endotoxinas
son componentes estructurales exclusivamente de las bacterias Gram-.

4.¿Por qué es necesario que la muestra no hierva durante la tinción con

carbofucsina?
Ya que el calentamiento aumenta la energía cinética de las moléculas del colorante lo cual
también facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloración son
de color rojo y las que no, se ven de color azul ya que se utiliza azul de metileno como
tinción de contraste. Debido a esto, está que está muy influenciado con la enfermedad de
tuberculosis.

5.Otras bacterias que posean en su pared celular estructuras que proporcionen alta
hidrofobicidad ¿serían resistentes a la decoloración por ácidos y alcoholes en la
tinción de Ziehl-Neelsen?.
La alta concentración de ácido micolico en la pared celular es la causante, como las
bacterias del género Mycobacterium, de la baja absorción y alta retención de la tinción
(fucsina). La forma más común para poder identificar este tipo de bacterias es a través de
la técnica de tinción de Ziehl-Neelsen, donde la bacteria queda teñida en rojo y se agrega
una tinción de contraste de nombre azul de metileno la cual permite apreciar de mejor
forma la bacteria.
Recuperado de: https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Ziehl-Neelsen

6. En la tinción Gram ¿Qué función cumple el lugol?

El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio)
y Sl (Siulterio), los cuales están presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente,
haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula
bacteriana.

7.Determine Ud. el principio por el cual los colorantes se adhieren a una muestra
determinada.
Para que no se pierda el reactivo que adhiere a la carga microbiana según corresponda.

8.¿Por qué en la tinción Gram, las bacterias Gram+ se observan de color azul y las
Gram- de color rojo. Asi mismo, en las tinción de Ziiehl-Neelsen, ¿porque los
microorganismos ácido-resistentes se tiñen de color rojo?.
Ya que en Gram positivas están en medio ácido de coloración azul, mientras que Gram
negativo están en medio alcalino de coloración roja.

9. ¿Cómo se caracterizan las lesiones por la lepra?

REACCIÓN LEPRÓTICA TIPO 1 (REVERSA)
Se presenta en su forma característica dentro del espectro de la lepra dimorfa: borderline
tuberculoide (BT), borderline borderline (BB) y en la borderline lepromatosa (BL), como
consecuencia de la inestabilidad inmunológica de estas formas.
Se inicia, bruscamente, con fiebre, mal estado general, inflamación de lesiones cutáneas
antiguas y otras nuevas generalizadas que pueden ulcerarse, compro-miso neural severo,
con intenso dolor y edema de cara y miembros superiores e inferiores. Si no se atiende de
inmediato con corticoterapia sistémica pueden producirse parálisis y anestesias severas.
Hay que hacer el diagnóstico diferencial con una recaída de la enfermedad.
REACCIÓN LEPRÓTICA TIPO 2 (ERITEMA NODOSO LEPROSO)
Se presenta, por lo general, en la lepra lepromatosa (LL) durante el primer año de
tratamiento, debido, sobre todo, a la destrucción de bacilos por la terapia específica. Se
caracteriza por la aparición de nódulos o placas eritematosas muy infiltradas, dolorosas,
generalmente en cara, brazos y muslos, en brotes sucesivos, con fiebre, malestar general,
dolores óseos, mialgias, linfadenitis generalizada, neuritis, iridociclitis, orquitis, artritis y
compromiso visceral.
En casos graves, las lesiones pueden tornarse vesiculosas y ampollares que van a la
ulceración con gran componente inflamatorio por una angeitis necrotizante (Fenómero de
Lucio), que deja secuelas cicatricicales. La talidomida juega un rol importante en el
terapia del ENL.
Recuperado de: https://cuidateplus.marca.com/enfermedades/infecciosas/lepra.html