INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Relación Planta - Microorganismo

Práctica 10. Reacción de Hill

Introducción
En 1973, R. Hill descubrió que cuando una suspensión de cloroplastos aislados o
fragmentos de cloroplastos, se iluminan en presencia de un aceptor de electrones
adecuados, éste es reducido al mismo tiempo que se libera O​2​, derivandose los
electrones de la cadena transportadora, donde los aceptores de electrones pueden
utilizarse diversas sustancias, como son complejos de iones férricos, benzoquinona
y algunos colorantes como los derivados del indofenol. A esto se le denominó
reacción de Hill, y hace referencia a la primera fase de la fotosíntesis.

La fuente de energía más importante para todos los seres vivos es la luz solar. La
energía luminosa se utiliza, con la ayuda de la fotosíntesis, para la producción de
compuestos orgánicos a partir del CO​2​ y del agua.
En las algas verdes y en los vegetales la fotosíntesis tiene lugar en los cloroplasto.
En su interior, conocido como estroma, se encuentran los tilacoides. La fase
luminosa es catalizada por las enzimas de la membrana tilacoidea. Aquí los
electrones son transportados a través de una cadena transportadora de electrones
desde un sistema redox que lo cede al siguiente. Los electrones son liberados del
agua con consumo de energía y transportados hasta el NADP+. Para que el
transporte de electrones en la fotosíntesis sea posible debe ser excitado en dos
sitios por medio de la absorción de energía luminosa. Lo anterior ocurre por medio
de dos fotosistemas que son complejos proteicos que contienen un gran número de
moléculas de clorofila y de otros pigmentos. Otro componente de la cadena
transportadora de electrones es el complejo del citocromo b/f, un agregado de
proteínas integrales de la membrana que contiene entre otras cosas dos citocromos.
La plastoquinona funciona como transportador móvil de electrones junto con otras
dos proteínas solubles, la plastocianina, que contiene cobre, y la ferredoxina. Al final
de la cadena se localiza una enzima que transfiere los electrones al NADP+.
Diagrama de flujo
Resultados

Tabla 1. Intensidad de color azul del DCPIP

Tiempo( tubo 1 tubo 2 tubo 3 tubo 4 tubo 5 tubo 6
min) (+/-) (+/-) (+/-) (+/-) (+/-) (+/-)

0 ++ +++ +++ ++++ ++++ ++++

3 + ++ +++ ++++ ++++ ++++

6 - + +++ +++ ++++ ++++

9 - + +++ ++++ ++++ ++++

12 - - + ++ +++ ++++

15 - - - -- - ++++
Discusión

Para observar la reacción de Hill en el laboratorio se pueden extraer cloroplastos y

utilizar como aceptor de electrones de la actividad del fotosistema II al diclorofenol
indofenol (DCPIP). En forma oxidada, el DCPIP es azul, mientras que en forma
reducida, es incoloro. El progreso de la reducción puede seguirse y monitorearse
por la desaparición del color azul en los tubos de reacción. se utilizan 6 tubos que
llevan a cabo 4 diferentes tratamientos, con el objetivo de demostrar la importancia
de la luz, y cloroplastos en la transferencia de electrones en la fotosíntesis (fase
luminosa). Todos los tubos contienen regulador de fosfatos para mantener el pH.
Los tubos que corresponden al tratamiento de luz y oscuridad se lleva a cabo
simultáneamente, se espera que el primer tubo que se expone a la luz llevará a
cabo una mayor reducción del diclorofenol indofenol (DCPIP) que es el aceptor
artificial de electrones utilizado en la práctica y al ser comparado con el resto de los
tubos que, cada 3 minutos un tubo se saca de la oscuridad hasta llegar al tubo 6, la
reducción del DCPIP sea menor. Al terminar ambos tratamientos, el tubo 6 tendrá
una coloración azul es decir que esta oxidado el DCPIP.

Máxima Reducción Máxima Oxidación

La reacción de Hill solo se llevará a cabo si están presentes en los tratamientos, los
cloroplastos que donde se lleva a cabo la fotólisis de la molécula de agua y si está
presente el aceptor de electrones DCPIP. Los tubos que reciben el tratamiento de
oscuridad no se lleva a cabo la reacción
El testigo negativo presenta una coloración azul, porque el tubo no contiene
cloroplastos y en el control positivo presenta una coloración verde porque no
contiene el aceptor artificial de electrones DCPIP.
El tubo con tratamiento de ebullición las proteínas son desnaturalizadas,, por lo
tanto al colocar los cloroplastos para llevar a cabo la reacción de Hill, estos al estar
sometidos a una temperatura alta, impide que las condiciones sean adecuadas para
completar la reacción.

Conclusiones
-La transferencia de electrones ocurre al reducirse DCPIP y es incoloro
-Para que llevarse a cabo la reacción de Hill es necesario la presencia de Luz y
cloroplastos y un aceptor artificial de electrones.
-Sin la presencia de luz no ocurre la fotólisis.

Bibliografía
- Koolman J., Röhm K., (2004). Bioquímica: texto y atlas. 3a edición. Ed.
Médica Panamericana. Alemania. pp. 128-129.