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RESUMEN
El presente trabajo tuvo como objetivo determinar la cantidad de flavonoides que contiene el
extracto etanólico de propóleos. Se recolectaron las muestras de propóleos en los diferentes
puestos del mercado de la ciudad de Otuzco. Se realizó la extracción de flavonoides utilizando
el extractor soxhlet, empleando como solvente etanol 96ºG.L.Se obtuvo el espectro de
absorción ultravioleta del extracto etanólico, así mismo se hicieron pruebas de identificación
de grupos fenólicos y de flavonoides, para la cuantificación de estos últimos se usó estándar
de quercetina. Los resultados indican que el extracto etanólico de propóleos contiene en su
composición flavonoides al presentar respuestas positivas en todos las pruebas realizadas. El
porcentaje de flavonoides totales expresados en quercetina fue 8,71 g/100g de extracto seco.
ABSTRACT
The purpouse of this work is to determine the amount of flavonoids conteined in the ethanol
extract of propolis. The samples of propolis were collected in different areas of the market
from Otuzco city. Flavonoids extraction was performed by the method of the soxhlet
extractor, using ethanol 96º G.L. as solvent. It was obtained the ultraviolet absorption
spectrum of the ethanol extract, likewise identification testing of phenolic groups and
flavonoids were made, to quantify these latter, quercetin standard was used. The results
indicate that the ethanol extract of propolis contains flavonoids in its composition to present
positive responses in all tests performed. The percentage of total flavonoids expressed as
quercetin was 8.71g/100g of dried extract.
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Docente de la Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional de Trujillo-Perú.
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Los propóleos de origen nacional pueden Reactivos: Acetato de potasio 1M, acetato
constituir una oportunidad interesante de de plomo al 10%, Ácido clorhídrico al
aprovechamiento de nuestros recursos 28%, Agua destilada, Cloruro de
naturales para acceder a mercados exigentes en Aluminio al 10%, Cloruro férrico al 5%,
donde países como Argentina y Brasil ya Estándar de Quercetina Batch: MM 2-
ocupan un lugar de liderazgo (3,4). De los 5027, Etanol de 96% “Dropaksa”,
compuestos identificados el 50% son Hidróxido de sodio al 20%, Láminas de
compuestos fenólicos, a los cuales se les Magnesio metálico.
atribuye acción farmacológica. Los principales
fenoles identificados son: flavonoides, ácidos Equipos: Balanza analítica Sartorius
aromáticos y sus ésteres, aldehídos aromáticos, BP301S Nº de serie 13005198, Baño
cumarinas, triglicéridos fenólicos. Los Maria Memmert, Espectrofotómetro
flavonoides, son quizá los componentes de Hewlett Packard 8452 con arreglo de
mayor interés en los propóleos (4,5,6). diodos, Espectrofotómetro Jenway 6105
Del Rio P, (2006) en su estudio U.V./Vis Model 6105 Nº de serie 1228,
“Actividad biocida de un propolis chileno Estufa Memmertt UM – 300, Refrigerador
contra Porphyromonas gingivalis“ y Gutiérrez Avanti Model 34 – 3R G.
M, y colaboradores en su estudio de “Acción
antibacteriana de la tintura hidroalcohólica de Métodos
propóleos al 4 % en gérmenes de origen Recolección de la muestra: Para la
endodoncico” demostraron la actividad recolección de la muestra de propóleo se
antibacteriana in vitro de los propóleos contra recorrió el mercado de la ciudad de
microorganismos patógenos orales como el Otuzco, se recogieron muestras de 3g de
Porphyromonas gingivalis, Streptococos diferentes puestos; las muestras recogidas
viridans, Streptococos aureus y lactobacilos se unieron. El peso total de la muestra fue
s/p. (3). de 20g, este peso se enfrió a una
Los espectros de flavonoides consisten temperatura de -3ºC.
típicamente de dos máximos de absorción en
los rangos de 240 – 285 nm (Banda II) y 300 – Preparación del extracto etanólico: Los
550 nm (Banda I) (7). 20 g de la muestra se mezcló con arena
El extracto de propóleos es un producto lavada y se llenó en un cartucho de papel
semielaborado que se obtiene procesando los filtro, introduciendo éste en el extractor
propóleos con un solvente de manera de Soxhlet tapado con un algodón. Se realizó
extraer los componentes biológicamente la extracción por 4 horas, utilizando 100
activos. Posteriormente, se evapora el alcohol ml. de etanol 96°G.L. en un balón de
trabajando a una temperatura baja y fondo plano de 250 ml y controlando la
controlada. A partir del extracto se pueden temperatura hasta obtener 8 ciclos por
desarrollar una gran variedad de productos. hora. Usando el baño maría se realizó la
Por todo lo mencionado, dado que la operación de evaporación del extracto
comercialización de propóleos en el Perú es etanólico hasta 20 mL, se continuó la
aún reciente es que se decide realizar un evaporación en una estufa a 80ºC hasta
estudio que tuvo como objetivo determinar la obtener un extracto blando. Seguidamente
cantidad de flavonoides contenidos en se pesó 0,1 g de extracto blando en un
propóleos procedente de la ciudad de Otuzco. vaso de precipitación de 10 cc,
disolviéndose con 5 mL de etanol de
MATERIAL Y MÉTODO 96ºG.L. y se llevó a baño maría por 3
minutos, enfriándose, filtrándose y
Material Botánico aforandose a 10 mL.
Se utilizaron 20g de propóleos que fueron
recolectados en la Ciudad de Otuzco
Departamento de La Libertad durante el mes
de febrero del 2011.
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Figura 1: Espectro UV del extracto etanólico de propóleos λmáx= 226 nm, λ= 316 nm.
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entre los 250 y 350 nm donde se debe observar Según las normas Salvadoreñas se
uno o más picos (8,9). establecen dos reacciones de identificación de
En las figuras 1, el espectro de absorción flavonoides; la reacción con acetato de plomo
UV de la muestra del extracto etanólico de y la reacción de Shinoda, ambas reacciones
propóleo, presenta un pico a los 226 nm y otro deben ser positivas para que el producto sea
a los 316 nm estos resultados concuerdan con aceptado. Una precipitado amarillento o una
lo establecido por las normas antes solución turbia, color amarillo opaco es prueba
mencionadas por lo que se trata de un positiva con acetato de plomo, mientras que
flavonol. una coloración anaranjada, roja, verde, azul o
Para la identificación cualitativa de violeta es prueba positiva con la reacción de
compuestos fenólicos se utilizó la reacción con Shinoda (8).
NaOH y FeCl3, la Norma Salvadoreña En la tabla 1 se observa los resultados
establece que la reacción para identificar obtenidos después de aplicar las pruebas de
compuestos fenólicos debe ser positiva para identificación de flavonoides; en la reacción
que el producto sea aceptado. Las coloraciones con acetato de plomo se obtuvo un precipitado
para una reacción positiva con NaOH, varía amarillo. La reacción con el acetato de plomo
del amarillo al anaranjado rojizo y para el se fundamenta en formación de un complejo
FeCl3 del verde, pardo oscuro al azul coloreado entre el plomo y los di y
respectivamente (7,8). polihidroxifenoles como las flavonas,
En la tabla 1 se observan los resultados de flavonoles, flavanonas dihidroxiladas,
la reacción con NaOH y FeCl3, encontrando flavanoles y antocianidinas di y
reacciones positivas para la muestra de trihidroxiladas. En la reacción de Shinoda se
extracto etanólico de propóleos analizada. En observó una coloración rojo púrpura. Las
la muestra se observó coloración amarilla al coloraciones observadas en esta reacción se
reaccionar con NaOH y azul al reaccionar con ajustan a lo indicado en la norma Salvadoreña.
FeCl3, las cuales estuvieron dentro de las Los flavonoides con el núcleo
coloraciones que se indica en la norma. benzopirona (p. ej. flavonas, flavonoles,
En la reacción con NaOH se produce la flavanonas, etc.) producen coloraciones rojizas
ruptura del anillo C de un flavonoide el cual cuando a sus disoluciones acuosas o
puede ser de una flavona o de una flavanona, alcohólicas se les adiciona magnesio seguido
esta ruptura produce la formación de una de HCl concentrado. Aunque no se conoce el
chalcona lo que se evidencia con una mecanismo de esta prueba, es muy utilizada
coloracion amarilla que puede variar en para reconocer esta clase de compuestos.
intensidad. La cuantificación de flavonoides en los
La reacción del FeCl3 con grupos extractos etanólicos de propóleos es
fenólicos puede dar lugar a la formación de considerado también como un parámetro de
compuestos coloreados, dado que los grupos calidad por la Norma IRAM 15935-2 así
hidroxilo actúan como activadores del anillo como también la Norma Salvadoreña (esta
bencénico al donarle densidad, esto ocasiona última lo considera para los propóleos en
que la aromaticidad del anillo se debilite, bruto) que a diferencia de la Norma Rusa
adquiriendo más las características de un vigente RST-RSFR-317-77 que establece la
polieno conjugado. El ión hierro (III) es un determinación porcentual de compuestos
oxidante moderado capaz de inducir la flavonoides, las dos primeras normas
conversión de un pirogalol a una ortoquinona establecen no sólo la identificación cualitativa
hidroxilada (que proporciona la coloración de compuestos flavonoides, sino también la
azul) y, en concentraciones de pirogalol aún cuantificación de estos compuestos (8,9,10).
mayores, promover la formación de un La Norma IRAM 15935 – 2 para extracto
polímero de la quinona formada, obteniendo etanólico de propóleos, la cual considera como
un producto con un sistema pi muy largo y, mínimo concentraciones de 0,25 g de
por tanto, absorción en todo el espectro. flavonoides totales expresados en quercetina
por 100 g de extracto seco (9). En la tabla 3 se
observa que el porcentajes (g/100g e.s.) de
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flavonoides totales expresados en quercetina en línea]. Zootecnia Tropical – 2007; 25
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