Extracción de ADN

Resumen
Como bien sabemos el ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él están
escritas las instrucciones que deben seguir las células para construir un organismo y
mantenerlo vivo. Los métodos de extracción de ADN constan de diferentes pasos, según la
European Comission, uno de los más importantes es provocar una lisis celular, este
procedimiento consiste en el rompimiento de la membrana celular y la membrana del
núcleo con el fin de tener acceso al material genético.
Para esto utilizaremos una solución de detergente con cloruro de sodio que nos ayudaran
a disolver las membranas celulares fosfolipidicas, luego mediante métodos de filtración y
enzimáticos haremos precipitar el ADN que hemos liberado y podremos recolectarlo.
Este procedimiento lo realizaremos en células animales y vegetales, para demostrar que el
material genético se encuentra tanto en las células vegetales como animales.

Objetivo
Determinar presencia de Ácidos nucleicos en tejidos vegetales y animales.

Hipótesis
En esta práctica de laboratorio trataremos de demostrar que es posible extraer el ADN del
interior de las células, tanto vegetales como animales con una metodología simple de
extracción y digestión enzimática, para luego ser precipitado y observar a simple vista esta
maravilla.

Marco teórico
Los desarrollos científicos y tecnológicos han permitido al ser humano conocer más a fondo los
fenómenos celulares. El desarrollo del microscopio fue el escalón que permitió comprender el
comportamiento celular y los componentes de su estructura, como bien sabemos el ADN
constituye el material hereditario de un individuo. Estas biomoléculas están formadas por largas
cadenas de nucleótidos conectados por un grupo fosfato y son las portadoras del material
genético. Los ácidos nucleicos fueron descubiertos por Friedrich Miescher, médico suizo en el año
de 1869, empleo glóbulos blancos para aislar del núcleo una sustancia ácida rica en fósforo y
nitrógeno. El aislamiento de esta sustancia fue denominado nucleina, aunque Miescher no logro
relacionarlo con la herencia, fue hasta en el año de 1885 que se le pudo asignar el papel de la
transferencia genética gracias a posteriores descubrimientos científicos. Con el avance tecnológico,
día a día se van desarrollando nuevos equipos y con estos se desarrollan nuevas técnicas para
mejorar procedimientos de gran complejidad como lo son el manejo del ADN. Destacando técnicas
como PCR (Reacción en cadena de Polimerasa) y sus derivadas y el método de extracción de FCI
(fenol-cloroformo-alcohol isoamilo) o extracción por gradiente de sales (MgCl2, KCl, NaCl, EDTA,
Tris-HCl), que es un método menos contaminante para el ambiente, el analista y el ambiente.

Materiales y métodos
Materiales:
- Fruta triturada (plátano o kiwi)
- Panita de cerdo
- Jugo de piña natural
- Guantes de latex
- 1 botella de alcohol de 95
- 1 trozo de gasa fina
- 1 tubo de ensayo
- Vaso pp de 150 ml
- Hielo
- Jeringa 10 ml
- 1 cucharada sopera
- Cámara fotográfica
- Delantal blanco

Métodos
- Preparar en un vaso precipitado una solución de detergente y agregue 4 gramos de
sal de mesa, mezcle suavemente con una varilla de vidrio, evitando producir
espuma.
- Agregue tres cucharadas soperas de la mezcla animal o vegetal previamente
triturada a la solución anterior, mézclela suavemente por 10 minutos evitando
producir espuma.
- Coloque la mezcla en baño María con agua a 65 °C, durante 10 minutos.
- Retire del baño María y enfrié rápidamente colocándola en una mezcla de agua y
hielo.
- Filtre la mezcla dejando pasar la solución durante varios minutos hasta obtener 6
ml de filtrado aproximadamente.
- Tome los 6 ml de filtrado en un tubo de ensayo limpio y agregue 1 ml de jugo de
piña natural. (solución ablandadora).
- Agregar 1 ml de alcohol muy frio lentamente dejándolo escurrir por las paredes del
tubo de ensayo
- Dejar reposar la mezcla por 2-3 minutos sin perturbarla. NO lo agite, No lo mueva.
 - Observe el precipitado blanco del ADN que se forma en la capa de alcohol. El ADN
tiene apariencia de una sustancia mucosa blanca y filamentosa.

Resultados
En los resultados vamos a destacar lo ocurrido en la etapa final de nuestra experiencia de
laboratorio, al ir agregando suavemente el alcohol etílico previamente enfriado a nuestra
solución resultante, lo primero que podemos observar es que se forman dos fases liquidas
quedando el alcohol encima de la primera fase, en esta interface que se formó de agua-
alcohol vamos, observando como comienza a precipitar el ADN como una sustancia
blanquecina transparente, viscosa que se va concentrando poco a poco.

Foto 1. Tubo de ensayo, luego de agregar alcohol etílico previamente enfriado,

se observa precipitado de ADN, muestra animal.

Foto 2. Tubo de ensayo, luego de agregar alcohol etílico previamente enfriado,

se observa precipitado de ADN, muestra vegetal.
Discusión
Luego de tratar las muestras, tanto vegetal como animal, hemos obtenido el precipitado
de ADN, el cual se pudo apreciar al ojo desnudo, se seguimos este método en forma
ordenada y meticulosa obtenemos el resultado buscado, por lo que debemos destacar que
el orden y limpieza en el trabajo de laboratorio nos proporcionara el resultado esperado,
este practico puede fallar si no se realiza un buen enfriamiento del alcohol etílico en la
última etapa o si no se dan los tiempos necesario de reposo para que la solución
detergente y la enzima de piña actué como es debido.

Conclusión
Cada paso de esta experiencia tiene una gran importancia para obtener el resultado
esperado para comprobar nuestra hipótesis y así poder observar el ADN que se encuentra
en las células tanto vegetal como animal.
- Las células se encuentran rodeadas de una membrana plasmática de fosfolípidos y
el núcleo también posee una membrana nuclear que protege el material genético,
al cual queríamos tener acceso, es por esto que utilizamos una solución detergente
la cual calentamos por 10 minutos para disolver los lípidos de membrana y dejar el
ADN libre en la solución.
- La sal que agregamos tiene dos funciones una es como estabilizador del ph,
formando un tipo buffer o tampón de Ph, que ayuda a mantener el equilibrio de Ph
y así proteger el ADN que es muy susceptible a los cambios de Ph, y además el ion
Na+ ayuda a neutralizar un poco la electronegatividad de la molécula de ADN, que
le otorgan por grupos fosfatos con esto disminuye su solubilidad en alcohol para
poder precipitarlo y poder ver finalmente la molécula de ADN.
- Filtramos lentamente para separar los restos de sustancias orgánicas que no fueron
disueltas.
- Agregamos jugo de pina natural a la solución de filtrado resultante, este proceso de
digestión enzimática es muy importante para terminar de liberar las proteínas que
acompañan al ADN en el núcleo, la piña y algunas frutas como la papaya poseen
gran cantidad de enzimas proteolíticas muy importantes y que ayudan también en
procesos inflamatorios.
- Como el ADN es soluble en agua, al agregar alcohol etílico frio el ADN se desenrolla
y va precipitando en la interface alcohólica donde es menos soluble.

Bibliografía
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